专利名称：针对人呼吸道合胞病毒(rsv)的抗体以及使用方法
技术领域：
提供了免疫特异性地结合呼吸道合胞病毒(RSV)的F蛋白和/或免疫特异性地结合RSV和/或中和RSV的抗体及其抗原结合片段。还提供了采用抗RSV抗体及其抗原结合片段的诊断和治疗方法。所述治疗方法包括施用所提供的抗RSV抗体或其抗原结合片段用于预防或治疗RSV感染和/或改善RSV感染的ー种或多种症状，例如婴儿中的感染以及与器官移植相关的感染。本文所提供的多种不同抗RSV抗体及其抗原结合片段的组合和/或与其他抗RSV抗体及其抗原结合片段的组合可以用于联合治疗。还提供了含有抗RSV抗体及其抗原结合片段的混合物的组合物。
背景技术：
呼吸道合胞病毒(RSV)是婴儿和幼儿中严重呼吸道疾病的重要原因，并且是婴儿毛细支气管炎的主要原因(Welliver (2003) J Pediatr 143:S112)。估计全世界6.4X107例呼吸道疾病和160，000例死亡可归因于RSV诱导的疾病。仅在美国，数万婴儿住院是由于副粘病毒感染，例如 RSV 和副流感病毒(PIV) (Shay et al. (1999) JAMA 282:1440-1446)。严重RSV感染最常发生在儿童和婴儿中，特别是早产儿。诸如慢性肺疾病或先天性心脏病的潜在的健康问题可以显著增加严重疾病的风险。RSV感染还可以在老人、患有慢性肺疾病的个体和免疫低下的成人(例如骨髄移植接受者)中引起严重疾病。已研究预防和治疗RSV感染的几种方法，包括疫苗开发、抗病毒化合物(利巴韦林)、反义药物、RNA干扰技术以及抗体产品，例如免疫球蛋白或静脉注单克隆抗体。分离自供体的静脉注射免疫球蛋白(RSV-IGI V ;RespiGam )和单克隆抗体帕利珠单抗(SYNAGIS )已被批准用于高风险儿童中的RSV预防。然而，尚没有RSV的疫苗或可商购的治疗。仅利巴韦林被批准用于治疗RSV感染。由于其低特异性，，需要高剂量、频繁施用和/或大量抗体产品(例如RSV-IG和帕利珠单抗)来有效治疗RSV感染。而且，诸如静脉注射免疫球蛋白的产品的使用取决于供体可用性。因此，需要用于预防或治疗RSV感染的其他物质。发明概述
本文提供用于预防和治疗呼吸道合胞病毒(RSV)感染以及RSV介导的疾病或疾病状况的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段。本文还提供用于诊断和/或监测RSV感染的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段。本文提供免疫特异性地结合并中和RSV的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段。在一些实例中，当本文所提供的多肽包含在抗体或抗原结合片段中时，本文所提供的多肽免疫特异性地结合并中和RSV。本文还提供含有本文所提供的多肽的抗体和抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段免疫特异性地结合并中和RSV。本文所提供的多肽、抗体和抗原结合片段可以特异性结合F蛋白以及中和RSV。本文提供可以中和RSV A和B亚型的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段。本文提供免疫特异性地结合RSV的F蛋白的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段。在一些实例中，本文所提供的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段含有SEQ ID NO :1-16和1627-1628中任一个所示的氨基酸序列，其中所述分离的多肽免疫特异性地结合RSV融合(F)蛋白。在一些实例中，所述分离的多肽含有与SEQ ID NO :1-16中任一个所示的氨基酸序列具有60%、65%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更多序列相同性的多肽，其中所述分离的多肽免疫特异性地结合RSV融合(F)蛋白。 本文提供免疫特异性地结合呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白和/或中和RSV的分离的抗体或其抗原结合片段，并且所述分离的抗体或其抗原结合片段含有VH CDRl,其具有SEQ ID NO :2或1627所示的氨基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列；VH CDR3，其具有SEQID NO :4所示的氨基酸序列八CDR1，其具有SEQ ID NO :6所示的氨基酸序列；ん⑶R2，其具有SEQ ID NO :7所示的氨基酸序列；以及ん⑶R3，其具有SEQ ID NO :8所示的氨基酸序列。在其他实例中，所述分离的抗体或其抗原结合片段含有与SEQ ID NO :2-4、6-8和1627中任一个所示的氨基酸序列具有60%、65%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的 Vh CDRUVh CDR2、Vh⑶R3、\⑶Rl、\⑶R2和\⑶R3。本文提供免疫特异性地与以下抗体或其抗原结合片段结合RSV F蛋白上或RSV病毒上的相同表位的抗RSV抗体或抗原结合片段抗体或其抗原结合片段，其含有VH CDRl，其具有SEQID NO 2或1627所示的氨基酸序列；VH CDR2，其具有SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列；Vh CDR3，其具有SEQ ID NO :4所示的氨基酸序列；VfDRl，其具有SEQ ID NO :6所示的氨基酸序列八⑶R2，其具有SEQ IDNO :7所示的氨基酸序列；以及\ CDR3，其具有SEQ ID NO :8所示的氨基酸序列；或者分离的抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQ ID NO :2-4、6-8和1627所示的氨基酸序列具有60%、65%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的 Vh CDRU VhCDR2、Vh CDR3、Vl CDR1、Vl CDR2 和 Vl CDR3。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链具有SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含Vh结构域，所述Vh结构域具有SEQID NO 1的氨基酸1_125所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链，所述轻链具有SEQID NO :5所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含ん结构域，所述ん结构域具有SEQ ID NO :5的氨基酸1-107所示的氨基酸序列。在ー特定实例中，所述分离的抗体或其抗原结合片段为58c5。本文提供包含可变重(Vh)链和可变轻(VJ链的分离的抗RSV抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段免疫特异性地与包含SEQ IDNO :I所示的重链和SEQ IDNO :5所示的轻链的抗体或抗原结合片段结合呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白上的相同表位。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或其抗原结合片段包含Vh互补决定区I (⑶Rl)，所述Vh互补决定区I (⑶Rl)具有SEQ ID NO 2或1627所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含Vh⑶R2，所述Vh⑶R2具有SEQID NO :3所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含VfDR3，所述￥11⑶R3具有SEQ ID NO :4所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或其抗原结合片段包含VH⑶R1，其具有SEQ ID NO :2或1627所示的氨基酸序列；Vh CDR2，其具有SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列；以及Vh CDR3，其具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或其抗原结合片段包含\CDR1，所述VfDRl具有SEQ ID NO :6所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含I CDR2，所述\ CDR2具有SEQ ID N0:7所示的\ CDR2的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含ん⑶R3，所述ん⑶R3具有SEQID NO :8所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含CDR1，其具有SEQ ID NO :6所示的氨基酸序列八CDR2，其具有SEQ ID N0:7所示的氨基酸序列；以及ん⑶R3，其具有SEQ ID NO :8所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含重链，所述重链具有SEQ ID NO :9所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含Vh结构域，所述Vh结构域具有SEQID NO 9的氨基酸1-125所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含轻链，所述轻链具有SEQ IDNO 13所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含Vl结构域，所述\结构域具有SEQ ID NO 13的氨基酸1-107所示的氨基酸序列。在ー特定实例中，所述分离的抗体或抗原结合片段为sc5。本文提供包含可变重(Vh)链和可变轻(VJ链的分离的抗RSV抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段免疫特异性地与包含SEQ IDNO :9所示的重链和SEQ IDNO: 13所示的轻链的抗体或抗原结合片段结合呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白上的相同表位。