专利名称：与凋亡或坏死相关的TNFα短肽及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医学领域，更具体地涉及引起细胞凋亡和坏死的肿瘤坏死因子TNF-a激动剂多肽及其制法和用途。
背景技术：
TNF-a是一种多功能的细胞因子，可由多种细胞分泌，其中最主要是来自巨噬细胞。TNF-a通过与靶细胞受体TNFR结合发挥多种生理功能，例如引起恶病质、刺激淋巴细胞生长、诱发炎症反应、诱导细胞凋亡和坏死性死亡。TNF-a是以三聚体的形式与它的受体三聚体结合。然而，人们并不知道TNF-a与受体结合后为什么会引起以及如何引起不同的的功能，有时甚至是引起相反的功能。 有研究显示，TNF-a在低pH环境下会产生结构上的变化，然后插入细胞膜，从而促使细胞发生裂解[Proc. Natl. Acad. Sci. 1996 ;USA 93:1021-1026]。这一结果提示TNF- a结构的改变可能是它发挥功能的关键。此外，受体TNFR存在两种形式，但是TNFR2受体只有存在于人体的某些细胞里，因此无法以此解释为什么TNF-a与受体结合会引起的不同功能。这些未解之谜对TNF-a的临床应用造成了一定影响。因此，本领域迫切需要确定导致TNF-a不同功能的原因，并开发具有明确功能的TNF-a或其衍生多肽。
发明内容
本发明的目的就是提供一种鉴定引起细胞凋亡和/或坏死的肿瘤坏死因子TNF-a激动剂多肽的方法。本发明的另一目的是提供上述能引起细胞凋亡和/或坏死的肿瘤坏死因子TNF-a激动剂多肽及其制法和用途。在本发明的第一方面，提供了一种鉴别引起细胞凋亡和/或细胞坏死的肿瘤坏死因子TNF-a激动剂多肽的方法，包括步骤(a)提供基于肿瘤坏死因子TNF-a的多肽，所述多肽的长度为7_50个氨基酸；(b)测定所述多肽引起细胞凋亡的能力和测试所述多肽引起细胞坏死的能力，如果所述多肽能够明显引起细胞凋亡且引起凋亡的程度远大于引起坏死的程度，则该多肽是引起细胞凋亡的TNF-a激动剂多肽；如果所述多肽能够明显引起细胞坏死且引起坏死的程度远大于引起凋亡的程度，则该多肽是引起细胞坏死的TNF-a激动剂多肽。在另一优选例中，在步骤(b)中，如果所述多肽能够明显引起细胞胞内表达caspase-3但没有细胞膜破坏,而且这种(Caspase-3阳性,细胞膜破坏阴性)细胞的百分比超过阴性对照中同样细胞20%以上，则该多肽是引起早期细胞凋亡的TNF-a激动剂多肽；如果所述多肽既能够明显引起细胞胞内表达caspase-3又能引起细胞膜破坏，而且这种(Caspase-3阳性，细胞膜破坏阳性)细胞的百分比超过阴性对照中同样细胞20%以上，则该多肽是引起晚期细胞凋亡的TNF-a激动剂多肽；如果所述多肽不激活胞内caspase-3的表达但却能够明显引起细胞膜破坏，而且这种细胞(caspase-3阴性，细胞膜破坏阳性)的百分比超过阴性对照中同样细胞20%以上，则该多肽是引起细胞坏死的TNF-a激动剂多肽。在另一优选例中，所述的阴性对照是在不添加所述的待测多肽的情况下，在相同培养条件下培养的相同种类的细胞。在另一优选例中，在步骤(b)中，当该多肽满足以下条件时，则该多肽是TNF-a的细胞凋亡型激动剂多肽⑴该多肽可引起彡20% (较佳地彡30%，更佳地彡50%，最佳地彡70% )细胞表达caspase-3或发生凋亡；(ii)设Zl = Q1-Q2，则Zl彡20%，其中Ql为在相同条件下，该多肽引起的胞内caspase-3表达(发生凋亡)的细胞百分比数量，而Q2为无多肽(或阴性多肽)引起胞内表 达caspase-3的细胞百分比数量。较佳地，Zl彡30%，更佳地Zl彡50%;最佳地Zl彡70 %。