专利名称：包含麻醉剂的透明质酸基凝胶的制作方法
技术领域：
本发明大体上涉及可注射软组织填充物并且更具体地涉及包括麻醉剂的透明质酸基皮肤和皮下填充物。
背景技术：
一般认为随着人变老，脸部开始表现出重力、日晒和长年的面部肌肉运动(例如微笑、皱眉、咀嚼和眯眼)的影响。保持皮肤看起来年轻的下层组织开始损坏，经常导致通常被称为“衰老效应”的笑纹、微笑纹、“鱼尾纹”和面部皱纹。为了治疗或矫正衰老效应，已经开发出了软组织填充物以帮助填平面部纹路和低凹，并用于修复与脂肪损失相关的组织体积减少。由此软组织填充物可暂时地恢复更光滑更年轻的外观。理想地，软组织填充物在植入皮肤内或皮肤之下时是长效、柔软、光滑并且看起来自然的。此外，软组织填充物很容易用小号针头植入患者内并且只需要较小的挤压力来进行注射。理想的填充物还应该不会引起不良副作用，并且应该是可注射的，同时不会使患者产生不适或仅产生极小的不适。20多年以前，开发出了胶原基软组织填充物，并且在一段时间里，牛胶原基填充物是美国食品和药物管理局(FDA)批准的唯一皮肤填充物。由于这些皮肤填充物是基于牛的，一个主要缺点是患者可能出现变态反应。人们认为大约3-5%的受试人对牛胶原表现出严重的变态反应，因此在任一具体的人中使用这些填充物前需要仔细地测试。除了变态反应之外，胶原基填充物在注射后会迅速降解并且需要频繁处理以维持更光滑更年轻的外观。在2003年2月，源自人的胶原填充物组合物得到了 FDA的批准。这些胶原的优势在于显著降低的变态反应风险。但是，尽管变态反应的发生率降低，源自人的胶原填充物仍然面临注射产品迅速降解的问题。针对不引起变态反应并维持更光滑更年轻的外观的填充物的研究已经引起对透明质酸(HA)基产品的开发。在2003年12月，第一种HA基填充物被FDA批准。紧随其后的是对其他HA基填充物的开发。HA也被称作乙酰透明质酸，是天然水溶性多糖，具体地是糖胺聚糖，是细胞外基质的主要成分并且广泛分布于动物组织中。HA具有极好的生物相容性并且在植入患者中时不会引起变态反应。此外，HA能够结合大量的水，这一点使之成为很好的软组织增体积剂 (volumizer)0 开发在体内显示出理想的特性以及理想的手术可用性的HA基填充物被证明是很困难的。例如，在体内表现出合乎需要的稳定性的HA基填充物可能很黏，以至于通过小号针头注射非常困难。相反，相对容易通过小号针头注射的HA基填充物在体内经常有相对较差的稳定性。克服这个困难的一个方法是使用交联HA基填充物。交联HA是通过将游离HA与交联剂在合适的反应条件下反应形成的。制备包含交联HA和游离HA的HA基软组织填充物的方法是已知的。已提出将某些治疗性试剂例如麻醉剂(如利多卡因(Lidocaine))加入可注射HA 基组合物中。遗憾的是，在制备过程中加入利多卡因的HA基可注射组合物易于在注射之前部分或几乎全部降解，特别是在高温灭菌步骤中和/或当储藏相当长的时间时。本文描述的HA基软填充物组合物与制备和使用它们的方法的一个目的是提供不在患者中引起变态反应的、生物相容的、在体内稳定且可用的、并且包括一种或多种局部麻醉剂的软组织填充物。
发明内容
本说明书涉及基于透明质酸(HA)和HA的可药用盐——例如透明质酸钠 (NaHA)——的软组织填充物，例如皮肤填充物和皮下填充物。本文描述的HA基组合物包括治疗有效量的至少一种麻醉剂。在一个实施方案中，例如，所述麻醉剂是利多卡因。当进行例如高压灭菌的灭菌技术处理和/或在室温下长时间储藏时，与常规的含有例如利多卡因的HA基组合物相比，本发明的包含至少一种麻醉剂的HA基组合物有增强的稳定性。还提供了制备这样的HA基组合物的方法以及由这样的方法制备的产品。本文描述的是软组织填充物组合物，所述组合物大体上包括由交联剂交联的透明质酸(HA)组分和至少一种与所述交联的HA组分结合的麻醉剂，所述交联剂选自1， 4_ 丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)、1，4-二(2，3_环氧丙氧基)丁烷、1，4-二缩水甘油氧基丁烷(l，4-bisglycidyloxybutane)、l，2-二 (2，3_ 环氧丙氧基)乙烯和 1_(2，3_ 环氧丙基)-2，3-环氧环己烷以及1，4- 丁二醇二缩水甘油醚。在再另一个实施方案中，所述至少一种麻醉剂是利多卡因。在另一个实施方案中， 麻醉剂的量以所述组合物的约0. 1重量％至约5. 0重量％的浓度存在。在另一个实施方案中，麻醉剂以所述组合物的约0. 2重量％至约1. 0重量％的浓度存在。在一个实施方案中， 所述麻醉剂是利多卡因并且以所述组合物的约0. 3重量％存在。在又另一个实施方案中，所述软组织填充物组合物的挤压力在例如约12. 