专利名称：一种普乐安制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种普乐安制剂的质量控制方法，更具体的说是一种普乐安制剂中 α-亚麻酸的含量测定方法。
背景技术：
普乐安制剂为蜜蜂科昆虫中华蜂蜜Apis cerana Fabricius等工蜂所采集的十字 花科植物油菜Brassica campestis Linn.的干燥花粉，加适宜辅料后制成的片剂。花粉是被子植物雄蕊花药和孢子植物小孢叶上的小孢子囊内的小颗粒状物，是植 物的雄性生殖细胞。花粉内含各种丰富的营养物质，具有多种的生物学活性，在治疗前列腺 疾病方面有独到的效果。目前市场上已经有“前列康”、“舍尼通”等花粉制品，表现出良好 的疗效。这些药物在临床长期使用，已被证明制剂能有效地改善良性前列腺增生症状及并 发症，长期使用无毒副作用，同时花粉促进机体代谢及造血、免疫功能，因此适合老年人长 期使用。前列康牌普乐安制剂由浙江康恩贝公司生产，是纯油菜花粉制剂，临床用于肾气 不固，腰膝酸软，尿后余浙或失禁，及慢性前列腺炎、前列腺增生具有上述症候者。浙江医院 谢海宝等用前列康治疗前列腺增生100例的观察结果，减轻症状有效率93. 0%，用药后51 例经B超测定前列腺体积有明显缩小，总有效率95. 0%。浙江兰溪市中医院俞大毛用前列 康治疗40例前列腺增生患者，总有效率90%。油菜花粉中富含不饱和脂肪酸，其中α -亚麻酸含量最高，且α -亚麻酸与抗前列 腺增生活性药效研究显示一定的相关性。因此对普乐安制剂中α-亚麻酸进行质量控制可 提高普乐安的疗效，保障人民用药的安全性。在其它植物来源α -亚麻酸的含量测定中，均需要对α -亚麻酸进行提纯后再进 行测定。而普乐安制剂已做成药品，不可能对α-亚麻酸先进行提纯，然后再测定含量。因 此目前普乐安制剂质量标准中尚无α -亚麻酸的含量测定，而花粉的不饱和脂肪酸含量测 定均只测定脂肪油中各脂肪酸的相对含量，不能完全阐明问题。而实际检测时由于花粉的 不饱和脂肪酸容易相互作用，不能很好的定量。因此一种能定量的α-亚麻酸绝对含量的 检测对普乐安制剂质量的保障相当重要。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种普乐安制剂质量控制方法，其通过生产中可 行的方法，对普乐安制剂中α-亚麻酸含量进行监控，从而可控制普乐安制剂的内在质量。为此，本发明采用以下技术方案所述方法包括以下供试品溶液的制备步骤取普乐安制剂，研细，称取适量，称定，用有机溶剂提取α -亚麻酸，提取液回收溶 剂，残渣加入甲酯化试剂进行甲酯化，用有机溶剂萃取α-亚麻酸，萃取液转移至量瓶中， 加入内标溶液，用有机溶剂定容，加入适量无水硫酸钠，摇勻，即得供试品溶液；
所述方法还包括以下参照物溶液的制备步骤称取十七烷酸甲酯对照品、十九烷酸甲酯对照品中的一种为内标，制备内标溶液； 再移取内标溶液与α-亚麻酸甲酯溶于同一量瓶中，组成参照物溶液；所述方法采用气相色谱法测定普乐安制剂中的α -亚麻酸，包括以下测定步骤分别移取参照物溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，测定，按内标对比法计算 α-亚麻酸含量，即得；其中色谱条件为以聚乙二醇为固定相的毛细管柱，检测器氢火焰 离子化检测器FID ；柱温为程序升温初始温度120°C，保持2分钟；以每分钟10°C的速度升 温至180°C，保持2分钟；以每分钟2°C升温至184°C ；以每分钟1°C升温至190°C，保持10 分钟；再以每分钟30°C升温至250°C，保持10分钟；进样口温度220-260°C ；检测器温度 220-260 0C ；分流进样，分流比10-1000。