专利名称：3-脱氧葡糖醛酮的天然产物抑制剂的制作方法
3-脱氧葡糖醛酮的天然产物抑制剂发明人
Annette Tobia Alice Marcy Bangying Su Takeshi Niwa 相关申请的交叉引用
本申请要求美国临时专利申请61/057，398 (2008年5月30日申请)的权益，本文结合 其全部公开内容作为参考。背景
氨基酸赖氨酸是哺乳动物中必需的氨基酸，并且存在回收赖氨酸并因此其可被重复 利用的生物化学途径。美国专利6，004，958 (Brown等人)公开了由果糖赖氨酸(FL)酶催 回收赖氨酸的Amadori途径，同时伴随产生3-脱氧葡糖醛酮(3DG)。正如在国际公开WO 03/089601所公开的那样，在皮肤中也发现了 3DG和该酶。由于在葡萄糖和含有赖氨酸的 蛋白的ε-NH2基团之间的可逆反应，赖氨酸在身体内被糖化。这种方法通过希夫碱中间 体来进行，该中间体重排变成更稳定的FL，一种“Amadori产物”。通过饮食引进的熟的动 物产品也可以提供糖化蛋白。糖化蛋白最终降解产生FL。果糖胺-3-激酶(F3K)在FL的 3’ -OH上将其磷酸化，形成果糖赖氨酸-3磷酸盐(FL3P)，然后其自发地分解为赖氨酸、Pi和 3DG。由此，FI可以使身体回收赖氨酸，然而，这种方法产生3DG，其是高度反应性的二醛分 子。已经证明，在初期不可逆转的步骤中，在形成蛋白交叉连接基(其是晚期糖化最终产物 (AGEs)的特征)的过程中，3DG化学上可以与蛋白赖氨酸残基相互作用。美国专利6，004, 958 (Brown等人)和国际申请公开WO 03/089601描述了 一类化 合物，其可以抑制FL酶转化为FL3P，抑制由FL的去醣化而形成赖氨酸，抑制3DG的形成，以 及提供了 3DG的失活作用和3DG的解毒作用。也已经对代表该类别的具体化合物进行了描 述(Brown等人，国际公开WO 98/33492)。例如，人们发现，尿或血浆3DG可以被葡甲胺、山 梨糖醇赖氨酸、甘露糖醇赖氨酸和半乳糖醇赖氨酸还原。在同一文献中，还发现，糖化蛋白 含量高的饮食对肾有害，并且导致出生率降低。在同一文献中，还公开的是，FL途径与肾脏 致癌作用有关。在同一文献中，进一步的，先前的研究表明，饮食和3DG可以在与这种途径 有关的致癌作用中起一定作用(参见国际公开WO 00/24405 ；WO 00/62626 ；WO 98/33492)。3DG是高度反应性的分子，可以通过至少两种途径将其在身体内解毒。在一种途 径中，3DG被醛还原酶还原成3-脱氧果糖(3DF)，然后3DF可有效地通过尿排泄(Takahashi 等人1995，Biochemistry 34:1433-8)。另一个解毒反应是通过氧醛脱氢酶将3DG氧化 为 3-脱氧-2-酮葡糖酸(DGA) (Fujii 等人 1995，Biochem. Biophys. Res. Commun. 210:852-7)。迄今为止的研究结果表明，这些酶中的一种(醛还原酶)对糖尿病产生不利影 响。当从患有糖尿病的大鼠肝脏中分离这种酶时，这种酶在赖氨酸的67、84和140位置上 被糖化，并且与正常未改性的酶相比较，具有催化作用降低的效果(Takahashi等人1995，Biochemistry 34:1433-8)。由于糖尿病患者比血糖正常个体具有更高比例的糖化蛋白， 所以他们具有更高水平的3DG，其立刻趋向于使醛还原酶失活，并且降低该酶通过还原成 3DF来解毒这种反应性分子的能力。有支持性的证据表明，在糖尿病人中，3DG至3DF的这 种解毒作用受到削弱，这是由于糖尿病人的尿和血浆3DG解毒为3DF的比例显著地不同于 非糖尿病个体(Lal等人1997，Arch. Biochem. Biophys. 342:2M_60)。酸还原酶的超 表达保护PC12细胞免于丙酮醛或3DG的细胞毒素效果(Suzuki等人1998，J. Biochem. 123:353-7)。已经研究了醛还原酶的工作机理。