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含VH。在一些实例中，所述分离的抗体或抗原结合片段包含Vh CDRlCDRl具有SEQ ID N0:10或1628所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含Vh CDR2，所述Vh⑶R2具有SEQ IDNO 11所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含Vh⑶R3，所述￥11⑶R3具有SEQ ID NO : 12所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或其抗原结合片段包含VH⑶R1，其具有SEQ ID NO10或1628所不的氣基酸序列；VH Q)R2,其具有SEQ ID NO 11所不的氣基酸序列；以及VhCDR3，其具有SEQ IDNO 12所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含\CDR1，所述んCDRl具有SEQ ID NO :14所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含^ CDR2，所述^ CDR2具有SEQ ID NO: 15所示的^ CDR2的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含ん⑶R3，所述ん⑶R3具有SEQ ID NO : 16所示的氨基酸序列。在一些实例中，本文所提供的分离的抗体或抗原结合片段包含CDR1，其具有SEQ ID NO :14所示的氨基酸序列八CDR2，其具有SEQ ID NO 15所示的氨基酸序列；以及\⑶R3，其具有SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列。本文提供免疫特异性地结合RSV F蛋白的一部分的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段，其具有SEQ ID NO :25所示的氨基酸序列。本文还提供免疫特异性地结合RSV F蛋白的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段，其具有SEQ ID NO :1629所示的氨基酸序列。本文提供包含抗原结合结构域的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段，其为人或人源化抗体或其抗原结合片段。在一些实例中，本文所提供的分离的多肽、抗体或抗原结合片段为嵌合抗体。在一些实例中，所述分离的多肽、抗体或抗原结合片段为单链Fv(ScFv)、 Fab, Fab;、F(ab，)2、Fv、dsFv、双抗体(diabody)、Fd 或 Fd’ 片段。在一些实例中，本文所提供的分离的多肽、抗体或抗原结合片段包含肽接头。在一些实例中，所述肽接头包含约I-约50个氨基酸。在一些实例中，本文所提供的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段缀合至聚こニ醇(PEG)。在一些实例中，本文所提供的分离的多肽、抗体或抗原结合片段包含治疗剂或诊断剂。示例性诊断剂包括但不限于酶、荧光化合物、电子转移剂和放射性标记。本文提供包含蛋白转导结构域的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段。在ー些实例中，所述蛋白转导结构域选自具有SEQ ID NO :1529-1600所示的氨基酸序列的肽。在一些实例中，所述蛋白转导结构域为HIV-TAT蛋白转导结构域。本文提供多价抗体，所述多价抗体包含第一抗原结合部分，其包含缀合至多聚化结构域的本文所提供的多肽、抗体或其抗原结合片段；以及第二抗原结合部分，其包含缀合至第二多聚化结构域的抗病毒抗体的抗原结合片段。在这类实例中，所述第一多聚化结构域与所述第二多聚化结构域是互补的或相同的，从而所述第一抗原结合部分与所述第二抗原结合部分形成多价抗体。在一些实例中，本文所提供的多价抗体包含1、2、3、4或5个额外的抗原结合部分。示例性多价抗体包括ニ价、三价、四价、五价、六价或七价抗体。本文所提供的多价抗体包括异ニ价(heterobivalent)或同ニ价(homobivalent)抗体。本文所提供的多价抗体包括多特异性抗体。在一些实例中，所述多特异性抗体为双特异性、三特异性或四特异性抗体。在一些实例中，本文所提供的多价抗体包含抗原结合片段，所述抗原结合片段为单链Fv(scFv)、Fab、Fab’、F (ab，) 2、Fv、dsFv、双抗体、Fd或Fd’片段。本文所提供的多价抗体的第一抗原结合部分和/或第二抗原结合部分可以通过共价或非共价键缀合至多聚化结构域。在一些实例中，所述抗原结合部分通过接头(例如化学接头或多肽接头)缀合至所述多聚化结构域。在一些实例中，本文所提供的多价抗体的多聚化结构域选自免疫球蛋白恒定区(Fe)、亮氨酸拉链、互补疏水区、互补亲水区或相容的蛋白-蛋白相互作用结构域。在一些实例中，所述Fe结构域为IgG、IgM或IgE Fe结构域。在一些实例中，本文所提供的多价抗体包含两个或多个抗RSV抗体或其抗原结合片段。在一特定实例中，本文所提供的多价抗体包含两个或多个抗RSV抗体或其抗原结合 片段。本文提供多价抗体，所述多价抗体包含第一抗原结合部分，其包含缀合至多聚化结构域的本文所提供的抗RSV抗体或其抗原结合片段；以及第二抗原结合部分，其包含缀合至第二多聚化结构域的选自帕利珠单抗、莫他珠单抗、AFFF, P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L1、FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(I)、6H8、Ll-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(l)、A4B4LlFR_S28R、A4B4_F52S、rsv6、rsvll、rsvl3、rsvl9、rsv21、rsv22、rsv23、RF-U RF-2或它们的抗原结合片段的抗RSV抗体或其抗原结合片段本文提供多价抗体，所述多价抗体包含第一抗原结合部分，其包含缀合至多聚化结构域的本文所提供的抗RSV抗体或其抗原结合片段；以及第二抗原结合部分，其包含缀合至第二多聚化结构域的抗病毒抗体，所述抗病毒抗体免疫特异性地结合副流感病毒(PIV)抗原或人偏肺病毒(hMPV)抗原。本文提供组合，其包含本文所提供的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段或者本文所提供的多价抗体，以及抗病毒剂。在一些实例中，所述抗病毒剂为利巴韦林。本文提供组合，其包含本文所提供的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段和抗病毒剂，所述分离的多肽、抗体或其抗原结合片段和抗病毒剂配制为单ー组合物或分离的组合物。本文提供组合，其包含本文所提供的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段或者本文所提供的多价抗体，以及ー种或多种额外的抗病毒抗体。在一些实例中，所述组合包含两种或更多种不同的抗体RSV抗体或其抗原结合片段。在一些实例中，所述组合包含两种或更多种不同的选自本文所提供的抗体或抗原结合片段的抗RSV抗体或抗原结合片段。在一些实例中，所述组合包含本文所提供的抗体或其抗原结合片段以及选自帕利珠单抗、莫他珠单抗、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L1、FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(I)、6H8、L1-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(1)、A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvll、rsvl3、rsvl9、rsv21、rsv22、rsv23、RF-1、RF-2或它们的抗原结合片段的抗体。在一些实例中，所述组合包含本文所提供的抗体或其抗原结合片段以及选自免疫特异性地结合副流感病毒(PIV)抗原或人偏肺病毒(hMPV)抗原的抗体或其抗原结合片段的抗体。在一些实例中，所述PIV抗原为人PIV I型、人PIV 2型、人PIV 3型和/或人PIV 4型的抗原。在一些实例中，所述PIV抗原选自PIV核衣壳磷蛋白、PIV融合(F)蛋白、PIV磷蛋白、PIV大(L)蛋白、PIV基质(M)蛋白、PIV血凝素-神经氨酸酶(HN)糖蛋白、PIV RNA依赖性RNA聚合酶、PIV Yl蛋白、PIVD蛋白、PIV C蛋白以及它们的等位变体。在一些实例中，所述hMPV抗原为hMPV A型或hMPV B型的抗原。在ー些实例中，所述hMPV抗原为hMPV Al亚型、hMPV A2亚型、hMPV BI亚型或hMPV B2亚型的抗原。在一些实例中，所述hMPV抗原选自hMPV核蛋白、hMPV磷蛋白、hMPV基质蛋白、hMPV小疏水蛋白、hMPV RNA依赖性RNA聚合酶、hMPV F蛋白、hMPV G蛋白以及它们的等位变体。本文提供组合，其包含本文所提供的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段或者本文所提供的多价抗体，以及ー种或多种额外的抗病毒抗体，其中所述ー种或多种额外的抗病毒抗体为单链 Fv(scFv)、Fab、Fab’、F (ab，) 2、Fv、dsFv、双抗体、Fd 或 Fd’ 片段。本文提供药物组合物，其包含本文所提供的任何分离的多肽、抗体或其抗原结合片段，本文所提供的任何多价抗体，或者本文所提供的任何组合以及药学可接受的载体或赋形剂。在一些实例中，本文所提供的药物组合物配制为凝胶剂、软膏剂、液体制剂、混悬齐U、气雾剂、片剂、丸剂、散剂或鼻腔喷雾剂。在一些实例中，配制本文所提供的药物组合物用于肺部、鼻内或肠胃外施用。在一些实例中，配制本文所提供的药物组合物用于单剂量施用。在一些实例中，配制本文所提供的药物组合物用于缓释。本文提供药物组合物，其包含本文所提供的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段或者本文所提供的多价抗体，以及ー种或多种额外的抗病毒抗体。