一种稳定的艾塞那肽缓释微球制剂及制备方法

专利名称：一种稳定的艾塞那肽缓释微球制剂及制备方法
技术领域：
本发明涉及缓释微球的药物制剂领域，尤其涉及艾塞那肽缓释微球制剂及其制备方法。
背景技术：
艾塞那肽是从美国西南部大毒蜥唾液中分泌的天然肠促胰岛素拟似物，能模拟胰高血糖素样肽-1 (glucagon like ρ印tide-1即GLP-1)的作用，从而达到控制血糖的效果，由美国Amylin和Lilly制药公司共同开发。人工合成的艾塞那肽是首个获准上市的肠促胰岛素拟似物，其新药上市申请于2005年4月获美国FDA批准，主要用于改善二甲双胍和磺酰脲类药物治疗不理想的2型糖尿病患者的血糖控制。艾塞那肽是一种含有39个氨基酸的多肽，与哺乳动物GLP-I的氨基酸序列只有53%同源；哺乳动物的GLP-I来自小肠L 细胞的胰高血糖素原基因；而艾塞那肽不是来自来源于胰高血糖素原基因，因此不能称为是GLP-I的类似物。但艾塞那肽是胰腺GLP-I受体的一种有效的激活剂，与GLP-I受体具有高度亲和性。因此具有与GLP-I相似的生物学作用，故艾塞那肽可称为肠促胰岛素拟似物、GLP-I拟似物或GLP-IR的激动剂。艾塞那肽注射液已于2005年4月获得美国FDA批准上市，商品名为Byetta。该制剂已被证实在改善血糖控制及减轻体重方面具有良好效果。但由于艾塞那肽的半衰期仅为 2. 4小时，为平稳控制血糖，需每日皮下注射给药两次，频繁的注射使患者顺应性较差。

发明内容
本发明提供一种能有效延长艾塞那肽在体内作用时间的艾塞那肽缓释微球制剂， 降低了艾塞那肽的给药频率。本发明所述的“微球”包括制剂学中类似球形的微囊或颗粒微小的微囊。本发明的艾塞那肽缓释微球制剂在体外的缓释周期可达到7-35天。本发明还提供一种艾塞那肽缓释微球制剂的制备方法。本发明的艾塞那肽缓释微球制剂，包括艾塞那肽、乙交酯丙交酯共聚物，其质量百分比分别为艾塞那肽0. 1%-12. 5%，乙交酯丙交酯共聚物77. 5%-99%。乙交酯丙交酯共聚物[poly (lactide-co-glycolide)即PLGA]是有乙交酯和丙交酯以不同比例嵌段共聚而成的一种高分子材料，具有良好的生物相容性和可降解性，其最终降解产物是二氧化碳和水。本发明中所述的乙交酯丙交酯共聚物是乙交酯丙交酯为 25:75 75:25的共聚物，其分子量为2000 25000道尔顿，特性粘度为0. Γθ. 5dL/g。为了实现艾塞那肽缓释微球具有理想的载药量，使其在临床上应用成为一种可能。发明人对艾塞那肽的理化性质以及处方因素进行研究，结果发现，采用艾塞那肽 0. 1%-12. 5%，乙交酯丙交酯共聚物77. 5%-99%的处方制备成缓释微球，可以实现载药量为 0. 5%-9. 8%的艾塞那肽缓释微球，通过改变处方中乙交酯丙交酯共聚物的用量可以对微球的载药量进行调节，方便临床用药。本发明所述的艾塞那肽缓释微球制剂还包含质量百分比为0. 1-10. 0%的保护剂，该保护剂选自人血清白蛋白、明胶、海藻糖、蔗糖、硫酸铵或甘露醇中的一种或任意两种或两种以上的组合。由于艾塞那肽为39肽，在制备过程中会发生构象的改变或降解，已有文献报道艾塞那肽会形成四聚体，在制备过程中加入上述保护剂，可以提高艾塞那肽的稳定性；同时，由于加入保护剂，降低多肽与该缓释微球制剂中的所含的其他组分之间的化学相互作用，从而将活性损失减到最小；并且，由于加入保护剂使缓释微球制剂保持良好的缓释特性。申请人发现，当保护剂的浓度小于0. 1%时，其提高艾塞那肽稳定性的作用较弱，效果不明显；而当保护剂的浓度大于10. 