专利名称：大承气汤在制备神经修复剂中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物组合物的新用途。
背景技术：
现代研究证实，肠神经系统(enteric nervous system，ENS)是一个不依赖于中枢神经系统而具有高度自主性的完整外周神经环路。由胃肠道壁内大量的神经节和神经元细胞，以及节间神经纤维和神经递质所组成。完整连续地分布在食管下端至肛管内括约肌。 解剖学研究发现，ENS主要由肌间神经丛和黏膜下神经丛两部分构成。肌间神经丛解剖形态较黏膜下神经丛体积大，分布在环纵层肌之间，含有大量可以调节胃肠平滑肌运动和临近器官分泌的神经元；黏膜下神经丛较肌间神经丛体积小很多，神经节和神经丛内包含的神经元也较少，并且神经节之间的连接也很细微。黏膜下神经丛含有感觉神经元，可以接收肌间神经丛神经元的传入信号，同时还可以刺激胃肠上皮中的隐窝细胞的分泌功能。ENS不同于其它的外周神经系统，它具有相对的独立性，可以在一定程度上不依赖于大脑和脊髓而调控消化系统平滑肌(包括胃肠平滑肌和血管平滑肌)和腺体的活动，从而控制胃肠道的运动，分泌和血流。ENS的相对独立性主要是由于在消化系统的壁内存在着一个由大量功能特性不相同的神经元亚型细胞所成的局部环路，它可以感知胃肠道腔内和壁内的生理状态，并可以对传入的神经信号加之处理，即具有类似于大脑和脊髓的处理信息的功能，从而自主地调节胃肠道的生理功能。因此，ENS又被称为“腹脑”或“第二脑”。多器官功能障碍综合征(MODS)是在严重感染、创伤和大手术等原发病的基础上， 同时或序惯发生地两个或两个以上的器官或系统的功能障碍，其发病急，进展快，是腹部外科患者死亡的重要原因。目前已有研究表明，胃肠道是MODS的始发部位和重要的靶器官。 胃肠道是人体最大的储菌库。在机体受到严重打击的情况下，胃肠运动功能和粘膜屏障受损，胃肠道内的细菌移位，发生菌血症或败血症，从而导致多个器官功能障碍甚至衰竭。胃肠运动的恢复可以有效的减轻粘膜屏障的损伤，抑制全身的炎症反应，从而降低MODS患者的病死率。因此，胃肠动力的恢复已经成为判断MODS患者预后的重要指标。ENS主要是通过位于黏膜下和肌间的兴奋性和抑制性神经元来调节胃肠的运动。 其中兴奋性神经递质主要包括乙酰胆碱(Ach)，P物质(SP)，对胃肠运动功能尤为重要。胆碱能神经元被认为是ENS中数量最多的，大量分布于肠肌层间，属于兴奋性神经，可以刺激胃肠道的蠕动和吸收功能。SP神经元主要存在于肌层神经丛内，通过发出的突起延伸到胃肠壁的各层。SP可以抑制胃肠道消化液的分泌，促进胃肠蠕动。研究发现，很多胃肠运动障碍性疾病与乙酰胆碱和P物质等兴奋性神经的受损密切相关，修复乙酰胆碱和P物质兴奋性神经损伤可有效治疗胃肠运动障碍性疾病。开发乙酰胆碱和P物质兴奋性神经的修复剖是当前胃肠病学领域的重要课题。通里攻下法为中医学八大治则之一，常用于疏通脏腑，增强肠蠕动，恢复肠功能。 大承气汤始见于汉代张仲景《伤寒论》及《金匱要略》，为通里攻下法中寒下法的代表方剂， 其荡涤脏腑，泻热除满等作用早已为古今医学临床实践所证实。大承气汤由大黄、芒硝、枳实、厚朴组成。大黄苦寒泻热，通便去实，荡涤肠胃实热，为君药；芒硝咸寒，软坚润燥，助大黄泻热通便，为臣药，二药相须为用。大黄推荡下行，芒硝软化燥屎，可将胃肠实热积滞一鼓荡涤而下。厚朴宽肠行气、化滞除满，枳实下气消痞，二药调协气机，共为佐使。临床上用于梗阻性疾病、腹膜炎和血运障碍性腹部疾病，已经取得一定的效果。但尚无大承气汤修复肠运动胆碱能神经和SP神经损伤的报告。
发明内容
本申请的目的在于提供大承气汤的一种新用途，即大承气汤在制备神经修复剂中的应用。其中所述的神经是肠运动胆碱能神经和/或SP神经。其中所述的修复剂优选口服制剂。以方便使用。现有技术中已有制备成颗粒冲剂的大承气汤，如本发明所使用的大承气汤冲剂(扬子江药业公司，按重量份由大黄12、芒硝 9、枳实9、厚朴9组成)。可方便地用于本发明所述及的目的。经证明，大承气汤可以有效地抑制MODS状态下Ach和SP神经的损伤。是胃肠运动Ach和SP神经很好的修复剂。