在另一优选例中，还包括根据以下条件，进一步细分凋亡型激动剂的类型(iii)设Z2 = Q3-Q4，其中Q3为在相同条件下，该多肽引发的胞膜破坏的细胞百分比数量，而Q4为无多肽(或阴性多肽)引起的细胞膜破坏数量(百分比)；当21彡20%，Z2 ( 5%，判定为早期细胞凋亡；当Zl彡20%, Z2彡20%，判定为晚期细胞凋亡。在另一优选例中，在步骤(b)中，当该多肽满足以下条件时，则该多肽是TNF-a的细胞坏死型激动剂多肽(i)在无caspase-3胞内表达的条件下,该多肽可引起彡20% (较佳地彡30%,更佳地> 50%，最佳地> 70% )细胞膜破坏(细胞坏死)；(ii)当无细胞凋亡或Zl 5% (如0% )，设Z2 = Q3-Q4，则Z2彡20%，其中Q3为在相同条件下，该多肽引发的胞膜破坏的细胞百分比数量，而Q4为无多肽(或阴性多肽)引起的细胞细胞膜破坏的细胞百分比数量。(较佳地，Z2彡30%，更佳地Z2彡50% ；最佳地Z2彡70%。)在另一优选例中，所述的多肽的序列来源于人TNF-a，更佳地来源于SEQ ID NO.I (或参见 uniprot/P01375)。在另一优选例中，所述多肽的长度为8-40个氨基酸，更佳地9-30个氨基酸，最佳地10-20个氨基酸。在本发明的第二方面，提供了一种TNF-a的激动剂多肽，所述的多肽具有以下特征(i)该多肽的序列来源于肿瘤坏死因子TNF-a的氨基酸序列；(ii)该多肽的长度为7-50个氨基酸；(iii)该多肽具有明显引起细胞凋亡或明显引起细胞坏死的能力。在另一优选例中，被诱导凋亡或被诱导细胞坏死的细胞包括肿瘤细胞、过度增长的细胞包括与自身免疫相关的细胞(如自身免疫T细胞、B细胞)。在另一优选例中，所述的多肽是细胞凋亡型激动剂多肽。在另一优选例中，所述的细胞凋亡型激动剂多肽含有或具有选自下组的序列SEQID NO. :3(P8)、6 (Pll)、7(P12)、8(P13)、15 (P20)和 16(P21)。
在另一优选例中，所述的细胞凋亡型激动剂多肽包括？8、？11、？12、？13、？20、？21、P13-2、P13-3、P13-4、P13-5、P13—6、P13—7、P13—8、P13—9、P13—10、P16—6、P16—7、P16—8、P16-9、P16-10、P16-11 或其组合。在另一优选例中，所述的多肽是细胞坏死型激动剂多肽。在另一优选例中，所述的细胞坏死型激动剂多肽含有或具有选自下组的序列SEQID NO. :9(P14)、10(P15)JP11(P16)。在另一优选例中，所述的细胞坏死型激动剂多肽包括P14、P15、P16、P13-10、P14-1、P14-2、P14-3、P14-4、P16-5 或其组合。在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，其特征在于，包括药学上可接受的载体和本发明第二方面中所述的TNF-a的激动剂多肽。在本发明的第四方面，提供了本发明第二方面中所述的TNF-a的激动剂多肽的 用途，它被用于制备诱导细胞凋亡和/或坏死的药物组合物。在本发明的第四方面，提供了本发明第二方面中所述的TNF-a的激动剂多肽的用途，它被用于制备治疗肿瘤的药物组合物；或用于制备治疗自身免疫病及感染性疾病的药物组合物。在另一优选例中，所述的肿瘤包括口腔癌、食道癌、胃癌、十二指肠癌、小肠癌、结肠癌、肛门癌、肝癌、胰腺癌、胆囊癌、胆管癌、壶腹癌、鼻咽癌、肺癌、皮肤癌(黑色素瘤)、骨癌、骨髓癌、T及B细胞淋巴瘤、白血病、何杰金氏瘤、非何杰金氏瘤、卡波氏肉瘤、头颈部肿瘤、脑瘤、神经胶质瘤、甲状腺癌、胸腺癌、肾癌、输尿管癌、膀胱癌、睾丸癌、前列腺癌、阴茎癌、子宫癌、子宫颈癌、卵巢癌、输卵管癌、阴道癌。在另一优选例中，所述的感染性疾病包括HIV感染。