专利名称：桑叶和/或桑枝提取物的制备方法及所得产品和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及桑叶和/或桑枝提取物的制备方法及所得产品和应用。
背景技术：
桑叶和/或桑枝属于桑科桑属植物桑(Morus alba L.)。桑原产于中国和朝鲜， 全球约有16种，分布于北温带、亚洲热带和非洲热带及美洲地区；我国约有11种，分布于全国大部分地区，以长江流域尤其江浙一带为多。桑树在我国已有4000多年的栽培历史， 我国现有近千万亩桑园，是世界上最大的桑树种植国，资源极其丰富，但传统的桑叶只用于养蚕，用途单一，出现了大量桑叶过剩现象，因此开发桑叶功效活性成分无疑具有很好的前
旦
ο在我国桑叶用于美白已有悠久的历史，民间有人通过饮用桑树叶煎煮的汤剂或将新鲜桑叶捣碎敷脸来治疗色斑和青春痘。研究证明，黄酮类物质是一种天然的强抗氧化剂， 能够清除人体中超氧离子自由基、羟自由基、脂质过氧化物、过氧化氢等，桑叶黄酮类物质可以通过抑制酪氨酸酶活性可有效减少黑色素生成，将其添制于护肤品中可达到美白的效果，因此，桑叶备受美白产品的青睐，这些活性物质协同对皮肤有营养、保湿及修复作用，可以增加弹性，消除色素沉着，防止皮肤粗糙。自古以来，中医就将桑叶作为治疗消渴症的中药应用于临床；日本古书《吃茶养生记》也有记载桑叶有改善“饮水病”(即糖尿病)的作用；近代医家也常将桑叶配伍于中药复方中应用于临床。国内外研究资料证实，生物碱和多糖是桑叶中主要的降血糖活性成分； 大量研究表明桑叶的降血糖作用是通过两个方面实现的一是通过生物碱DNJ对二糖类分解酶活性产生抑制作用，从而抑制小肠对双糖的吸收，降低餐后血糖的高峰值；二是桑叶生物碱(Fagomine)及桑叶多糖促进β细胞分泌胰岛素，而胰岛素可以促进细胞对糖的利用、 肝糖原合成以及改善糖代谢，最终达到降血糖的效果。因此，提取桑叶中的降糖功效成分， 开发降糖新降糖药和功能性食品前景十分广阔。目前关于桑叶功效成分的研究较多，但仅是对桑叶中某一组分进行单独研究，尤其是涉及提取工艺的研究，往往是针对一种功效成分的提取工艺，这对于工业化大生产无疑是很大的浪费。杨虎等(杨虎，马燮等，桑叶中黄酮类化合物的提取工艺研究[J]，应用化工，2008，37 (5) :520 52 报道桑叶中黄酮类化合物的提取工艺研究，该研究通过正交试验确定了桑叶黄酮的最佳提取工艺回流提取时间1.5h，提取3次，乙醇浓度80%，料液质量比1 30，其提取率为0. 723%。王芳(王芳，桑叶中酪氨酸酶抑制成分的研究[D]，浙江工商大学，2008)对桑叶中酪氨酸酶活性抑制成分的研究，确定桑叶中酪氨酸酶抑制剂主要是黄酮类物质，并对对桑叶中黄酮类物质的提取工艺进行了优化，确定了超声波辅助提取法效果最好优化条件为70%乙醇提取溶剂、1 20料液比、200W功率超声预处理IOmiru 70°C浸提1. 5h，桑叶黄酮提取得率为28. 8mg/g。应之(应芝，桑叶多糖提取分离、结构鉴定及其降血糖活性的初步研究[D]，浙江工商大学，2009)采用响应面分析法优化了三种不同方法(包括普通水提法、微波辅助提取法和超声波辅助提取法)提取桑叶多糖工艺，结果表明，相比普通水提法的多糖得率，微波辅助提取多糖得率提高了 104 %，超声波辅助提取多糖得率提高了 131% ；并通过注射四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型，研究了桑叶多糖降血糖活性，研究结果表明桑叶多糖具有降血糖作用。马静(马静，桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ) 的提取分离及其活性的研究[D]，陕西科技大学，2007)以DNJ含量为指标，通过正交试验优选其提取工艺的最佳条件，确定酸水提取法的最佳工艺条件物料粒度60目、pH为3的盐酸溶液、料液比1 20、超声功率150W，超声温度60°C，超声时间25min，提取2次，DNJ得率0.083%，纯度沈.3%。