在一些实例中，所述药物组合物包含两种或更多种不同的抗RSV抗体或其抗原结合片段。在一些实例中，所述药物组合物包含两种或更多种不同的选自本文所提供的抗体或抗原结合片段的抗RSV抗体或抗原结合片段。在一些实例中，所述药物组合物包含本文所提供的抗体或抗原结合片段以及选自帕利珠单抗、莫他珠单抗、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、lX-493Ll、FR H3_3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(I)、6H8、L1-7E5、L2_15B10、A13all、Alh5、A4B4(1)、A4R4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvll、rsvl3、rsvl9、rsv2UrSV22、rSV23、RF-l、RF-2或它们的抗原结合片段的抗体。在一些实例中，所述药物组合物包含本文所提供的抗体或其抗原结合片段以及选自免疫特异性地结合副流感病毒(PIV)抗原或人偏肺病毒(hMPV)抗原的抗体或其抗原结合片段的抗体。在一些实例中，所述PIV抗 原为人PIV I型、人PIV 2型、人PIV 3型和/或人PIV 4型的抗原。在一些实例中，所述PIV抗原选自PIV核衣壳磷蛋白、PIV融合(F)蛋白、PIV磷蛋白、PIV大(L)蛋白、PIV基质(M)蛋白、PIV血凝素-神经氨酸酶(HN)糖蛋白、PIV RNA依赖性RNA聚合酶、PIV Yl蛋白、PIV D蛋白、PIV C蛋白以及它们的等位变体。在一些实例中，所述hMPV抗原为hMPV A型或hMPV B型的抗原。在一些实例中，所述hMPV抗原为hMPV Al亚型、hMPV A2亚型、hMPVBI亚型或hMPV B2亚型的抗原。在一些实例中，所述hMPV抗原选自hMPV核蛋白、hMPV磷蛋白、hMPV基质蛋白、hMPV小疏水蛋白、hMPV RNA依赖性RNA聚合酶、hMPV F蛋白、hMPV G蛋白以及它们的等位变体。本文提供药物组合物，其包含本文所提供的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段或者本文所提供的多价抗体，以及ー种或多种额外的抗病毒抗体，其中所述ー种或多种额外的抗病毒抗体为单链Fv (scFv)、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、dsFv、双抗体、Fd或Fd’片段。本文提供药物组合物，其包含本文所提供的分离的多肽、抗体或其抗原结合片段或者本文所提供的多价抗体，以及抗病毒剂。在一些实例中，所述抗病毒剂为利巴韦林。本文提供治疗对象中的病毒感染的方法，其包括给所述对象施用治疗有效量的本文所提供的药物组合物。本文提供治疗或抑制对象中的病毒感染的ー种或多种症状的方法，其包括给所述对象施用治疗有效量的本文所提供的药物组合物。本文还提供预防对象中的病毒感染的方法，其包括给所述对象施用治疗有效量的本文所提供的药物组合物。在一特定实例中，所述病毒感染为RSV感染。在一特定实例中，所述RSV感染为上呼吸道感染。可以通过任何合适的途径进行施用，包括但不限于体表(topically)、肠胃外、局部或全身，例如鼻内、肌肉内、皮内、腹腔内、静脉内、皮下、ロ服施用，或者通过肺部施用。在一些实例中，通过雾化吸入器或吸入器施用本文所提供的药物组合物。可以将本文所提供的药物组合物施用于任何合适的对象,例如哺乳动物,如人。在一些实例中，将本文所提供的药物组合物施用于人类婴儿，早产或有为RSV感染住院的风险的人类婴儿，老年人，患有囊性纤维化、支气管肺发育不良、先天性心脏病、先天性免疫缺陷、获得性免疫缺陷、白血病或非何杰金淋巴瘤的人类对象，或者具有移植物(例如骨髄移植物或肝移植物)的人类对象。
在一些实例中，在RSV季节(例如，10月至5月)期间施用本文所提供的药物组合物I次、2次、3次、4次或5次。在一些实例中，在RSV季节之前I个月、2个月或3个月内施用本文所提供的药物组合物I次、2次、3次、4次或5次。在一些实例中，本文所提供的药物组合物可以与ー种或多种抗病毒剂一起施用。在一些实例中，所述抗病毒剂为利巴,林。在一些实例中，所述药物组合物与所述抗病毒剂配制为单ー组合物或分离的组合物。在本文所提供的方法中，所述药物组合物与所述抗病毒剂可以顺序、同时或间歇施用。在一些实例中，本文所提供的药物组合物可以与激素治疗、免疫治疗或抗炎剂ー起施用。在一些实例中，本文所提供的药物组合物可以与ー种或多种额外的抗病毒抗体或其抗原结合片段一起施用。所述药物组合物与所述ー种或多种额外的抗病毒抗体配制为单ー组合物或分离的组合物。所述药物组合物与所述ー种或多种额外的抗RSV抗体可以顺序、同时或间歇施用。在一些实例中，所述抗原结合片段为单链Fv(scFv)、Fab、Fab’、F(ab，)2、卩￥、(18 ￥、双抗体、？(1或卩(1’片段。 在一些实例中，本文所提供的药物组合物可以与ー种或多种额外的抗病毒抗体一起施用，所述抗病毒抗体选自抗RSV抗体或其抗原结合片段，例如帕利珠单抗、莫他珠单抗、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L1、FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(I)、6H8、L1-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(1)、A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvll、rsvl3、rsvl9、rsv21、rsv22、rsv23、RF-1、RF-2或它们的抗原结合片段。在一些实例中，本文所提供的药物组合物可以与ー种或多种额外的抗病毒抗体一起施用，所述抗病毒抗体选自免疫特异性地结合副流感病毒(PIV)抗原或人偏肺病毒(hMPV)抗原的抗体或其抗原结合片段。在一些实例中，所述PIV抗原为人PIV I型、人PIV2型、人PIV 3型和/或人PIV 4型的抗原。在一些实例中，所述PIV抗原选自PIV核衣壳磷蛋白、PIV融合(F)蛋白、PIV磷蛋白、PIV大(L)蛋白、PIV基质(M)蛋白、PIV血凝素-神经氨酸酶(HN)糖蛋白、PIV RNA依赖性RNA聚合酶、PIV Yl蛋白、PIVD蛋白、PIV C蛋白以及它们的等位变体。在一些实例中，所述hMPV抗原为hMPV A型或hMPV B型的抗原。在一些实例中，所述hMPV抗原为hMPV Al亚型、hMPV A2亚型、hMPV BI亚型或hMPV B2亚型的抗原。在一些实例中，所述hMPV抗原选自hMPV核蛋白、hMPV磷蛋白、hMPV基质蛋白、hMPV小疏水蛋白、hMPV RNA依赖性RNA聚合酶、hMPV F蛋白、hMPV G蛋白以及它们的等位变体。本文提供检测RSV感染的方法，其包括(a)利用本文所提供的抗体或其抗原结合片段測定流体、细胞或组织样品中的RSV抗原水平；(b)将所測定RSV抗原水平与对照水平比较，其中与RSV抗原的对照水平相比，所測定的RSV抗原水平的提高代表RSV感染。在一些实例中，所述细胞或组织样品获得自人类对象。在一些实例中，所述细胞或组织样品为血液、尿、唾液、肺痰、灌洗或淋巴样品。本文提供分离的核酸，其编码本文所提供的多肽、抗体或其抗原结合片段。本文提供载体，其包含编码本文所提供的多肽、抗体或其抗原结合片段的核酸。本文提供分离的细胞，其包含本文所提供的抗体或其抗原结合片段、本文所提供的核酸或本文所提供的载体。本文所提供的细胞可以为例如原核细胞或真核细胞。本文还提供转基因动物，其包含本文所提供的核酸或本文所提供的载体。本文还提供表达分离的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在表达所编码的抗体的条件下培养本文所提供的分离的细胞或者通过从本文所提供的转基因动物分离所述抗体或抗原结合片段。在一些实例中，所述抗体或抗原结合片段分离自所述转基因动物的血清或乳汁。本文提供试剂盒，其包含在ー个或多个容器中的本文所提供的多肽、抗体或抗原结合片段，本文所提供的多价抗体，或者本文所提供的组合，以及使用说明。本文还提供本文所提供的抗体或其抗原结合片段用于预防和/或治疗对象中的病毒感染的用途。本文还提供本文所提供的抗体或其抗原结合片段用于治疗或抑制对象中的病毒感染的ー种或多种症状的用途。本文还提供本文所提供的抗体或抗原结合片段在配制预防和/或治疗个体中的病毒感染的药物中的用途。本文还提供本文所提供的抗体或抗原结合片段在配制治疗或抑制个体中的病毒感染的ー种或多种症状的药物中的用途。发明详述 提纲A.定义B.综述_I.呼吸道合胞病毒C.抗 RSV 抗体_I. 一般抗体结构和功能结构域_a.抗体的结构和功能结构域_b.抗体片段_2.示例性抗RSV抗体_a.衍生抗体_i.单链抗体_ii抗独特型抗体_iii.多特异性抗体和抗体多聚化D.抗RSV抗体的额外修饰_I.降低免疫原性的修饰_2. Fe 修饰_3.聚こニ醇化—4.可检测部分的缀合_5.治疗性部分的缀合_6.修饰以提高结合特异性E.分离抗RSV抗体的方法F.制备抗RSV抗体及其修饰或变体形式以及编码抗体的核酸的方法_I.核酸_2.载体_3.细胞表达系统_a.原核表达_b.酵母细胞
_c.昆虫细胞_d.哺乳动物细胞_e.植物_4.抗体的纯化G.评价抗RSV抗体特性和活性_I.结合测定_3.用于分析抗体的病毒中和效应的体外测定_4.用于评价抗RSV抗体的效カ的体内动物模型