在本发明的第六方面，提供了一种体外(非治疗性)诱导细胞凋亡和/或细胞坏死的方法，包括步骤在本发明第二方面所述的TNF-a的激动剂多肽存在下，培养细胞，从而诱导细胞凋亡和/或细胞坏死。在本发明的第七方面，提供了一种诱导对象发生细胞凋亡和/或细胞坏死的方法，包括步骤给需要治疗的对象施用第二方面所述的TNF-a的激动剂多肽，从而诱导细胞凋亡和/或细胞坏死。在本发明的第八方面，提供了一种减少或封闭对象发生TNF-a相关炎症的方法，包括步骤给需要治疗的对象施用第二方面所述的TNF- a的激动剂多肽，从而诱导细胞凋亡和/或细胞坏死。在另一优选例中，所述的多肽是细胞凋亡型激动剂多肽(包括P12和P13)。在本发明的第九方面，提供了一种治疗感染性疾病的方法，其特征在于，包括步骤给需要治疗的对象施用第二方面所述的TNF-a的激动剂多肽。在另一优选例中，所述的感染性疾病是HIV感染。在另一优选例中，所述的多肽是细胞凋亡型激动剂多肽(包括P12和P13)。在本发明的第十方面，提供了一种第二方面所述的TNF-a的激动剂多肽的用途，它被用于制备提高体重的药物组合物。在本发明的第十一方面，提供了一种提高治疗对象体重的方法，包括步骤给需要的对象施用第二方面所述的TNF-a的激动剂多肽。
在另一优选例中，所述的对象是肿瘤患者。在另一优选例中，所述的多肽是细胞凋亡型激动剂多肽(包括P12)、细胞凋亡型激动剂多肽(包括P16)、或其组合。应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再
累述。
图Ia显示了完整TNF-a不能诱导T细胞死亡。图Ib显示了 TNF- a激活NF_kB (细胞生长)。·
图Ic显示了 TNF- a片段(多肽)可诱导细胞凋亡和坏死。图Id显示了各NF-多肽(20aa)诱导之细胞凋亡和坏死的图谱。图Ie显示了 TNF-a (IOaa)多肽诱导之细胞凋亡和坏死的图谱。图If显示了 TNF- a多肽诱导之新鲜或经PHA刺激过的PBMC凋亡情况。图Ig显示了 TNF- a多肽诱导之新鲜或经PHA刺激过的PBMC坏死情况。图2显示了 TNF- a结合可溶性的TNF受体。图3a显示了 P12和pl3抑制TNF-a的杀伤作用。图313显示了？12和？13可抑制丁,-0的杀伤作用。图3c显示了 Anti_P12抗体抑制TNF-a的杀伤作用。其中，纵坐标为细胞数，横坐标为caspase-3表达量。空峰为阴性对照(就是无TNF- a，只有L929细胞)，因此无细胞凋亡(无caspase-3表达)。TNF-a加L929细胞后会引起细胞凋亡。黑峰表示细胞表达caspase-3，细胞凋亡。右图表明加对照血清对TNF-a杀L929细胞没影响。左图表示加了抗P12抗体后，抑制了 TNF-a引起的L929凋亡，黑峰左移，细胞凋亡减少。“I”和“2”是分别来源于两只老鼠的抗血清。TNF-a的浓度是0. 59nM。图4a显示了 HIV感染导致MT2细胞死亡。图4b显示了 HIV感染导致MT2细胞死亡的曲线。图4c显示了 HIV感染或不感染的MT2细胞，在未经P13或P16处理下细胞凋亡和坏死的情况。图4d显示了 HIV感染或不感染的MT2细胞，经P13和P16处理后细胞凋亡和坏死的情况。图4e用柱形图总结图4c的结果。图4f用柱形图总结图4d的结果。图4g显示了随着P13浓度的增加，HIV感染逐渐减少。图4h显示了使用P13和P16时，HIV感染细胞的数量图。图4i显示了细胞凋亡激动剂多肽P12和P13可以使上清液中的病毒含量减少。图5显示了 P16对多种肿瘤细胞的杀伤作用。图6显示了肽P12和P16对老鼠体重的影响。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现和证实了，完整的TNF-a可以刺激细胞生长，不会诱导细胞死亡，但是变性的TNF- a (如降低TNF- a溶液的pH值所导致的变性、酶降解所导致的变性)、片段化的TNF-a多肽却能诱导细胞凋亡和/或坏死。