在采用上述技术方案的基础上，本发明还可以采用以下进一步的技术方案所述供试品溶液的制备步骤中，提取α-亚麻酸的有机溶剂为无水乙醇、体积百 分比95%乙醇、石油醚、正己烷、乙醚、氯仿中的一种或几种。所述供试品溶液的制备步骤中，提取α-亚麻酸的方法为搅拌提取、回流提取、索 氏提取、超声提取、超临界二氧化碳提取中的一种。所述供试品溶液的制备步骤中，甲酯化试剂为氢氧化钾-甲醇溶液、三氟化硼-甲 醇溶液、硫酸-甲醇溶液、硫酸甲醇-苯溶液中的一种。所述供试品溶液的制备步骤中，萃取和定容有机溶剂为正己烷。供试品溶液的制备步骤为取普乐安制剂20片，研细，称取0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50ml石油醚 于60-90°C超声提取1小时，三角抽滤漏斗抽滤，用石油醚洗涤漏斗和滤纸，将滤渣和滤纸 置锥形瓶中，继续提取2次，第二次用50ml石油醚超声提取1小时，第三次用30ml石油醚 超声提取0.5小时，每次提取后均抽滤，用石油醚洗涤漏斗和滤纸，合并滤液，60°C减压回 收溶剂至干，残渣加重量比1 1的硫酸甲醇-苯10ml，60°C水浴回流30分钟，放冷，加正 己烷10ml，饱和氯化钠溶液10ml，振摇，转移至分液漏斗中，静置分层，水层继续用正己烷 提取2次，每次IOml，合并正己烷液，适当减压浓缩，转移至IOml量瓶中，精密加入2. Oml内 标溶液，正己烷稀释至刻度，加入适量无水硫酸钠，摇勻，即得；参照物溶液的制备步骤为称取十九烷酸甲酯对照品250. 9mg于IOOml量瓶中，正己烷溶解并稀释至刻度，摇 勻，作为内标溶液；称取α -亚麻酸甲酯8. SOmg于IOml量瓶中，加正己烷溶解，移取十九烷 酸甲酯内标溶液2. Oml于量瓶中，正己烷稀释至刻度，摇勻，即得参照物溶液，其中每Iml含 α -亚麻酸甲酯0. 88mg、十九烷酸甲酯0. 5018mg ；气相色谱法测定普乐安制剂中的α -亚麻酸的步骤为分别移取参照物溶液和供试品溶液各2μ 1，注入气相色谱仪，测定，按内标对比法 计算α-亚麻酸含量，即得；其中色谱条件为以聚乙二醇为固定相的毛细管柱，柱长30m， 内径0. 32mm,膜厚度为0. 25 μ m ；检测器氢火焰离子化检测器FID ；柱温为程序升温初始 温度120°C，保持2分钟；以每分钟10°C的速度升温至180°C，保持2分钟；以每分钟2°C升 温至184°C;以每分钟1°C升温至190°C，保持10分钟；再以每分钟30°C升温至250°C，保持 10分钟；进样口温度230°C ；检测器温度250°C ；分流进样，分流比10 1 ；载气为氮气；
以十九烷酸甲酯为内标物，按内标对比法定量；α-亚麻酸甲酯色谱峰与相邻色 谱峰分离度不低于1. 5 ；理论塔板数以α -亚麻酸甲酯峰计算应不低于50000。本发明利用测定普乐安制剂中的α -亚麻酸含量来对普乐安制剂进行质量控制， 所需普乐安制剂量少，只需要对普乐安制剂进行初步处理后就可检测α-亚麻酸的含量而 无需对α-亚麻酸提纯，而且通过使用气相色谱法对α-亚麻酸进行定量测定，测试精密 度高，可靠性好。本发明非常适合工业应用，可用于药品的质量控制，通过对普乐安制剂中 α -亚麻酸的监控，可有效控制产品的内在质量。
图1为本发明实施例1的供试品色谱图，批号为20090402 ；保留时间内标(十九 烷酸甲酯)22. · 433min, α -亚麻酸甲酯23. 750min。图2为本发明实施例2的供试品色谱图，批号为20090422 ；保留时间内标(十九 烷酸甲酯)22. 412min，α -亚麻酸甲酯23. 729min。图3为参照物溶液色谱图，保留时间内标(十九烷酸甲酯)22. 450min，α -亚麻 酸甲酯 23. 856min。
