专利名称：一种抗衰老组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及本发明涉及含有来源于植物、动物或矿物组份的医用配制品，特别涉 及一种抗衰老组合物。
背景技术：
衰老是一种自然规律，是生物随着时间的推移而自发进行的必然过程，表现为结 构和机能衰退，适应性和抵抗力减退。在生理学上，把衰老看作是从受精卵开始一直进行到 老年的个体发育史。从病理学上，衰老是应激和劳损，损伤和感染，免疫反应衰退，营养不 足，代谢障碍以及疏忽和滥用积累的结果。虽然人们不可能违背这个规律，但是当人们采用 良好的生活习惯和保健措施并适当地运动，就可以有效地延缓衰老，降低衰老相关疾病的 发病率，提高生活质量。临床上使用的一些化学合成抗衰老药，虽然对衰老有一定的延缓作 用，但是这些药物对患者的机体也造成了很大的损伤。寻找天然无毒副作用的抗衰老药物 已经成为研究的热点。螺旋藻(Spirulina)是浮游自养的原核生物，其外观为青绿色，显微镜观察呈螺 旋状，它为蓝藻门(Cyanoptha)颤藻目(Oscilatorales)颤藻科(Oscilatoriaece)的一个 属。螺旋藻作为宝贵的营养与药物资源日益受到科学界的重视，被公认为“人类未来的优秀 粮食资源”。它不仅含有丰富的蛋白质，还含有15%左右的碳水化合物。螺旋藻中所含有的 最主要的活性成分之一为螺旋藻多糖(PSP)，它主要由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖和 葡萄糖醛酸组成，糖苷键为a-型，分子量约为12590D，是一种水溶性多糖。国内外大量的 研究表明，PSP具有多种生理活性，它可促进细胞生长、增强机体免疫力、抑制肿瘤生长、降 血糖、降血脂、抗辐射、抗突变及抗氧化等功能。螺旋藻多糖是从螺旋藻提取出的生理活性多糖，无毒。性状无色的或淡黄色粉 末。溶于水，不溶于醇和油脂。螺旋藻中的螺旋藻多糖具有抗辐射损伤和改善放、化疗引 起的副反应作用，因此对肿瘤患者是食疗佳品。螺旋藻多糖是采用现代化生物化学技术与 工艺，从螺旋藻中提取的，含多种且生物活性更高的纯天然生物制品。它是首先在美国专 家经数年的悉心研究，于九十年代中期开发出的，螺旋藻多糖现广泛被用于化妆、保健、医 药等。据医学专家新近分析，现代人由于所处生活环境受到现代工业污染愈来愈重与强烈 工作压力加大，处于亚健康状况人的比例在逐渐增加，因此，追求返朴归真，锻炼与保健相 结合的人愈来愈多，这符合我国薄大精深中医学固本清源的精髓。螺旋藻多糖是经螺旋藻 作原料，通过现代生物技术提取加工而成的高级生物制品，因此，它不仅保留了螺旋藻中富 含的多种生物活性物质，且生物活性更高。研究证明螺旋藻多糖无论是注射或口服，小 鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率提高33% -52%，吞噬指数提高0. 9-1. 8倍，T淋巴细胞数提高 46.8% -87. 7%，使小鼠的血清溶血素提高39. 5% -98. 0%脾脏白髓淋巴细胞排列密集，红 髓内巨噬细胞明显增多，ANAE阳性淋巴细胞增加7. 3% -12. 8%，并且能极显著地提高细胞 超氧化物岐化酶(S0D)的活力，促进人体外周血中NR细胞的活性等，因此，螺旋藻多糖可以 显著改善与提高人的机体非特异性的细胞与特异性的体液免疫功能，增强人体抵抗多种病