这一发现对于治疗炎症、感染和肿瘤具有极重要的应用价值。在此基础上，本发明人完成了本发明。具体地，完整的TNF- a能刺激一些正常的细胞(如PBMC)和其它许多细胞株的生长(如Jurkat A3和MT2细胞)，但是很少会引起这些细胞的凋亡或坏死。完整的TNF-a也能引起一些肿瘤细胞(如L929和U937细胞)的死亡、凋亡及坏死。然而，一些TNF-a衍生多肽分别具有明显的诱导细胞凋亡和/或细胞坏死的功能。本发明不仅提供了定量鉴定细胞凋亡与坏死的方法(并以TNF-a为例子)，而且除TNF-a外，该方法还可以用于药物(如小分子药物及生物药物)毒性的筛选。术语
如本文所用，术语“TNF-a ”和“肿瘤坏死因子a ”可互换使用，指哺乳动物(包括人)的肿瘤坏死因子a。优选的TNF-a来源于人，野生型人TNF-a蛋白具有233个氨基酸，序列见 http://www. uniprot. org/uniprot/P01375 或 SEQ ID NO. :1。应理解，该术语也包括天然存在的、上述野生型人TNF-a的突变体。本发明多肽在本发明中，术语“本发明的短肽”、“本发明的多肽”或“TNF-a衍生多肽”可互换使用，指衍生自TNF-a序列的、具有确定的引起细胞凋亡和/或细胞坏死功能的多肽。通常，这些断短肽的长度为7-50个氨基酸，较佳地8-40个氨基酸，更佳地9-30个氨基酸，最佳地10-20个氨基酸。应理解，本发明的短肽通常包括两类多肽，即“TNF-a的细胞凋亡型激动剂多肽”和“TNF-a的细胞坏死型激动剂多肽”。在本发明中，当TNF-a及某一多肽满足以下条件时，可认为是TNF-a的细胞凋亡型激动剂多肽⑴该多肽可引起彡20% (较佳地彡30%，更佳地彡50%，最佳地彡70% )细胞表达caspase-3或发生凋亡；(ii)设Zl = Q1-Q2，则Zl彡20%，其中Ql为在相同条件下，该多肽引起的胞内caspase-3表达(发生凋亡)的细胞百分比数量，而Q2为无多肽(或阴性多肽)引起胞内表达caspase-3的细胞百分比数量。较佳地，Zl彡30%，更佳地Zl彡50%;最佳地Zl彡70 %。此外，可进一步基于(iii)进行细分(iii)设Z2 = Q3-Q4，其中Q3为在相同条件下，该多肽引发的胞膜破坏的细胞百分比数量，而Q4为无多肽(或阴性多肽)引起的细胞膜破坏数量(百分比)。当Zl彡20%，Z2 ( 5%，为早期细胞凋亡；当Zl彡20%, Z2彡20%，为晚期细胞凋亡。在步骤(b)中，当该多肽满足以下条件时，则该多肽是TNF-a的细胞坏死型激动剂多肽(i)在无caspase-3胞内表达的条件下,该多肽可引起彡20% (较佳地彡30%,更佳地> 50%，最佳地> 70% )细胞膜破坏(细胞坏死)；(ii)当无细胞凋亡或Zl =彡5% (如0% )，设Z2 = Q3-Q4，则Z2彡20%，其中Q3为在相同条件下，该多肽引发的胞膜破坏的细胞百分比数量，而Q4为无多肽(或阴性多肽)引起的细胞细胞膜破坏的细胞百分比数量。则该多肽是引起细胞坏死的TNF-a激动剂多肽。较佳地，Z2彡30%，更佳地Z2 ^ 50% ;最佳地Z2彡70%。本发明的多肽可以是重组多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本发明“TNF-a的细胞凋亡型激动剂多肽”和“TNF_ a的细胞坏死型激动剂多肽”的片段、衍生物和类似物也包括在本发明范围内。