具体实施例方式对于本领域技术人员而言，根据本发明所公开的技术内容，本领域的技术人员将 很清楚本发明的其他实施方案，本发明实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨和范围的 情况下，可对本发明进行各种改变和改进。例如使用不同检测器所获得的结果可能有所不 同，但只要使用本发明所述的的质量控制方法，均在本发明保护范围之内。下面列举的实施例为进一步说明本发明，对本发明并不构成限制。以下实施例使用的仪器和试剂1、仪器气相色谱仪Agilent 6890A，检测器FID (美国Agilent公司)；SPH-300氢 气发生器(北京中惠普分析技术研究所)；SPB-3全自动空气源(北京中惠普分析技术研究 所)；GPI空气净化器(杭州科晓化工仪器设备有限公司)；BS210S电子天平(北京赛多利 斯天平有限公司)；AX205DR电子天平(METTLER TOLEDO公司)；DK-S^型恒温水浴锅(上 海精密实验设备有限公司)；KQ-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)； R系列旋转蒸发器(上海申生科技有限公司)2、试剂普乐安制剂(浙江康恩贝制药股份有限公司批号20090402、20090422)； α -亚麻酸对照品彡99 % (Sigma-Aldrich公司)；α -亚麻酸甲酯对照品彡99 % (GC) (Sigma-Aldrich公司)；十九烷酸甲酯彡99. 5% (GC) (Fluka公司)；石油醚(60-90°C )、正 己烷、甲醇、硫酸、苯等均为分析纯试剂。实施例1 含量测定一、方法(1)供试品溶液的制备取普乐安胶囊20粒(批号20090402)，研细，称取0.5g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，加50ml石油醚(60-90°C )超声提取1小时，三角抽滤漏斗抽滤， 用少量石油醚洗涤漏斗和滤纸，将滤渣和滤纸置锥形瓶中，继续提取2次，第二次用50ml石 油醚超声提取1小时，第三次用30ml石油醚超声提取0. 5小时，每次提取后均抽滤，用少量石油醚洗涤漏斗和滤纸，合并滤液，60°C减压回收溶剂至干，残渣加硫酸甲醇-苯(重量比 1 1) 10ml，60°C水浴回流30分钟，放冷，加正己烷10ml，饱和氯化钠溶液10ml，振摇，转移 至分液漏斗中，静置分层，水层继续用正己烷提取2次，每次10ml，合并正己烷液，适当减压 浓缩，转移至IOml量瓶中，精密加入2. Oml内标溶液，正己烷稀释至刻度，加入适量无水硫 酸钠，摇勻，即得。(2)参照物溶液的制备精密称取十九烷酸甲酯对照品250. 9mg于IOOml量瓶中，正 己烷溶解并稀释至刻度，摇勻，作为内标溶液；精密称取α -亚麻酸甲酯8. SOmg于IOml量 瓶中，加适量正己烷溶解，精密移取十九烷酸甲酯内标溶液2. Oml于已加入α -亚麻酸甲酯 量瓶中，正己烷稀释至刻度，摇勻，即得，作为参照物溶液。(3)测定采用气相色谱法测定，分别精密移取参照物溶液和供试品溶液各2 μ 1， 注入气相色谱仪，测定，按内标对比法计算α-亚麻酸含量，即得；其中色谱条件为以聚乙 二醇为固定相的毛细管柱，检测器氢火焰离子化检测器(FID)；柱温为程序升温初始温 度120°C，保持2分钟；以每分钟10°C的速度升温至180°C，保持2分钟；以每分钟2°C升温 至184°C;以每分钟1°C升温至190°C，保持10分钟；再以每分钟30°C升温至250°C，保持10 分钟；进样口温度230°C;检测器温度250°C;分流进样，分流比10 1 ；载气为高纯氮气。二、结果对照品测量结果见附图3，样品测量结果见附图1。结果