这些研究表明，这种重要的解毒酶被醛糖还原 酶抑制剂(ARIs)所抑制(Barski 等人 1995，Biochemistry 34:11264-75)0 ARIs 目前处 于临床研究中，研究其降低某些糖尿病并发症的潜力。已经证明这些化合物(作为一类) 对短期糖尿病并发症具有一些效果，但它们对长期糖尿病并发症缺乏临床效果，并且它们 使饲喂高蛋白食物的大鼠的肾脏功能变差。这种发现与新发现的赖氨酸回收的代谢途径一 致。氨基胍(AG)，其是通过形成快速排泄的共价衍生物而将3DG进行药理学解毒的药 剂，(Hirsch等人1992，Carbohydr. Res. 232 125-30)，可以在动物模型中降低AGh相 关的视网膜、神经、动脉和肾病变(Brownlee, 1994，Diabetes 43:836-41; Brownlee等人 1986，Science 232:1629-32;等人 1991，Metabolism 40 1016-9 ； Soulis-Liparota 等 人 1991，Diabetes 40:1328-34，和 Edelstein 等人 1992，Diabetologia 35:96-7)。过去的研究集中于3DG在糖尿病中的作用。与非糖尿病个体相比较，糖尿病人的 (Niwa ^A 1993, Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:837-43; Wells-Knecht
等人 1994， Diabetes 43:1152-6)和尿中(Wells-Knecht 等人 1994， Diabetes 43:1152-6)的3DG和3DF(3DG的解毒产物)的水平提高。此外，与非糖尿病患者相比，发 现患有肾病的糖尿病患者的血浆3DG水平提高(Niwa等人1993，Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:837-43)。最近的研究(比较患有胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)和非胰岛素依赖性糖尿病 (NIDDM)的患者)证明，两种类型病人的血液和尿中的3DG和3DF水平都提高。由此，在糖尿 病人中，还原解毒3DG(转化为3DF)的正常途径受到削弱(Lal等人1995，Arch. Biochem. Biophys. 318:191-9)。甚至表明，在生理条件下体外培养葡萄糖和蛋白可以产生3DG。继而，已经表明3DG使蛋白糖化和交联，形成可检测出的AGE产物(Baynes等人 1984，Methods Enzymol. 106:88-98; Dyer等人 1991，J. Biol. Chem. 266:11654-60)。此外，与对照大鼠的肾相比，在糖尿病大鼠的肾中已经发现了 3DG改性的蛋白的 水平提高(Niwa等人1997，J. Clin. Invest. 99:1272-80)。3DG具有使酶(例如谷胱甘 肽还原酶，中心抗氧化酶)失活的能力。还已经表明，糖尿病个体中的血色素-AGE水平提 高(Makita等人1992，Science 258:651-3)，并且在实验模型中已经显示其它AGE蛋白随 时间而聚集，在糖尿病大鼠的视网膜、晶状体和肾皮质中，经过5-20周的周期，提高5-50倍 (Brownlee, 1994，Diabetes 43:836-41)。另外，在糖尿病的胚胎病中，3DG是导致胚胎畸 形的致畸因子(Eriksson等人1998，Diabetes 47:1960-6)。这看起来是由3DG的积聚所 引起，其导致过氧化物介导的胚胎病。无酶催化的糖化(其中还原糖与自由氨基共价连接、并且最终形成AGEs)在自然老化期间发生，并且在糖尿病中得到促进(Bierhaus等人1998，Cardiovasc. Res. 37:586-600)。蛋白的交联和随后AGEs的形成是不可逆过程，其改变蛋白、脂质组分和核苷 酸的结构和功能性质(Bierhaus等人1998，Cardiovasc. Res. 37 586-600)。