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的“TNF- a的细胞凋亡型激动剂多肽”和“TNF- a的细胞坏死型激动剂多肽”相同的生物学功能或活性(诱导凋亡或坏死)的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性 氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)该多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与抗原IgG片段的形成的融合蛋白)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。在本发明中，还包括具有与上述“TNF-a的细胞凋亡型激动剂多肽”和“TNF_ a的细胞坏死型激动剂多肽”相同功能的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)一个或多个(通常为1-3个，较佳地1-2个，更佳地I个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为5个以内，较佳地为3个以内，更佳地为2个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变多肽的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。本发明多肽的变异形式包括同源序列和保守性变异体等。本发明还提供多肽的类似物。这些类似物与“TNF- a的细胞凋亡型激动剂多肽”和“TNF- a的细胞坏死型激动剂多妝”的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如P、Y-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。修饰(通常不改变一级结构)形式包括体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的多肽。
在本发明中，“保守性变异多肽”指与相应的“TNF- a的细胞凋亡型激动剂多肽”和“TNF-a的细胞坏死型激动剂多肽”的氨基酸序列相比，有至多5个，较佳地至多3个，更佳地至多2个，最佳地至多I个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表A进行氨基酸替换而产生。表A
最初的残基I代表性的取代优选的取代
Ala(A)Val；Leu ；IleVal
Arg(R)Lys ；Gln ；AsnLys
Asn(N)Gln ；His ；Lys ；ArgGln
Asp (D)GluGlu
Cys (C)SerSer
Gln (Q)AsnAsn
Glu(E)AspAsp
Gly(G)Pro ；AlaAla
His (H)Asn ；Gln ；Lys ；ArgArg
He (I)Leu ；Val ；Met ；Ala ；PheLeu
Leu (L)lie ；Val ；Met ；Ala ；Phelie
Lys(K)Arg ；Gln ；AsnArg
Met (M)Leu ；Phe ；IleLeu
Phe(F)Leu ；Val ；Ile ；Ala ；TyrLeu
Pro (P)AlaAla
Ser(S)ThrThr
Thr(T)SerSer
Trp (W)Tyr ；PheTyr
Tyr (Y)Trp ；Phe ；Thr ；SerPhe
权利要求
1.一种鉴别引起细胞凋亡和/或细胞坏死的肿瘤坏死因子TNF-α激动剂多肽的方法，其特征在于，包括步骤 (a)提供基于肿瘤坏死因子TNF-α的多肽，所述多肽的长度为7_50个氨基酸； (b)测定所述多肽引起细胞凋亡的能力和测试所述多肽引起细胞坏死的能力，如果所述多肽能够明显引起细胞凋亡且引起凋亡的程度远大于引起坏死的程度，则该多肽是引起细胞凋亡的TNF-α激动剂多肽；如果所述多肽能够明显引起细胞坏死且引起坏死的程度远大于引起凋亡的程度，则该多肽是引起细胞坏死的TNF-α激动剂多肽。
