用于治疗呼吸道合胞病毒感染的富-鸟苷寡核苷酸(gro)组合物、方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明是呼吸道合胞病毒（RSV)感染治疗领域，特别是用于治疗RSV感染的方法， 用途和富一鸟苷寡核苷酸（GRO)组合物。 相关申请交叉参考
[0002] 本申请要求2012年2月16日申请的标题是〃用于治疗呼吸道合胞病毒感染的 富一鸟苷寡核苷酸（GRO)组合物、方法和用途〃的美国临时专利申请登记号No. 61/599, 653 的利益。
【背景技术】
[0003] 人呼吸道合胞病毒（RSV)是副黏病毒家族有包膜的、单链、负极性RNA肺病毒。它 是全世界呼吸道感染的常见原因，包括细支气管炎和其它严重疾病（参见，例如，Collins 和Graham)，2008 等，2008)。RSV感染的控制和预防是全球健康优先；几乎所有的孩子 在生命的头两年期间被RSV感染（参见，例如，Domachowske和Rosenberg), 1999)。只在美 国，每年有超过两百万RSV-感染婴儿需要内科护理（Hall等，2009)。因为RSV而住院的婴 儿还有发展周期性呼吸困难和哮喘的风险（Escobar等，2010)。
[0004] 极性纤毛呼吸道上皮细胞是体内RSV感染的主要靶物（参见，例如，Johnson 等，2007)。纤毛呼吸道上皮细胞RSV感染体外发生在顶（腔）方位（参见，例如，Zhang 等，2002)。病毒与质膜通过受体介导结合的接触引发宿主细胞中的病毒复制（参见， 例如，Marsh和Helenius, 2006)。有人提出候选的RSV受体（参见，例如，Krusat和 Streckert)，1997 ;Behera 等，2001 ;和，Malhotra 等，2003)。RSV 实验室适合毒株通过结 合细胞表面黏多糖（GAGs)而显示出提高的感染效率；但是缺乏GAGs的细胞允许感染（参 见，例如，Feldman等，2000)并且RSV的野生型群落分离物对GAGs在细胞感染中的作用尚 不得知（参见，例如，Hallak等，2007)。
[0005] 治疗的选择是有限的，接种疫苗有很多障碍，使用抗-RSV抗体（例如，帕利珠单 抗（palivizumab))的被动预防性治疗昂贵，不是100%有效，并且限于那些有严重感染高 风险的那些（Wu等，2008)。
[0006] RSV包膜包含三种蛋白质：小疏水性蛋白（SH)，糖蛋白（G)和融合蛋白（F) (Collins和Graham, 2008)。SH蛋白不需要病毒结合（参见，例如，Techaarpornkul 等，2001)。表征RSV亚型A和B的异质性RSV G，以高亲合性与细胞表面黏多糖（GAGs)结 合（参见，例如，Hallak等，2007)，但不是感染的绝对必要条件，因为缺乏G糖蛋白（RSV AG)的突变体RSV保留感染性（参见，例如，Techaarpornkul等，2002)。此外缺乏细胞表 面GAGs的或者有化学修饰GAGs的细胞允许RSV，虽然与表达充裕GAGs的细胞相比水平较 低（参见，例如，Techaarpornkul 等，2002 ;和 Hallak 等，2000) 〇
[0007] 核仁蛋白是转录调节、细胞增殖和生长基本方面中涉及的普遍存在的核仁磷 蛋白（参见，例如，Tuteja等，1998;和Chen等，2008)。核仁蛋白还被描述为细胞核、 细胞质和细胞表面之间的穿梭分子。已经证明核仁蛋白可以作为各种各样胞外配体的 受体起作用，例如细胞增殖、分化、附着、有丝分裂和血管发生中包含的那些。Nisole等 (1999)，US20040002457A1,和US20020076693A1公开了核仁蛋白在HIV病毒与宿主细胞 的结合中涉及。核仁蛋白肽，核苷酸抗体，和核仁蛋白RNAi都被证明用于抑制RSV感染 (W0/2011/123945)〇
【发明内容】
