专利名称：一种复合辅酶药的制备方法
技术领域：
本发明属干医药技术领域，特别涉及一种复合辅酶药的新的制备方法。
背景技术：
复合辅酶药是一种广泛用于临床的药物。2004年，北京奥路特生物医药研发有限 公司、北京苏里曼生物医药科技有限公司和海南康永药品有限公司联合申报了专利“一种 复合辅酶药的制备方法及其复合辅酶药和临床应用“，专利号为ZL200410058086X。该专利 公开了一种新的复合辅酶药的制备方法并将复合辅酶的组分从只含辅酶A，辅酶I，ATP和 谷胱甘肽四种提高到另含FMN、FAD、ADP、AMP、SAM等共九种。但该发明的制备方法复杂，力口 工时间长，成本高，不利大批量生产。
发明内容
本发明的目的是克服已有技术制备方法复杂，加工时间长，成本高，不利大批量生 产的缺点，提出一种新的复合辅酶的制备方法，该方法不仅生产工艺筒单，时间短，成本低， 利于大批量生产，而且产品质量与前述专利方法生产的产品质量相当。本发明提出的一种复合辅酶药制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤1)将新鲜冰冻酵母加0. 5 5倍无热原水化开；2)化开的新鲜酵母用物理法或机械法破碎酵母细胞；3)将破碎后的酵母细胞冷冻离心，离心温度为0 °C 10°C，离心力为 10000-15000G，离心时间为30 60分钟，得澄清离心液；4)离心液经截流分子量为5000 8000道尔顿超滤柱超滤；5)调节超滤液所含有效组分的含量，使该超滤液达到该药含量标准后，即为复合 辅酶原料药；6)在所述复合辅酶原料药中，加入相应的赋型剂，再经截流分子量为3000 5000 道尔顿超滤柱超滤和无菌过滤后，灌封并冻干成注射粉针；或将所述复合辅酶原料药，用冻 干法或有机溶剂沉淀法，得到干粉，加入相应的辅料，制成口服片剂或胶囊。上述新鲜冰冻酵母菌可为将生产出的新鲜啤酒酵母、面包酵母、食用酵母立即冷 冻(_5°C -20°c )保存，保存期不得超过五天。上述破碎酵母细胞的物理法是指将酵母菌液反复进行深冻至-rc -5°C和融化 1°C 5°C (冻融法)，或速热至85°C 95°C，再速冷至5°C 10°C (速热、速冷法)；所述机械法是指用高压勻质机在压力50 150Mpa，温度0°C 20°C下破碎酵母细 胞(高压勻质)，或用研磨机研磨破碎酵母细胞(研磨法)。采用上述制备方法的复合辅酶药，其辅酶成分含有辅酶A(COA)、辅酶I (NAD)、谷 胱苷肽、腺三磷(ATP)、腺二磷(ADP)、腺一磷(AMP)、黄素单核苷酸、黄素腺嘌呤二核苷酸 (FAD)、腺苷蛋氨酸(SAM)等九种。所述辅酶成分的浓度如下
FAD 2 ~ 20 μ g/mlFMN 2 20 μ g/mlATP 0.1 2.5mg/mlADP 0. 1 ~ 0. 5mg/mlAMP 0. 1 ~ 0. 5mg/mlSAM 1 20 μ g/mlGSH 1 5mg/mlCoA 100 300U/mlNAD 0. 1 0. 5mg/ml本发明的特点和效果本发明的制备方法除去了活性碳吸附和解吸，除去子交换层析，除去了减压浓缩 和丙酮沉淀，缩短和简化了工艺流程，节约了时间，节约了原材料，降低成本，利于大批量工 业化生产。并保证达到或超过该药品有效组分及其含量和质量标准。本发明根椐酵母菌(食用、啤酒、面包)为无毒菌株和生物体的辅酶均为小分子量 物质(分子量均小于1000道尔顿)及酵母细胞内含有丰富的人体细胞需要的小分子生物 物质(如氨基酸，核苷酸，糖类及脂类化合物)和无机离子，直接将冰冻保存的酵母菌细胞， 用物理(冻融、速热速冷)或机械(研磨、高压勻质)的方法破碎，经高速离心，得澄清细胞 液，再经脱水和超滤，获得符合复合辅酶药相应有效组分及其含量和质量标准的原料药。
具体实施例方式复合辅酶药制备方法实施例1，该方法包括以下步骤1)用在冷冻_5°C下保存一天的新鲜冰冻面包酵母加0. 5倍无热原水化开；2)用高压勻质机在压力50Mpa，温度10°C下(在压力50 150Mpa，温度0°C 20°C的范围均可)破碎酵母细胞，也可用研磨机研磨破碎酵母细胞；3)将破碎后的酵母细胞冷冻离心，离心温度为5°C，离心力为15000G，离心30分 钟，得澄清离心液；4)用截流分子量为8000道尔顿的超滤柱超滤；，5)调节超滤液所含有效组分的含量，使该超滤液达到该药含量标准后，即为复合 辅酶原料药；6)在所述复合辅酶原料药中，加入相应的甘露醇或人白蛋白赋型剂，再经截流分子量为5000 (3000 5000均可)道尔顿的超滤器超滤和无菌过滤后，灌封并冻干成注射粉 针。测定本实施例方法制备的各辅酶成分的浓度，结果如下FAD 5 μ g/mlFMN 8 μ g/mlATP 2. Omg/mlADP 0. 3mg/mlAMP 0. 15mg/mlSAM 10 μ g/ml