人们相信这 些过程有助于一些糖尿病并发症的发展，包括肾病、视网膜病和神经病(Rahbar等人1999， Biochem. Biophys. Res. Commun. 262:651-6)。在糖尿病大鼠中，抑制AGE的形成降低了肾病的程度(Ninomiya等人2001， Diabetes 50A178-179)。因此，抑制AGE形成和/或氧化应激的物质似乎限制了糖尿病 并发症的发展，并且可以在糖尿病的治疗中为治疗干预提供新的方法(Thornalley，1996， Endocrinol. Metab. 3:149-166; Bierhaus 等人 1998，Cardiovasc. Res. 37:586-600)。糖尿病个体中的血色素-AGE水平提高(Makita等人1992，Science 258:651-3)， 并且在实验模型中已经显示其它AGE蛋白随时间而聚集，在糖尿病大鼠的视网膜、晶状体 和肾皮质中，经过 5-20 周的周期，提高 5-50 倍(Brownlee, 1994，Diabetes 43:836-41)。3DG在人脐静脉内皮细胞中诱导反应性的氧物种，导致氧化性DNA损伤(Shimoi等 人2001，Mutat. Res. 480-481:371-8)。另外，3DG诱导的反应性氧物种有助于糖尿病并 发症的发展(araki, 1997，Nippon Ronen Igakkai Zasshi 34:716-20)。具体地说，3DG 诱导肝素-结合表皮生长因子，其是在动脉粥样硬化斑块中大量存在的平滑肌分裂素。这 说明3DG的提高可以在糖尿病中引发动脉粥样化形成(Taniguchi等人1996，Diabetes 45 Supp 1. 3:S81-3; Che 等人 1997，J. Biol. Chem. 272:18453-9)。最后，已经表明，糖尿病中的3DG血清水平和糖尿病并发症发展的危险之间具有 直接联系(Kusunoki等人2003，Diabetes Care 26:1889-94)。结果表明，在糖尿病患者 中，空腹血清3DG水平提高，并且具有相对更高的3DG水平的患者倾向于患有更严重的并发 症，这表明3DG与糖尿病性微血管病变可能有关联。3DG还产生与糖尿病无关的有害影响。例如，据证实，3DG在巨噬细胞衍生的 细胞系中诱导细胞程序死亡(Okado等人1996，Biochem. Biophys. Res. Commun. 225:219- )，并且对培养的皮层神经元(Kikuchi等人1999，J. Neurosci. Res. 57:280-9)和 PC12 细胞(Suzuki 等人 1998，J. Biochem. 123:353-7)具有毒性。最近，对 肌萎缩侧索硬化(运动神经元病的一种形式)的病因的研究已经说明，3DG的积聚可以由于 形成 ROS 而导致神经毒性(Shinpo 等人 2000，Brain Res. 861:151-9)。先前的研究表明，3DG使蛋白糖化和交联，产生被称为AGEs的化合物的复杂混合 物(Baynes 等人 1984，Methods Enzymo 1. 106: 88-98; Dyer 等人 1991，J. Biol. Chem. ^6:11654-60)。AGh与大部分炎症性疾病例如动脉粥样硬化和智力衰退以及糖尿病有关。 它们最通常在长时间生存的结构蛋白例如胶原上形成。AGEs具有特定的细胞受体，通常称为RAGE。细胞RAGE在内皮、单核吞噬细胞和 胸腺依赖性细胞上的活化引发自由基的形成和炎症基因介质的表达(Hofmarm等人1999， Cell 97:889-901)。这种提高的氧化应激导致转录因子NF_kB的活化，并且促进与动脉粥 样硬化有关的 NF-kB 基因的表达(Bierhaus 等人 1998，Cardiovasc. Res. 37:586-600)。在与癌的关系中，RAGE活化的阻断可以抑制与肿瘤增殖和肿瘤细胞的跨内皮迁移 有关系的一些机理。这还会降低自发性和植入性肿瘤两者的生长和转移病变(Taguchi等 人 2000， Nature 405:354-60)。