2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，当该多肽满足以下条件时，则该多肽是TNF- α的细胞凋亡型激动剂多肽 (i)该多肽可引起彡20% (较佳地彡30%，更佳地彡50%，最佳地彡70% )细胞表达caspase-3或发生凋亡； ( )设Zl = Q1-Q2，则Zl彡20 %，其中Ql为在相同条件下，该多肽引起的胞内caspase-3表达(发生凋亡)的细胞百分比数量，而Q2为无多肽(或阴性多肽)引起胞内表达caspase-3的细胞百分比数量。
3.如权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，当该多肽满足以下条件时，则该多肽是TNF- α的细胞坏死型激动剂多肽 (i)在无caspase-3胞内表达的条件下,该多肽可引起彡20%(较佳地彡30%,更佳地彡50%，最佳地彡70% )细胞膜破坏(细胞坏死)； (ii)当无细胞凋亡或Zl5% (如0% )，设Z2 = Q3-Q4，则Z2彡20%，其中Q3为在相同条件下，该多肽引发的胞膜破坏的细胞百分比数量，而Q4为无多肽(或阴性多肽)弓丨起的细胞细胞膜破坏的细胞百分比数量。
4.一种TNF-α的激动剂多肽，其特征在于，所述的多肽具有以下特征 (i)该多肽的序列来源于肿瘤坏死因子TNF-α的氨基酸序列； ( )该多肽的长度为7-50个氨基酸； (iii)该多肽具有明显引起细胞凋亡或明显引起细胞坏死的能力。
5.如权利要求4所述的激动剂多肽，其特征在于，所述的多肽是细胞凋亡型激动剂多肽； 更佳地，所述的细胞凋亡型激动剂多肽含有或具有选自下组的序列SEQID NO. :3、6、7、8、15和16 ;或者所述的细胞凋亡型激动剂多肽包括P8、P11、P12、P13、P20、P21、P13-2、P13-3、P13-4、P13-5、P13—6、P13—7、P13—8、P13—9、P13—10、P16—6、P16—7、P16—8、P16—9、P16-10、P16-11 或其组合。
6.如权利要求4所述的激动剂多肽，其特征在于，所述的多肽是细胞坏死型激动剂多肽； 更佳地，所述的细胞坏死型激动剂多肽含有或具有选自下组的序列SEQID NO. :9、10、和11 ;或者所述的细胞坏死型激动剂多肽包括P 14、P15、P16、P13-10、P14-1、P14-2、P14-3、P14-4、P16-5 或其组合。
7.—种药物组合物，其特征在于，包括药学上可接受的载体和如权利要求4所述的TNF-α的激动剂多肽。
8.如权利要求4所述的TNF-α的激动剂多肽的用途，其特征在于，用于制备诱导细胞凋亡和/或坏死的药物组合物。
9.如权利要求4所述的TNF-α的激动剂多肽的用途，其特征在于，用于制备治疗肿瘤的药物组合物；或用于制备治疗自身免疫病及感染性疾病的药物组合物。
10.一种体外(非治疗性)诱导细胞凋亡和/或细胞坏死的方法，其特征在于，在权利要求4所述的TNF- α的激动剂多肽存在下，培养细胞，从而诱导细胞凋亡和/或细胞坏死。
全文摘要
本发明涉及与凋亡或坏死相关的TNF-α短肽及其应用。具体地，本发明提供了鉴定引起细胞凋亡和坏死的肿瘤坏死因子TNF-α激动剂多肽的方法，以及用该方法鉴别出的多肽。本发明多肽具有明确的引起细胞凋亡和/或坏死的功能，因此可用于治疗肿瘤、感染性疾病。
文档编号A61K38/10GK102776264SQ20111011785
公开日2012年11月14日 申请日期2011年5月7日 优先权日2011年5月7日
发明者姜石松 申请人:姜石松