4毒感染能力。螺旋藻多糖对体内腹水型肝癌细胞有显著的抑制率，其中治疗组抑制率54%， 防治组抑制率达91%。研究表明螺旋藻多糖虽然不能直接杀伤癌细胞，但对癌细胞中的 DNA、RNA和蛋白质合成具有抑制作用，且随作用时间延长抑制作用而加强。螺旋藻多糖对 电离辐射的损伤具有明显的防护效果，它能使患有急性放射的NIH小鼠存活率提高63%， 还能显著减轻小鼠骨髓细胞的辐射遗传损伤。银杏(ginkgo biloba L.)又名白果，属裸子植物。是冰川时期存活在地球上的孑 遗植物，素有“活化石”之称。中国是银杏的发源地，其资源占世界总量的70%左右。除黑 龙江、吉林、内蒙古、青海、西藏外其他各省区都有分布。银杏叶的主要活性成分为含有甙和酚羟基结构的银杏黄酮和银杏内酯，国内外大 量的研究也表明，银杏黄酮和银杏内酯同样具有多种生理活性，它对心脑血管和神经系统 疾病有很好的治疗效果，同时还具有抗氧化、清除自由基、抗衰老、抗真菌、抗休克、抗过敏、 抗炎等作用，另外银杏内酯还是血小板活化因子(PAF)受体的特异拮抗剂(PAF与多种疾病 的发生、发展关系密切)。银杏叶提取物为银杏科植物银杏的干燥叶提取物。银杏的活性成分是萜烯部分， 其中包括银杏内酯和白果内酯。这些银杏黄酮_糖甙成分具有强大的抗氧化与自由基能 力。银杏叶提取物(GBE)能同时促进大脑和身体肢体的循环。银杏叶提取物的一个主要保 健功能就是抑制一种称为血小板活化因子(PAF)的物质，PAF是一种从细胞中释放的介质， 其会导致血小板聚集(堆积在一起)。高含量的PAF会导致神经细胞损伤，中枢神经系统血 流量降低，发炎，和支气管收缩。与自由基非常相似，高PAF水平也会导致衰老。银杏内酯和白果内酯可在缺血(体内组织缺少氧气)时期内保护中枢神经系统的 神经细胞不受损伤。该功能可能能对苦于中风的患者有辅助治疗的作用。除了抑制血小板 粘着外，银杏提取物调节血管张力和弹力。换句话说，其可令血管循环更加有效率。该提升 循环效率作用对循环系统中的大血管(动脉)和较小血管(毛细血管)都有同样作用。银杏叶提取物可能在大脑，眼球视网膜和心血管系统中可发挥抗氧化特性。其在 大脑和中枢神经系统中的抗氧化作用可能有助于防止因年龄导致的大脑功能衰落。银杏叶 提取物在大脑中的抗氧化功能特别使人感兴趣。大脑和中枢神经系统特别易受自由基攻 击。自由基导致大脑损伤被广泛认为是导致伴随衰老而来的多种疾病的影响因素，其中甚 至包括阿兹海默症。近年来螺旋藻多糖和银杏叶提取物已被开发成了各式各样的药物或保健品。有关 螺旋藻多糖抗衰老作用的报道已经很多，广大科研工作者也进行了大量的试验研究。有关 银杏叶提取物抗衰老的研究和报道还很少。将螺旋藻多糖和银杏叶提取物复合用于抗衰老 的研究目前尚未见报道。
发明内容
本发明所要解决得技术问题在于，提供一种抗衰老组合物，包括螺旋藻多糖和银 杏叶提取物，利用螺旋藻多糖与银杏叶提取物都含有羟基或酚羟基结构，通过组合能发挥 协同增效作用，显著提高抗衰老的效果。为解决上述技术问题，本发明提供了一种抗衰老组合物，包括螺旋藻多糖和银杏叶提取物，所述的螺旋藻多糖和银杏叶提取物的质量比为0. 35 1. 5 0. 35 1. 5。所述螺旋藻多糖与银杏叶提取物的质量比优选为2 1。所述螺旋藻多糖优选为一种水溶性杂多糖，其多糖质量百分比含量优选>93%。所述银杏叶提取物，其总黄酮质量百分比含量优选> 24%，其萜内酯质量百分比 含量优选彡6%。所述螺旋藻多糖的制备方法为准确称取钝顶螺旋藻粉30. 0g，加入300mL石油醚脱脂，间歇搅拌24h。倒出石 油醚，放入通风橱，自然干燥至恒重。再经脱脂的螺旋藻粉内加入360mL(12倍体积)pH10 NaOH溶液，使用超声波细胞粉碎机处理，将经超声波处理过的螺旋藻粉，放入80°C水浴锅 内，间歇搅拌，浸提4h。离心，弃滤渣，收集上清液。上清液内加入5% TCA至无絮状沉淀产 生为止，4°C冰箱放置24h，离心，收集上清液。再加入5% TCA至无絮状沉淀，5小时后离心， 收集上清液。在上清液内加入5倍体积酒精，混勻，4°C冰箱放置24h。