并以与人体接近的动物小肠(猪小肠)内的蔗糖酶为对象，对桑叶中提取出来的DNJ进行了体外活性的研究，结果表明DNJ对蔗糖酶的抑制作用类型为竞争性抑制。由上述可见现有技术中对桑叶和/或桑枝提取获得提取物的方法获得的提取物收率及产品纯度仍不够理想，却只针对一种功效成分进行提取工艺，造成资源浪费。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服了现有桑叶和/或桑枝提取物的制备方法往往能够只能针对其中一种成分进行提取，并且获得提取物的收率和纯度仍然不够理想的缺陷，提供了桑叶和/或桑枝提取物的制备方法及所得产品和应用。该方法充分利用原料资源，能够同时有效提取多种有效成分，操作步骤简单方便，工艺合理，获得的产品的收率和纯度显著提高，产品用于美白或降血糖功效显著，达到产值最大化的目的，具有一定的经济和社会效益。本发明目的之一是提供一种桑叶和/或桑枝提取物的制备方法，包括如下步骤(1)将桑叶和/或桑枝用体积百分比为40% 90%的乙醇水溶液提取，之后固液分离，得提取液A与滤渣；(2)将步骤(1)的滤渣用纯水提取，之后固液分离，得提取液B ；(3)将提取液A与提取液B合并，然后除去乙醇，浓缩，静置，之后过滤，得桑叶和/ 或桑枝粗提液；(4)将桑叶和/或桑枝粗提液上弱极性或非极性大孔吸附树脂柱吸附，之后用纯水洗脱至洗脱液无多糖为止，收集的流出液和纯水洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物I。下面，进一步的对本发明的桑叶和/或桑枝提取物I的制备方法进行详细介绍本发明中，所述的桑叶和/或桑枝为使用原料，桑叶与桑枝的有效成分基本相同， 因而本发明可单独以桑叶或桑枝为原料，也可以两者任意比例的混合物为原料；进一步地， 所述桑叶或桑枝各自经提取后，提取物可分别利用，也可混合后利用。所述桑叶与桑枝作为原料的使用方式没有特殊要求。其中所述的桑叶和/或桑枝大小没有限定只要不影响提取即可，工业上一般不对桑叶和/或桑枝进行另行粉碎处理。本发明中，所述步骤(1)的提取操作可为本领域常规操作和条件。其中，步骤(1)中，所述乙醇水溶液与桑叶和/或桑枝的质量比较佳的为2 1 10 1。其中，步骤(1)中，所述提取温度较佳的为60°C 90°C。其中，步骤(1)中，所述提取时间较佳的为Ih 池。其中，步骤⑴中，所述提取次数较佳的为1 3次；当提取次数多于1次时，合并提取液。
其中，步骤(1)中，所述固液分离为本领域常规操作，一般过滤即可。本发明中，所述步骤O)的提取操作可为本领域常规操作和条件。其中，步骤O)中，所述纯水与步骤(1)的滤渣的质量比较佳的为2 1 10 1。其中，步骤O)中，所述提取温度较佳的为60V 90°C。其中，步骤O)中，所述提取时间较佳的为Ih 池。其中，步骤( 中，所述提取次数较佳的为1 3次，较佳的1次；当提取次数多于 1次时，合并提取液。其中，步骤O)中，所述固液分离为本领域常规操作，一般过滤即可。本发明中，所述步骤(3)中除去乙醇的方式为本领域常规方式，较佳的为减压蒸馏。所述的乙醇较佳的回收利用。本发明中，所述步骤(3)中浓缩为本领域常规操作。所述浓缩较佳的为浓缩至浓缩液中乙醇体积百分比< 5%。所述浓缩的方式较佳的为减压浓缩。其中，所述减压浓缩的条件较佳的为真空度-O. 08mpa -0. lmpa，温度55°C 65°C。本发明中，所述步骤(3)中静置的温度较佳的为0°C 5°C，静置的时间较佳的为 8小时以上。其中，所述的静置为控制温度一般在冷藏箱中进行。本发明中，所述步骤中桑叶和/或桑枝粗提液与大孔吸附树脂柱的用量及吸附时间本领域技术人员可根据具体使用的大孔吸附树脂合理选择。所述步骤(4)中桑叶和 /或桑枝粗提液的吸附流速较佳的为lBV/h !3BV/h，更佳的为lBV/h。本发明中，所述步骤(4)中弱极性或非极性大孔吸附树脂的型号较佳的为D101、 NKA-9、AB-8、ADS-7或ADS-17。其中，所述的弱极性大孔吸附树脂以及非极性大孔吸附树脂为本领域常规技术术语，是大孔吸附树脂根据分子结构及极性大小进行的分类。本发明中，所述步骤⑷中纯水洗脱速度较佳的为lBV/h !3BV/h，更佳的为IBV/ h。