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AGEs由正常代谢作用产生，并且是非还原糖与蛋白、脂质或核酸的氨基的反应产 物。AGh可以通过各种成分组合与烹调而被引进到食品中。AGh含量高的食品包括在高 温下(例如焙、烤、油炸和烘)烹调的那些食品。(Goldberg等人2004，J Am Diet Assoc 104:1287-1291)。一部分摄食的AGEs被吸收，并且出现在循环中(Koschinsky等人1997， Proc Natl Acad Sci USA 94:6474-6497)。少量的AGE改性的肽可以通过肠内的上皮细胞 (Huebschmann等人2006，Diabetes Care 29:1420-1432)。富含糖化蛋白的饮食导致循环 AGE 产物的提高(Uribarri 等人 2005. Ann NY Acad Sci 1043:461-466)。循环AGh水平还依赖于环境因素和生理状态。在患有糖尿病的人中，血浆AGE 水平由于葡萄糖水平提高而提高，或在患有肾衰竭的患者中，血浆AGE水平由于肾的廓清 率降低而提高(Odani 等人 1999，J. Chromatogr B 731:131-140; Odani 等人 Biochem Biophys res Commun 256:89-93) 吸烟者具有更高循环水平的 AGEs (Cerami 等人 1997. Proc Natl Acad Sci USA 94:13915-20)。饮食AGEs的摄入与循环AGEs有关，并且继而这些又与炎症和氧化应激的标记物 有关(Koschinsky 等人 1997，Proc Natl Acad Sci USA 94:6474-6497; Vlassara 等人 2002，Proc Natl Acad Sci USA 99:15596-15601; Uribarri 等人 2007. J. Gerontol A Biol Sci Med Sci 62:427)。保持低AGE饮食的小鼠显示了 AGE积聚降低、氧化应激降低 和寿命提高(Cai等人2000，Am J Pathol 170:1893)。摄食高AGE膳食的糖尿病患者显 示血清AGE的水平提高、氧化应激提高和血管功能的削弱(Negrean等人2007. Am J Clin Nutr 85:1236-43)。与低AGE饮食的动物相比，摄食高AGE饮食的糖尿病小鼠显示了削弱 的创伤愈合能力(P印pa等人2003. .Diabetes 52:2805-13) 通过口腔吸附剂AST-120 来吸收一种AGE产物，羧甲基赖氨酸，在患有慢性肾衰竭的非糖尿病患者中降低了 AGE水平 (Ueda 等人 2006. Mol Med 12:180-184)。由于循环3DG的不利影响，合乎需要的是，通过使从食品或营养增补剂中摄入的 3DG最小化，降低3DG接触量。由于3DG对皮肤细胞具有不利影响，因此，还合乎需要的是，通 过降低局部制剂或化妆品中的3DG浓度来减少3DG对皮肤的接触量。3DG可以被醛还原酶 酶催还原成 3DF(Kato 等人 1990，Biochim Biophys Acta 1035:71-76; Liang 等人 1991， Eur J Biochem 197:373—379; Knecht 等人 1992，Arch Biochem Biophys294:130-137； Niwa 1999，J Chromatog B Biomed Sci Appl 731 23-36)。然后3DF可以有效地在尿中排 泄(Takahashi等人1995，Biochemistry 34:1433-8)。