专利名称：一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别涉及一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位及其制备方法。
背景技术：
紫丹参为云南鼠尾草的干燥根及根茎，首载于《紫南本草》，其中记载“丹参味苦，性微寒。色赤象火，入心经。补心，生血，养心，定志，安神宁心，健忘怔忡，惊悸不寐，生新血，去瘀血，安生胎，落死胎。一味可抵四物之功”。后经考证，此记载“丹参”即为紫丹参，在大理民间特别是彝医常用于调经、活血、散瘀、镇静止痛，用于月经不调、风湿痹痛、子宫出血、吐血、乳腺炎等症。功用与丹参相仿，该品是云南长期作丹参药用的品种之一，已收载于1974年版和1996年版《云南省药品标准》。紫丹参中化学成分与丹参中相似，分为脂溶性和水溶性两部分，前者为丹参酮类，主要有丹参酮II A、丹参酮I、隐丹参酮、二氢丹参酮、 羟基丹参酮等等；后者主要为丹酚酸类，主要包括丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B等。从紫丹参的药理研究来看，其具有多方面的作用，例如，紫丹参能够增加冠脉血流、防止血栓形成、改善血液流变学、清除自由基、改善血管内皮功能等。目前，关于紫丹参的研究主要以复方制剂为主，关于紫丹参的提取方式，主要有水提醇沉、二氧化碳超临界萃取，但是水提取紫丹参，由于提取后需要浓缩大量水，需要加热减压去除大量水，比较消耗能源，污染环境；超临界二氧化碳萃取成本较高；紫丹参中水溶性成分为丹酚酸类，丹酚酸类样品不稳定，加热时间过长，容易引起降解；紫丹参中的化学成分为脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类，用水提取不到丹参酮，超临界二氧化碳萃取不能提取到丹酚酸，所以造成有效组分不能完全提取，浪费药材；药理研究表明，紫丹参药材中的有效组分有治疗冠心病的作用，可以单独用紫丹参来治疗疾病。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位，本发明的目的还在于提供该有效部位的制备方法，本发明的第三个目的在于提供其在制备治疗心血管疾病药物中的应用。本发明的目的是通过如下技术方案实现的本发明紫丹参有效部位的制备方法包括如下步骤A.将紫丹参用药用乙醇加热回流提取；B.合并两次乙醇提取液，浓缩，水沉，分离上清液与沉淀；C.水沉沉淀部分先用常规溶剂溶解，再用碳酸钠溶液进行萃取，分离有机相与水相，即得有效部位I，按照常规高效液相色谱法检测显示，有效部位I中主要为丹参酮；D.将步骤A中残留的药渣用水提取，将水提液与步骤B中水沉上清液合并；E.将合并液过大孔树脂柱，即得有效部位II，按照常规的亚硝酸钠-硝酸铝显色测定方法测定，有效部位II中总丹酚酸的含量不少于90% ；
F.将步骤C中的有效部位I与有效部位II合并即得。其中，所述步骤A中将紫丹参除去杂质，粉碎成粗粉，加入5 30重量倍的60% 100%的乙醇，加热回流提取O. 5 5小时，再用5 30重量倍的乙醇加热回流提取O. 5 5小时；优选加入10重量倍的95%的乙醇，加热回流提取I. 5小时，再用10重量倍的乙醇加热回流提取I. O小时；所述步骤B中合并两次乙醇提取液，浓缩至生药量的1/5 4/5，加入I 10重量倍的水进行水沉，水沉溶液的PH值为3 7，静置12 72小时，分离上清液与沉淀；优选浓缩至生药量的1/2，加入6重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为5，静置48小时，分离上清液与沉淀；所述步骤C中常规溶剂为正己烷、环己烷、乙酸乙酯、正庚烷、正戊烷、石油醚、甲基叔丁基醚、乙醚、二氯甲烷、甲苯、乙酯、四氢呋喃、甲酸乙酯、甲酸丁酯、乙酸丁酯中的一种或几种，优选为环己烷；所述步骤C中碳酸钠溶液的浓度为O. 2% 5%，优选碳酸钠溶液的浓度为O. 5% ;所述碳酸钠溶液可以用氢氧化钠、氨水、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钾或氢 氧化钙溶液替代；所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入I 10重量倍的水，提取O. 5 5小时，再用I 10重量倍的水提取O. 2 4小时，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合并；优选加入6重量倍的水，提取I小时，再用6重量倍的水提取O. 5小时；所述步骤E中将合并液调pH值为I 7先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用5% 50%的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用60% 100%乙醇洗脱，洗脱体积为2 10倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得；优选将合并液调pH值为2，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用10%的乙醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用80%乙醇洗脱，洗脱体积为4倍柱体积；所述大孔树脂柱为聚酰胺或苯乙烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号 D101-1、BS-II、DlOl、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-I、SP-825，优选型号为 LS-105 ；所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照O 8 O 8的比例合并即得，优选比例为I : 5。