本发明中，所述步骤中纯水洗脱至洗脱液无多糖的检测方式较佳的为α -萘酚法和/或菲林试剂法。所述α-萘酚法与菲林试剂法均属于本领域常规方法。本发明中，所述步骤中的流出液是指桑叶和/或桑枝粗提液流经树脂后的收集液。所述步骤(4)中的流出液和纯水洗脱液，可按本领域常规方法经除水，干燥，即得桑叶和/或桑枝提取物I成品。其中，所述除水方式较佳的为减压浓缩。所述干燥方式较佳的为真空干燥、热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。本发明目的之二是提供一种桑叶和/或桑枝提取物的制备方法，包括如下步骤①同前述桑叶和/或桑枝提取物I的制备方法的步骤(1) (3)；②将桑叶和/或桑枝粗提液上弱极性或非极性大孔吸附树脂柱吸附，之后用纯水洗脱至无多糖，然后以体积百分比为30% 90%的乙醇水溶液继续洗脱至洗脱液无黄酮， 收集的乙醇水溶液洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物II。下面，进一步的对本发明的桑叶和/或桑枝提取物II的制备方法进行详细介绍本发明中，所述步骤①的各条件以及步骤②中将桑叶和/或桑枝粗提液上弱极性或非极性大孔吸附树脂柱吸附，之后用纯水洗脱至无多糖的各步骤条件均如前所述。本发明中，所述步骤②乙醇水溶液洗脱速度较佳的为lBV/h !3BV/h。本发明中，所述步骤②中乙醇水溶液洗脱至洗脱液无黄酮的检测方式较佳的为盐酸-镁粉显色法。所述盐酸-镁粉比色法属于本领域常规测定黄酮方法。
本发明中，所述步骤②中的乙醇水溶液洗脱液，可按本领域常规方法除乙醇，经除水干燥，即得桑叶和/或桑枝提取物II干燥成品。其中，所述除乙醇的方式为本领域常规方式，较佳的为减压蒸馏。所述乙醇较佳的可回收利用。所述除水方式较佳的为浓缩。所述干燥方式较佳的为真空干燥、热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。本发明目的之三是提供一种桑叶和/或桑枝提取物的制备方法，包括如下步骤(a)同前述桑叶和/或桑枝提取物I的制备方法的步骤(1) (3)；(b)然后将桑叶和/或桑枝粗提液上弱极性或非极性大孔吸附树脂柱吸附，之后用纯水洗脱至无多糖为止，收集的纯水洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物I ；(c)之后再以体积百分比为30% 90%的乙醇水溶液洗脱至洗脱液无黄酮，收集的乙醇水溶液洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物II。本发明中，所述步骤(a) (C)中涉及各步骤具体条件均如前所述。本发明目的之四是提供由本发明桑叶和/或桑枝提取物制备方法制得的桑叶和/ 或桑枝提取物I，其含有多糖类物质和生物碱DNJ，总多糖含量为10% 50%，DNJ含量为 0.5% 90%，百分比为多糖类物质或生物碱DNJ占提取物总量的质量百分比。本发明中，所述桑叶和/或桑枝提取物I对α -葡萄糖苷酶抑制率的IC5tl为 IOppm 2000ppm。本发明中，所述总多糖的测定方法为以葡萄糖为标准品，纯水溶解，配制标准溶液。取适量葡萄糖标准溶液，加入6%苯酚溶液，加入浓硫酸，静置lOmin，摇勻，在一定条件下进行显色反应，反应结束，在波长490nm处测定吸光度值，以水按同样显色操作为空白对照。以吸光度值为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。准确称取提取物，纯水溶解，作为待测液，取适量待测液，按标准曲线检测方法操作，测定其在490nm处的吸光度值， 根据标准曲线计算提取物中总多糖含量，表示为总多糖含量(以葡萄糖计)。本发明中，所述生物碱DNJ的检测方法为采用高效液相色谱法，色谱柱 Inertsil NH2，5um，4. 6*250mm ；流动相为乙睛水(8 2)；流速0. 8mL/min ；柱温40°C ； 检测器ELSD ；以DNJ标准品按100%，采用归一化法计算样品中DNJ含量。