5mm/分钟的速率下为约ION至约13N。在另一个实施方案中，所述组合物的粘度在例如约5Hz下测量时为约5Pa * s至约450Pa * S。在一个实施方案中，所述HA组分是凝胶，例如，内聚性水合凝胶。在一个实施方案中，所述HA组分是具有不超过约至约10%游离HA的交联HA凝胶。对于本公开内容， 游离HA包括在水中全部为可溶形式的确实未交联HA以及轻度交联HA链和片段。在其他实施方案中，所述HA组分包含超过约10% (例如，超过约15%，例如最多达或超过约20% )的游离HA。在又另一个实施方案中，所述HA组分是包含于游离HA的相对液体性介质中的交联HA颗粒的凝胶。在一些实施方案中，所述HA组分的平均颗粒大小超过约200μπι，例如， 超过约250 μ m。本文还描述了一种软组织填充物组合物，包括由1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚 (BDDE)交联的HA组分和浓度为所述软组织填充物组合物的约0. 1重量％至约5. 0重量％ 的麻醉剂组分，其中所述HA组分的交联度小于约5%，例如约2%，其中所述麻醉剂是利多卡因。本文还描述了制备软组织填充物组合物的方法，所述方法包括以下步骤提供由至少一种交联剂交联的HA组分，所述交联剂选自1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)、1， 4-二(2，3_环氧丙氧基)丁烷、1，4_ 二缩水甘油氧基丁烷、1，2_ 二(2，3_环氧丙氧基)乙烯和1- ，3-环氧丙基)-2，3_环氧环己烷以及1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚或其结合物；调节所述HA组分的pH至调节过的pH高于约7. 2 ；并向所述具有所述调节过的pH的HA组分加入含有至少一种麻醉剂的溶液，以获得HA基填充物组合物。在另一个实施方案中，通过例如高压灭菌将所述组合物灭菌以形成灭菌组合物， 并且其中所述灭菌组合物在室温下稳定至少约6个月——例如，至少9个月，至少约12个月或更长时间。在又另一个实施方案中，所述调节过的pH高于约7. 5。在另一个实施方案中，所述方法还包括在所述加入包含所述至少一种麻醉剂的溶液的步骤期间或之后勻化所述HA组分的步骤。在另一个实施方案中，所述勻化步骤包括将所述组合物用受控的剪切力混合。在另一个实施方案中，所述提供HA组分的步骤包括提供干燥的游离NaHA材料， 并在碱性溶液中使所述干燥的游离NaHA材料水合以得到游离的碱性NaHA凝胶。在再另一个实施方案中，所述游离的碱性NaHA材料的pH高于约8. 0。在又另一个实施方案中，所述 PH高于约10。在另一个实施方案中，所述HA组分包含超过约20%的游离HA，并且所述HA组分的交联部分的交联度小于约6%或小于约5%。在又另一个实施方案中，所述软组织填充物组合物具有微粒特性，因为它包含分散于液体的可溶性HA介质中的交联HA颗粒。在一些实施方案中，这样的颗粒的平均大小为至少约200 μ m，并且在其他实施方案中，这样的颗粒的平均大小为至少约250 μ m。本文还描述了一种软组织填充物组合物，包括由1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚 (BDDE)交联的透明质酸(HA)组分和浓度为所述软组织填充物组合物的约0. 1重量％至约 5. 0重量％的麻醉剂组分，其中所述HA组分的交联度小于约5%，其中所述麻醉剂是利多卡因。在本发明的一个具体实施方案中，还描述了一种制备一种软组织填充物组合物的方法，所述方法包括以下步骤提供干燥的游离NaHA材料，并在碱性溶液中使所述干燥的游离NaHA材料水合以得到一种游离的碱性NaHA凝胶；将所述游离的NaHA凝胶用BDDE交联以形成交联的碱性HA组合物，其交联度小于约5%并且pH高于约7. 2 ；向所述具有调节过的PH的HA组分加入含有0. 3%利多卡因HCl的溶液，以得到所述HA基填充物组合物；勻化所述HA基填充物组合物，从而形成勻化的HA基填充物组合物；并灭菌所述勻化的HA基
5填充物组合物，从而形成一种灭菌HA基填充物组合物，其中所述软组织填充物组合物具有超过约200 μ m的颗粒大小，例如超过约250 μ m的颗粒大小。