_5.用于测量抗体效カ的体外和体内测定H.诊断用途_I.病原感染的体外检测_2.病原感染的体内检测_3.监测感染I.预防和治疗用途I.治疗对象_2.剂量_3.施用途径_4.联合治疗_a.用于联合治疗的抗病毒抗体_i.抗 RSV 抗体_ii抗其他呼吸道病毒的抗体_5.基因治疗J.药物组合物、组合和制成品/试剂盒_I.药物组合物_2.制成品/试剂盒_3.组合K.实施例A.定义除非另有定义，本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域技术人员通常理解的相同的意义。除非另有说明，整个公开中提到的所有专利、专利申请、公开的申请和出版物、Genbank序列、数据库、网站和其他公开的材料整体援引加入本文。如果本文的术语有多种定义，则以本节中的定义为准。当提及URL或者其他这样的标识符或地址时，应当理解这类标识符可以改变，并且在网络上特定的信息可以交流，但是通过搜索网络可以找到等同的信息。对其引用证明这类信息的可得性和公开传播。如本文所用，“抗体”指免疫球蛋白和免疫球蛋白片段，无论天然的或者部分或全部合成(例如重组)产生的，包括其至少包含免疫球蛋白分子的部分可变区的保留全长免疫球蛋白的结合特异性能力的任何片段。因此，抗体包括具有与免疫球蛋白抗原结合结构域(抗体结合位点)同源或基本上同源的结合结构域的任何蛋白。抗体包括抗体片段，例如抗RSV抗体片段。如本文所用，因此术语抗体包括合成抗体、重组产生的抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人抗体、非人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、胞内抗体以及抗体片段，例如但不限于Fab片段、Fab'片段、F(ab’)2片段、Fv片段、ニ硫键连接的Fv(dSFv)、Fd片段、Fd’片段、单链Fv(scFv)、单链Fab (scFab)、双抗体、抗独特型(抗Id)抗体、或者上述任何抗体的抗原结合片段。本文所提供的抗体包括任何免疫球蛋白类型(例如，IgG、IgM、IgD、IgE、IgA 和 IgY)、任何类别(例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或亚类(例如，IgG2a和IgG2b)的成员。如本文所用，抗体的“抗体片段”或“抗原结合片段”指全长抗体的任何部分，其少于全长，但是至少包含结合抗原的所述抗体的部分可变区(例如ー个或多个CDR和/或ー个或多个抗体结合位点)，并且因此保留结合特异性以及所述全长抗体的至少部分特异性结合能力；抗体片段包括通过酶促处理全长抗体所产生的抗体衍生物，以及合成产生的衍生物，例如重组产生的衍生物。抗体包括抗体片段。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab’)2、单链Fv (scFv)、Fv、dsFv、双抗体、Fd和Fd’片段以及其他片段，包括修饰的片段(參见，例如，Methods in Molecular Biology, Vol 207 Recombinant Antibodiesfor Cancer Therapy Methods and Protocols (2003) ；Chapter I ；p 3-25, Kipriyanov)。 所述片段可以包括连接在一起的多条链，例如通过ニ硫键和/或通过肽接头。抗体片段ー般包含至少或约50个氨基酸，并且典型至少或约200个氨基酸。如本文所用，抗原结合片段指包含抗原结合部分的抗体片段，其与所述抗体片段所来源的抗体结合相同的抗原。如本文所用，抗原结合片段包括任何抗体片段，其在被插入抗体框架(例如通过置换相应区域)时获得免疫特异性地结合(即表现出至少或至少约IO7-IO8M-1的Ka)抗原的抗体。抗原结合片段包括抗体片段，例如Fab片段、Fab'片段、F(ab，)2片段、Fv片段、ニ硫键连接的Fv(dsFv)、Fd片段、Fd，片段、单链Fv(scFv)、单链Fab(scFab)，并且还包括其他片段，例如包含⑶R的片段，以及免疫特异性地结合抗原的多肽或在插入抗体框架时获得免疫特异性地结合抗原的抗体的多肽。如本文所用，“治疗性抗体”指为了治疗包括人在内的动物而施用的任何抗体或其抗原结合片段。这类抗体可以通过任何已知的用于制备多肽的方法来制备，并且因此包括但不限于重组产生的抗体、合成产生的抗体以及提取自细胞或组织和其他来源的治疗性抗体。在分离自任何来源或制备时，治疗性抗体可以是长度异质的或者翻译后修饰不同，例如糖基化(即糖含量)不同。治疗性抗体的异质性也可以不同，取决于所述治疗性抗体的来源。因此，提及治疗性抗体时指制备或分离的异质群体。当预期同质制品时，其会被这样陈述。适当地，本文中提及治疗性抗体是关于它们的単体、ニ聚体、或其他多聚体形式。如本文所用，“中和抗体”是结合病原体并干扰所述病原体在对象中感染细胞和/或引起疾病的能力的任何抗体或其抗原结合片段。中和抗体的实例为结合病毒、细菌和真菌病原体的中和抗体。典型地，本文所提供的中和抗体结合所述病原体的表面。在所述病原体为病毒的实例中，结合所述病毒的中和抗体典型地结合所述病毒表面上的蛋白。根据所述病毒的类别，所述表面蛋白可以是衣壳蛋白(例如无包膜病毒的衣壳蛋白)或病毒包膜蛋白(例如，包膜病毒的病毒包膜蛋白)。在一些实例中，所述蛋白为糖蛋白。例如所述病毒抑制病毒感染性的能力可以通过体外中和測定来測量，例如利用非洲绿猴肾细胞(Vero)宿主细胞的空斑减少測定。如本文所用，“包膜病毒”是具有外膜或包膜的动物病毒，所述外膜或包膜是围绕病毒衣壳的包含病毒蛋白的脂双层。病毒的包膜蛋白參与感染性颗粒的装配，并且还涉及病毒进入，其通过结合存在于宿主细胞上的受体并诱导病毒包膜与宿主细胞膜之间的融合。包膜病毒可以是球形或丝状(杆状)的。示例性包膜病毒包括但不限于疱疹病毒科(Herpesviridae)、痕病韋科(Poxviridae)、嗜肝 DNA 病韋科(Hepadnaviridae)、披膜病韋科(Togaviridae)、沙粒病韋科(Arenaviridae)、黄病韋科(Flaviviridae)、正粘病韋科(Orthomyxoviridae)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、弹状病韋科(Rhabdoviridae)、丝状病韋科(Filoviridae)、冠状病韋科(Coronaviridae)以及波纳病毒科(Bornaviridae)的成员。呼吸道合胞病毒(RSV)是副粘病毒科、肺病毒亚科(Pneumovirinae)的负义单链RNA有包膜病毒。如本文所用，“无包膜病毒”或“裸病毒”是缺少病毒包膜的病毒。为了感染 宿主细胞，无包膜病毒使用病毒衣壳的蛋白附着至靶细胞。示例性无包膜病毒包括但不限于腺病毒科(Adenoviridae)、乳头瘤病毒科(Papillomavirinae)、细小病毒科(Parvoviridae)、多瘤病韋科(Polyomavirinae)、圆环病韋科(Circoviridae)、呼肠孤病韋科(Reoviridae)、小 RNA 病韋科(Picornaviridae)、杯状病韋科(Caliciviridae)以及星状病韋科(Astroviridae)。如本文所用，病原体的“表面蛋白”是位于所述病原体的外表面上的任何蛋白。所述表面蛋白可以部分或全部暴露于外部环境(即外表面)。表面蛋白的实例为膜蛋白，例如位于病毒包膜或细菌外膜表面上的蛋白(例如，膜糖蛋白)。膜蛋白可以是跨膜蛋白(即穿越脂双层的蛋白)或非跨膜细胞表面相关蛋白(例如，锚定或共价连接至膜表面，如附着至所述病原体表面上的另ー蛋白)。其他示例性表面蛋白包括至少部分暴露于外部环境的无包膜包膜病毒的病毒衣壳蛋白。如本文所用，“单克隆抗体”指相同抗体的群体，表示单克隆抗体的群体中的每个単独的抗体分子与其他抗体分子相同。这种特性是与抗体的多克隆群体的特性相比，所述抗体的多克隆群体包含具有多种不同序列的抗体。单克隆抗体可以通过许多公知的方法来制备(Smith et al. (2004) J. Clin. Pathol. 57，912-917 ;和 Nelson et al. , J ClinPathol (2000)，53，111-117)。例如，单克隆抗体可以通过永生化B细胞来制备，例如通过与骨髄瘤细胞融合以产生杂交瘤细胞系或者通过用诸如EBV的病毒感染B细胞。重组技术还可以用来在体外通过用携带编码抗体的核苷酸的人工序列的质粒转化宿主细胞来从宿主细胞的克隆群体制备抗体。如本文所用，“常规抗体”指包含两条重链(其可以标示为H和H’ )和两条轻链(其可以标示为L和L’ )和两个抗体结合位点的抗体，其中每条重链可以是全长免疫球蛋白重链或保留抗原结合能力的其任何功能区(例如重链包括但不限于Vh链、Vh-ChI链和Vh-Ch1-Ch2-Ch3链)，并且每条轻链可以是全长轻链或任何功能区(例如轻链包括但不限于Vl链和链)。每条重链(H和H’ )与一条轻链(分别为L和L’)配对。如本文所用，全长抗体是具有两条全长重链(例如Vh-Ch1-Ch2_Ch3或Vh-Ch1-Ch2-Ch3-Ch4)和两条全长轻链(V^CJ和铰链区的抗体，例如通过抗体分泌B细胞天然产生的人抗体以及合成产生的具有相同结构域的抗体。如本文所用，Fv抗体片段由通过非共价相互作用连接的一个可变重链结构域(Vh)和ー个可变轻链结构域组成。
如本文所用，dsFv指 具有稳定Vh-I对的工程化分子间ニ硫键的Fv。如本文所用，Fd片段是包含抗体重链的可变结构域(Vh)和一个恒定区结构域(ChI)的抗体片段。 如本文所用，Fab片段是用木瓜蛋白酶消化全长免疫球蛋白所获得的片段，或者例如通过重组方法合成产生的具有相同结构的片段。Fab片段包含轻链(包含ん和CJ和另一条链，所述另一条链包含重链的可变结构域(Vh)和重链的ー个恒定区结构域(ChI)。如本文所用，F(ab’)2片段是在pH 4. 0_4. 5下用胃蛋白酶消化免疫球蛋白所导致的抗体片段，或者例如通过重组方法合成产生的具有相同结构的片段。F(ab’)2片段基本上包含两个Fab片段，其中每个重链部分包含额外的几个氨基酸，包括形成连接两个片段的ニ硫键的半胱氨酸。如本文所用，Fab’片段是包含F(ab’)2片段的一半(一条重链和一条轻链)的片段。如本文所用，Fd’片段是包含F(ab’)2片段的一个重链部分的抗体片段。如本文所用，Fv’片段是仅包含抗体分子的Vh和\结构域的片段。如本文所用，hsFv指抗体片段，其中正常存在于Fab片段中的恒定结构域已用异ニ聚卷曲螺旋结构域取代(參见，例如，Arndt et al. (2001) J Mol Biol. 7 :312 :221-228)。如本文所用，scFv片段指包含通过多肽接头以任何顺序共价连接的可变轻链(\)和可变重链(Vh)的抗体片段。接头长度使得两个可变结构域基本不干扰地桥接。示例性接头是分散有ー些Glu或Lys残基以增加溶解性的(Gly-Ser)n残基。如本文所用，术语“衍生物”指包含抗RSV抗体或其片段的氨基酸序列的多肽，其已例如通过引入氨基酸残基取代、缺失或添加，通过将任何类型的分子共价连接指所述多肽(例如，通过糖基化、こ酰化、聚こニ醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白酶切割、连接至细胞配体或其他蛋白)来修饰。抗RSV抗体或其抗原结合片段的衍生物可以利用本领域技术人员已知的技术通过化学修饰来修饰，包括但不限于特异性化学切割、こ酰化、こ酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成。而且，抗RSV抗体或其抗原结合片段的衍生物可以包含一个或多个非经典氨基酸。通常，多肽衍生物具有与本文所提供的抗RSV抗体或其抗原结合片段相似或相同的功能(例如中和RSV)。