本发明目的之五是提供本发明桑叶和/或桑枝提取物制备方法制得的桑叶和/或桑枝提取物11，其含有桑叶和/或桑枝黄酮类物质，总黄酮含量为10 % 50 %，百分比为总黄酮占提取物总量的质量百分比。本发明中，所述桑叶和/或桑枝提取物II对酪氨酸酶抑制率的IC5tl为IOppm 2000ppm，对DPPH自由基清除效果的IC5tl为IOppm 2000ppm。本发明中，所述总黄酮的测定方法为以芦丁为标准品，30%体积浓度乙醇超声溶解，配制标准溶液；取适量标准溶液，加入5%质量浓度NaNO2水溶液，静置5min，加入10% 质量浓度Al (NO3) 3的水溶液，静置6min，加入浓度lmol/L的NaOH，加入30%体积浓度的乙醇，80°C水浴lOmin，同时以不加10%质量浓度Al (NO3) 3的反应体系作为空白对照，以调节分光光度计零点，待反应结束后，在510nm处测定吸光度值，以吸光度值为纵坐标，芦丁含量为横坐标，绘制标准曲线。准确称取提取物，30%乙醇溶解，作为待测液，取适量待测液， 按标准曲线检测方法操作，测定其在510nm处的吸光度值，根据标准曲线计算提取物中总黄酮含量。
本发明目的之六是提供本发明的桑叶和/或桑枝提取物制备方法制得的桑叶和/ 或桑枝提取物I在制备降血糖食品中的应用。本发明目的之七是提供本发明的桑叶和/或桑枝提取物制备方法制得的桑叶和/ 或桑枝提取物II在制备美白化妆品中的应用。本发明所用试剂和原料均市售可得。在符合本领域常识的基础上，本发明中上述的各技术特征优选条件可以任意组合得到较佳实例。本发明的积极进步效果在于本发明桑叶和/或桑枝提取物的制备方法充分利用桑叶和/或桑枝原料资源，能够同时有效提取多种有效成分，操作步骤简单方便，工艺合理，获得的产品的收率和纯度显著提高，产品用于美白或降血糖功效显著，达到产值最大化的目的，具有一定的经济和社会效益。
具体实施例方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下述实施例中，除特殊说明外，百分比均为质量百分比。实施例1桑叶和/或桑枝提取物的制备方法取粉碎的桑叶400g，加入800mL体积百分比40%的乙醇水溶液，90°C保温提取，提取1次，每次lh，合并提取液，过滤，得提取液A与滤渣；向滤渣中加入800mL纯水，90°C保温提取，提取lh，过滤，得提取液B，将提取液A 与提取液B合并，减压蒸馏回收乙醇，浓缩至浓缩液中乙醇体积百分比< 5%以下(减压浓缩条件为真空度-0. OSmpa -0. lmpa，浓缩温度55°C 65°C )；浓缩液置于冷藏箱中0°C 冷藏，静置他，过滤，滤液澄清，得桑叶和/或桑枝粗提液；取桑叶和/或桑枝粗提液上ADS-7大孔吸附树脂柱，粗提液全部通过大孔树脂吸附柱后(吸附速度为lBV/h)，用纯水冲洗大孔吸附树脂柱，洗脱速度为lBV/h，至菲林试剂法检测洗脱液中无多糖止(即生成砖红色沉淀，下同)，收集流出液和纯水洗脱液，减压浓缩，真空干燥(干燥温度70V，真空度-0. OSmpa -0. Impa)，得桑叶和/或桑枝提取物I 成品；纯水洗脱结束，继续以体积百分比30%的乙醇水溶液洗脱(洗脱速度lBV/h)至盐酸-镁粉显色法检测洗脱液中无黄酮(即洗脱液呈紫红色，下同)，收集乙醇水溶液洗脱液，回收乙醇，真空干燥(干燥温度70°C，真空度-0. OSmpa -0. Impa)，得桑叶和/或桑枝提取物II成品。本实施例制得桑叶和/或桑枝提取物I的得率为13.3%，其中总多糖含量为 42. 59%, DNJ含量为4. 62% ；制得桑叶和/或桑枝提取物II的得率为3.5%，其中总黄酮含量为35. 62%。