离心，收集沉淀，冷冻 干燥得螺旋藻多糖。所述银杏叶提取物的制备方法可以为将干净的银杏叶按原料与萃取剂之比为 1 8-12W/V投料置提取罐中，浸提温度60-80°C，提取时间2-4小时，浸提过程中，每小时 间歇搅拌原料2-3次，每次8-10分钟，提取过程结束时，料液温度控制在60-80°C，滤出料 液；向残余银杏叶中加入5-15倍的萃取剂进行第二次提取，过程同上，合并两次料液，待温 度降到30°C以下后，精滤，去除180目以下的杂质；将前述得到的料液泵入大孔树脂吸附柱 上，用10-15倍柱体积的自来水洗涤去除杂质后，用8-10倍的去离子水过柱，再用70%的乙 醇溶液冲洗树脂吸附柱，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液在60-80°C真空浓缩，回收溶剂，得 到银杏叶提取物的浓缩液；干燥后得到的银杏叶提取物。所述银杏叶提取物的制备方法也可以为将干燥银杏叶粉碎至10-20目，用浓度 为90%乙醇回流提取三次，将提取液合并，过滤，回收乙醇，对过滤液减压浓缩至稠膏；在 上述稠膏中加入浓度为50-70%乙醇，加入量为0. 5-lml/g稠膏，搅勻后回流提取，过滤，沉 淀，同法再处理一次，合并滤液，搅拌，在滤液中加入浓度为2-3%壳聚糖溶液作为絮凝剂， 加入量为0. 02-0. 05ml/g稠膏，絮凝，静置，离心分离；将前述离心分离得到的上清液，用浓 度为5-15%乙醇洗脱，得洗脱物，减压回收乙醇，浓缩，再用水饱和乙酸乙酯萃取，回收有机 层中的溶剂后得浓缩液；将浓缩液真空干燥，得银杏叶提取物。所述银杏叶提取物的制备方法还可以为将银杏叶干燥粉碎至80-100目粗粉，加 入20-40倍量的70%的乙醇回流提取三次，将提取液合并过滤，减压回收至总体积的1/10 ； 浓缩液中加入相同体积的去离子水，阴凉环境中放置24小时，过滤或离心除去沉淀；充分 搅拌，往前述得到的滤液或上清液中加入浓氨水，调节PH至9，放置2小时，过滤或离心除去 沉淀杂质；向前述滤液或上清液中加入盐酸调节PH至3. 5-5. 5，加正己烷萃取4次；萃取后 的水液过大孔吸附树脂柱，先以5倍柱床体积的去离子水洗脱，弃水洗液；再以8-10倍柱床 体积的80%-90%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压挥去乙醇，之后用陶瓷膜超滤，截留分子 量为2-2. 5万，超滤液经减压浓缩，浓缩液喷雾干燥后即得到银杏叶提取物。本发明抗衰老组合物，包括螺旋藻多糖和银杏叶提取物，螺旋藻多糖与银杏叶提 取物组合的药物对体内和体外衰老的进程都有很好的抑制作用，其抗衰老效果都显著优于 螺旋藻多糖和银杏叶提取物单一使用。
图1为本发明实施例所述复合螺旋藻多糖对超氧阴离子清除率试验结果图。
具体实施例方式本发明抗衰老组合物，包括螺旋藻多糖和银杏叶提取物，所述的螺旋藻多糖和银 杏叶提取物的质量比为0. 35 1. 5 0.35 1.5。所述螺旋藻多糖与银杏叶提取物的质量比优选为2 1。所述螺旋藻多糖优选为一种水溶性杂多糖，其多糖质量百分比含量优选>93%。所述银杏叶提取物，其总黄酮质量百分比含量优选> 24%，其萜内酯质量百分比 含量优选彡6%。所述螺旋藻多糖的制备方法为准确称取钝顶螺旋藻粉30. 0g,加入300mL石油醚脱脂，间歇搅拌24h。倒出石 油醚，放入通风橱，自然干燥至恒重。再经脱脂的螺旋藻粉内加入360mL(12倍体积)pH10 NaOH溶液，使用超声波细胞粉碎机处理，将经超声波处理过的螺旋藻粉，放入80°C水浴锅 内，间歇搅拌，浸提4h。离心，弃滤渣，收集上清液。上清液内加入5% TCA(三氯乙酸)至 无絮状沉淀产生为止，4°C冰箱放置24h，离心，收集上清液。