可以用氨基胍、半胱氨酸或吡哆醛 5，-磷酸盐使 3DG 化学失活(Nakamura 和 NiWEi, 2005, J Am Soc ^phrol, 16:144-150; Igaki 等人 1990，Clin Chem 36:631-634)。已经注意到，具有FI抑制活性的某些药剂还可以有效治疗或预防被称为“干眼 症”(干性角膜炎)的病症。参见美国临时申请61/043,162(2008年4月8日申请)。干 眼症是角膜和结膜表面的慢性干燥，并且由产生的泪水组分减少或湿润眼睛的泪膜的个别 油、水和粘液组分的比例发生改变所引起。该病症显现各种症状，包括眼睛发红、眼疮、眼睛 灼痛和眼睛发痒、畏光、视力模糊、异物感和接触眼镜不耐受。人们相信，上述药剂可以促进 角膜和结膜表面的湿润，这是由于杯状细胞(其是分泌粘蛋白的主要渠道)增加而增加了 粘液产生。由于杯状细胞存在于其它组织(消化道和呼吸上皮)中，所以，增加粘蛋白产生 的药剂可以在治疗病症例如口干燥(口干症)和便秘方面具有附加的用途。
本发明概述
如上所述，如先前报道的，F3K在赖氨酸回收途径中的作用可导致高度反应性的3DG的 产生，其在AGEs的形成过程中具有主要的作用。按照本发明，现在发现，很多种天然产物包含一或多种可抑制FL酶转化成为FL3P 和/或使3DG失活的组分。这种发现可以用下面的方式来付诸实际使用
-治疗或预防需要这种治疗或预防的患者的病症或疾病状态的方法，这种病症或疾病 状态是通过抑制FL酶转化成为FL3P来减轻的，该方法是给予患者至少一种天然产物，该天 然产物具有FL至FL3P酶转化的抑制剂作为其组分，以有效抑制这种转化的数量给予；
-预防、改善和/或逆转内在和/或外在皮肤衰老的方法，该方法是给衰老皮肤局部施 加包含至少一种天然产物的组合物，该天然产物具有FL至FL3P酶转化的抑制剂作为其组 分，以有效抑制这种转化的数量施加；
-改善衰老皮肤的外观、质地或弹性的方法，该方法是给衰老皮肤局部施加包含至少 一种天然产物的组合物，该天然产物具有FL至FL3P酶转化的抑制剂作为其组分，以有效抑 制这种转化的数量施加；或
-治疗由于氧化应激和/或产生AGEs所造成的皮肤损伤的方法，该方法是给损伤皮肤 局部施加包含天然产物的组合物，该天然产物具有FL至FL3P酶转化的抑制剂作为其组分， 以有效抑制这种转化的数量施加。按照本发明，还已经发现，许多天然产物含有不同数量的3DG，在某些实例中，其可 以对使用它们的患者(人和动物)造成健康危险。当用作食品、化妆品、药物或营养增补剂 成分时，可以通过降低3DG含量来提高这种含有3DG物质的纯度(健康危险的可能性相应 地降低)，例如，与3DG失活试剂混合。在下面的详细说明中，鉴定为此目的的合适失活试 剂。本发明的详细说明
含有FI酶的抑制剂和/或3DG失活剂的天然产物可以有利地用于治疗或预防与 3DG(以FI活性的副产物形式产生)有关的病症或疾病状态。可以用本发明方法治疗或 预防的疾病状态包括炎症性病症，糖尿病的并发症，衰老疾病，高血压症，中风，神经变性病 症，循环疾病，动脉粥样硬化，骨关节炎和白内障。本文所描述的方法还可以用于治疗或预 防皮肤病症，尤其是与内在或外在的衰老有关的那些皮肤病症。皮肤的内在衰老是由自然 老化过程引起的逐渐退化，这种过程引起蛋白的化学结构发生变化，包括胶原和弹性蛋白， 部分地是由于形成AGh所造成的。许多外因，常常与自然老化过程结合起作用，致使皮肤 的过早衰老。绝大部分外在的衰老是由日光照射或“光老化”引起的；然而，其它因素，例如， 重复的面部表情和吸烟可以促进这种过早衰老。各种不同的天然产物可以用于治疗或预防病症或疾病状态，这种病症或疾病状态 可以通过抑制果糖赖氨酸至果糖赖氨酸-3-磷酸盐的酶转化和/或通过3DG的体内失活而 得到减轻。本文使用的术语“天然产物”是指自然界中发现的化学物质，例如，从陆生植物、 海洋动物或植物及其它生物机体的组织中获得的物质，以及这种物质的衍生物。可以用于 本发明实践的天然产物(和其提取物)的代表性的例子包括来自植物和动物源的材料，多 肽，寡肽，维生素，前维生素等等。天然产物提取物可从各种渠道商购，并且可以使用一般性 地描述在美国专利6，485，756 (Aust和Wilmott)中的提取方法来制备。