实施例2桑叶和/或桑枝提取物的制备方法取粉碎的桑枝400g，加入MOOmL体积百分比70%的乙醇水溶液，60°C保温提取，提取2次，每次2. Oh,合并提取液，过滤，得提取液A与滤渣；向滤渣中加入MOOmL纯水，60°C保温提取，提取池，过滤，得提取液B，将提取液A 与提取液B合并，减压蒸馏回收乙醇，浓缩至浓缩液中乙醇体积百分比< 5%以下(减压浓缩条件为真空度-0. OSmpa -0. lmpa，浓缩温度55°C 65°C )；浓缩液置于冷藏箱中2V 冷藏，静置12h，过滤，滤液澄清，得桑叶和/或桑枝粗提液；取桑叶和/或桑枝粗提液上DlOl大孔吸附树脂柱，粗提液全部通过大孔树脂吸附柱后(吸附速度为2BV/h)，用纯水冲洗大孔吸附树脂柱，洗脱速度为2BV/h，至菲林试剂法检测洗脱液中无多糖止，收集流出液和纯水洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥(干燥温度-40°C )，得桑叶和/或桑枝提取物I成品；纯水洗脱结束，继续以体积百分比70%的乙醇水溶液(2BV/h)洗脱至盐酸-镁粉显色法检测洗脱液中无黄酮，收集乙醇水溶液洗脱液，回收乙醇，冷冻干燥(干燥温度-40°C )，得桑叶和/或桑枝提取物II成品。本实施例制得桑叶和/或桑枝提取物I的得率为13. 1%，其中总多糖含量为 40. 05%, DNJ含量为5. 67% ；桑叶和/或桑枝提取物II的得率为2. 9%，其中总黄酮含量为 37. 79%。实施例3桑叶和/或桑枝提取物的制备方法取粉碎的桑枝200g，粉碎的桑叶200g，混合，加入4000mL体积百分比90%的乙醇水溶液，70°C保温提取，提取3次，每次池，合并提取液，过滤，得提取液A与滤渣；向滤渣中加入4000mL纯水，70°C保温提取，提取池，过滤，得提取液B，将提取液A 与提取液B合并，减压蒸馏回收乙醇，浓缩至浓缩液中乙醇体积百分比< 5%以下(减压浓缩条件为真空度-0. OSmpa -0. lmpa，浓缩温度55°C 65°C )；浓缩液置于冷藏箱中5°C 冷藏，静置16h，过滤，滤液澄清，得桑叶和/或桑枝粗提液；取桑叶和/或桑枝粗提液上ADS-17大孔吸附树脂柱，粗提液全部通过大孔树脂吸附柱后(吸附速度为3BV/h)，用纯水冲洗大孔吸附树脂柱，洗脱速度为!3BV/h，至菲林试剂法检测洗脱液中无多糖止，收集流出液和纯水洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥(进风温度 200°C，出风温度80°C )，得桑叶和/或桑枝提取物I成品；纯水洗脱结束，继续以体积百分比90%的乙醇水溶液C3BV/h)洗脱，盐酸-镁粉显色法检测洗脱液中无黄酮，收集乙醇水溶液洗脱液，回收乙醇，喷雾干燥(进风温度200°C， 出风温度80°C )，得桑叶和/或桑枝提取物II成品。本实施例制得桑叶和/或桑枝提取物I的得率为12.5%，其中总多糖含量为 36. 72%, DNJ含量为3. 97% ；桑叶和/或桑枝提取物II的得率为3. 1%，其中总黄酮含量为 35. 79%。实施例4桑叶和/或桑枝提取物的制备方法取粉碎的桑叶400g，加入800mL体积百分比40%的乙醇水溶液，90°C保温提取，提取1次，每次lh，合并提取液，过滤，得提取液A与滤渣；向滤渣中加入800mL纯水，90°C保温提取，提取lh，过滤，得提取液B，将提取液A 与提取液B合并，减压蒸馏回收乙醇，浓缩至浓缩液中乙醇体积百分比< 5%以下(减压浓缩条件为真空度-0. OSmpa -0. lmpa，浓缩温度55°C 65°C )；浓缩液置于冷藏箱中0°C 冷藏，静置他，过滤，滤液澄清，得桑叶和/或桑枝粗提液；取桑叶和/或桑枝粗提液上ADS-7大孔吸附树脂柱，粗提液全部通过大孔树脂吸附柱后(吸附速度为lBV/h)，用纯水冲洗大孔吸附树脂柱，洗脱速度为lBV/h，至菲林试剂法检测洗脱液中无多糖止(即生成砖红色沉淀)，收集流出液和纯水洗脱液，减压浓缩，真空干燥(干燥温度70°C，真空度-0. OSmpa -0. Impa)，得桑叶和/或桑枝提取物I成品。本实施例制得桑叶和/或桑枝提取物I的得率为13.3%，其中总多糖含量为 42. 59 %，DNJ 含量为 4. 62 %。