如本文所用，当指抗体片段来源于另ー抗体时，例如单克隆抗体，短语“来源干”指保留原抗体的结合特异性的抗体片段(例如，Fab > F(ab/ )、F(ab’)2、单链Fv (scFv)、Fv、dsFv、双抗体、Fd和Fd’片段)的工程化。这类片段可以通过本领域已知的各种方法获得，包括但不限于酶促切割、化学交联、重组方法或者它们的组合。通常，衍生的抗体片段享有相同或基本上相同的亲本抗体的重链可变区(Vh)和轻链可变区(\)，从而抗体片段与亲本抗体结合相同的表位。如本文所用，“亲本抗体”或“源抗体”指抗体片段(例如，Fab、F(ab' )、F(ab’)2、单链Fv (scFv)、Fv、dsFv、双抗体、Fd和Fd，片段)所来自的抗体。如本文所用，术语“表位”指抗体的互补位结合的抗原上的任何抗原决定簇。表位决定簇通常包含分子的化学活性表面分型，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。如本文所用，嵌合多肽指包含来自至少两个不同多肽的部分或者来自单个多肽的两个不连续部分的多肽。因此，嵌合多肽一般包括来自一个多肽的全部或部分的氨基酸残基序列以及来自另ー不同多肽的全部或部分的氨基酸序列。这两部分可以直接或间接连接，并且可以通过肽键、其他共价键或者在平衡条件和生理条件下(例如在等渗PH 7缓冲盐水中)有足够强度以维持该嵌合多肽的主要部分的完整性的其他非共价相互作用来连接。为了本文的目的，嵌合多肽包括含有连接至另ー多肽(例如，多聚化结构域、异源免疫球蛋白恒定结构域或框架区、或者诊断性或治疗性多肽)的全部或部分抗RSV抗体的嵌合多肽如本文所用，融合蛋白是工程化以包含对应于两种不同多肽的氨基酸序列的多肽，例如通过从载体表达所述融合蛋白来将这两种不同多肽连接在一起，所述载体包含沿载体长度互相靠近(例如相邻)的编码这两种多肽的两种核酸。通常，本文所提供的融合蛋白指这样的多肽，其包含具有抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列的多肽以及具有异源多肽或肽(例如，诊断性或治疗性多肽)的氨基酸序列的多肽或肽。相应地，融合蛋白指包含通过肽键直接或间接连接的来自两种或更多种蛋白或肽的两个或更多个部分的嵌合蛋白。这两个分子可以在构建体中相邻或者通过接头或间隔多肽来分开。间隔区可以编码改变所 述多肽的特性(例如溶解性或胞内运输)的多肽。如本文所用，“接头”或“间隔物”肽指连接两个多肽序列的短氨基酸序列(或者编码这样的氨基酸序列的核酸)。“肽接头”指连接两个多肽序列的短氨基酸序列。多肽接头的实例是将肽转导结构域连接至抗体的接头或者连接合成抗体片段(例如scFv片段)中的两条抗体链的接头。接头是公知的，并且任何已知的接头可以用于所提供的方法。多肽接头的实例是分散有ー些Glu或Lys残基以增加溶解性的(Gly-Ser) 氨基酸序列。其他示例性接头如本文所述；任何这些和其他已知的接头可以用于所提供的组合物和方法。如本文所用，“抗体铰链区”或“铰链区”指天然存在于Y、S和a抗体同种型的重链中ChI和Ch2结构域之间的与其他抗体结构域没有同源性的多肽区。这个区富含脯氨酸残基，并且赋予IgG、IgD和IgA抗体柔性，允许Fab部分的两个“臂”(每个包含ー个抗体结合位点)移动，在它们结合抗原时相对呈现各种角度。这种柔性允许Fab臂移动以便将抗体结合位点排列至与细胞表面上的表位或其他抗原相互作用。铰链区内的两个链间ニ硫键稳定两条重链之间的相互作用。在本文所提供的一些实施方案中，合成产生的抗体片段包含一个或多个铰链区，例如，以通过两条抗体链之间的相互作用提高稳定性。铰链区是ニ聚化结构域的实例。如本文所用，双抗体是ニ聚体scFv ;双抗体通常具有比scFv短的肽接头，并且优 选ニ聚化。如本文所用，人源化抗体指修饰以包括“人”氨基酸序列的抗体，从而施用于人而不引起免疫应答。人源化抗体通常包含来源于非人物种免疫球蛋白的互补决定区(CDR)以及主要来源于人免疫球蛋白的抗体分子的剰余部分。用于制备这类抗体的方法是已知的。例如,可以通过重组DNA技术改变编码单克隆抗体的DNA以编码其中非可变区的氨基酸组成是基于人抗体的抗体。鉴定这类区域的方法是已知的，包括设计用于鉴别免疫球蛋白的可变区和非可变区的计算机程序。如本文所用，独特型指免疫球蛋白分子可变区特异性的一组ー种或多种抗原决定簇。
如本文所用，抗独特型抗体指针对抗体或T细胞受体序列的抗原特异性部分的抗体。原理上抗独特型抗体抑制特异性免疫应答。如本文所用，Ig结构域是本领域技术人员这样识别的结构域，其通过称为免疫球蛋白(Ig)折叠的结构来鉴别，所述免疫球蛋白(Ig)折叠包含两个P折叠，每个包含通过环连接的氨基酸的反向平行的P链。Ig折叠中的两个P折叠通过疏水相互作用和保守的链内ニ硫键夹在一起。抗体链内的单个免疫球蛋白结构域可以基于功能来进ー步区别。例如，轻链包含一个可变区结构域和一个恒定区结构域(CJ，而重链包含ー个可变区结构域(Vh)以及3个或4个恒定区结构域(Ch)。每个\、CL, Vh和Ch结构域均为免疫球蛋白结构域的实例。如本文所用，可变结构域或可变区是抗体重链或轻链的特定Ig结构域，其包含在不同抗体之间变化的氨基酸序列。每条轻链和每条重链分别具有一个可变区结构域ん和VH。可变结构域提供抗原特异性，并且因此负责抗原识别。每个可变区包含CDR和框架区 (FR)，CDR是抗原结合位点结构域的部分。如本文所用，“抗原结合结构域”、“抗原结合位点(antigen-binding site)”、“抗原结合位点(antigen combining site) ”和“抗体结合位点”同义地用来指识别并与同种(cognate)抗原物理相互作用的抗体内的结构域。天然的常规全长抗体分子具有两个常规抗原结合位点，每个包含重链可变区部分和轻链可变区部分。常规抗原结合位点包含连接可变区结构域内反向平行的P链的环。抗原结合位点可以包含可变区结构域的其他部分。每个常规抗原结合位点包含3个来自重链的高变区和3个来自轻链的高变区。高变区也称为互补性决定区(CDR)。如本文所用，“高变区”、“HV”、“互补性决定区”和“⑶R”和“抗体⑶R”可交換地用来指一起形成抗体的抗原结合位点的每个可变区内的多个部分中的ー个。每个可变区结构域包含3个⑶R，命名为⑶R1XDR2和⑶R3。这3个⑶R沿线性氨基酸序列是不连续的，但是在折叠的多肽中接近。CDR位于连接可变结构域的P折叠的平行链的环内。如本文所述，本领域技术人员知道并且可以基于Kabat或Chothia编号鉴定⑶R(參见例如，Kabat,E. A. et al. (1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fiftn Edition,U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242,和Chothia, C. et al. (1987) J。Mol. Biol. 196 :901-917)。如本文所用，框架区(FR)是位于P折叠内的抗体可变区结构域内的结构域；在氨基酸序列方面，FR区比高变区相对更保守。如本文所用，“恒定区”结构域是抗体重链或轻链中的结构域，其包含比可变区结构域的氨基酸序列相对更保守的氨基酸序列。在常规全长抗体分子中，每条轻链具有单个轻链恒定区(CJ结构域，而每条重链包含一个或多个重链恒定区(Ch)结构域，包括Ch1、Ch2、Ch3和Ch4。全长IgA、IgD和IgG同种型包含ChU Ch2Ch3和铰链区，而IgE和IgM包含ChU Ch2Ch3和Ch4。ChI和Q结构域延伸抗体分子的Fab臂，因此有助干与抗原相互作用以及转动抗体臂。抗体恒定区可以服务于效应子功能，例如但不限于清除该抗体特异性结合的抗原、病原体和毒素，例如通过与各种细胞、生物分子和组织相互作用。如本文所用，抗体的功能区是包含该抗体的至少VH、\、Ch (例如ChI、Ch2或CH3)，Cl或铰链区结构域或者至少其功能区的部分抗体。
如本文所用，Vh结构域的功能区是保留完整Vh结构域的至少部分结合特异性(例如通过保留完整Vh结构域的ー个或多个CDR)的完整Vh结构域的至少部分，从而单独或者与另ー抗体结构域(例如\结构域)或其区域组合的Vh结构域的功能区结合抗原。示例性Vh结构域的功能区是包含Vh结构域的⑶R1、⑶R2和/或⑶R3的区域。如本文所用，ん结构域的功能区是保留完整\结构域的至少部分结合特异性(例如通过保留完整\结构域的ー个或多个CDR)的完整\结构域的至少一部分，从而所述\结构域的功能区単独地或者与另ー抗体结构域(例如Vh结构域)或其区域组合地结合抗原。示例性\结构域的功能区是包含\结构域的⑶R1、⑶R2和/或⑶R3的区域。如本文所用，关于抗体或其抗原结合片段的“特异性结合”或“免疫特异性地结合”在本文中可交換使用，并且指抗体或抗原结合片段通过抗体和抗原的抗体结合位点之间的非共价相互作用与同种抗原形成一个或多个非共价键的能力。所述抗原可以是分离的抗原或存在于病毒中。通常，免疫特异性地结合(或特异性结合)病毒抗原或病毒的抗体是以约或IxIO7IT1或IxIO8IT1或更大的亲和常数Ka (或者1x10_7M或1x10_8M或更低的解离常 数(Kd))结合所述病毒抗原(或者至所述病毒中的抗原或者至所述病毒)。亲和常数可以通过抗体反应的标准动力学方法来測定，例如，免疫測定、表面等离子共振(SPR) (Rich andMyszka (2000)Curr. Opin. Biotechnol 11 :54 ；Englebienne(1998)Analyst. 123 :1599)、等温滴定量热法(ITC)或本领域已知的其他动力学相互作用測定(參见，例如，Paul, ed.，Fundamental Immunology, 2nd ed. , Raven Press,New York, pages 332-336 (1989);还參见描述用于计算抗RSV抗体的结合亲和性的示例性SPR和ITC方法的美国专利第7，229，619号)。用于实时检测和监测结合速率的仪器和方法是已知的，并且可商购(參见，BiaCore2000,Biacore AB,Upsala,Sweden and GE Healthcare Life Sciences ；Malmqvist(2000)Biochem. Soc. Trans. 27 :335)。免疫特异性地结合病毒抗原(或病毒)的抗体可以相等或较低的结合亲和性结合其他肽、多肽或蛋白或者病毒。通常，本文所提供的免疫特异性地结合RSV F蛋白(或RSV病毒)的抗体或其抗原结合片段不与其他抗原交叉反应，或者以对这类抗原大幅(至少10-100倍)降低的亲和性交叉反应。例如，可以通过免疫測定(如放射免疫測定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA))、表面等离子共振或本领域技术人员已知的其他技术来鉴定免疫特异性地结合特定病毒抗原(例如RSV F蛋白)的抗体或抗原结合片段。免疫特异性地结合RSV F蛋白上的表位的抗体或其抗原结合片段通常是如利用实验技术(例如但不限于免疫測定、表面等离子共振或本领域技术人员已知的其他技木)所测定的，以比结合任何交叉反应表位更高的结合亲和性结合所述表位(存在于所述蛋白或病毒中)的抗体或其抗原结合片段。免疫特异性地结合分离的RSV蛋白(例如，重组产生的蛋白)，如RSV F蛋白，并不必须表示该抗体会表现出对该病毒相同的免疫特异性结合和/或中和。这类测量和特性是不同的。可以测定抗体或抗原结合片段对病毒或存在于该病毒中的抗原的亲和性。为了本文的目的，当描述亲和性或相关术语时，会鉴定靶，例如分离的蛋白或病毒。如本文所用，术语“表面等离子共振”指允许例如利用BiaCore系统(GEHealthcare Life Sciences)通过检测生物传感器矩阵内蛋白浓度的变化来分析实时相互作用的光学现象。如本文所用，“多价”抗体是包含两个或更多个抗原结合位点的抗体。多价抗体包括ニ价、三价、四价、五价、六价、七价或更高价的抗体。如本文所用，“单特异性”是包含两个或更多个抗原结合位点的抗体，其中每个抗原结合位点免疫特异性地结合相同表位。