批号每粒含量(mg)200904024.23实施例2 含量测定一、方法(1)供试品溶液的制备取普乐安片剂20片(批号20090422)，研细，称取0.5g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，加50ml石油醚(60-90°C )超声提取1小时，三角抽滤漏斗抽滤， 用少量石油醚洗涤漏斗和滤纸，将滤渣和滤纸置锥形瓶中，继续提取2次，第二次用50ml石 油醚超声提取1小时，第三次用30ml石油醚超声提取0. 5小时，每次提取后均抽滤，用少量 石油醚洗涤漏斗和滤纸，合并滤液，60°C减压回收溶剂至干，残渣加硫酸甲醇-苯(重量比 1 1) IOml，60°C水浴回流30分钟，放冷，加正己烷IOml，饱和氯化钠溶液IOml，振摇，转移 至分液漏斗中，静置分层，水层继续用正己烷提取2次，每次10ml，合并正己烷液，适当减压 浓缩，转移至IOml量瓶中，精密加入2. Oml内标溶液，正己烷稀释至刻度，加入适量无水硫 酸钠，摇勻，即得。(2)参照物溶液的制备精密称取十九烷酸甲酯对照品250. 9mg于IOOml量瓶中，正 己烷溶解并稀释至刻度，摇勻，作为内标溶液；精密称取α -亚麻酸甲酯8. SOmg于IOml量 瓶中，加适量正己烷溶解，精密移取十九烷酸甲酯内标溶液2. Oml于已加入α -亚麻酸甲酯 量瓶中，正己烷稀释至刻度，摇勻，即得，作为参照物溶液。(3)测定采用气相色谱法测定，分别精密移取参照物溶液和供试品溶液各2 μ 1， 注入气相色谱仪，测定，按内标对比法计算α-亚麻酸含量，即得；其中色谱条件为以聚乙二醇为固定相的毛细管柱，检测器氢火焰离子化检测器(FID)；柱温为程序升温初始温 度120°C，保持2分钟；以每分钟10°C的速度升温至180°C，保持2分钟；以每分钟2°C升温 至184°C;以每分钟1°C升温至190°C，保持10分钟；再以每分钟30°C升温至250°C，保持10 分钟；进样口温度240°C;检测器温度260°C;分流进样，分流比10 1 ；载气为高纯氮气。二、结果对照品测量结果见附图3，样品测量结果见附图2。结果
权利要求
1.一种普乐安制剂质量控制方法，其特征在于所述方法包括以下供试品溶液的制备步骤取普乐安制剂，研细，称取适量，称定，用有机溶剂提取α -亚麻酸，提取液回收溶剂， 残渣加入甲酯化试剂进行甲酯化，用有机溶剂萃取α -亚麻酸，萃取液转移至量瓶中，加入 内标溶液，用有机溶剂定容，加入适量无水硫酸钠，摇勻，即得供试品溶液；所述方法还包括以下参照物溶液的制备步骤称取十七烷酸甲酯对照品、十九烷酸甲酯对照品中的一种为内标，制备内标溶液；再移 取内标溶液与α-亚麻酸甲酯溶于同一量瓶中，组成参照物溶液；所述方法采用气相色谱法测定普乐安制剂中的α-亚麻酸，包括以下测定步骤分别移取参照物溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，测定，按内标对比法计算α-亚 麻酸含量，即得；其中色谱条件为以聚乙二醇为固定相的毛细管柱，检测器氢火焰离子 化检测器FID ；柱温为程序升温初始温度120°C，保持2分钟；以每分钟10°C的速度升温 至180°C，保持2分钟；以每分钟2°C升温至184°C ；以每分钟1°C升温至190°C，保持10分 钟；再以每分钟30°C升温至250°C，保持10分钟；进样口温度220-260°C ；检测器温度 220-2600C ；分流进样，分流比10-1000。