0%时会因为用量过大而导致内水相的密度和粘度增加，所制备的初乳的粒径会增加，进一步导致最终得到的缓释微球的粒径变大，不利于药物的控制释放；另外浓度过大反而还会导致艾塞那肽的析出。发明人在研究过程中发现，保护剂的浓度在0. 1-10.0%时，由于加入保护剂可提高艾塞那肽的稳定性；意外的发现，当保护剂的质量百分比为0.1-10. 0%时，可增加缓释微球的载药量。本发明所述的艾塞那肽缓释微球制剂还包括质量百分比为0. 01%-10. 0%的助悬剂，该助悬剂选自西黄蓍胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、明胶、果胶、脱乙酰甲壳素、甲基纤维素、 羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆、聚维酮、聚乙烯醇中的一种或任意两种或两种以上的组合。若本发明采用复乳法(w/0/w)制备艾塞那肽缓释微球时，由于艾塞那肽易溶于水，在制备过程中会因为由于艾塞那肽从内水相向外水相迁移而导致包封率很低，而最终得到的缓释微球制剂的载药量很低；而在制备过程中加入上述的助悬剂可以增加内水相的粘度进而阻碍了艾塞那肽的迁移，从而增加了包封率和缓释微球的载药量， 发明人在研究过程中发现，当助悬剂浓度小于0.01%时，其增加了包封率和缓释微球的载药量的作用不明显，而当其浓度大于10.0%时会由于粘度过大而微球的制备带来困难。由于本发明处方组成合理，可以通过普通的缓释微球技术制备获得，该缓释微球的缓释周期可以实现长达7—35天。采用复乳法(W/0/W)制备艾塞那肽缓释微球会有更好的技术效果。在完成本发明的过程中，申请人发现以下制备方法会使上述缓释微球制剂获得更佳的效果，该制备方法包括以下步骤
(a)将乙交酯丙交酯共聚物溶于有机溶剂，形成油相，其中有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或其组合；
(b)将艾塞那肽、保护剂、助悬剂溶于水，形成内水相；
(c)将内水相与所述油相混合形成初乳，并将该初乳加入到含有表面活性剂的外水相中形成复乳。所述的表面活性剂选自聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸钠、硬脂酸钠、吐温、或司盘中的一种或任意两种或两种以上的组合。(d)待有机溶剂挥发后，得到包裹有艾塞那肽的缓释微球。本发明缓释微球的制备方法(a)步骤和(b)步骤其目的是制备初乳所需的半成品，所以制备方法(a)步骤和(b)步骤可以同时进行，可以不分先后顺序的进行。上述制备方法优选包括以下步骤
将乙交酯丙交酯共聚物溶于有机溶剂，制成所述乙交酯丙交酯共聚物浓度为10%-40% (W/V)的油相，其中有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或其组合物。将艾塞那肽、保护剂、助悬剂溶于水，形成艾塞那肽浓度为5%_50%(W/V)的内水相。
将内水相与所述油相混合形成初乳，并将该初乳加入到含有表面活性剂的外水相中形成复乳。所述的表面活性剂选自聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸钠、硬脂酸钠、吐温、或司盘中的一种或任意两种或两种以上的组合。优选的表面活性剂为聚乙烯醇，其浓度为0. 1%-5% (W/V)。待有机溶剂挥发后，得到包裹有艾塞那肽的缓释微球。本发明中内水相和油相的体积比、外水相和初乳的体积比均会影响到最终缓释微球制剂的粒径、载药量和药物的释放。发明人在研究过程中发现当内水相与油相的体积比大于1:5时虽然会提高微球的载药量，但药物的包封率会下降，造成药物的浪费；而当其体积比小于1:100时则会造成载药量的下降。