如本文所用，“多特异性”抗体是包含两个或更多个抗原结合位点的抗体，其中至少两个抗原结合位点免疫特异性地结合不同表位。如本文所用，“双特异性”抗体是包含两个或更多个抗原结合位点并且可以免疫特异性地结合两个不同表位的多特异性抗体。“三特异性”抗体是包含三个或更多个抗原结合位点并且可以免疫特异性地结合三个不同表位的多特异性抗体，“四特异性”抗体是包含四个或更多个抗原结合位点并且可以免疫特异性地结合四个不同表位的多特异性抗体，等
坐寸o如本文所用，“异ニ价”抗体是包含两个抗原结合位点的双特异性抗体，其中每个抗原结合位点免疫特异性地结合不同表位。如本文所用，“同ニ价”抗体是包含两个抗原结合位点的单特异性抗体，其中每个抗原结合位点免疫特异性地结合相同表位。同ニ价抗体包括但不限于常规全长抗体，工程化或合成的全长抗体，两个相同抗原结合片段的任何聚合物，或者包含相同抗原结合结构域的两个抗原结合片段的任何聚合物。如本文所用，多聚化结构域指促进多肽分子与ー个或多个额外的多肽分子的稳定相互作用的氨基酸序列，每个额外的多肽分子包含互补多聚化结构域以与第一个结构域形成稳定的聚合物，所述互补多聚化结构域可以是相同或不同的多聚化结构域。通常，多肽直接或间接连接至多聚化结构域。示例性多聚化结构域包括免疫球蛋白序列或其部分、亮氨酸拉链、疏水区、亲水区以及相容的蛋白-蛋白相互作用结构域。例如，多聚化结构域可以是免疫球蛋白恒定区或结构域，例如来自IgG (包括IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亚型)、IgA、IgE、IgD和IgM以及它们的修饰形式的Fe结构域或其部分。如本文所用，ニ聚化结构域是促进两个多肽序列(例如但不限于抗体链)之间的相互作用的多聚化结构域。ニ聚化结构域包括但不限于包含促进形成两个多肽序列之间的ニ硫键的半胱氨酸残基的氨基酸序列，例如全部或部分全长抗体铰链区；或者一个或多个ニ聚化序列，其为已知促进多肽之间相互作用的氨基酸序列(例如，亮氨酸拉链、GCN4拉链)。如本文所用，“Fe”或“Fe区”或“Fe结构域”指包含抗体重链的恒定区但不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域的多肽。因此，Fe指IgA、IgD和IgE的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，或者IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域。任选地，Fe结构域可以包括全部或部分的这些结构域N端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fe可以包括J链。对于IgG的示例性Fe结构域，Fe包含免疫球蛋白结构域C Y 2和C Y 3，以及任选存在的C y I与C Y 2之间的铰链的全部或部分。Fe区的边界可以变化，但是通常包括至少部分铰链区。此外，Fe还包括任何等位或物种变体或者任何变异或修饰形式，例如改变结合FcR或改变Fe介导的效应子功能的任何变异或修饰形式。如本文所用，“Fe嵌合体”指嵌合多肽，其中一个或多个多肽直接或间接连接至Fe区或其衍生物。通常，Fe嵌合体组合免疫球蛋白的Fe区与另ー多肽，例如抗RSV抗体片段。修饰的Fe多肽的衍生物为本领域技术人员已知。
如本文所用，“蛋白转导结构域”或“PTD”是肽结构域，其可以缀合至蛋白(例如本文所提供的抗体)以促进所述蛋白附着至和/或摄入靶细胞。 如本文所用，“标签”或“表位标签”指通常添加至多肽(例如本文所提供的抗体)的N端或C端的氨基酸序列。标签融合至多肽可以促进多肽纯化和/或检测。通常，标签或标签多肽指这样的多肽，其具有足够的残基以提供被抗体识别的表位或者可以服务于检测或纯化，但是其足够短从而不干扰其连接的嵌合多肽的活性。标签多肽通常足够独特，因此特异性结合标签多肽的抗体基本上不与该标签多肽所连接的多肽中的表位交叉反应。合适的标签多肽一般具有至少5或6个氨基酸残基，并且通常约8-50个氨基酸残基，典型9-30个残基。标签可以连接至聚合物中的ー个或多个嵌合多肽，并且允许检测该聚合物或者从样品或混合物回收该聚合物。这类标签是公知的，并且可以很容易合成和设计。示例性标签多肽包括用于亲和纯化的标签多肽，并且包括His标签、流感血凝素(HA)标签多肽及其抗体 12CA5(Field et al. (1988)Mol. Cell. Biol. 8 :2159-2165) ;c_myc标签及其8F9、3C7、6E10、G4、B7 和 9E10 抗体(參见，例如，Evan et al. (1985)Molecular and CellularBiology 5 :3610-3616);以及单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体(Paborsky etal. (1990) Protein Engineering 3 :547-553 (1990)。用来检测表位标记抗体的抗体在本文中通常指ニ抗。如本文所用，“多肽”指共价连接的两个或更多个氨基酸。术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可交换使用。如本文所用，“肽”指长度为2至约或40个氨基酸的多肽。如本文所用，“氨基酸”是包含氨基和羧酸基团的有机化合物。多肽包含两个或更多个氨基酸。为了本文的目的，所提供的抗体中包含的氨基酸包括20种天然存在的氨基酸(表I)、非天然氨基酸以及氨基酸类似物(例如，其中a-碳具有侧链的氨基酸)。如本文所用，存在于本文出现的多肽的各种氨基酸序列中的氨基酸根据它们公知的3-字母或I-字母縮写来显示(參见表I)。存在于各种核酸分子和片段中的核酸分子用本领域常规使用的标准单字母命名来命名。如本文所用，“氨基酸残基”指多肽在其肽键处化学消化(水解)而形成的氨基酸。本文所述的氨基酸残基一般为“L”异构形式。“D”异构形式的残基可以取代任何L-氨基酸残基，只要该多肽保留期望的功能特性。NH2指存在于多肽的氨基端的游离氨基。C00H指存在于多肽的羧基端的游离羧基。与J. Biol. Chem.，243 :3557-59(1968)中所述的标准多肽命名一致，并且采用37C.F.R. § § 1.821-1. 822，氨基酸残基的缩写如表I所示表I-对应表
权利要求
1.ー种抗体或其抗原结合片段，其包含 Vh CDR1，其包含SEQ ID NO :2或SEQ ID NO : 1627所示的氨基酸残基序列或者与SEQID NO :2 或 SEQ ID NO :1627 具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96 %、97 %、98 %、99 %或更多序列相同性的氨基酸序列； Vh CDR2，其包含SEQ ID NO :3所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID NO :3具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列； Vh CDR3，其包含SEQ ID NO :4所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID NO :4具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列； Vl CDR1，其包含SEQ ID NO :6所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID NO :6具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列； Vl CDR2，其包含SEQ ID NO :7所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID NO :7具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列；和 Vl CDR3，其包含SEQ ID NO :8所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID NO :8具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列， 其中所述抗体或抗原结合片段免疫特异性地结合呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白和/或中和RSV。
2.ー种抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性地与权利要求I的抗体结合RSV F蛋白上或RSV病毒粒子上的相同的表位。
3.权利要求I或2的抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性地与包含SEQID NO :1所示重链和/或SEQ ID NO :5所示轻链的抗体结合RSV F蛋白上或RSV病毒上的相同的表位。
4.权利要求1-3中任ー项的抗体或抗原结合片段，其包含SEQID NO :1所示的重链和SEQ ID NO 5所示的轻链。
5.权利要求1-4中任ー项的抗体或抗原结合片段，其包含Vh结构域，其中所述Vh结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO 1的氨基酸1-125所示。