实施例5桑叶和/或桑枝提取物的制备方法取粉碎的桑枝400g，加入MOOmL体积百分比70%的乙醇水溶液，60°C保温提取， 提取2次，每次2. Oh,合并提取液，过滤，得提取液A与滤渣；向滤渣中加入MOOmL纯水，60°C保温提取，提取池，过滤，得提取液B，将提取液A 与提取液B合并，减压蒸馏回收乙醇，浓缩至浓缩液中乙醇体积百分比< 5%以下(减压浓缩条件为真空度-0. OSmpa -0. lmpa，浓缩温度55°C 65°C )；浓缩液置于冷藏箱中2V 冷藏，静置12h，过滤，滤液澄清，得桑叶和/或桑枝粗提液；取桑叶和/或桑枝粗提液上DlOl大孔吸附树脂柱，粗提液全部通过大孔树脂吸附柱后(吸附速度为lBV/h)，用纯水冲洗大孔吸附树脂柱，洗脱速度为2BV/h，至菲林试剂法检测洗脱液中无多糖；纯水洗脱结束，继续以体积百分比70%的乙醇水溶液2BV/h洗脱至盐酸-镁粉法检测洗脱液中无黄酮，收集乙醇水溶液洗脱液，回收乙醇，冷冻干燥(干燥温度-40°C )，得桑叶和/或桑枝提取物II成品。本实施例制得桑叶和/或桑枝提取物II的得率为2.9%，其中总黄酮含量为 37. 79%。效果实施例1抑制α -葡萄糖苷酶活性功效试验1、试验试剂ρΗ 6. 81 磷酸盐缓冲溶液l/15mol/L Na2HPO4 水溶液和 l/15mo VLKH2PO4 等体积混合；α -葡萄糖苷酶溶液的配制取α -葡萄糖苷酶原液用ρΗ 6. 81磷酸盐缓冲溶液稀释定容，配制为0. 08U/mL的酶液；PNPG底物的配制称取0. 0301g PNPG,用ρΗ 6. 81磷酸盐缓冲溶液溶解稀释至 IOOmL,配制为lumol/mL的溶液；Na2CO3溶液准确称取26. 4975g Na2CO3用纯水溶解稀释至500mL，配制为0. 5mol/ mL的溶液；样品的配制准确称取样品150mg，用PH 6. 81磷酸盐缓冲溶液稀释定容至 50mL (母液)；样品稀释液分别取母液用缓冲溶液稀释至不同浓度，备用。2、试验方法分别吸取不同浓度的样品稀释液0. 4mL,加入0. 4mL PNPG溶液，摇勻，冰水浴冷却 5min，再加入0. 2mL α -葡萄糖苷酶溶液，摇勻，37°C水浴20min，加入3mL Na2CO3溶液，终止反应，摇勻，于400nm处测定吸光度值As，每个稀释度的样品以不加α -葡萄糖苷酶溶液的体系为对照，消除样品颜色的影响，测定吸光度值Atl;再以不加抑制剂的体系作为对照， 测定吸光度值Α。，各管均以空白体系作为调零管，按照式(1)计算抑制率
抑制率(％) = [1 - As~Ao]xl00
AC式(1)以样品浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，作对数回归曲线，查找样品对α-葡萄糖苷酶抑制效果的IC5。。3、试验结果本发明实施例1 3所得的桑叶和/或桑枝提取物I对α -葡萄糖苷酶的抑制效果见表1 表1桑叶和/或桑枝提取物I的功效评价
编号α -葡萄糖苷酶活性抑制率(IC5。)实施例1956ppm实施例2603ppm实施例3426ppm效果实施例2抑制酪氨酸酶活性功效试验1、试验试剂ρΗ 6. 81 磷酸盐缓冲溶液l/15mol/L Na2HPO4 水溶液和 l/15mo VLKH2PO4 等体积混合；酪氨酸酶溶液的配制取α -葡萄糖苷酶原液用ρΗ 6. 81磷酸盐缓冲溶液稀释定容，配制为1081. 58U/mL的酶液；L-酪氨酸底物的配制称取35mg L-酪氨酸，用ρΗ 6.81磷酸盐缓冲溶液溶解稀释至IOOmL ；样品的配制准确称取样品150mg，用ρΗ 6. 81磷酸盐缓冲溶液稀释定容至 50mL (母液)；样品稀释液分别取母液用缓冲溶液稀释至不同浓度，备用。2、试验方法分别吸取不同浓度的样品稀释液0.2mL，加入0.3mL L-酪氨酸溶液，再加入缓冲溶液2mL，摇勻，冰水浴冷却5min，加入0. ImL酪氨酸酶溶液，摇勻，37°C水浴40min，放置冰水浴lOmin，于470nm处测定吸光度值As，每个稀释度的样品以不加酪氨酸酶溶液的体系为对照，消除样品颜色的影响，测定吸光度值Atl ；再以不加抑制剂的体系作为对照，测定吸光度值A。，各管均以空白体系作为调零管，按照式(2)计算抑制率
权利要求