当外水相与初乳的体积比小于20:1时会由于外水相的体积过小造成微球的固化缓慢，固化时间延长，大量的药物会进入水中，导致载药量下降；当其体积比大于2000:1时会由于外水相过大而使微球固化速度过快，影响微球的球形度和外观。因此本发明中所述的内水相与油相的体积比为1:5-1:100，外水相与初乳的体积比 20:1-2000:1。本发明中的初乳可以采用高速搅拌、高压均质或超声破碎等方式制备，只要能够保证初乳的粒径符合要求即可。所制备的初乳要存放在20°C以下的环境中以增加初乳的稳定性。


图1 实施例1所制备的艾塞那肽缓释微球制剂的体外累积释放曲线。图2 实施例2所制备的艾塞那肽缓释微球制剂的体外累积释放曲线。图3 实施例3所制备的艾塞那肽缓释微球制剂的体外累积释放曲线。
实施例实施例一
称取SOOmg艾塞那肽和300mg明胶溶于Iml注射用水中，作为内水相；称取6g乙交酯丙交酯共聚物溶于15ml的二氯甲烷中作为油相；将油相加入到内水相中，采用高速搅拌(23000rpm) 15秒，得初乳，存放在20°C以下的环境中；将此初乳在搅拌的状态下加入到 6000毫升0. 5% (W/V)的聚乙烯醇溶液得复乳，将此复乳持续搅拌3小时挥去二氯甲烷，离心、洗涤收集得到微球，微球粒径小于100微米。载药量为9. 8%，包封率为87. 0%。实施例二
称取200mg艾塞那肽、300mg羧甲基纤维素钠和IOOmg蔗糖溶于Iml注射用水中，作为内水相；称取12. 5g乙交酯丙交酯共聚物溶于50ml的二氯甲烷中作为油相；将油相加入到内水相中，采用高速搅拌(23000rpm)15秒，得初乳，存放在20°C以下的环境中；将此初乳在搅拌的状态下加入到6000毫升0. 5% (W/V)的聚乙烯醇溶液得复乳，将此复乳持续搅拌3 小时挥去二氯甲烷，离心、洗涤收集得到微球，微球粒径小于100微米。载药量为0. 5%，包封率 32. 7%ο实施例三
称取500mg艾塞那肽、300mg明胶和IOOmg甘露醇溶于2ml注射用水中，作为内水相；称取8g乙交酯丙交酯共聚物溶于80ml的二氯甲烷中作为油相；将油相加入到内水相中，采用超声波细胞破碎仪(Branson S-250D)进行超声30秒，得初乳，存放在20°C以下的环境中；将此初乳在搅拌的状态下加入到10000毫升1. 0% (w/ν)的聚乙烯醇溶液得复乳，将此复乳持续搅拌3小时挥去二氯甲烷，离心、洗涤收集得到微球，微球粒径小于50微米。载药量为 4. 2%ο包封率为74. 7%
实施例四
艾塞那肽缓释微球体外释放的测定
将上述实施例制备的艾塞那肽缓释微球制剂进行体外释放的测定，测定方法为精密称取含药微球50mg置于IOml具塞试管中，以pH为7. 4的磷酸盐缓冲液(含0. 02%叠氮化钠作为抑菌剂，0. 05%的吐温80为润湿剂)IOml为释放介质，置于恒温水浴摇床中，在振荡速度lOOrpm、温度37°C 士0. 5°C条件下进行微球的体外释放度测定。分别在ld、2d、4d、7d、 14d、21d、28d各取0. 5ml释放介质用于高效液相色谱法测定艾塞那肽的含量，并补充新鲜的释放介质。图1、2、3分别为实施例1、2、3所制备的艾塞那肽缓释微球制剂的体外累积释放曲线。由图1 3可以看出，本发明所制备的艾塞那肽缓释微球制剂具有良好的缓释效果，1天内的突释均小于25%。其缓释周期可以为一周，也可以为一个月。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
权利要求
1.一种艾塞那肽缓释微球制剂，其特征在于包含艾塞那肽和乙交酯丙交酯共聚物， 其质量百分比分别为艾塞那肽ο. 1%-12. 5%，乙交酯丙交酯共聚物77. 5%-99%。