再加入5% TCA至无絮状沉淀， 5小时后离心，收集上清液。在上清液内加入5倍体积酒精，混勻，4°C冰箱放置24h。离心， 收集沉淀，冷冻干燥得螺旋藻多糖。所述银杏叶提取物的制备方法可以为将干净的银杏叶按原料与萃取剂之比为 1 8-12(w/w)投料置提取罐中，浸提温度60-80°C，提取时间2-4小时，浸提过程中，每小 时间歇搅拌原料2-3次，每次8-10分钟，提取过程结束时，料液温度控制在60-80°C，滤出料 液；向残余银杏叶中加入5-15倍的萃取剂进行第二次提取，过程同上，合并两次料液，待温 度降到30°C以下后，精滤，去除180目以下的杂质；将前述得到的料液泵入大孔树脂吸附柱 上，用10-15倍柱体积的自来水洗涤去除杂质后，用8-10倍的去离子水过柱，再用70%的乙 醇溶液冲洗树脂吸附柱，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液在60-80°C真空浓缩，回收溶剂，得 到银杏叶提取物的浓缩液；干燥后得到的银杏叶提取物。所述银杏叶提取物的制备方法也可以为将干燥银杏叶粉碎至10-20目，用浓度 为90%乙醇回流提取三次，将提取液合并，过滤，回收乙醇，对过滤液减压浓缩至稠膏；在 上述稠膏中加入浓度为50-70%乙醇，加入量为0. 5-lml/g稠膏，搅勻后回流提取，过滤，沉 淀，同法再处理一次，合并滤液，搅拌，在滤液中加入浓度为2-3%壳聚糖溶液作为絮凝剂， 加入量为0. 02-0. 05ml/g稠膏，絮凝，静置，离心分离；将前述离心分离得到的上清液，用浓 度为5-15%乙醇洗脱，得洗脱物，减压回收乙醇，浓缩，再用水饱和乙酸乙酯萃取，回收有机 层中的溶剂后得浓缩液；将浓缩液真空干燥，得银杏叶提取物。所述银杏叶提取物的制备方法还可以为将银杏叶干燥粉碎至80-100目粗粉，加 入20-40倍量的70%的乙醇回流提取三次，将提取液合并过滤，减压回收至总体积的1/10 ； 浓缩液中加入相同体积的去离子水，阴凉环境中放置24小时，过滤或离心除去沉淀；充分 搅拌，往前述得到的滤液或上清液中加入浓氨水，调节PH至9，放置2小时，过滤或离心除去 沉淀杂质；向前述滤液或上清液中加入盐酸调节PH至3. 5-5. 5，加正己烷萃取4次；萃取后
7的水液过大孔吸附树脂柱，先以5倍柱床体积的去离子水洗脱，弃水洗液；再以8-10倍柱床 体积的80% -90%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压挥去乙醇，之后用陶瓷膜超滤，截留分子 量为2-2. 5万，超滤液经减压浓缩，浓缩液喷雾干燥后即得到银杏叶提取物。所述的螺旋藻多糖与银杏叶提取物的最佳质量比为2 1。所述的螺旋藻多糖为一种水溶性杂多糖，多糖含量> 93%，它主要由D-甘露糖、 D-葡萄糖、D-半乳糖和葡萄糖醛酸等通过a-型糖苷键连接而成，分子量约为12590D。所述的银杏叶提取物，总黄酮含量> 24%，萜内酯含量> 6%。本发明的组合药物在对抑制由D-半乳糖致衰老小鼠方面有着显著的效果，其步 骤如下1、试验动物昆明种小白鼠2、小鼠分组与给药剂量小鼠适应性生长一周后，随机分为空白对照组、模型组和 高、中、低剂量给药组。空白对照组与模型组每天灌服等体积的12. 5ml生理盐水与羧甲 基纤维素钠的等体积混合液。3、造模方法将D-半乳糖用生理盐水配成0. 5%的溶液。在给药的同时，模型组 与给药组每天均无菌操作颈背皮下注射D-半乳糖125mg kg"1 cf1。空白对照同法皮下给 等体积生理盐水，连续八周。4、试验方法试验结束后，小鼠称重，无菌条件下颈动脉采血，3000r/min离心，收 集血清，等体积加入乙醇_氯仿(体积比5 3)混合液，震荡2min，4000r/min离心5min 以除去蛋白质，所得上清液即为SOD抽提液。