图1图解说明了来自实施例4中样本5的凝胶中的利多卡因浓度与时间的关系，所述凝胶由测试2的方法制备。本说明书所用的某些术语意指以下的如下所详述的定义。在术语的定义与所述术语的常用含义背离时，除非专门指出，否则申请人意欲使用以下所提供的定义。在本文中使用高压灭菌稳定的或者对高压灭菌稳定描述抵抗降解的产品或组合物，这样使得所述产品或组合物在有效的高压灭菌之后保持以下方面的至少一方面，优选全部方面透明的外观、PH、挤压力和/或流变学特征、透明质酸(HA)浓度、无菌度、摩尔渗透压浓度和利多卡因浓度。本文使用高分子量HA描述具有至少约一百万道尔顿(mw彡IO6Da或IMDa)至约 4. OMDa的分子量的HA材料。例如，本发明组合物中的所述高分子量HA可具有约2. OMDa的分子量。在另一个实例中，所述高分子量HA可具有约2. SMDa的分子量。本文使用低分子量HA描述具有少于约1. OMDa的分子量的HA材料。低分子量HA 的分子量可以是约200，OOODa (0. 2MDa)至少于约1. OMDa，例如约300，OOODa (0. 3MDa)至约 750，OOODa (0. 75MDa)。本文使用的交联度是指将各个HA聚合物分子或单体链连接为永久结构或如本文公开的软组织填充物组合物的分子间连接。此外，对于本发明公开内容，交联度还被定义为HA基组合物内交联部分中的交联剂与HA单体单元的重量百分比(percent weight ratio)。交联度由HA单体与交联剂的重量比(HA单体交联剂)来测量。本文使用的游离HA是指未交联至或者很轻度地交联至(很低的交联度)构成所述软组织填充物组合物的高度交联的(较高的交联度)大分子结构的各个HA聚合物分子。 游离HA —般保持水溶性。游离HA或者可定义为构成本文所公开的软组织填充物组合物的大分子结构的“未交联”或轻度交联组分。本文所用的内聚性是HA基组合物保持其形状和抵抗变形的能力。内聚性受初始游离HA的分子量比例、交联度、交联后剩余游离HA的量和HA基组合物的pH等因素的影响。当按照本文实施例1公开的方法测试时内聚性HA基组合物会抵抗析相作用(phase separation)0
具体实施例方式本发明公开内容大体上涉及基于透明质酸(HA)和HA的可药用盐(例如透明质酸钠(NaHA))的软组织填充物，例如皮肤填充物和皮下填充物。在一方面，本文描述的HA基组合物包括治疗有效量的至少一种麻醉剂，例如利多卡因。当进行高温和高压处理时，例如在加热和/或压力灭菌技术例如高压灭菌过程中所经历的那些高温和高压处理，并且/或者例如在室温下长时间储藏时，与常规的含有例如利多卡因的HA基组合物相比，本发明的包含至少一种麻醉剂的HA基组合物具有增强的稳定性。
所述稳定的组合物在有效的高压灭菌和/或长时间储藏后保持以下方面的至少一方面或者全部方面透明的外观、可用于患者的PH、挤压力和/或流变学特征、HA浓度、无菌度、摩尔渗透压浓度和利多卡因浓度。还提供了制备这样的HA基组合物的方法或过程以及由这些方法或过程制备的产品。如本文所使用，透明质酸(HA)可指它的任意透明质酸盐，并且包括但不局限于透明质酸钠(NaHA)、透明质酸钾、透明质酸镁、透明质酸钙及它们的结合物。一般地，在本文所描述的组合物中HA的浓度优选地为至少lOmg/mL并且最高达约 40mg/mL。例如，在某些所述组合物中HA的浓度为约20mg/mL至约30mg/mL。此外，例如，在一些实施方案中，所述组合物的HA浓度为约22mg/mL、约2%ig/mL、约^mg/mL或约28mg/mL。此外，一种或多种麻醉剂的浓度为有效减轻注射所述组合物时所感受到的疼痛的量。所述至少一种局部麻醉剂可选自氨布卡因(ambucaine)、阿莫拉酮(amolanone)、 阿米洛卡因(amylocaine)、奥布卡因(benoxinate)、苯佐卡因(benzocaine)、贝托卡因(betoxycaine)、苯才卯胺酉旨(biphenamine)、布比卡因(bupivacaine)、布他卡因(butacaine)、氨苯丁酯(butamben)、甲氯卡因(butanilicaine)、丁胺卡因(butethamine)、丁托西卡因(butoxycaine)、卡铁卡因(carticaine)、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、己基苯酉先爱康因(cocaethylene)、可卡因(cocaine)、环美卡因(eyelomethycaine)、二丁卡因(dibucaine)、二甲异喹(dimethysoquin)、二甲卡因 (dimethocaine)、地哌冬(diperodon)、双环胺(dycyclonine)、去水芽子碱(ecgonidine)、 芽子碱(ecgonine)、氯乙烧、依替卡因(etidocaine)、β-优卡因(beta-eucaine)、尤普罗辛(euprocin)、非那可明(fenalcomine)、formocaine、海克卡因(hexylcaine)、轻丁卡因(hydroxyteracaine)、对氨基苯甲酸异丁酉旨(isobutyl