2.根据权利要求1所述的艾塞那肽缓释微球制剂，其特征在于含有质量百分比为 0.1%-10%的保护剂，所述的护剂为人血清白蛋白、明胶、海藻糖、蔗糖、甘露醇中的一种或任意两种或两种以上的组合。
3.根据权利要求1或2任意一项所述的艾塞那肽缓释微球制剂，其特征在于含有质量百分比为0. 01%-10%的助悬剂，所述的助悬剂为西黄蓍胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、明胶、果胶、脱乙酰甲壳素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆、 聚维酮、聚乙烯醇中的一种或任意两种或两种以上的组合。
4.一种根据权利要求1-3任意一项所述的艾塞那肽缓释微球制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(a)将乙交酯丙交酯共聚物溶于有机溶剂，形成油相；其中有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或其组合；(b)将艾塞那肽、保护剂、助悬剂溶于水，形成内水相；(c)将内水相与所述油相混合形成初乳，并将该初乳加入到含有表面活性剂的外水相中形成复乳；所述的表面活性剂为聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸钠、硬脂酸钠、吐温、司盘中的一种或任意两种或两种以上的组合；(d)待有机溶剂挥发后，得到含有艾塞那肽的缓释微球。
5.根据权利要求4所述的艾塞那肽缓释微球制剂的制备方法，其特征在于 (a)步骤所述油相为乙交酯丙交酯共聚物浓度为10%-40% (W/V)的油相。
6.根据权利要求4所述的艾塞那肽缓释微球制剂的制备方法，其特征在于(b)步骤所述内水相为艾塞那肽浓度为5%-50% (W/V)的内水相。
7.根据权利要求5所述的艾塞那肽缓释微球制剂的制备方法，其特征在于(b)步骤所述内水相为艾塞那肽浓度为5%-50% (W/V)的内水相。
8.根据权利要求4至7任意一项所述的艾塞那肽缓释微球制剂的制备方法，其特征在于(c)步骤所述表面活性剂浓度为0. 1%-5% (W/V)。
9.根据权利要求4至7任意一项所述的艾塞那肽缓释微球制剂的制备方法，其特征在于内水相与油相的体积比为1:5-1:100。
10.根据权利要求4至7任意一项所述的艾塞那肽缓释微球制剂的制备方法，其特征在于外水相与初乳的体积比为20:1-2000:1。
全文摘要
本发明提供一种艾塞那肽缓释微球制剂及其制备方法，包含艾塞那肽和乙交酯丙交酯共聚物，其质量百分比分别为艾塞那肽0.1%-12.5%，乙交酯丙交酯共聚物77.5%-99%。所述制备方法包括以下步骤(a)将乙交酯丙交酯共聚物溶于有机溶剂，形成油相；其中有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或其组合；(b)将艾塞那肽、保护剂、助悬剂溶于水，形成内水相；(c)将内水相与所述油相混合形成初乳；(d)待有机溶剂挥发后，得到含有艾塞那肽的缓释微球。由于本发明处方组成合理，可以通过普通的缓释微球技术制备获得，该缓释微球的缓释周期可以实现长达7—35天。采用复乳法(W/O/W)制备艾塞那肽缓释微球会有更好的技术效果。
文档编号A61K38/22GK102198103SQ20111014253
公开日2011年9月28日 申请日期2011年5月30日 优先权日2011年5月30日
发明者袁建成, 陶安进, 马亚平 申请人:深圳翰宇药业股份有限公司