GSH lmg/mlCoA 150U/mlNAD 0. 15mg/ml复合辅酶药制备方法实施例2，该方法包括以下步骤1)用在冷冻-10°C下保存两天的新鲜冰冻啤洒酵母加5倍无热原水化开；2)将化开的新鲜酵母迅速加热至85°C 95°C，立即冷却至5°C 10°C，破碎酵母 细胞；3)将破碎后的酵母细胞冷冻离心，离心温度为3°C，离心力为10000G，离心60分
钟，得澄清离心液；4)用截流分子量为6000道尔顿超滤柱超滤；5)调节超滤液所含有效组分的含量，使该超滤液达到该药含量标准后，即为复合 辅酶原料药；6)将所述复合辅酶原料药，用冻干法得到干粉，加入相应的辅料(可由羧甲基淀 粉、乳糖、硬脂酸镁、粘合剂、微粉硅胶组成或采用本领域常用的其它辅料)，制成口服片剂。测定本实施例方法制备的各辅酶成分的浓度，结果如下FAD 20 μ g/mlFMN 18 μ g/mlATP 2. 5mg/mlADP 0. 2mg/mlAMP 0. lmg/mlSAM 15 μ g/mlGSH 2mg/mlCoA 150U/mlNAD 0. lmg/ml复合辅酶药制备方法实施例3，该方法包括以下步骤1)用在冷冻_20°C下保存五天的新鲜冰冻食用酵母加1倍无热原水化开；2)反复进行深冻至-1°C _5°C和融化1°C 5°C，破碎酵母细胞；3)将破碎后的酵母细胞冷冻离心，离心温度为5°C，离心力为12000G，离心60分
钟，得澄清离心液；4)用截流分子量为5000道尔顿超滤柱超滤；5)调节超滤液所含有效组分的含量，使该超滤液达到该药含量标准后，即为复合辅酶原料药；6)将所述复合辅酶原料药，用丙酮或乙醇沉淀，得到干粉，加入相应的辅料(可由 羧甲基淀粉、乳糖、硬脂酸镁、微粉硅胶组成，或采用本领域常用的其它辅料)，制成胶囊。测定本实施例方法制备的各辅酶成分的浓度，结果如下FAD 1 μ g/mlFMN 1.5 μ g/mlATP 1. 5mg/mlADP 0. lmg/ml
AMP0. 2mg/mlSAM12μ g/mlGSH2. 5mg/mlCoA130U/mlNAD 0. 5mg/ml
权利要求
一种复合辅酶药制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤1)将新鲜冰冻酵母加0.5～5倍无热原水化开；2)化开的新鲜酵母用物理法或机械法破碎酵母细胞；3)将破碎后的酵母细胞冷冻离心，离心温度为0℃～10℃，离心力为10000 15000G，离心时间为30～60分钟，得澄清离心液；4)离心液经截流分子量为5000～8000道尔顿超滤柱超滤；5)调节超滤液所含有效组分的含量，使该超滤液达到该药含量标准后，即为复合辅酶原料药；6)在所述复合辅酶原料药中，加入相应的赋型剂，再经截流分子量为3000～5000道尔顿超滤柱超滤和无菌过滤后，灌封并冻干成注射粉针；或将所述复合辅酶原料药，用冻干法或有机溶剂沉淀法，得到干粉，加入相应的辅料，制成口服片剂或胶囊。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述新鲜冰冻酵母菌为将生产出的新 鲜啤酒酵母、面包酵母、食用酵母立即冷冻(-5°C _20°C )保存，保存期不得超过五天。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述破碎酵母细胞的物理法是指将酵 母菌液反复进行深冻至-1°C -5°c和融化1°C 5°C，或速热至85°C 95°C速冷至5°C 10°C;所述机械法是指用高压勻质机在压力50 150Mpa，温度0°C 20°C下破碎酵母细胞， 或用研磨机研磨破碎酵母细胞。
全文摘要
本发明涉及一种复合辅酶药的制备方法，属于医药技术领域。该方法包括将新鲜冰冻酵母加无热原水化开；再用物理法或机械法破碎酵母细胞；再将破碎后的酵母细胞冷冻离心，得澄清离心液经超滤；调节超滤液所含有效组分的含量，即为复合辅酶原料药；加入相应的赋型剂或辅料，制成注射粉针或口服片剂或胶囊。本发明不仅提高了生产效率，降低了生产成本，并保证达到或超过该药品有效组分及其含量和质量标准。
文档编号A61K36/064GK101984978SQ20101050323
公开日2011年3月16日 申请日期2010年9月30日 优先权日2010年9月30日
发明者林韶辉 申请人:海南康永药品有限公司;宿迁博华生物科技有限公司