p-aminobenzoate)、甲磺酸亮氨卡因(leucinocaine mesylate)、左沙屈尔(Ievoxadrol)、利多卡因(Iidocaine)、 甲哌卡因(mepivacaine)、美普卡因(meprylcaine)、美布卡因(metabutoxycaine)、氯甲烷、麦替卡因(myrtecaine)、纳伊卡因fca印aine)、奥他卡因(octacaine)、奥索卡因(orthocaine)、轻乙卡因(oxethazaine)、对乙氧卡因(parethoxycaine)、非那卡因 (phenacaine)、苯酚、哌罗卡因(piperocaine)、匹多卡因(piridocaine)、聚乙二醇单十二醚(polidocanol)、丙吗卡因(pramoxine)、丙胺卡因(prilocaine)、普鲁卡因(procaine)、 M ^ 13 (propanocaine) > M ^ ^ 13 (proparacaine) > Μ ΦΚ ^ 13 (propipocaine)、f^ 氧卡因(propoxycaine)、假可卡因(psuedococaine)、口比口各卡因(pyrrocaine)、罗喊卡因(ropivacaine)、水杨醇、丁卡因(tetracaine)、托利卡因(tolycaine)、三甲卡因 (trimecaine)、佐拉敏(zolamine)、及其盐。在一个实施方案中，所述至少一种麻醉剂是利多卡因，例如利多卡因HCl的形式。本文描述的组合物的利多卡因浓度可以是所述组合物的约0. 1重量％至约5重量％，例如所述组合物的约0. 2重量％至约1. O重量％。在一个实施方案中，所述组合物的利多卡因浓度为所述组合物的约0.3重量％ (w/w% ) 0本文描述的组合物中利多卡因的浓度可为治疗有效量的，这意味着所述浓度足以提供不损害患者的治疗益处。在本发明的一个方面中，提供了一种制备包含有效量利多卡因的HA基组合物的方法，其中所述方法包括提供一种还包含交联的内聚性HA基凝胶的前体组合物，向其中加入包含利多卡因(例如利多卡因HCl形式)的溶液，并且将所得混合物勻化以得到一种至少部分交联的包含利多卡因的内聚性HA基组合物，所述组合物对高压灭菌稳定。所述交联的内聚性HA基凝胶包含不多于约1体积％至约10体积％ (w/v%)的游离或轻度交联的 HA材料。不意 欲囿于可操作性的任何具体理论，人们认为，在本发明的一些实施方案中，所述前体组合物的高内聚性起到基本上或完全防止或阻止所述加入了利多卡因的组合物中交联HA的分解或降解的作用。人们认为发生这样的降解可能主要是因为很多、也可能是大部分的交联HA基凝胶是按照常规方法制备的，当加入利多卡因时其方式会产生内聚性不足以防止这样的降解的凝胶。现已发现将利多卡因加入内聚性充分的交联HA基组合物中并不会引起所述组合物明显或显著的降解，而且所述组合物在流变学、粘性、外观和其他特征方面保持其完整性，甚至是当储藏较长一段时间——例如至少6个月至1年或更长时间的一段时间，并且甚至是在进行灭菌操作例如高压灭菌处理之后。令人意外的发现是，可以根据本发明的方式制备包含利多卡因的交联HA基组合物制剂，以生产灭菌稳定的、可注射的HA/利多卡因组合物。本文还描述了一种通过以下方式制备含有有效量利多卡因的稳定的HA基组合物的方法制备交联的内聚性HA基前体组合物，向所述前体组合物加入利多卡因盐酸盐 (lidocaine chlorhydrate)，以形成HA/利多卡因凝胶混合物，并勻化所得混合物，以得到对高压灭菌稳定的交联HA基组合物。在某些实施方案中，所述前体组合物是包含少于约可溶液体形式的游离HA的凝胶。在其他的实施方案中，所述前体组合物包含不超过约1体积％至约10体积％的游离 HA。所述前体组合物可包含第一组分和第二组分，所述第一组分包含基本为固相的相对高度交联的HA颗粒，所述第二组分包含基本为液相的游离或相对低度交联的HA，相对高度交联的颗粒在所述液相中分散。所述组合物可包含约10体积％至约20体积％或更多的游离HA。在一些实施方案中，所述游离HA占少于所述组合物的20重量％。例如，所述游离 HA占少于所述HA组分的10重量％。在另一个实施方案中，第二部分占所述HA组分的约1