取血后将小鼠放入75%酒精浸泡消毒，无菌操 作取出胸腺、脾脏、心脏，分别进行脾脏指数、胸腺指数和心肌MDA含量以及大脑皮层脂质 过氧化物含量等指标的检测。5、数据处理采用单因素方差分析(LSD)6、结果本试验发现复合螺旋藻多糖组对致衰老小鼠的血清SOD活性提高和心、 脑MDA含量降低的药效均优越于单一成分组，表明含有相同官能团的螺旋藻多糖和银杏叶 提取物复合使用，产生了协同增效作用。从试验小鼠的脑中MDA含量来看，高剂量组螺旋 藻多糖银杏叶提取物=2 1时，MDA含量最低，说明在该配比下的复合药液清除自由基 的能力最高，使得过剩自由基攻击细胞膜产生的脂质过氧化物含量降到最低。从试验小鼠 血清SOD的活性看，与单一成分组相比，复合组均能发挥协同增效作用，提高SOD活性，其 中高剂量的PSP GBE = 2 1时，小鼠血清SOD活力最高，酶活力比模型对照组提高了 38. 78%。因此，复合螺旋藻多糖与银杏叶提取物对D-半乳糖致衰老小鼠抑制效果最优配 比为PSP GBE = 2 1，而且高剂量的抗衰老效果最好，呈现剂量依赖性。本发明的组合药物在抑制体外氧化方面有着显著的效果，其步骤如下1、试验材料本实验室自提2、H202清除能力测定以pH 7. 4的磷酸盐缓冲液配成lOmmol/L H202，取5ml上述溶液加入5ml样品液 (不同浓度)，均勻混合用紫外可见分光光度计测定其在230nm处的吸光值~，试验中以不 加H202溶液的样品液的吸光值为以不加H202溶液的样品溶液的吸光值为A2。清除率 (% ) = [A0-(ArA2)]/A03、超氧阴离子清除试验
取0. 05mol/L pH 8. 2的Tris-HCl缓冲液4. 5ml于试管中，置25 "C水浴中预 热20min。分别加入不同体积的待测液后，加入2. 5mmol/L邻苯三酚(lOmmol/L HC1配 置)0. 4ml，混勻后在25°C水浴中准确反应4min，立即加入8moL/L HC12滴终止反应，蒸馏水 调零，在290nm处测定吸光度值。空白组以对应体积的蒸馏水代替不同体积的样品溶液，样品对超氧阴离子的清除 率计算公式为清除率(％) = (A空白-A样品)/A空白X1004、羟自由基的产生及清除活性测定取0. 15mol/L pH 7. 4 的磷酸盐缓冲液 1. 0ml，40 ii g/ml 番红花 1. 0ml，0. 945mmol/ L EDTA-Fel. 0ml (新鲜配制)，样品溶液0. 5ml, 3% H2021. 0ml，混合后在37°C水浴中反应 30min,在520nm处测定吸光度As，空白组以0. 5蒸馏水代替样品，测定吸光度A0，对照组以 1. 5ml蒸馏水代替H202和样品，测定吸光度A，用3. 5ml蒸馏水代替番红花、EDTA_Fe、H202和 样品，1.0ml磷酸盐缓冲液调零。清除率(％) = (As-A0)/(A-A0)5、结果从试验结果可以看出，对三种自由基离子H202、超氧阴离子自由基、羟基 自由基的清除率，螺旋藻多糖与银杏叶提取物复合使用的清除率高于三种单一组的清除 率，而且不同的复合配比对最终的清除率有很大影响。对羟基自由基的清除率，PSP GBE =2 1时，在所试验的浓度范围内，清除率均高于任何组，说明螺旋藻多糖与银杏叶提取 物由于含有相似的官能团，产生了叠加的复合效应。与对照组相比，螺旋藻多糖组、银杏黄 酮组、银杏内酯组、复合药物组的清除率分别比空白对照组提高了 45.82% (P<0.01)、 9. 63% (P > 0. 05)、46. 28% (P < 0. 01)和 68. 04% (P < 0. 01)。实施例1 昆明种雄性小白鼠50只，体重20 25g。