2.如权利要求1所述的一种普乐安制剂质量控制方法，其特征在于所述供试品溶液的 制备步骤中，提取α-亚麻酸的有机溶剂为无水乙醇、体积百分比95%乙醇、石油醚、正己 烷、乙醚、氯仿中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的一种普乐安制剂质量控制方法，其特征在于所述供试品溶 液的制备步骤中，提取α-亚麻酸的方法为搅拌提取、回流提取、索氏提取、超声提取、超临 界二氧化碳提取中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种普乐安制剂质量控制方法，其特征在于所述供试品溶 液的制备步骤中，甲酯化试剂为氢氧化钾-甲醇溶液、三氟化硼-甲醇溶液、硫酸-甲醇溶 液、硫酸甲醇-苯溶液中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种普乐安制剂质量控制方法，其特征在于所述供试品溶 液的制备步骤中，萃取和定容有机溶剂为正己烷。
6.根据权利要求1所述的一种普乐安制剂质量控制方法，其特征在于供试品溶液的制 备步骤为取普乐安制剂20片，研细，称取0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50ml石油醚于 60-90°C超声提取1小时，三角抽滤漏斗抽滤，用石油醚洗涤漏斗和滤纸，将滤渣和滤纸置 锥形瓶中，继续提取2次，第二次用50ml石油醚超声提取1小时，第三次用30ml石油醚超声 提取0.5小时，每次提取后均抽滤，用石油醚洗涤漏斗和滤纸，合并滤液，60°C减压回收溶 剂至干，残渣加重量比1 1的硫酸甲醇-苯10ml，60°C水浴回流30分钟，放冷，加正己烷 10ml，饱和氯化钠溶液10ml，振摇，转移至分液漏斗中，静置分层，水层继续用正己烷提取2 次，每次10ml，合并正己烷液，适当减压浓缩，转移至IOml量瓶中，精密加入2. Oml内标溶 液，正己烷稀释至刻度，加入适量无水硫酸钠，摇勻，即得；参照物溶液的制备步骤为称取十九烷酸甲酯对照品250. 9mg于IOOml量瓶中，正己烷溶解并稀释至刻度，摇勻， 作为内标溶液；称取α-亚麻酸甲酯8. SOmg于IOml量瓶中，加正己烷溶解，移取十九烷酸甲酯内标溶液2. Oml于量瓶中，正己烷稀释至刻度，摇勻，即得参照物溶液，其中每Iml含 α -亚麻酸甲酯0. 88mg、十九烷酸甲酯0. 5018mg ；气相色谱法测定普乐安制剂中的α-亚麻酸的步骤为分别移取参照物溶液和供试品溶液各2μ 1，注入气相色谱仪，测定，按内标对比法计算 α -亚麻酸含量，即得；其中色谱条件为以聚乙二醇为固定相的毛细管柱，柱长30m，内径 0. 32mm,膜厚度为0. 25 μ m ；检测器氢火焰离子化检测器FID ；柱温为程序升温初始温度 120°C，保持2分钟；以每分钟10°C的速度升温至180°C，保持2分钟；以每分钟2°C升温至 184°C ；以每分钟1°C升温至190°C，保持10分钟；再以每分钟30°C升温至250°C，保持10分 钟；进样口温度230°C ；检测器温度250°C ；分流进样，分流比10 1 ；载气为氮气；以十九烷酸甲酯为内标物，按内标对比法定量；α-亚麻酸甲酯色谱峰与相邻色谱峰 分离度不低于1. 5 ；理论塔板数以α -亚麻酸甲酯峰计算应不低于50000。
全文摘要
本发明提供一种普乐安制剂质量控制方法，它利用测定普乐安制剂中的α-亚麻酸含量来对普乐安制剂进行质量控制，所需普乐安制剂量少，只需要对普乐安制剂进行初步处理后就可检测α-亚麻酸的含量而无需对α-亚麻酸提纯，而且通过使用气相色谱法对α-亚麻酸进行定量测定，测试精密度高，可靠性好。本发明非常适合工业应用，可用于药品的质量控制，通过对普乐安制剂中α-亚麻酸的监控，可有效控制产品的内在质量。
文档编号A61P13/08GK102138954SQ20101061453
公开日2011年8月3日 申请日期2010年12月30日 优先权日2010年12月30日
发明者叶剑锋, 吴键, 姚建标, 王如伟, 胡江宁 申请人:浙江康恩贝制药股份有限公司, 浙江现代中药与天然药物研究院有限公司