本发明紫丹参有效部位可以单独或与其他药物按任意比例配伍，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、丸剂、胶囊剂、口服液体制剂、注射剂等药学上可接受的各种剂型。药效学实验研究表明依照本发明制备方法得到的紫丹参有效部位在治疗心血管疾病方面具有较好的疗效。同时，本发明制备方法是经过严密的工艺筛选实验得到，能够有效提取紫丹参中的有效部位，节省药材，降低生产成本；减少了有效组分的损失；提取到的紫丹参有效部位纯度较高，避免不明成分引起的不良反应。下述实验例和实施例用于进一步证明但不限于本发明。实验例I :本发明紫丹参有效部位药效学实验I.紫丹参有效部位口服药效实验1.1紫丹参有效部位口服给药对冠脉结扎致大鼠心肌缺血的影响I. I. I实验材料实验药物
按实施例I方法制备A为药丹参酮累积部位、B为药丹酚酸累积部位、C为药其他部位、AB复方药为丹参酮和丹酚酸混合物。丹参舒心胶囊规格0. 3克/粒，批号20081004。成分丹参提取物，由河南辅仁堂制药有限公司生产。试剂聚乙二醇无色透明液体，分子量400，分析纯，汕头市光华化学厂生产。试验仪器BL_410生物机能试验系统成都泰盟科技有限责任公司生产并提供。I. I. 2:实验方法动物分组将SD大鼠随机分为10组，分别为阴性对照组，阳性对照药丹参舒心胶囊组，本发 明提取物 A 药大(0.44g/kg)、小(O. 22g/kg)剂量组，B 药大(0.48g/kg)、小(O. 24g/kg)剂量组，AB 复方药大(O. 73g/kg)、小(O. 37g/kg)剂量组，C 药大(4. 88g/kg)、小(2. 44g/kg)剂量组。A药配制A药大、小剂量组分别称取O. 44g、0. 22g A药，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为IOml的药液(聚乙二醇浓度为30% )，按lml/100g体重灌胃给药。B药配制B药大、小剂量组分别称取O. 48g、0. 24g B药，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为IOml的药液(聚乙二醇浓度为30% )，按lml/100g体重灌胃给药。C药配制C药大、小剂量组分别称取4. 88g、2. 44g C药，放入烧杯，加蒸馏水配成最终容积为IOml的药液，按lml/100g体重灌胃给药。AB药配制AB大剂量分别取A药O. 12g、B药O. 61g，放入烧杯，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为IOml的药液(聚乙二醇浓度为30% )，按IOOg体重/ml灌胃给药。AB小剂量分别取A药0. 06g，B药0. 31g，加蒸馏水和聚乙二醇。配成最终容积为IOml的药液(聚乙二醇浓度为30% )，按lml/100g体重灌胃给药。丹参舒心胶囊的配制丹参舒心胶囊每日人用量为1.8g，即0.03g/kg。折算成大鼠剂量为0. 162g/kg，10倍临床剂量为I. 62g/kg。配制方法称取I. 62g丹参舒心胶囊，配成IOml药液。按lml/100g体重灌胃给药。I. I. 3实验步骤大鼠按相应分组及剂量灌胃，阴性对照组给予30%聚乙二醇溶液，连续4天，每天一次，第4天末次给药后以10 %水合氯醛按0. 35ml/100g体重腹腔注射进行麻醉，背位固定，75%乙醇擦拭四肢，联接标准II导联心电图，调整BL-410生物机能试验系统参数，监测心电图。分别左右两侧颈总动脉及气管，并行左侧颈总动脉插管，通过压力转换器与BL-410生物机能试验系统连接，观察血压曲线，记录血压；行气管插管，连接呼吸机以保持呼吸通畅。呼吸比5 4;于第4肋间隙开胸，剪破心包膜，轻压挤出心脏，以冠状动脉主干为标志，左心耳根部下方2_冠状动脉左前降支根部穿线，备结扎用；行右侧颈总动脉插管，用BL-410生物机能实验系统，将一末端连接压力换能器的心导管插入左心室，导管内充满肝素。当动脉血压波形突然变宽大，且最小值接近O时，说明导管已进入左心室；结扎冠状动脉左前降支，观察心电图判断有无心肌缺血的发生。若无心电的改变，则再穿线结扎(假手术组动物只穿线，不结扎)，记录结扎前后心率，动脉血压(收缩压SBP、舒张压DBP}、左心室内压(左室收缩压LVSP、左室舒张末压LVDP、左室舒张末压(LVEDP)和左室内压最大上升和下降速率(土dp/dtmax)等；结扎后记录上述指标时间分别为结扎后3min、5min、lOmin、15min、30min、60mino
1.1.4实验数据实验结果以平均值土标准差(^ 士 s )表示，采用SPSS13. O统计软件进行组间t检验，检验水准α =0.05。本发明紫丹参有效部位口服对心肌缺血大鼠心率(HR)的影响见表I
权利要求
1.一种治疗心血管疾病的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤 A.将紫丹參用药用こ醇加热回流提取； B.合并两次こ醇提取液，浓缩，水沉，分离上清液与沉淀； C.水沉沉淀部分先用常规溶剂溶解，再用碳酸钠溶液进行萃取，分离有机相与水相，即得有效部位I ; D.将步骤A中残留的药渣用水提取，将水提液与步骤B中水沉上清液合并； E.将合并液过大孔树脂柱，即得有效部位II； F.将步骤C中的有效部位I与有效部位II合并即得。
2.如权利要求I所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤A中将紫丹參除去杂质，粉碎成粗粉，加入5 30重量倍的60% 100%的こ醇，加热回流提取0.5 5小时，再用5 30重量倍的こ醇加热回流提取0. 5 5小吋。