随机分为空白对照组、模型组、螺旋藻多 糖组(高、中、低剂量)、银杏黄酮组(高、中、低剂量)、银杏内酯组(高、中、低剂量)、组合 药物组(高、中、低剂量的螺旋藻多糖银杏叶提取物=1 1、2 1、1 2)。将D-半乳 糖用生理盐水配成0. 5 %的溶液。在给药的同时，模型组与给药组每天均无菌操作颈背皮下 注射D-半乳糖USmgAg—^cf1。空白对照同法皮下给等体积生理盐水，连续八周。试验结 束后，小鼠称重，无菌条件下颈动脉采血，3000r/min离心，收集血清，等体积加入乙醇-氯 仿(体积比5 3)混合液，震荡2min，4000r/min离心5min以除去蛋白质，所得上清液即 为SOD抽提液。取血后将小鼠放入75%酒精浸泡消毒，无菌操作取出胸腺、脾脏、心脏，分别 进行脾脏指数、胸腺指数和心肌MDA含量以及大脑皮层脂质过氧化物含量等指标的检测。胸腺指数=胸腺重(mg) /体重(g)脾脏指数=脾脏重(mg) /体重(g)试验结果见表1。表1复合螺旋藻多糖对小鼠胸腺指数的影响 注与模型组相比，*P< 0. 05，**P < 0. 01表2复合螺旋藻多糖对小鼠脾指数的影响 注与模型组相比，*P< 0. 05，**P < 0. 01实施例2 如图1所示，为本发明实施例所述复合螺旋藻多糖对超氧阴离子清除率实验结果 图。其中，超氧阴离子清除试验为取0. 05mol/L pH 8. 2的Tris-HCl缓冲液4. 5ml于试管中，置25 "C水浴中预 热20min。分别加入不同体积的待测液后，加入2. 5mmol/L邻苯三酚(lOmmol/L HC1配 置)0. 4ml，混勻后在25°C水浴中准确反应4min，立即加入8mol/LHCl 2滴终止反应，蒸馏水 调零，在290nm处测定吸光度值。空白组以对应体积的蒸馏水代替不同体积的样品溶液，样品对超氧阴离子的清除 率计算公式为清除率(％ ) = (A空白-A样品)/A空白X100。
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以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任 何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等 效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实例所作 的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。所有上述为这一知识产权的首要实施组合物，并没有设定限制以其它形式实施这 种新型组合物。本领域技术人员将利用这一重要信息，对上述内容修改，以实现类似的执行 情况。但是，所有基于本发明的修改或改造新产品和/或方法，属于保留的权利。
权利要求
一种抗衰老组合物，其特征在于，包括螺旋藻多糖和银杏叶提取物，所述的螺旋藻多糖和银杏叶提取物的质量比为0.35～1.5∶0.35～1.5。
2.根据权利要求1所述抗衰老组合物，其特征在于，所述螺旋藻多糖与银杏叶提取物 的质量比为2 1。
3.根据权利要求1所述抗衰老组合物，其特征在于，所述螺旋藻多糖为一种水溶性杂 多糖，其多糖质量百分比含量> 93%。
4.根据权利要求1所述抗衰老组合物，其特征在于，所述银杏叶提取物，其总黄酮质量 百分比含量> 24%，其萜内酯质量百分比含量> 6%。
