专利名称：含白香草木犀紫檀酚a的降香有效成分及制备方法与用途的制作方法
技术领域：
本发明属中药领域，涉及一种治疗心血管疾病的中药提取物，具体地说涉及从降 香中提取的有效组分，制剂及其制备方法与用途，该有效组分主要含有白香草木犀紫檀酚 A0
背景技术：
心血管疾病是危害人类健康的第一杀手，近年来，随着我国人口老年化以及人们 工作、生活、饮食结构及环境等的变化，冠心病等心脑血管疾病的发生率也逐年增多，严重 威胁着人民的身心健康。天然产物中许多活性物质具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已 开发成治疗冠心病和心绞痛的新药。因而从天然产物中寻找具有抗心肌缺血、缺氧生理活 性的有效物质，是发现、开发新药的有效途径之一。我国药用生物资源十分丰富，其生理活 性物质是研究和发现新药先导化学物，开发新药的天然宝库。目前，我国从天然产物中提取 活性物质，用于开发成治疗冠心病、安全性好、毒性低的新药还很少，从天然产物中提取活 性物质，开发成具有抗心肌缺血，用于治疗冠心病和心绞痛的新药，具有重要应用价值和广 阔发展前景。降香为豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T. Chen树干和根的干燥心材。 辛，温，归肝、脾经。具有行气活血，止痛，止血的功效，含多种黄酮类成分，属异黄酮的有 刺芒柄花素，鲍迪木醌，3’-甲氧基大豆素；属黄烷酮的有甘草甙元；属查耳酮的有异甘 草甙元，2’ -0-甲基异甘草甙元；属异黄烷的有(3R)-驴食草酚，5’ -甲氧基驴食草酚，3’， 8_ 二羟基驴食草酚，消旋的微凸剑叶莎酚，右旋的剑叶莎属异黄烷，消旋的异剑叶莎属异黄 烷，降香异黄烯；属异黄烷酮的有(3R)-2'，3’ -7-三羟基-4’ -甲氧基异黄烷酮。还含双异 黄烷类成分(3R, 4R)-反式-2’，3’，7-三羟基-4’ -申氧基_4 [ (3R) -2’，7- 二羟基-4’ -甲 氧基异黄烷_5’ -基]异黄烷，(3R，4R)-反式2’，7- 二羟基-4’ -甲氧基_4_ [ (3R) -2’，7- 二 羟基-4’-甲氧基异黄烷-5’-基]异黄烷，(3R，4R)_反式-3’下，7-二羟基-2’，4’ - 二甲 氧基-4 [ (3R) 2’，7- 二羟基-4’ -甲氧基异黄烷-5’ -基]异黄烷，7-羟基-4’ -甲氧基_2’， 5’ - 二氧-4- [ (3R) -2，，7- 二羟基-4’ -甲氧基异黄烷_5’ -基〕异黄烷，(3R，4R)-反式-3’， 7- 二羟基-2’，4’ - 二甲氧基-4-[ (2S) -4’，5，7-三羟基黄烷酮_6_基]异黄烷，2，3- 二去 氧-2’，7- 二羟基-4’ -甲氧基-3- [2’，7- 二羟基-4’ -甲氧基异黄烷_6_基]黄烷，2，3- 二 去氧-2’，7- 二羟基-4’ -甲氧基-3-[2’，7- 二羟基-4’ -甲氧基异黄烷_5’基]黄烷，2， 3- 二去氧-2’，7- 二羟基-4’ -甲氧基-3- (2’，7- 二羟基-4’ -甲氧基异黄烷_5’基)黄酮。 又含紫檀烷类成分美迪紫檀素，左旋的9-0-甲基尼森香豌豆紫檀酚，左旋的白香草木犀 紫檀酚C及D，左旋的季香紫檀素。还含肉桂基苯酚类成分钝叶黄檀苏合香烯，异微凸剑 叶莎苏合香烯。又含2-羟基-3，4- 二甲氧基苯甲酸甲酯，2’，6- 二羟基-4’ -甲氧基-2-芳 基苯并呋喃。降香为活血散瘀中药，实验表明其对高分子右旋糖酐注射所形成的高粘滞血症之 血瘀证动物能使全血粘度显著降低，尤以降低高切速下全血粘度效果为著，还可降低血浆粘度，但对红细胞聚集性无显著影响，降香还有降低血脂作用，其降低血瘀证动物血液粘度 可能与其降脂作用有关，而其降血脂作用的机制则与能抑制HMG辅酶A还原酶有关。2-羟 基-3，4-二甲氧基苯甲酸甲酯、羟基钝叶黄檀苏合香烯、异微凸剑叶莎苏合香烯另有试验 表明所含某些成分还能显著抑制血小板聚集。另外，降香为冠心II号方组成药物之一，现代 药理实验表明单味降香可显著促进小鼠肠系膜实验性微循环障碍血流的恢复、以及微动脉 收缩后的恢复及局部微循环的恢复，其抗肾上腺素所致微动脉的收缩作用较强，对推迟血 液停流的作用较弱。冠心II号具的显著降压作用，其中降香因抑制血管紧张素II的受体而 发挥作用。降香具有以上对心血管系统的明显药理作用，因此，从降香中分离出有效组分， 开发出治疗心血管疾病的现代中药具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种降香有效组分，通过以下制备方法步骤实现本发明 的降香有效组分的制备方法，包括下列步骤将降香药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热 提取，药渣加乙醇水溶液提取，将提取液浓缩成浸膏，用反相硅胶柱对其进行分离，首先用 低浓度甲醇作为流动相，得洗脱液I，弃之，然后改用高浓度甲醇作为流动相，得洗脱液II， 将洗脱液II浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条 件色谱柱为制备柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱。本发明的降香有效组分主要含有白香 草木犀紫檀酚A，其中，以重量百分比计，白香草木犀紫檀酚A的含量为70、5%。优选的，本发明的降香有效组分，通过以下制备方法获得取降香药材，将其粉碎 后加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取2次，滤液合并得提取液I。 