6.权利要求1-5中任ー项的抗体或抗原结合片段，其包含重链，其中所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。
7.权利要求1-6中任ー项的抗体或抗原结合片段，其包含ん结构域，其中所述ん结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO 5的氨基酸1-107所示。
8.权利要求1-7中任ー项的抗体或抗原结合片段，其包含轻链，其中所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO 5所示。
9.权利要求I的抗体或抗原结合片段，其为命名为58c5的Fab或包含命名为58c5的Fab0
10.权利要求1-9中任ー项的抗体或抗原结合片段，其为抗原结合片段。
11.权利要求10的抗原结合片段，其为Fab。
12.—种抗体或其抗原结合片段，其包含 Vh CDR1，其包含SEQ ID N0:10或SEQ ID NO : 1628所示的氨基酸残基序列或者与SEQID N0:10 或 SEQ ID NO :1628 具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96 %、97 %、98 %、99 %或更多序列相同性的氨基酸序列； Vh⑶R2，其包含SEQ ID NO: 11所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID NO:ll具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列； Vh CDR3，其包含SEQ ID NO : 12所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID NO:12具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列； Vl⑶R1，其包含SEQ ID NO: 14所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID N0:14具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列； Vl CDR2，其包含SEQ ID NO : 15所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID NO:15具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列；和 Vl CDR3，其包含SEQ ID NO : 16所示的氨基酸残基序列或者与SEQ ID NO:16具有至少或至少约 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的氨基酸序列， 其中所述抗体、其抗原结合片段或其抗体片段免疫特异性地结合呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白和/或中和RSV。
13.ー种抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性地与权利要求12所述抗体结合RSV F蛋白上或RSV病毒粒子上的相同的表位。
14.权利要求12或13的抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性地与包含SEQID NO 9所示重链和/或SEQ ID NO :13所示轻链的抗体结合RSVF蛋白上或RSV病毒上的相同的表位。
15.权利要求12-14中任ー项的抗体或其抗原结合片段，其包含SEQIDNO 9所示的重链和SEQ ID NO 13所示的轻链。
16.权利要求12-15中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其包含Vh结构域，其中所述Vh结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO 9的氨基酸1-125所示。
17.权利要求12-16中任ー项的抗体或抗原结合片段，其包含重链，其中所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO 9所示。
18.权利要求12-17中任ー项的抗体或抗原结合片段，其包含\结构域，其中所述\结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO 13的氨基酸1-107所示。
19.权利要求12-18中任ー项的抗体或抗原结合片段，其包含轻链，其中所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO 13所示。
20.权利要求12的抗体或抗原结合片段，其为命名为sc5的Fab或包含命名为sc5的Fab0
21.权利要求1-20中任ー项的抗体或抗原结合片段，其中所述分离的抗体或抗原结合片段在体外空斑减少测定中具有少于2nM或少于约2nM的RSV中和的EC5tl,或者具有至少或至少约IO8M.1的对分离的RSV F蛋白或对RSV病毒的亲和性。
22.权利要求1-20中任ー项的抗体或抗原结合片段，其在体外空斑減少測定中具有少于或约2nM至少于或约0. 005nM ;少于或约InM至少于或约0. 005nM ;少于或约0. 5nM至少于或约0. 005nM ;少于或约InM至少于或约0. OlnM ;少于或约InM至少于或约0. 05nM ;或者少于或约0. 5nM至少于或约0. 05nM的RSV中和的EC5tl。
23.权利要求1-22中任ー项的抗体或抗原结合片段，其中和RSV。
24.权利要求1-23中任ー项的抗体或抗原结合片段， 其中和RSVA亚型和B亚型。
25.权利要求1-24中任ー项的抗体或抗原结合片段，其为人抗体或其抗原结合片段，或者为人源化抗体或其抗原结合片段，或者为嵌合抗体。
26.权利要求1-25中任ー项的抗体或抗原结合片段，其为抗原结合片段，所述抗原结 合片段为单链 Fv(scFv)、Fab、Fab'、F(ab’ ) 2、Fv、dsFv、双抗体、Fd 或 Fd’ 片段。
27.权利要求1-26中任ー项的抗体或抗原结合片段，其直接或通过接头连接至多聚化结构域，或者连接至多肽接头。
28.权利要求27的抗体或抗原结合片段，其为scFV。
29.权利要求1-28中任ー项的抗体或抗原结合片段，其缀合至聚こニ醇(PEG)或治疗剂或诊断剂。
30.权利要求29的抗体或抗原结合片段，其缀合至选自酶、荧光化合物、电子转移剂和放射性标记的诊断剂。
31.权利要求1-30中任ー项的抗体或抗原结合片段，其进ー步包含蛋白转导结构域。
32.权利要求31的抗体或抗原结合片段，其中所述蛋白转导结构域包含SEQID NO1529-1600之一所不的氨基酸序列。
33.权利要求1-32中任ー项的抗体或抗原结合片段，其为分离的。
34.一种多价抗体，其包含 第一抗原结合部分，其包含权利要求27的抗体或其抗原结合片段，其中所述包含抗体或其抗原结合片段的第一抗原结合部分缀合至多聚化结构域；和 第二抗原结合部分，其包含缀合至第二多聚化结构域的抗病毒抗体的抗原结合片段，其中 所述第一多聚化结构域与所述第二多聚化结构域互补或相同，从而所述第一抗原结合部分与第二抗原结合部分形成多价抗体；和 所述第一和第二抗原结合部分相同或不同。
35.权利要求34的多价抗体，其中所述第二抗原结合部分包含抗RSV抗体或其抗原结合片段。
36.权利要求34或35的多价抗体，其中所述第二抗原结合部分免疫特异性地结合RSVF蛋白。
37.权利要求34-36中任ー项的多价抗体，其中所述抗RSV抗体选自帕利珠单抗、莫他珠单抗、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L1、FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(I)、6H8、L1-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(1)、A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvll、rsvl3、rsvl9、rsv21、rsv22、rsv23、RF-1、RF-2以及它们的抗原结合片段，或者是包含58c或sc5的抗体或是它们的抗原结合片段。
38.权利要求34-36中任ー项的多价抗体，其为异ニ价或同ニ价的。
39.权利要求34-36中任ー项的多价抗体，其为针对RSV上的至少两种不同表位或者针对至少两种不同病原体的多特异性抗体。
40.权利要求39的多价抗体，其中所述第二抗原结合部分免疫特异性地结合副流感病毒(PIV)抗原或人偏肺病毒(hMPV)抗原。
41.权利要求34-40中任ー项的多价抗体，其中所述多聚化结构域选自免疫球蛋白恒定区(Fe)、亮氨酸拉链、互补疏水区、互补亲水区和相容的蛋白-蛋白相互作用结构域。
42.权利要求34-41中任ー项的多价抗体，其中所述多聚化结构域为Fe结构域或其变体。
43.权利要求42的多价抗体，其中所述Fe结构域为IgG、IgM或IgEFc结构域。
44.ー种组合，其包含 权利要求1-33中任ー项的分离的抗体或抗原结合片段或者权利要求34-43中任ー项的多价抗体；和 抗病毒剂和/或与所述第一抗体不同的ー种或多种额外的抗病毒抗体。
45.权利要求44的组合，其中所述抗病毒剂为利巴韦林。
46.权利要求44或45的组合，其中 所述ー种或多种额外的抗病毒抗体选自帕利珠单抗、莫他珠单抗、4 、？12デ2、？12デ4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L1、FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(I)、6H8、Ll-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(l)、A4B4LlFR_S28R、A4B4_F52S、rsv6、rsvll> rsvl3> rsvl9> rsv21> rsv22> rsv23> RF-1> RF-2 以及它们的抗原结合片段；和 / 或 所述ー种或多种额外的抗病毒抗体选自免疫特异性地结合副流感病毒(PIV)抗原或人偏肺病毒(hMPV)抗原的抗体或其抗原结合片段。
47.权利要求46的组合，其中所述抗原为人PIVI型、人PIV 2型、人PIV 3型和/或人PIV 4型的抗原。