1.一种桑叶和/或桑枝提取物的制备方法，其特征在于其包括如下步骤(1)将桑叶和/或桑枝用体积百分比为40% 90%的乙醇水溶液提取，之后固液分离，得提取液A与滤渣；(2)将步骤(1)的滤渣用纯水提取，之后固液分离，得提取液B；(3)将提取液A与提取液B合并，然后除去乙醇，浓缩，静置，之后过滤，得桑叶和/或桑枝粗提液；(4)将桑叶和/或桑枝粗提液上弱极性或非极性大孔吸附树脂柱吸附，之后用纯水洗脱至洗脱液无多糖为止，收集的流出液和纯水洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物I。
2.一种桑叶和/或桑枝提取物的制备方法，其特征在于其包括如下步骤①如权利要求1所述桑叶和/或桑枝提取物的制备方法的步骤(1) (3)；②将桑叶和/或桑枝粗提液上弱极性或非极性大孔吸附树脂柱吸附，之后用纯水洗脱至无多糖，然后以体积百分比为30% 90%的乙醇水溶液继续洗脱至洗脱液无黄酮，收集的乙醇水溶液洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物II。
3.一种桑叶和/或桑枝提取物的制备方法，其特征在于其包括如下步骤(a)如权利要求1所述桑叶和/或桑枝提取物的制备方法步骤(1) (3)；(b)然后将桑叶和/或桑枝粗提液上弱极性或非极性大孔吸附树脂柱吸附，之后用纯水洗脱至无多糖为止，收集的流出液和纯水洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物I ；(c)之后再以体积百分比为30% 90%的乙醇水溶液洗脱至洗脱液无黄酮，收集的乙醇水溶液洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物II。
4.如权利要求1 3任一项所述的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述乙醇水溶液与桑叶和/或桑枝的质量比为2 1 10 1;和/或，步骤(1)中，所述提取温度为60°C 90°C ；和/或，步骤⑴中，所述提取时间为Ih : ;和/或，步骤(1)中，所述提取次数为1 3次；当提取次数多于1次时，合并提取液；和/或，步骤O)中，所述纯水与步骤(1)的滤渣的质量比为2 1 10 1 ；和/或，步骤O)中，所述提取温度为60V 90°C ；和/或，步骤⑵中，所述提取时间为Ih !Bh;和/或，步骤O)中，所述提取次数为1 3次，较佳的1次；当提取次数多于1次时， 合并提取液；和/或，所述步骤(3)中除去乙醇的方式为减压蒸馏，所述的乙醇回收利用；和/或，所述步骤(3)中浓缩为浓缩至浓缩液中乙醇体积百分比< 5% ；所述浓缩的方式为减压浓缩；其中，所述减压浓缩的条件为真空度-0. OSmpa -0. lmpa，温度55°C 65 0C ；和/或，所述步骤⑶中静置的温度为0°C 5°C，静置的时间为8小时以上。
5.如权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中桑叶和/或桑枝粗提液的吸附流速为lBV/h !3BV/h，较佳的为IBV/h；和/或，所述步骤中弱极性或非极性大孔吸附树脂的型号为D101、NKA-9、AB-8、 ADS-7 或ADS-17；和/或，所述步骤(4)中纯水洗脱速度为lBV/h !3BV/h，较佳的为lBV/h ；和/或，所述步骤中纯水洗脱至洗脱液无多糖的检测方式为α-萘酚法和/或菲林试剂法；和/或，所述步骤(4)中的流出液和纯水洗脱液，经除水，干燥，即得桑叶和/或桑枝提取物I成品；其中，所述除水方式为减压浓缩；所述干燥方式为真空干燥、热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。