适合于实践本发明的天然产物可以使用下文所描述的FI试验来鉴别。对多种天 然产物进行该试验的结果列在下面的表1和IA中。通过直接测定果糖赖氨酸-3-磷酸盐 产生来测定FI抑制活性的替代性试验描述在上述美国专利6，004, 958中。如果需要的话，可以与本文所描述的天然产物结合给予辅助活性剂。合适的辅助 活性剂包括，例如，麻醉剂，抗生素，抗过敏剂，抗霉菌剂，杀菌剂，抗刺激剂，消炎剂，抗微生 物剂，镇痛剂和抗高血压剂，例如ACE抑制剂。本文所描述的天然产物以及任何辅助活性剂可以使用有效抑制酶催3DG产生的 任何数量和任何给药途径来给予。所给予的确切数量可以根据患者的种类、年龄和一般条 件、所治疗病症或疾病状态的性质、使用的具体天然产物和其给药模式来变化。本文使用的 术语“患者”是指动物，包括哺乳动物，优选人和家畜。通过供给患者(人或动物)富含糖化赖氨酸残基或FL的食品，并且测定供给食品 前后的患者尿中的3DG和3DF数量，可以评价给予患者的天然产物数量的效果。与在给予 天然产物之前相同患者的分泌水平相比较，在系统中具有有效抑制数量的F!3K抑制剂的患 者显示出3DG和/或3DF的分泌减少和FL的尿分泌增加。用于本发明实践的天然产物通 常以粉末形式获得。因此，可以容易地将它们配制为局部或口服形式给药，优选局部给药形 式。包括任何各种皮肤可接受的赋形剂的局部制剂可以以下列形式制备乳剂，膏剂， 香脂，光泽剂，洗剂，油膏剂，屏蔽剂，乳浆剂，调色剂，软膏剂，油剂，摩丝，凝胶剂，油脂剂， 溶液剂，液体喷雾剂，基于蜡的条状物或小毛巾。这种制剂可以有利地包括通常在化妆品领 域使用的任何成分。这些成分包括防腐剂，液相增稠剂，脂肪相增稠剂，香料，亲水性的和 亲脂性的活性剂，以及色素，填料，油，一或多种蜡或胶，或任何上述成分的混合物。另外，上述制剂可以包括下列中的一或多种皮肤渗透增强剂，表皮输送系统，柔 软剂，皮肤除酸剂，光学扩散剂，防晒剂，表皮脱落促进剂和抗氧化剂。除了别的以外，表皮 输送系统可以是脂质体，纳米物质(nanosomes)，基于磷脂的非脂质体组合物(例如，选择 的脂质双层卷(cochleates))。关于这些及其它合适化妆品成分的详细内容可以在下列中 得到!international Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook(ICID)，10th ed., Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, at 2177-2299(2004)。这些天然产物还可以结合进透皮贴片或类似的递送系统中。透皮贴片可以是常规 类型的结构，例如，用于递送持续剂量的雌激素、硝化甘油、芬大尼等等的类型。在本发明的其它实施方案中，用作食品、化妆品、药物或规定食物的增补剂成分的 含有3DG的天然产物的益处，可以通过降低其3DG含量的纯化或精制过程而得到提高。可 以使用下面实施例2所描述的测定技术来测定天然产物的3DG浓度。本发明所涉及的纯化或精制过程包括使天然产物与至少一种3DG失活剂混合。 合适的3DG失活剂的代表性例子列于下面表3中。精氨酸是实践本发明的该实施方案所使 用的优选的3DG失活剂。考虑到3DG对健康的潜在有害效果，将用作食品、化妆品、药物或规定食物的增补 剂成分的天然产物的3DG含量的任何可测量的降低都会提供益处。可以使用同样的方法以降低食品、食品添加剂或饮料中的3DG含量，饮料例如碳 酸饮料，其可以是发酵的(例如啤酒，麦芽酒等等)或未发酵的碳酸饮料(例如可乐)，以及非碳酸饮料，其可以是发酵的(例如酒)或未发酵的(例如果汁，果汁喷趣饮料，蔬菜汁或 茶)。提供下列方法和试验数据，以便进一步详细地描述本发明的各种实施方案。提供 这些方法和数据仅仅是为了说明的目的，决不应该将其理解为对本发明的限制。F3K 试验