48.权利要求46或47的组合，其中所述PIV抗原选自PIV核衣壳磷蛋白、PIV融合(F)蛋白、PIV磷蛋白、PIV大(L)蛋白、PIV基质(M)蛋白、PIV血凝素-神经氨酸酶(HN)糖蛋白、PIV RNA依赖性RNA聚合酶、PIV Yl蛋白、PIV D蛋白、PIV C蛋白以及它们的等位变体。
49.权利要求46的组合，其中所述抗原为hMPVA型或hMPV B型的抗原。
50.权利要求49的组合，其中所述抗原为hMPVAl亚型、hMPV A2亚型、hMPV BI亚型或hMPV B2亚型的抗原。
51.权利要求46、49和50中任ー项的组合，其中所述hMPV抗原选自hMPV核蛋白、hMPV磷蛋白、hMPV基质蛋白、hMPV小疏水蛋白、hMPV RNA依赖性RNA聚合酶、hMPV F蛋白、hMPVG蛋白以及它们的等位变体。
52.ー种药物组合物，其包含 权利要求1-33中任ー项的抗体或抗原结合片段，或者权利要求34-43中任ー项的多价抗体，或者权利要求44-51中任一项的组合；以及 药学可接受的载体或赋形剂。
53.权利要求52的药物组合物，其进ー步包含与所述第一抗体不同的一种或多种额外的抗病毒抗体。
54.权利要求53的药物组合物，其中所述ー种或多种额外的抗病毒抗体为抗RSV抗体或其抗原结合片段。
55.权利要求53或54的药物组合物，其中所述ー种或多种额外的抗病毒抗体是选自权利要求1-33中任一项的抗RSV抗体或抗原结合片段的抗RSV抗体。
56.权利要求53-55中任一项的药物组合物，其中 所述ー种或多种额外的抗病毒抗体选自帕利珠单抗、莫他珠单抗、4 、？12デ2、？12デ4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L1、FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(I)、6H8、Ll-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(l)、A4B4LlFR_S28R、A4B4_F52S、rsv6、rsvll> rsvl3> rsvl9> rsv21> rsv22> rsv23> RF-1> RF-2 以及它们的抗原结合片段；和 / 或 所述ー种或多种额外的抗病毒抗体选自免疫特异性地结合副流感病毒(PIV)抗原或人偏肺病毒(hMPV)抗原的抗体或抗原结合片段。
57.权利要求56的药物组合物，其中所述抗原为人PIVI型、人PIV2型、人PIV 3型和/或人PIV 4型的抗原。
58.权利要求56或57的药物组合物，其中所述PIV抗原选自PIV核衣壳磷蛋白、PIV融合(F)蛋白、PIV磷蛋白、PIV大(L)蛋白、PIV基质(M)蛋白、PIV血凝素-神经氨酸酶(HN)糖蛋白、PIV RNA依赖性RNA聚合酶、PIV Yl蛋白、PIV D蛋白、PIV C蛋白以及它们的等位变体。
59.权利要求56的药物组合物，其中所述抗原为hMPVA型或hMPVB型的抗原。
60.权利要求59的药物组合物，其中所述抗原为hMPVAl亚型、hMPVA2亚型、hMPV BI亚型或hMPV B2亚型的抗原。
61.权利要求56、59和60中任一项的药物组合物，其中所述hMPV抗原选自hMPV核蛋白、hMPV磷蛋白、hMPV基质蛋白、hMPV小疏水蛋白、hMPV RNA依赖性RNA聚合酶、hMPV F蛋白、hMPV G蛋白以及它们的等位变体。
62.权利要求52-61中任一项的药物组合物，其中所述ー种或多种额外的抗病毒抗体为单链 Fv(scFv)、Fab、Fab'、F(ab’ ) 2、Fv、dsFv、双抗体、Fd 或 Fd’ 片段。
63.权利要求52-62中任一项的药物组合物，其配制为凝胶剂、软膏剂、液体制剂、混悬齐U、气雾剂、片剂、丸剂或散剤。
64.权利要求52-63中任一项的药物组合物,其配制用于肺部、鼻内或肠胃外施用。
65.权利要求52-64中任一项的药物组合物，其配制用于单剂量施用。
66.权利要求52-65中任一项的药物组合物，其为缓释制剂。
67.权利要求64的药物组合物，其配制为鼻腔喷雾剂。
68.一种治疗或预防对象中的病毒感染的方法，其包括给所述对象施用治疗或预防有效量的权利要求52-67中任一项的药物组合物。
69.权利要求68的方法，其中所述病毒感染为RSV感染。
70.权利要求68的方法，其中所述感染为上呼吸道感染。
71.权利要求68-70中任ー项的方法，其中所述对象为哺乳动物。
72.权利要求71的方法，其中哺乳动物为人。
73.权利要求72的方法，其中所述人类对象为人类婴儿，早产或有为RSV感染住院的风险的人类婴儿，老年人，患有囊性纤维化、支气管肺发育不良、先天性心脏病、先天性免疫缺陷、获得性免疫缺陷、白血病或非何杰金淋巴瘤的人类对象，或者具有器官或组织移植物或者输血的人类对象。
74.权利要求73的方法，其中所述移植物为骨髄移植物或肝移植物。
75.权利要求68-74中任ー项的方法，其中所述药物组合物体表、肠胃外、局部或全身施用。
76.权利要求68-74中任ー项的方法，其中所述药物组合物鼻内、肌肉内、皮内、腹腔内、静脉内、皮下、ロ服施用或通过肺部施用。
77.权利要求68-76中任ー项的方法，其中在RSV季节期间施用所述组合物多次或者I次、2次、3次、4次或5次。
78.权利要求68-77中任ー项的方法,其进ー步包括施用ー种或多种抗病毒剂。
79.权利要求78的方法，其中抗病毒剂为利巴韦林。
80.权利要求78或79的方法，其中所述药物组合物和所述抗病毒剂配制为单ー组合物或分离的组合物。
81.权利要求78-80中任ー项的方法，其中所述药物组合物和所述抗病毒剂顺序、同时或间歇施用。
82.权利要求68-81中任ー项的方法,其进ー步包括施用激素治疗、免疫治疗或抗炎齐U。
83.权利要求68-82中任ー项的方法，其进ー步包括施用ー种或多种额外的抗病毒抗体或其抗原结合片段。
84.权利要求83的方法，其中所述ー种或多种额外的抗病毒抗体选自抗RSV抗体或其抗原结合片段。
85.权利要求84的方法，其中所述ー种或多种额外的抗RSV抗体选自帕利珠单抗、莫他珠单抗、AFFF、P12f2、P12f4、Plld4、Ale9、A12a6、A13c4、A17d4、A4B4、A8c7、1X-493L1、FR H3-3F4、M3H9、Y10H6、DG、AFFF(I)、6H8、L1-7E5、L2-15B10、A13all、Alh5、A4B4(1)、A4B4L1FR-S28R、A4B4-F52S、rsv6、rsvll、rsvl3、rsvl9、rsv21、rsv22、rsv23、RF-1、RF-2以及它们的抗原结合片段。
86.权利要求83的方法，其中所述ー种或多种额外的抗病毒抗体选自免疫特异性地结合副流感病毒(PIV)抗原或人偏肺病毒(hMPV)抗原的抗体或其抗原结合片段。
87.权利要求86的方法，其中所述抗原为人PIVI型、人PIV 2型、人PIV 3型和/或人PIV 4型的抗原。
88.权利要求86或87的方法，其中所述PIV抗原选自PIV核衣壳磷蛋白、PIV融合(F)蛋白、PIV磷蛋白、PIV大(L)蛋白、PIV基质(M)蛋白、PIV血凝素-神经氨酸酶(HN)糖蛋白、PIV RNA依赖性RNA聚合酶、PIV Yl蛋白、PIV D蛋白、PIV C蛋白以及它们的等位变体。
89.权利要求86的方法，其中所述抗原为hMPVA型或hMPV B型的抗原。
90.权利要求89的方法，其中所述抗原为hMPVAl亚型、hMPV A2亚型、hMPV BI亚型或hMPV B2亚型的抗原。
91.权利要求86、89和90中任ー项的方法，其中所述hMPV抗原选自hMPV核蛋白、hMPV磷蛋白、hMPV基质蛋白、hMPV小疏水蛋白、hMPV RNA依赖性RNA聚合酶、hMPV F蛋白、hMPVG蛋白以及它们的等位变体。
92.权利要求83-91中任ー项的方法，其中所述ー种或多种额外的抗病毒抗体为单链Fv(scFv)、Fab、Fab'、F(ab’ ) 2、Fv、dsFv、双抗体、Fd 或 Fd’ 片段。
93.权利要求83-85中任ー项的方法，其中所述药物组合物以及所述ー种或多种额外的抗病毒抗体配制为单ー组合物或分离的组合物。
94.权利要求83或84的方法，其中所述药物组合物以及所述ー种或多种额外的抗RSV抗体顺序、同时或间歇施用。
95.一种检测RSV感染的方法，其包括 (a)利用权利要求1-33中任ー项的抗体或抗原结合片段測定流体、细胞或组织样品中的RSV抗原水平； (b)将所測定的RSV抗原水平与对照水平比较，由此与RSV抗原的对照水平相比，所测定的RSV抗原水平的提高代表RSV感染。
96.权利要求95的方法，其中所述流体、细胞或组织样品为血液、尿、唾液、肺痰、灌洗或淋巴样品。
97.权利要求95或96的方法，其中所述流体、细胞或组织样品获得自人类对象。
98.ー种核酸分子，其编码权利要求1-33中任ー项的抗体或抗原结合片段。
99.ー种载体，其包含一或多个编码权利要求1-33中任ー项的抗体或抗原结合片段的核酸分子。
100.—种分离的细胞，其包含权利要求1-33中任ー项的抗体或抗原结合片段、权利要求98的核酸分子或者权利要求99的载体。
101.权利要求100的细胞，其中所述细胞为原核细胞或真核细胞。
102.一种产生抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在表达所编码的抗体或抗原结合片段的条件下培养权利要求100或101的细胞。
103.ー种抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性地与58c5结合RSV F蛋白上或RSV病毒上的相同的表位。
104.ー种抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性与sc5结合RSV F蛋白上或RSV病毒上的相同的表位。
105.权利要求1-33中任ー项的抗体或抗原结合片段或者权利要求34-43中任ー项的多价抗体在配制用于治疗或预防病毒感染的药物中的用途。
106.用于治疗或预防病毒感染的药物组合物，其包含权利要求1-33中任ー项的抗体或抗原结合片段或者权利要求34-43中任ー项的多价抗体。
全文摘要
本发明提供免疫特异性地结合呼吸道合胞病毒(RSV)的融合(F)蛋白的抗体或其抗原结合片段。还提供用于预防、治疗和诊断病毒感染和/或治疗RSV介导的疾病的一种或多种症状的方法。还提供产生免疫特异性地结合RSV F蛋白的抗体的方法。
文档编号A61K38/00GK102656189SQ201080046058
公开日2012年9月5日 申请日期2010年8月13日 优先权日2009年8月13日
发明者E·基奥, G·帕斯夸尔, J·瓦迪亚, R·A·威廉森 申请人:克鲁塞尔荷兰公司