5.根据权利要求1 4中任一电所述抗衰老组合物，其特征在于，所述螺旋藻多糖的制 备方法为准确称取钝顶螺旋藻粉30. 0g,加入300mL石油醚脱脂，间歇搅拌24h ；倒出石油醚，放入通风橱，自然干燥至恒重；再经脱脂的螺旋藻粉内加入360mL pHIO的NaOH溶液，使用超声波细胞粉碎机处理，将 经超声波处理过的螺旋藻粉，放入80°C水浴锅内，间歇搅拌，浸提4h ；离心，弃滤渣，收集上清液；上清液内加入5%三氯乙酸至无絮状沉淀产生为止，4°C冰箱放置24h，离心，收集上清液；再加入5%三氯乙酸至无絮状沉淀，5小时后离心，收集上清液；在上清液内加入5倍体积酒精，混勻，4°C冰箱放置24h。离心，收集沉淀，冷冻干燥得螺 旋藻多糖。
6.根据权利要求1 5中任一电所述抗衰老组合物，其特征在于，所述银杏叶提取物 的制备方法为将干净的银杏叶按原料与萃取剂之比为1 8-12 (w/w)投料置提取罐中，浸 提温度60-80°C，提取时间2-4小时，浸提过程中，每小时间歇搅拌原料2-3次，每次8_10分 钟，提取过程结束时，料液温度控制在60-80°C，滤出料液；向残余银杏叶中加入5-15倍的 萃取剂进行第二次提取，过程同上，合并两次料液，待温度降到30°C以下后，精滤，去除180 目以下的杂质；将前述得到的料液泵入大孔树脂吸附柱上，用10-15倍柱体积的自来水洗 涤去除杂质后，用8-10倍的去离子水过柱，再用70%的乙醇溶液冲洗树脂吸附柱，收集乙 醇洗脱液；乙醇洗脱液在60-80°C真空浓缩，回收溶剂，得到银杏叶提取物的浓缩液；干燥 后得到的银杏叶提取物。
7.根据权利要求1 5中任一电所述抗衰老组合物，其特征在于，所述银杏叶提取物的 制备方法为将干燥银杏叶粉碎至10-20目，用浓度为90%乙醇回流提取三次，将提取液合 并，过滤，回收乙醇，对过滤液减压浓缩至稠膏；在上述稠膏中加入浓度为50-70%乙醇，加 入量为0. 5-lml/g稠膏，搅勻后回流提取，过滤，沉淀，同法再处理一次，合并滤液，搅拌，在 滤液中加入浓度为2-3%壳聚糖溶液作为絮凝剂，加入量为0. 02-0. 05ml/g稠膏，絮凝，静 置，离心分离；将前述离心分离得到的上清液，用浓度为5-15 %乙醇洗脱，得洗脱物，减压 回收乙醇，浓缩，再用水饱和乙酸乙酯萃取，回收有机层中的溶剂后得浓缩液；将浓缩液真 空干燥，得银杏叶提取物。
8.根据权利要求1 5中任一电所述抗衰老组合物，其特征在于，所述银杏叶提取物的 制备方法为将银杏叶干燥粉碎至80-100目粗粉，加入20-40倍量的70%的乙醇回流提取三次，将提取液合并过滤，减压回收至总体积的1/10 ；浓缩液中加入相同体积的去离子水， 阴凉环境中放置24小时，过滤或离心除去沉淀；充分搅拌，往前述得到的滤液或上清液中 加入浓氨水，调节PH至9，放置2小时，过滤或离心除去沉淀杂质；向前述滤液或上清液中 加入盐酸调节PH至3. 5-5. 5，加正己烷萃取4次；萃取后的水液过大孔吸附树脂柱，先以5 倍柱床体积的去离子水洗脱，弃水洗液；再以8-10倍柱床体积的80% -90%乙醇洗脱，收集 醇洗脱液，减压挥去乙醇，之后用陶瓷膜超滤，截留分子量为2-2. 5万，超滤液经减压浓缩， 浓缩液喷雾干燥后即得到银杏叶提取物。
全文摘要
本发明公开了一种抗衰老组合物，包括螺旋藻多糖和银杏叶提取物，所述的螺旋藻多糖和银杏叶提取物的质量比为0.35～1.5∶0.35～1.5。所述螺旋藻多糖与银杏叶提取物的质量比优选为2∶1。所述螺旋藻多糖为一种水溶性杂多糖，其多糖质量百分比含量≥93％。所述银杏叶提取物，其总黄酮质量百分比含量≥24％，其萜内酯质量百分比含量≥6％。本发明所抗衰老组合物，包括螺旋藻多糖和银杏叶提取物，利用螺旋藻多糖与银杏叶提取物都含有羟基或酚羟基结构，通过组合能发挥协同增效作用，显著提高抗衰老的效果。
文档编号A61K127/00GK101856374SQ201010197688
公开日2010年10月13日 申请日期2010年6月11日 优先权日2010年6月11日
发明者王清吉, 高玲 申请人:青岛农业大学