果糖胺-3-激酶(F3K)将果糖赖氨酸磷酸化，形成果糖赖氨酸-3-P，其自发地分解得到 赖氨酸、Pi和3DG。该试验是在96孔平皿中进行的，每个孔含有100 μ 1的50 mM Hepes, ρΗ8· 0，ImM Mg-ATP 和 0. 20 mM 果糖赖氨酸(Dynamis Therapeutics)。加入 5 μ 1 试验抑制 剂样品，用120 ηΜ人重组FI酶(Dynamis Therapeutics)来起始反应。在37°C将该平皿 培养M小时，使FI产生FL3P，而后分解释放Pi和3DG。按照实施例2测定3DG。天然产物和化学制品
用各种商购的天然产物制备含水提取物。下面给出了所得到的提取物的浓度，基于 重量/重量，除非另有陈述。LH(提取物和粉末得自于溶解的—Π(-23。用榨汁机 (Juiceman自动榨汁机)制备新鲜水果和蔬菜提取物。类似地制备草莓叶提取物(50% w/ w，在水中)。使样品沉积或离心(12，000 χ g，10 min)，而后取出上清液的等分样品，用于 分析。实施例1
F3K抑制作用
使用上述试验，在各种天然产物的存在下测定FI活性。抑制百分比示于表1和IA中。 栗子皮、荔枝核、葡萄种子、醋栗、花生皮、猫爪藤和玫瑰的提取物抑制超过90%的F3K活性。表 1
在天然产物提取物的存在下的FI活性
权利要求
1.治疗或预防需要所述治疗或预防的患者的病症或疾病状态的方法，这种病症或疾病 状态是通过抑制果糖赖氨酸酶转化成为果糖赖氨酸-3-磷酸盐来减轻的，所述方法包括 以有效抑制所述转化的量给予所述患者至少一种天然产物，该天然产物具有果糖赖氨酸至 果糖赖氨酸-3-磷酸盐的所述酶转化的抑制剂作为其组分。
2.权利要求1的方法，其中氧化应激有助于所述病症或疾病状态的起始和/或发展。
3.权利要求2的方法，其中晚期糖化最终产物(AGEs)的产生有助于所述病症或疾病状 态的起始和/或发展。
4.权利要求1的方法，其中所述疾病状态选自下面一组炎症性病症，糖尿病并发症， 衰老疾病，高血压症，中风，神经变性病症，循环疾病，动脉粥样硬化，骨关节炎和白内障。
5.权利要求1的方法，其中给予所述患者的所述至少一种天然产物得自于上述说明书 的表1和IA中所列出的一组天然产物。
6.权利要求1的方法，其中所述患者是人。
7.权利要求1的方法，其中所述患者是家畜。
8.权利要求1的方法，其中所述病症是皮肤病症。
9.权利要求8的方法，其中所述皮肤病症与内在或外在的衰老有关。
10.权利要求8或9的方法，其中所述皮肤病症的症状包括下列中的至少一种皮肤皱 纹，皮肤网纹，皮肤无弹性，皮肤的粗纹理和不均勻的色素淀积。
11.预防、改善和/或逆转内在和/或外在皮肤衰老的方法，所述方法包括以有效抑 制下述转化的量给所述衰老皮肤局部施加包含至少一种天然产物的组合物，该天然产物具 有果糖赖氨酸至果糖赖氨酸-3-磷酸盐的酶转化的抑制剂作为其组分。
12.权利要求11的方法，其中所述至少一种天然产物得自于上述说明书的表1和IA中 所列出的一组天然产物。
13.改善衰老皮肤的外观、质地或弹性的方法，所述方法包括以有效抑制下述转化的 量给所述衰老皮肤局部施加包含至少一种天然产物的组合物，该天然产物具有果糖赖氨酸 至果糖赖氨酸-3-磷酸盐的酶转化的抑制剂作为其组分。
14.权利要求13的方法，其中所述至少一种天然产物得自于上述说明书的表1和IA中 所列出的一组天然产物。
15.治疗由于氧化应激和/或产生AGEs所造成的皮肤损伤的方法，所述方法包括以 有效抑制下述转化的量给所述损伤皮肤局部施加包含天然产物的组合物，该天然产物具有 果糖-赖氨酸至果糖-赖氨酸-3-磷酸盐的酶转化的抑制剂作为其组分。
16.权利要求15的方法，其中所述至少一种天然产物得自于上述说明书的表1和IA中 所列出的一组天然产物。
17.提高制剂的纯度的方法，该制剂含有作为食品、化妆品、药物或营养增补剂成份的 氨基葡糖和其可药用盐和衍生物，所述方法包括降低其3-脱氧葡糖醛酮(3DG)含量。