重量％至约10重量％。例如，所述前体组合物可包含内聚性HA基凝胶。在其他的实施方案中，所述游离HA占超过所述HA组分的约20重量％。在一些实施方案中，本发明的组合物具有微粒特性并且包含分散于较少交联的HA 的介质中的相对高度交联的HA微粒。在一些实施方案中，这些交联的HA颗粒的平均大小为至少约200 μ m或至少约250 μ m。这样的微粒组合物的内聚性一般比其他类似的组合物 (没有可辨别的颗粒，或者有平均大小小于200 μ m的颗粒)差。例如，在一些实施方案中，可通过将大量相对高度交联的HA基凝胶挤压通过筛或网以产生相对高度交联的大小和形状大致相同的HA颗粒来制备所述前体组合物。然后将这些颗粒与载体材料一例如一份量的游离HA混合来生产凝胶。此外，提供了制备包含有效量利多卡因的HA基组合物的方法，其中所述方法包括提供包含PH基本为中性、至少部分地交联的HA基凝胶的前体组合物，并且将所述凝胶的PH调节至pH超过约7. 2，例如约7. 5至约8. 0。所述方法还包括以下步骤，即在所述pH 被如此调节过后将含有利多卡因(例如利多卡因HCl形式)的溶液与弱碱性凝胶结合，并且获得包含对高压灭菌稳定的包含利多卡因的HA基组合物。如本文别处所述，另一种制备包含有效量利多卡因的稳定的HA基组合的方法一般包括以下步骤提供纯化的NaHA材料，例如纤维形式的所述材料；将所述材料水合；并且将所述水合材料用合适的交联剂交联以形成交联的HA基凝胶。所述方法还包括以下步骤中和并溶胀所述凝胶，并且向所述凝胶加入包含利多卡因(优选利多卡因盐酸盐的酸式盐)的溶液，以形成HA/利多卡因凝胶。此外，所述方法还包括勻化所述HA/利多卡因凝胶并将所述勻化的HA/利多卡因凝胶装入例如注射器中来进行配药。然后将所述注射器在有效温度和压力下通过高压灭菌灭菌。按照本说明书，与使用常规方法制备的包含利多卡因的HA基组合物相比，所述包装好并且灭菌的内聚性NaHA/利多卡因凝胶表现出增强的稳定性。在高压灭菌期间，将本发明的产品和组合物暴露于至少约120°C至约130°C的温度下和/或至少约12磅/平方英寸(PSI)至约20PSI的压力下，持续至少约1分钟至约15 分钟的一段时间，就认为它们是无菌的。本发明的产品和组合物在室温下长期储藏时依然保持稳定。本发明的组合物优选地在至少约25°C的温度下保持稳定达至少约2个月、或至少约6个月、或至少约9个月、或至少约12个月、或至少约36个月的时间。在一个具体实施方案中，所述组合物在最高达约 45°C的温度下保持稳定达至少2个月的时间。在一个实施方案中，所述制备方法包括提供干燥的HA纤维或粉末形式的HA原材料的起始步骤。HA原材料可以是HA、它的盐和/或其混合物。在一个优选的实施方案中， 所述HA材料包括NaHA的纤维或粉末，并且甚至更优选细菌来源的NaHA。在本说明书的一些方面中，所述HA材料可以是动物来源的。所述HA材料可以是包括HA的原材料和至少一种其他多糖(例如糖胺聚糖(GAG))的结合物。在一些实施方案中，所述组合物中的所述HA材料几乎全部地包含高分子量HA或由高分子量HA组成。也就是说，本发明的组合物中几乎100%的所述HA材料都可以是如上文定义的高分子量HA。在其他的实施方案中，所述组合物中的所述HA材料包含如上文定义的相对高分子量的HA和相对低分子量的HA的结合物。所述组合物的所述HA材料可包含约5%至约95%的高分子量HA，其余为包含低分子量的HA材料。在本发明的一个典型实施方案中，高分子量HA对低分子量HA的比例为至少约2 (w/w彡2)，并且优选超过2，其中高分子量HA的分子量超过1. OMDa0本领域技术人员将理解，对高分子量和低分子量HA材料的选择及其相对百分比或比例取决于所需特性，例如HA基终产物的挤出力、弹性模数(elastic modulus)、粘性模数(viscous modulus)和表示为粘性模数和弹性模数的比例的相角、内聚性等。对于可帮助理解本公开内容的这一方面和其他方面的其他信息，参见Lebreton的美国专利申请 No. 2006/0194758，其全部公开内容以此引用的方式纳入本文。按照本说明书，所述HA基凝胶可通过首先清洗和纯化具有所需高/低分子量比例的干燥的HA材料或HA原料来制备。这些步骤一般涉及例如用纯水水合具有所需高/低分子量比例的干燥的HA纤维或粉末，并且将上述材料过滤以除去大的异物和/或其他杂质。 然后将已过滤的、水合的材料干燥并纯化。可分别清洗和纯化所述高分子量和低分子量HA， 或者可以例如以所需的比例将其混合在一起，随即进行交联。在本公开内容的一方面，将纯的、干燥的NaHA纤维在碱性溶液中水合以制备游离的NaHA碱性凝胶。在这一步骤中可使用任何适合的碱性溶液来水合所述NaHA，所述碱性溶液例如但不局限于包含氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钾(KOH)、碳酸氢钠(NaHCO3)、氢氧化锂 (LiOH)等的水性溶液。在另一个实施方案中，合适的碱性溶液是含有NaOH的水性溶液。所得的碱性凝胶的PH会超过7. 5。