6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤②桑叶和/或桑枝粗提液的吸附流速为lBV/h !3BV/h，较佳的为lBV/h ；和/或，所述步骤②弱极性或非极性大孔吸附树脂的型号为D101、NKA-9、AB-8、ADS-7 或 ADS-17 ；和/或，所述步骤②纯水洗脱速度为lBV/h !3BV/h，较佳的为lBV/h ；和/或，所述步骤②纯水洗脱至洗脱液无多糖的检测方式为α-萘酚法和/或菲林试剂法；和/或，所述步骤②乙醇水溶液洗脱速度为lBV/h !3BV/h ；和/或，所述步骤②中乙醇水溶液洗脱至洗脱液无黄酮的检测方式为盐酸-镁粉显色法；和/或，所述步骤②中的乙醇水溶液洗脱液经除乙醇，除水干燥，即得桑叶和/或桑枝提取物II干燥成品；其中，所述除乙醇的方式为减压蒸馏；所述乙醇回收利用；所述除水方式为浓缩；所述干燥方式为真空干燥、热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。
7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述步骤(b)桑叶和/或桑枝粗提液的吸附流速为lBV/h !3BV/h，较佳的为lBV/h ；和/或，所述步骤(b)弱极性或非极性大孔吸附树脂的型号为D101、NKA-9、AB-8、ADS-7 或 ADS-17 ；和/或，所述步骤(b)纯水洗脱速度为lBV/h !3BV/h，较佳的为lBV/h ；和/或，所述步骤(b)纯水洗脱至洗脱液无多糖的检测方式为α -萘酚法和/或菲林试剂法；和/或，所述步骤(b)中的流出液和纯水洗脱液，经除水，干燥，即得桑叶和/或桑枝提取物I成品；其中，所述除水方式为减压浓缩；所述干燥方式为真空干燥、热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥；和/或，所述步骤(c)乙醇水溶液洗脱速度为lBV/h !3BV/h ；和/或，所述步骤(c)中乙醇水溶液洗脱至洗脱液无黄酮的检测方式为盐酸-镁粉显色法；和/或，所述步骤(c)中的乙醇水溶液洗脱液经除乙醇，除水干燥，即得桑叶和/或桑枝提取物II干燥成品；其中，所述除乙醇的方式为减压蒸馏；所述乙醇回收利用；所述除水方式为浓缩；所述干燥方式为真空干燥、热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。
8.如权利要求1、3、4、5和7中任一项所述桑叶和/或桑枝提取物制备方法制得的桑叶和/或桑枝提取物I。
9.如权利要求8所述的桑叶和/或桑枝提取物I，其特征在于其含有多糖类物质和生物碱DNJ，总多糖含量为10 % 50 %，DNJ含量为0. 5 % 90 %，百分比为多糖类物质或生物碱DNJ占提取物总量的质量百分比。
10.如权利要求8或9所述的桑叶和/或桑枝提取物I在制备降血糖食品中的应用。
11.如权利要求2 4、6和7中任一项所述桑叶和/或桑枝提取物制备方法制得的桑叶和/或桑枝提取物II。
12.如权利要求11所述的桑叶和/或桑枝提取物II，其特征在于其含有桑叶和/或桑枝黄酮类物质，总黄酮含量为10% 50%，百分比为总黄酮占提取物总量的质量百分比。
13.如权利要求11或12所述的桑叶和/或桑枝提取物II在制备美白化妆品中的应用。
全文摘要
本发明公开桑叶和/或桑枝提取物制备方法及所得产品和应用。该方法包括如下步骤将桑叶和/或桑枝用40％～90％(V/V)乙醇水溶液提取，固液分离，得提取液A与滤渣；将滤渣用纯水提取，得提取液B；将提取液A与B合并，除去乙醇，浓缩，静置，过滤，得粗提液；将粗提液上大孔吸附树脂柱吸附，之后用纯水洗脱至无多糖，收集流出液和纯水洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物I；之后再以30％～90％(V/V)乙醇水溶液洗脱至无黄酮，收集的洗脱液即为桑叶和/或桑枝提取物II。该方法充分利用原料资源，能够同时有效提取多种有效成分，操作步骤简单方便，工艺合理，获得的产品的收率和纯度显著提高，产品用于美白或降血糖功效显著，达到产值最大化的目的。
文档编号A61P3/10GK102370707SQ20101026158
公开日2012年3月14日 申请日期2010年8月25日 优先权日2010年8月25日
发明者周自华, 杨海延, 骆峰 申请人:上海辉文生物技术有限公司, 骆峰