18.权利要求17的方法，其中所述3DG含量是通过与3DG失活剂混合来降低的。
19.权利要求18的方法，其中所述3DG失活剂选自下面一组精氨酸，栗子皮提取物， 胶原，吡哆醛-5’-磷酸盐，玫瑰提取物，LFKl, LFK2，植物提取物，葡萄种子提取物，荔枝核 提取物，花生皮提取物，醋栗提取物，罗布麻提取物和猫爪藤提取物。
20.权利要求18的方法，其中所述3DG失活剂是精氨酸。
21.精制含有3DG的天然产物的方法，该天然产物作为食品、化妆品、药物或营养增补 剂成分，所述方法包括降低所述天然产物的3DG含量。
22.权利要求21的方法，其中所述3DG含量是通过与3DG失活剂混合来降低的。
23.权利要求22的方法，其中所述3DG失活剂选自下面一组精氨酸，栗子皮提取物， 胶原，吡哆醛-5’-磷酸盐，玫瑰提取物，LFKl, LFK2，植物提取物，葡萄种子提取物，荔枝核 提取物，花生皮提取物，醋栗提取物，罗布麻提取物和猫爪藤提取物。
24.权利要求22的方法，其中所述3DG失活剂是精氨酸。
25.降低含有3DG的饮料、食品或食品添加剂的3-脱氧葡糖醛酮(3DG)含量的方法，所 述方法包括使3DG失活剂与所述饮料、食品或食品添加剂混合。
26.权利要求25的方法，其中所述3DG失活剂选自下面一组精氨酸，栗子皮提取物， 胶原，吡哆醛-5’-磷酸盐，玫瑰提取物，LFKl, LFK2，植物提取物，葡萄种子提取物，荔枝核 提取物，花生皮提取物，醋栗提取物，罗布麻提取物和猫爪藤提取物。
27.权利要求25的方法，其中所述3DG失活剂是精氨酸。
28.权利要求25的方法，其中所述3DG失活剂与碳酸饮料混合。
29.权利要求观的方法，其中所述碳酸饮料是发酵饮料。
30.权利要求25的方法，其中所述3DG失活剂与非碳酸饮料混合。
31.权利要求30的方法，其中所述饮料是发酵饮料。
32.权利要求30的方法，其中所述饮料是果汁、果汁宾治、蔬菜汁或茶。
33.治疗或预防干燥粘膜病症的方法，该方法包括以有效引起下述增殖的量给予需 要所述治疗或预防的患者可提高杯状细胞增殖的天然产物。
34.权利要求33的方法，其中所述病症选自下面一组干眼症、口干燥和便秘。
35.一种局部组合物，其包含至少一种天然产物和至少一种皮肤可接受的赋形剂，其中 该天然产物包含能够起到抑制由果糖赖氨酸酶催产生3-脱氧葡糖醛酮的作用的试剂。
36.权利要求35的组合物，进一步包含下列中的至少一种皮肤渗透增强剂，柔软剂， 皮肤除酸剂，光学扩散剂，防晒剂，表皮脱落促进剂和抗氧化剂。
37.权利要求1的组合物，其中所述赋形剂是包含至少一种脂质体、纳米物质 (nanosomes)和基于磷脂的非脂质体制剂的递送赋形剂。
38.制品，其包含结合进透皮贴片中的权利要求35的组合物。
39.局部组合物，其包含至少一种天然产物和至少一种皮肤可接受的赋形剂，其中该天 然产物包含3-脱氧葡糖醛酮的失活剂。
40.权利要求39的组合物，其中所述赋形剂选自下面一组皮肤渗透增强剂，柔软剂， 皮肤除酸剂，光学扩散剂，防晒剂，表皮脱落促进剂和抗氧化剂。
41.权利要求1的组合物，其包括递送赋形剂，其中递送赋形剂包含脂质体、纳米物质 (nanosomes)和基于磷脂的非脂质体制剂。
42.制品，其包含结合进透皮贴片中的权利要求35的组合物。
全文摘要
本发明公开了组合物，其具有抑制果糖赖氨酸酶催产生3-脱氧葡糖醛酮(3DG)的抑制剂和/或3DG失活剂作为其组分，并且其可有效用于治疗或预防通过抑制这种3DG产生可减轻的病症或疾病状态。还公开了这种组合物的使用方法，例如，改善衰老皮肤的外观、质地和/或弹性。
文档编号A61K38/16GK102099049SQ200980128105
公开日2011年6月15日 申请日期2009年5月29日 优先权日2008年5月30日
发明者M. 托比亚 A., 马西 A., 苏 B., 尼瓦 T. 申请人:戴纳米斯制药公司