3.如权利要求2所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤A中将紫丹參除去杂质，粉碎成粗粉，加入10重量倍的95%こ醇，加热回流提取I. 5小时，再用10重量倍的95%こ醇加热回流提取I. 0小吋。
4.如权利要求1-3任一所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤B中合并两次こ醇提取液，浓缩至生药量的1/5 4/5，加入I 10重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为3 7，静置12 72小吋，分离上清液与沉淀。
5.如权利要求4所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤B中合并两次こ醇提取液，浓缩至生药量的1/2，加入6重量倍的水进行水沉，水沉溶液的pH值为5，静置48小时，分离上清液与沉淀。
6.如权利要求1-5任一所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤C中常规溶剂为正己烷、环己烷、こ酸こ酷、正庚烷、正戊烷、石油醚、甲基叔丁基醚、こ醚、ニ氯甲烷、甲苯、こ酷、四氢呋喃、甲酸こ酷、甲酸丁酷、こ酸丁酯中的ー种或几种。
7.如权利要求6所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法中所述步骤C中常规溶剂为环己烷。
8.如权利要求1-7任一所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤C中碳酸钠溶液的浓度为0. 2% 5%。
9.如权利要求8所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法中所述步骤C中碳酸钠溶液的浓度为0. 5%。
10.如权利要求1-9任一所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤C中碳酸钠溶液可以用氢氧化钠、氨水、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钾或氢氧化钙溶液替代。
11.如权利要求1-10任一所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入I 10重量倍的水，提取0. 5 5小时，再用I 10重量倍的水提取0. 2 4小时，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合井。
12.如权利要求11所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤D中将步骤A中残留的药渣加入6重量倍的水，提取I小时，再用6重量倍的水提取0. 5小吋，将两次水提液与步骤B中水沉上清液合井。
13.如权利要求1-12任一所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中将合并液调pH值为I 7先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用5% 50%的こ醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用60% 100%こ醇洗脱，洗脱体积为2 10倍柱体积，浓缩样品，干燥，即得。
14.如权利要求13所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中将合并液调PH值为2，先用水洗脱至Molish反应显阴性为止，再用10 %的こ醇洗脱至三氯化铁试验反应为阳性，再用80%こ醇洗脱，洗脱体积为4倍柱体积，浓缩样品，干燥，SP得。
15.如权利要求1-14任一所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为聚酰胺或苯こ烯类大孔树脂柱，包括但不限于型号D101-1、BS-IUD101、HPD-100、HPD-450、LS-105、LS-300、ME-l、SP-825。
16.如权利要求15所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤E中大孔树脂柱为LS-105。
17.如权利要求1-16任一所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照0 8 0 8的比例合并即得。
18.如权利要求17所述的紫丹參有效部位的制备方法，其特征在于该方法所述步骤F中有效部位I与有效部位II按照I : 5的比例合并即得。
19.如权利要求1-18任一所述的方法制备得到的紫丹參有效部位。
20.如权利要求19所述的紫丹參有效部位在制备治疗心血管疾病药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种治疗心血管疾病的紫丹参有效部位及其制备方法，药效学实验研究表明依照本发明制备方法得到的紫丹参有效部位在治疗心血管疾病方面具有较好的疗效。同时，本发明制备方法是经过严密的工艺筛选实验得到，能够有效提取紫丹参中的有效部位，节省药材，降低生产成本；减少了有效组分的损失；提取到的紫丹参有效部位纯度较高，避免不明成分引起的不良反应。
文档编号A61P9/10GK102846705SQ201110176308
公开日2013年1月2日 申请日期2011年6月28日 优先权日2011年6月28日
发明者禹玉洪, 任武贤, 段秀梅 申请人:亚宝药业集团股份有限公司