所得碱性凝胶的pH可超过9，或超过10，或超过12，或超过13。所述制备方法中的下一步骤涉及将水合的碱性NaHA凝胶用合适的交联剂交联的步骤。所述交联剂可以是已知适于通过其羟基基团交联多糖及其衍生物的任何试剂。合适的交联剂包括但不局限于1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚(或1，4_ 二(2，3_环氧丙氧基)丁烷或1，4 二缩水甘油氧基丁烷，这些通常都被称作BDDE)、1，2-二(2，3_环氧丙氧基)乙烯和 1- ，3-环氧丙基)-2，3_环氧环己烷。本发明公开内容的范围并不排除使用多于一种交联剂或使用不同的交联剂。在本发明公开内容的一方面，本文所描述的HA凝胶用BDDE交联。可使用本领域技术人员已知的任何方法来进行交联步骤。本领域技术人员理解如何根据HA的性质优化交联条件，以及如何将交联进行至最佳程度。对本发明的公开内容，交联度被定义为在HA基组合物的交联部分中交联剂和HA 单体单元的重量百分比。交联度由HA单体与交联剂的重量比(HA单体交联剂)来测量。本发明组合物的HA组分中的交联度为至少约2%，最大为约20%。在一些实施方案中，交联度为约4%至约12%。在一些实施方案中，交联度为小于约6%，例如小于约5%。在其他的实施例中，交联度大于5%，例如，为约6%至约8(%。在一些实施方案中，所述HA组分能够吸收至少约为其重量一倍的水。当被中和与溶胀时，交联的HA组分和所述交联的HA组分吸收的水的重量比例为约1 1。所得的水合 HA基凝胶具有内聚性高的特性。本发明的一些实施方案的HA基凝胶可具有足够的内聚性，以使所述凝胶在 2000rd/min下离心5分钟后不会遭受显著的析相作用。在另一个实施方案中，所述凝胶具有能够吸收至少1倍于其重量的水的特性，并且具有足够的内聚性，以使得当以约1 1凝胶/水的重量比例用水溶胀时，例如当进行离心处理时，所述凝胶保持其完整性。所述水合的交联的HA凝胶可被溶胀以得到所需的内聚性。这一步骤可通过例如加入含有酸例如HCl的水性溶液来中和所述交联的水合HA凝胶来完成。然后将所述凝胶在磷酸盐缓冲的盐水(PBQ溶液中和低温下溶胀充足的时间。在一个实施方案中，所得的溶胀的凝胶具有高的内聚性，且没有明显不同 (visibly distinct)的颗粒，例如当用裸眼观察时没有明显不同的颗粒。在一个优选实施方案中，所述凝胶在小于35X的放大倍数下没有明显不同的颗粒。现在用常规方法，例如透析或醇沉淀来纯化所述凝胶，以回收交联的材料、稳定所述材料的PH并除去所有未反应的交联剂。可加入额外的水或弱碱性水溶液，以使组合物中的NaHA浓度达到所需的浓度。
优选地将所述纯化的、pH基本为中性的交联HA凝胶的pH调节至使所述凝胶变为弱碱性，这样使得所述凝胶的PH超过约7. 2，例如，约7. 5至约8. 0。这一步骤可通过任何合适的方法来完成，例如通过向所述凝胶加入合适量的稀Na0H、K0H、NaHCO3或LiOH或者任何其他本领域技术人员已知的碱性分子、溶液和/或缓冲组合物。
然后将有效量的利多卡因例如利多卡因HCl加入所述纯化的内聚性NaHA凝胶中。 例如，在一些实施方案中，所述利多卡因HCl以粉末形式提供，所述粉末用注射用水(WFI) 溶解。用缓冲液或通过用稀释的NaOH调节来使所述凝胶保持中性，以使最终的HA/利多卡因组合物具有所需的基本为中性的PH。优选地，所述包含利多卡因的最终HA基填充物组合物的利多卡因浓度为所述组合物的至少约0. 至约5%，例如约2重量％，或者在另一个实施例中为约0.3%。在加入利多卡因HCl后，或者可选地，在加入利多卡因HCl期间，将所述HA/利多卡因凝胶或组合物勻化，以制备高度均勻的具有所需稠度和稳定性的内聚性HA/利多卡因凝胶。所述勻化步骤优选包括混合、搅拌或用受控的剪切力击打凝胶，得到基本均勻的混合物。本文描述的HA/利多卡因组合物表现出依赖于所述组合物性质和至少一种麻醉剂的存在的粘度。所述HA/利多卡因组合物的粘度可以是约50Pa女s至约450Pa * s。在其他的实施方案中，所述粘度可以是约50Pa * s至约300Pa * s，约IOOPa * s至约400Pa * s，或约 250Pa * s 至约 400Pa * s，或约 50Pa * s 至约 250Pa * s。勻化以后，将所述HA/利多卡因组合物引入注射器中并灭菌。可用于本说明书的注射器包括本领域中已知的能够递送粘性皮肤填充物组合物的任何注射器。所述注射器的内体积一般为约0. 4mL至约3mL，更优选约0. 5mL至约1. 5mL或约0. 8mL至约2. 5mL。此内体积与注射器的内径有关，所述注射器的内径在注射高粘性皮肤填充物组合物所需的挤压力中具有重要的作用。