药渣加入70%乙醇，加热回流1小时，提取2次，滤液合并得提取液II，将提取液II浓缩 成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用5%甲醇作为流动相， 得洗脱液I，然后改用70%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相 色谱继续分离得到的样品制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱(ZORBAX Sb-C18; 21. 2m m 250mm, 7 μπι ),流动相为水A 和乙腈B，梯度洗脱程序如下0min时，流动相A为85%的水，流动相B为15%的乙腈溶液； 60min时，流动相A为40%的水，流动相B为60%的乙腈溶液；65min时，流动相A为5%的 水，流动相B为95%的乙腈溶液；流速为lOml/min，柱温为室温；样品经制备液相色谱分离， 在53. 8-60. Omin时间段收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分，主要含有白香草木犀 紫檀酚A，其中，以重量百分比计，白香草木犀紫檀酚A的含量为85、0%。本发明的另一个目的是提供一种降香有效组分在制备治疗、预防心血管疾病的药 物中的应用。经药理实验证明，本发明提供的降香有效组分对心肌细胞有一定的保护作用。本发明的降香有效组分可以作为活性成分，加入药剂学上接受的辅料，按照药剂 学上记载的制剂的制备方法制成制剂。所述的制剂包括注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣 片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、 丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩片、微丸等。本发明的降香有效组分及其制剂可在制备治疗、预防心血管疾病药物中应用。本 发明提供的制备方法设计合理，能快速准确地得到有效成分，在生产中更易于药物的质量控制。
图1是降香有效组分的HPLC色谱图，其中1为白香草木犀紫檀酚A。
具体实施例方式下面将结合实施例进一步详细说明本发明的实质内容和有益效果，该实施例仅用 于说明本发明而非对本发明的限制。实施例一降香有效组分的制备
将降香药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液I，弃之。药渣加入乙醇，加 热提取得提取液II，将提取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进 行分离，首先用低浓度甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改用高浓度甲醇作为流动相，得洗 脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品，经制备液相色谱分离， 在53. 8-60. Omin时间段收集溶液，浓缩干燥后得到有效组分。实施例二降香有效组分的制备
取降香药材250g，将其粉碎后加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时， 提取2次，滤液合并得提取液I。药渣加入70%乙醇，加热回流1小时，提取2次，滤液合并 得提取液11，将提取液11浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离， 首先用5%甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改用70%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩 干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品制备色谱的分离条件色谱柱为制 备柱ZORBAX Sb-C18 ； 21. 2mm χ 250mm, 7 μιη ,流动相为水A和乙腈B，梯度洗脱程序如下 Omin时，流动相A为85%的水，流动相B为15%的乙腈溶液；60min时，流动相A为40%的 水，流动相B为60%的乙腈溶液；65min时，流动相A为5%的水，流动相B为95%的乙腈溶 液；流速为lOml/min，柱温为室温；样品经制备液相色谱分离，在53. 8-60. Omin时间段收集 溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。实施例三降香有效组分的分析
色谱条件色谱柱Agilent Zorbax 38_(18柱(4. 6厕X 150 mm,^ Pm)；采用梯度洗 脱，流动相A相为0. 2%冰醋酸水溶液，流动相B相为含0. 2%冰醋酸的乙腈溶液；梯度洗脱 程序如下0分钟时，流动相A为90%的0. 2%冰醋酸水溶液、流动相B为10%的0. 2%冰醋 酸的乙腈溶液；20分钟时，流动相A为70%的0. 2%冰醋酸水溶液、流动相B为30%的0. 2% 冰醋酸的乙腈溶液；30分钟时，流动相A为50%的0. 2%冰醋酸水溶液、流动相B为50%的 0. 2%冰醋酸的乙腈溶液；35分钟时，流动相A为50%的0. 2%冰醋酸水溶液、流动相B为 50%的0. 2%冰醋酸的乙腈溶液；流速0. 5mL · mirT1 ；检测波长254 nm ；柱温30°C ；进样量 5 μ L。降香有效组分HPLC色谱图见图1。供试品溶液的制备称取本品，用甲醇溶液溶解在容量瓶中，稀释至刻度，摇勻， 即得。测定方法精密吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。实施例四滴丸制剂的制备