本发明附图2幅，其中图1是大鼠小肠肌间神经丛Ach阳性神经纤维结构(红色)，A为对照组；B为MODS 组；C为DCQT组。图2是大鼠小肠肌间神经丛SP阳性神经纤维结构(红色)，A为对照组；B为MODS 组；C为DCQT组。
具体实施例方式下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。本实施例所使用的大承气汤购自扬子江药业公司。实施例(1)分组与造模健康成年清洁级Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重200g 250g。 将大鼠按照随机数字表法分为对照组10只，MODS组20只，大承气汤(DCQT)治疗组20只。 无菌条件下，对照组每只大鼠腹腔注射Iml生理盐水；MODS组和DCQT组每只大鼠腹腔注射 Iml含有10% BaSO4佐剂的E. coloi X 108cfu/ml混悬液，建立细菌性腹膜炎致MODS模型。 DCQT组于造模前2日给予大承气汤灌胃，2次/日，每次lml/100g。(2)制备小肠肌层全厚标本模型建立M小时后，取各组存活大鼠脱颈处死，迅速取出距幽门2cm的上段小肠。沿小肠系膜剖开并去除内容物，将小肠组织切成Icm2大小片段放于4%多聚甲醛液中固定，4°C冰箱内存放过夜。解剖显微镜下，用显微解剖镊剥离黏膜和黏膜下层，再撕除环肌层，得到纵肌层及附于其上的肌间神经丛。(3)免疫荧光染色①PBS漂洗标本后，置于含0.5% TritonX-100的0.05mol/ ITris-HCl缓冲液中孵育4小时；②BSA室温下封闭非特异性抗体1小时；③分别滴加羊抗大鼠VAChT、VIP和SP多克隆抗体，或兔抗大鼠nNOS多克隆抗体，4°C孵育过夜；④PBSCN 102406738 A说明书3/4 页
漂洗后，滴加iTexas Red小鼠抗山羊IgG抗体或FITC驴抗兔IgG抗体，避光室温孵育2小时；⑤PBS中4°C避光过夜；⑥PBS漂洗后，荧光封片剂封片；⑦阴性对照在步骤③中不加一抗，只加抗体稀释液，其余操作步骤同上。(4)图像采集与分析用TCS-SP2激光扫描共聚焦显微镜观测并采集图像。分别以484nm和595nm激发FITC和Texas Red。VAChT、VIP、SP阳性荧光为红色，nNOS阳性荧光为绿色。每组取5个标本检测，每个标本随机选取2个视野，用Leica图像分析软件进行图像的三维重建，用Image-Pro Plus 6. 0进行荧光半定量分析。小肠肌层神经丛ACh阳性神经纤维样品和小肠肌间神经丛SP阳性神经纤维样品的显微镜照片分别如图1和图2所示。(5)统计学处理实验数据应用统计学软件SPSS 13. 0进行分析。计数数据比较采用均数士标准差士S)表示，采用两组独立样本的t检验，计量数据采用卡方(X2)检验，P < 0. 01表示差异有统计学意义。小肠肌层神经丛ACh阳性神经纤维样品和小肠肌间神经丛SP阳性神经纤维样品的检测统计结果分别如表1和表2所示表权利要求
1.大承气汤在制备神经修复剂中的应用。
2.权利要求1所述的大承气汤在制备神经修复剂中的应用，其特征在于所述的神经是肠运动胆碱能神经和/或SP神经。
3.权利要求1或2所述的大承气汤在制备神经修复剂中的应用，其特征在于所述的修复剂是口服制剂。
全文摘要
本发明公开大承气汤在制备神经修复剂中的应用。尤其是作为肠运动胆碱能神经和/或SP神经修复剂中的应用。经证明，大承气汤可以有效地抑制MODS状态下Ach和SP神经的损伤。是胃肠运动Ach和SP神经很好的修复剂。
文档编号A61K36/75GK102406738SQ20111039628
公开日2012年4月11日 申请日期2011年12月2日 优先权日2011年12月2日
发明者谢明征, 齐清会 申请人:大连医科大学附属第一医院