所述内径一般为约4mm至约9mm，更优选为约4. 5mm至约6. 5mm或约 4. 5_至约8. 8_。此外，由注射器递送HA/利多卡因组合物所需的挤压力依赖于针头的规格。所使用的针头的规格一般包括约18G至约40G的规格、更优选约25G至约33G的规格或约16G至约25G的规格。本领域技术人员可确定满足具体挤压力要求所需的正确的注射器尺寸和针头的规格。本文描述的HA/利多卡因组合物使用上述针头尺寸所表现出的挤压力是在使患者舒适的注射速度下的挤压力。使患者舒适被用来定义在注射至软组织时不会对患者造成伤害或导致过度疼痛的注射速率。本领域技术人员将理解这里所用的舒适不仅包括患者的舒适，还包括医生或医学技术人员注射所述HA/利多卡因组合物的舒适和能力。尽管用本说明书的HA/利多卡因组合物可实现某些挤压力，但是本领域的技术人员理解高的挤压力可导致在注射期间缺乏控制，并且这样的缺乏控制可引起患者额外的疼痛。本发明的HA/ 利多卡因组合物的挤压力可为约8N至约15N，或更优选为约ION至约13N，或约IlN至约 12N。本文所用的灭菌包括本领域已知的任何有效地杀死或消除可传染物的方法，并且优选地基本上不改变所述HA/利多卡因组合物的降解。灭菌已充填的注射器的一个优选方法是通过高压灭菌。高压灭菌可通过对需要灭菌的样本施加热、压力和水汽的混合作用来完成。很多不同的灭菌温度、压力和周期时间可用于此步骤。例如，可将所述已充填的注射器在至少约120°C至约130°C或更高的温度下灭菌。可使用也可不使用水汽。所施加的压力在一些实施方案中依赖于灭菌过程中使用的温度。灭菌周期可以是至少约1分钟至约20分钟或更长。灭菌的另一种方法包括使用已知能杀死或消除可传染物的气体物质。优选地， 环氧乙烷可用作灭菌气体并且本领域中已知其可用于灭菌医疗设备和产品。灭菌的另一种方法包括使用本领域已知能杀死或消除可传染物的辐射源。将一束辐射对准含有所述HA/利多卡因溶液的注射器，并且该波长的能量会杀死或消除不需要的可传染物。优选的可用能量包括但不局限于紫外(UV)光、伽马射线、可见光、微波或任何其他杀死或消除不需要的可传染物的波长或波带，优选基本上不改变所述HA/利多卡因组合物的降解。还描述了制备HA基组合物的方法，所述方法大体上包括以下步骤提供无麻醉剂的交联HA基凝胶(在下文中，有时称为前体凝胶)，调节所述前体凝胶的pH以得到pH为约 7. 2至8. 0的凝胶，并且向所述已调节pH的凝胶加入合适量的利多卡因或其他麻醉剂以得到包含麻醉剂的HA基组合物。在一个实施方案中，所述前体凝胶是包含不超过约10体积％ 的游离HA的高内聚性凝胶。在另一个实施方案中，所述前体凝胶是包含至少10体积％至约20体积％的游离HA的相对低内聚性凝胶。实施例1测试凝胶内聚性的方法为了证明本公开内容的HA基凝胶组合物的内聚性进行以下测试。首先，将待测试的0. 2g或0. 4g凝胶组合物置于玻璃注射器中。接着，将0. 2g或更多的磷酸盐缓冲物加入所述注射器中并且将所得混合物彻底地混合约1小时以得到均勻的混合物。然后在2000tr/min下将所述均勻的混合物离心5分钟以除去气泡并使所有颗粒倾析(decantation)。然后将所述注射器保持直立并且将一滴曙红色料通过注射器和 18G的针头滴在凝胶的表面。10分钟后，所述染料已经缓慢地扩散通过凝胶。在凝胶稀释、勻化和倾析之后，相对低内聚性凝胶显示出析相作用(稀释的粘度较低的无颗粒上层相和由裸眼可见或显微镜下可见的倾析颗粒组成的下层相)。在相同的条件下，高内聚性凝胶基本没有显示出析相作用，并且染料不能扩散进入所述内聚性制剂中。另一方面，相对低内聚性凝胶显示出清晰的析相作用。实施例2合成含有利多卡因的软组织填充物将NaHA纤维或粉末在碱性溶液例如含有NaOH的水性溶液中水合。在室温约23°C 下将混合物混合形成基本均勻的碱性HA凝胶。将交联剂BDDE在水性溶液中稀释，并且加入至所述碱性HA凝胶中。将所得混合物勻化数分钟。或者，可在所述过程开始时将BDDE直接加入至HA纤维(干燥状态)，随后进行水合。然后在室温下相对缓慢地开始交联反应，确保更好的交联均勻性和效力。参见，例如 Piron等，美国专利No. 6，921，819，它以引用的方式被全文纳入本文，纳入程度至作为本说明书的一部分。然后将得到的交联HA凝胶混合物在约50°C加热约2. 5小时。现在所述材料是高度交联的HA/BDDE凝胶(外观=固体凝胶)。然后将该交联的凝胶用合适的酸性溶液中和。 然后将已中和的HA凝胶在低温(例如约5°C的温度)下在磷酸盐缓冲液中溶胀，以得到高内聚性HA凝胶。在这个具体实施例中，所述磷酸盐缓冲的盐水溶液包含注射用水(WFI)、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。