[0008] 本发明部分基础在于发现核仁蛋白在RSV感染中起作用，向细胞施用富一鸟苷寡 核苷酸（GRO)AS 1411-5'-GGTGGTGGTGG TTGTGGTGGTGGTGG-3'（SEQ ID No: 1)(也已知为 GR026B和AGR0100)在治疗RSV感染中可以是有用的。这样的治疗可以引起RSV蛋白质F 和细胞内源核仁蛋白之间相互作用的干扰。
[0009] -方面，提供治疗细胞呼吸道合胞病毒（RSV)感染的方法，该方法包括对细胞施 用 AS 1411。
[0010] 另一方面，提供了具有SEQ ID NO: 1序列的AS 1411治疗RSV感染的用途。
[0011] 另一方面，提供了具有SEQ ID NO: 1序列的AS 1411在制备用于治疗RSV感染的 药物中的用途。
[0012] 再一方面，提供AS 1411用于治疗细胞呼吸道合胞病毒（RSV)感染。
[0013] 再一方面，提供商业包，包括：（a)AS 1411 ;和（b)治疗RSV的使用说明书。
[0014] 所述细胞可以是人细胞。人细胞可以是上皮细胞。人细胞可以是黏膜细胞。人细 胞可以是呼吸道细胞。人细胞可以是纤毛呼吸道上皮细胞。细胞可以是有RSV感染或者有 发生RSV感染风险的患者的。AS 1411分子可以静脉内给药。AS 1411分子可以对患者的 黏膜局部给药。AS 1411分子可以在给药之前与脂质粒混合。在给药之前AS 1411分子可 以在脂质体中制成胶囊。AS 1411分子还可以通过鼻喷雾或肌肉内或静脉内给药。
[0015] 治疗可以是人受试者。治疗可以是牛受试者。治疗可以是绵羊受试者。治疗可以 是马受试者。治疗可以是猪受试者。治疗可以是鼠受试者。
[0016] RSV可以是RSV的人毒株。RSV可以是RSV的牛毒株。RSV可以是RSV的绵羊毒 株。RSV可以是RSV的马毒株。RSV可以是RSV的猪毒株。
【附图说明】
[0017] 图la:显示宽剂量范围的AS 1411和CRO(对照）在RSV-感染HEp-2细胞中的 荧光信号图，其中在暴露给RSV之前24小时用寡聚物（预防性试验）预处理细胞（Μ0Ι = 1. 0) 〇
[0018] 图Ib :显示宽剂量范围的AS 1411和CRO(对照）在RSV-感染HEp-2细胞中的荧 光信号图，其中在加入寡聚物（治疗性试验）之前24小时将细胞暴露给RSV(Μ0Ι = 0. 1)。
[0019] 图2 :显示用17. 5 μΜ AS 1411 (A图）和17. 5 μΜ CRO对照物（B图）处理的治疗 性试验得到的HEp-2细胞的代表性荧光显微图，其中荧光信号的减弱是由于感染细胞总数 的减少（而不是每个细胞感染的降低的量）。
[0020] 图3 :显示MDCK细胞RSV感染之后增加浓度的AS 1411 (左栏）或CRO (右栏）的 效果图（η = 6;双尾配对t检验（two-tailed paired t test))，其中用AS 1411/CR0处理 之前24小时将细胞暴露给RSV (MOI = 0.1 )，向病毒感染的MDCK细胞培养物加入24小时之 后，17. 5 μΜ和70 μΜ的AS 1411足以分别达到87%和97% RSV荧光降低（Ρ〈0· 0001)。
[0021] 图4 :显示治疗性试验中MDCK细胞RSV感染之后增加浓度的AS 1411或CRO的效 果，其中用AS 1411/CR0处理之前24小时将MDCK细胞暴露给RSV(M0I = 0. 1)，并且用寡聚 物处理后24小时进行MTS分析来评价细胞毒性。
[0022] 图5 :显示用17. 5 μ M AS 1411 (A图）和17. 5 μ M CRO对照物（B图）处理的MDCK 的治疗性试验得到的代表性细胞培养孔的荧光显微图，其中使用AS 1411处理下，荧光信 号的减弱是由于感染细胞总数的减少。
[0023] 图6 :显示的是对第0天接受5x IO6PFU RSV并