取降香有效组分0. 5g与10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加热熔融，化料后移至滴丸
5滴灌中，药液滴至6、V液体石蜡中，除油，制得滴丸400粒。实施例五冻干粉针剂的制备
取降香有效组分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸钠0. 9g和蒸馏水1000ml，上述组分混合 均勻后，分装400支，冷冻干燥，即得。实施例六降香有效组分的活性评价实验 1.降香组分对H2O2损伤心肌细胞的保护作用
体外培养H9C2心肌细胞，培养液为DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%双 抗。取对数生长期细胞置于96孔细胞培养板上，恒温培养24 h后，加入200 μ mol/mL H2O2 损伤心肌细胞30 min,再加入终浓度为50 μ g/mL的降香组分孵育24 h，采用MTT法测定细 胞活力。结果表明，该组分对H2O2损伤心肌细胞的保护率为7. 38 %。2.降香组分对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用
体外培养H9C2心肌细胞，培养液为DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%双 抗。取对数生长期细胞置于96孔细胞培养板上，恒温培养24 h后，在缺氧小室中培养6 h。 缺氧结束后，取出细胞培养板加入经无糖Hank’ s稀释的终浓度为50 μ g/mL的降香组分，在 正常培养条件下孵育6 h，取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果表明，该组 分对缺氧复氧损伤的心肌细胞保护率为18. 5 %。
权利要求
1.一种降香有效组分，其特征在于，通过以下步骤获得将降香药材粉碎后加入乙 酸乙酯和乙醇，加热提取，药渣加乙醇水溶液提取，将提取液浓缩成浸膏，用反相硅胶柱对 其进行分离，首先用低浓度甲醇作为流动相，得洗脱液I，弃之，然后改用高浓度甲醇作为流 动相，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品； 制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，收集溶液，溶液经浓 缩干燥后得到有效组分；该有效组分中主要含有白香草木犀紫檀酚A。
2.根据权利要求1所述的一种降香有效组分，其特征在于，低浓度甲醇为5%的甲醇 溶液，高浓度甲醇70 %的甲醇溶液。
3.根据权利要求1所述的一种降香有效组分，其特征在于，通过以下步骤获得取降 香药材，将其粉碎后加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取2次，滤液 合并得提取液I ；药渣加入70%乙醇，加热回流1小时，提取2次，滤液合并得提取液II，将提 取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用5%甲醇作 为流动相，得洗脱液I，然后改用70%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用 制备液相色谱继续分离得到的样品制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱ZORBAX Sb-C18 ；21. 2mmχ 250mm, 7 μπι,流动相为 水A和乙腈B，梯度洗脱程序如下=Omin, 15%B ；60min,60%B ；65min,95%B ；流速为10ml/min, 柱温为室温；样品经制备液相色谱分离，在53. 8-60. O min时间段收集溶液，溶液经浓缩干 燥后得到有效组分；根据权利要求1或3所述的一种降香有效组分在制备治疗心血管疾病的药物中的应用。
4.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物由降香有效组分加入药剂学上 可接受的辅料，按照药剂学上记载的制剂制备方法制成。
5.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的制剂包括液体制剂或固体制剂。
全文摘要
本发明提供一种降香有效组分，将药材通过加热提取，浓缩，反相硅胶柱分离，洗脱，洗脱液浓缩干燥，再用制备液相色谱继续分离，收集溶液，溶液经浓缩干燥后获得。该有效组分主要含有白香草木犀紫檀酚A。本发明提供的降香有效组分可在制备治疗、预防心血管疾病药物中应用。本发明制备方法设计合理，能快速准确地得到有效成分，在生产中更易于药物的质量控制。
文档编号A61K36/48GK102133261SQ20111005897
公开日2011年7月27日 申请日期2011年3月11日 优先权日2011年3月11日
发明者李云飞, 王毅, 程翼宇, 葛志伟 申请人:浙江大学