当被中和和溶胀时，所述交联的HA组分和所述交联的HA组分吸收的水的重量比例为约1 1。然后将所述溶胀的内聚性HA凝胶机械搅拌，填充至透析膜中并且用磷酸盐缓冲液透析。将所述HA凝胶填充至透析膜中并且用磷酸盐缓冲液透析最长达数天，并定期更换透析液以除去未反应的交联剂、将PH稳定至接近中性(pH = 7. 2)并且确保HA凝胶的合适的摩尔渗透压浓度。所得到的内聚性HA凝胶的摩尔渗透压浓度为约200m0Smol至约 400m0smol，最优选约 300m0smolo透析后，所得到的内聚性HA凝胶具有基本上为中性、优选约7.2的pH，并且当在小于35X的放大倍数下观察时在液体性介质中没有明显不同的颗粒。首先用WFI溶解粉末形式的利多卡因盐酸盐(利多卡因HCl)并通过0.2μπι滤器过滤。将稀NaOH溶液加至所述内聚性HA凝胶以达到弱碱性的ρΗ(例如，约7. 5至约8 的PH)。然后将所述利多卡因HCl溶液加至所述弱碱性凝胶以达到最终所需浓度，例如约 0.3% (w/w)的浓度。然后所得的HA/利多卡因混合物的pH为约7，而所述HA浓度为约 2%ig/mL。在装有适当的搅拌机构的标准反应器中进行机械混合以得到适当的均勻性。若需要，可将合适量的游离HA凝胶加入所述HA/利多卡因凝胶混合物，这样有增加利多卡因递送的动力学的益处。例如，在磷酸盐缓冲液中溶胀游离HA纤维，以得到均勻的粘弹性凝胶。然后将该游离HA凝胶加入所述交联的HA/利多卡因凝胶(例如，以约5%， w/w)0然后将所得的凝胶填充至随时可填充的(Ready-to-Fill)灭菌注射器中并且在足够的灭菌温度和压力下高压灭菌至少约1分钟。高压灭菌后，将最终的HA/利多卡因产品包装并分给医生。按照该方法制备的产品表现出一种或多种如本文他处定义的稳定特性。例如，所述高压灭菌的HA/利多卡因产品具有可接受的粘度、内聚性和挤压力。在储藏数月之后进行的产品测试中并未发现所述 HA/利多卡因凝胶产品降解。实施例3软组织填充物的特性按照本文描述的方法制备的HA/利多卡因组合物的特性在下表1显示。例如，挤压力是使用INSTRON 高级材料测试系统模型5564(InStr0n，Norwood, ΜΑ)测量的，运行BLUEHILL 软件版本 2. ll(Instron, Norwood, ΜΑ)。表 权利要求
1.一种制备软组织填充物组合物的方法，所述方法包括以下步骤提供由至少一种交联剂交联的HA组分，所述交联剂选自1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚 (BDDE)、1，4-二(2，3-环氧丙氧基)丁烷、1，4-二缩水甘油氧基丁烷、1，2-二(2，3-环氧丙氧基)乙烯和1- (2，3-环氧丙基)-2，3-环氧环己烷以及1，4- 丁二醇二缩水甘油醚或其结合物；调节所述HA组分的pH至调节过的pH高于约7. 2 ；并向所述具有所述调节过的PH的HA组分加入含有至少一种麻醉剂的溶液，以获得HA基软组织填充物组合物。
2.权利要求1的方法，其中所述调节过的pH高于约7.5。
3.权利要求1的方法，其中所述至少一种麻醉剂是利多卡因。
4.权利要求1的方法，其中所述提供HA组分的步骤包括以下步骤提供干燥的未交联 NaHA材料，并在碱性溶液中使所述干燥的未交联NaHA材料水合以得到未交联的碱性NaHA 凝胶。
5.权利要求4的方法，其中所述未交联的碱性NaHA凝胶的pH高于约8.O。
6.权利要求4的方法，其中所述未交联的碱性NaHA凝胶的pH高于约10。
7.权利要求1的方法，其中所述HA组分包含超过约10%的未交联HA。
8.权利要求1的方法，其中所述HA组分包含至少约20%的未交联HA。
9.权利要求1的方法，其中所述HA组分的交联度小于约5%。
10.权利要求1的方法，其中所述HA组分包含平均颗粒大小超过约200μ m的交联HA 颗粒。
11.权利要求1的方法，其中所述HA组分是非内聚性组合物。
全文摘要
本文公开的是基于透明质酸及其可药用盐的软组织填充物，例如，皮肤填充物和皮下填充物。在一方面，本文描述的透明质酸基组合物包括治疗有效量的至少一种麻醉剂，例如利多卡因。例如当进行灭菌技术处理或长时间储藏时，与常规的包含利多卡因的组合物相比，本发明的包含利多卡因的透明质酸基组合物具有增强的稳定性。还提供制备这些透明质酸基组合物的方法和过程。
文档编号A61K47/36GK102170856SQ200980139163
公开日2011年8月31日 申请日期2009年3月2日 优先权日2008年8月4日
发明者P·勒布雷东 申请人:阿勒根工业有限公司