专利名称：免疫球蛋白制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及脯氨酸(并且特别是L-脯氨酸)用于降低蛋白质制剂粘度的用途，优选是免疫球蛋白(Ig)制剂，更优选包含至少18%质量-体积百分比Ig的Ig制剂。本发明进一步涉及包含至少18%质量-体积百分比Ig的Ig制剂的制备方法,涉及通过所述方法可获得的Ig制剂和所述Ig制剂用于制备皮下给药于人的药物的用途。
背景技术：
原发性免疫缺陷(PID)病，如普通易变型免疫缺陷(CVID)和X-连锁丙种球 蛋白缺乏症，使病人易于复发感染。这些病人需要免疫球蛋白(Ig)替代治疗，这可以通过静脉内(IVIg)或皮下(SCIg)来给药。使用IVIg或SCIg的免疫球蛋白治疗在其他病症的治疗中显示出也是有用的，例如，在炎症和自体免疫病症以及特定的神经失调的治疗中。如果通过更常见的静脉内途径给药，产生了血清免疫球蛋白水平的急剧升高，在接下来的48小时内，这随着Ig重新分配至血管外空间内而降低，并且随后在重复静脉内给药之前的大约三周内，以一级动力学下降。许多病人报告了感觉在给药间隔最后一周的过程中“逐渐减弱”，特别是不舒服、疲劳、关节痛、肌痛或对感染提高的敏感性。鉴于静脉内Ig给药的缺陷，通过皮下途径的Ig给药在近年来变得日益普遍起来。该方法不需要静脉入口，仅与很少的全身性副作用相关，并且已经报道了能提高病人的生活质量。Ig制剂(并且特别是用于皮下给药的Ig制剂)配制中的主要挑战之一在于如果没有使用合适的添加剂充分稳定，溶解于水溶液中的Ig易于聚集并且形成沉淀的事实。有时将碳水化合物用作稳定剂；然而，提高碳水化合物的浓度与差的耐受性相关，特别是在肾功能受损病人(例如，糖尿病病人)的治疗中。关于单体Ig的稳定，通过使用碱性或非极性氨基酸作为稳定剂已经获得了特别良好的结果。例如，如W02005/049078中所公开的，已经发现碱性或非极性氨基酸的添加和最终制剂的PH的调节显著降低了聚集物的形成，并且因此提高了那些制剂的稳定性，特别是在室温下。对于特定适应症的Ig-治疗，使用皮下途径时，需要给药相对大体积的Ig制剂。使用目前可用的高达16% (160g/l)的Ig制剂，组织对于接受大体积灌输的Ig制剂的无能快速呈现出对于皮下给药的限制。因此，通过皮下途径接受Ig的病人需要在多个部位相对频繁的相对小体积的给药。一些病人和医师认为多个部位和频繁的皮下灌输因为太繁重，因此拒绝或不推荐SCIg治疗。鉴于此，具有较高Ig浓度的Ig制剂因此是理想的。然而，Ig浓度的提高伴随着粘度的非线性提高，这快速呈现出对于使用常规方法的皮下给药的限制。特别地，高粘度Ig制剂产生高背压并且因此损害灌输泵的正确灌输。特别地，可以预期与较低浓度制剂相比给药持续时间会延长。这因此可能导致皮下途径接受性的降低。还是关于制造方法，高粘度Ig制剂的操作相对麻烦。
发明内容
因此本发明的目的是提供一种用于降低蛋白质制剂粘度，特别是降低Ig制剂的粘度，并且更特别是降低具有高Ig浓度的Ig制剂的粘度的简单方法。本发明进一步的目的是提供高度浓缩的Ig制剂，其适用于皮下给药并且通过至少维持目前可用的Ig制剂的功效而允许以快速且简单的方式进行较小剂量的给药。根据独立权利要求的主题解决了该问题。从属权利要求中限定了优选实施方案。根据第一个方面，本发明因此涉及脯氨酸用于降低蛋白质制剂粘度，优选Ig制剂的用途。
本发明内容中所用的术语“粘度”意思是动态粘度。动态粘度的SI物理单位是毫帕斯卡秒(mPa · S)。例如，根据 -Iilppler，根据欧洲药典版本6. O的2. 2. 49和DIN53015的要求，可以通过落球粘度计(“Kugelfallviskosimeter”)来测定粘度。由此，测定球或球体在限定尺寸并具有限定斜率的管子或毛细管中的滚动时间。基于滚动时间，可以确定管子或毛细管中的液体的粘度。本申请文中给出的值已经使用AMV200型微粘度计(Anton Paar GmbH,Graz，奥地利)通过以上原则进行了测定。测量在20. (TC +/-0. 1°C的温度下进行。本发明的发明人令人惊讶地发现了通过添加脯氨酸，并且特别是L-脯氨酸，可以获得相对低粘度的Ig制剂，即使Ig浓度高。对于其他蛋白质制剂，可以获得相同效果，例如，用于白蛋白制剂。已经报道了脯氨酸对蛋白质制剂具有稳定作用，然而，迄今为止没有考虑过其降低蛋白质制剂，并且特别是Ig制剂粘度的作用。因此，脯氨酸的存在具有双重有益作用，一方面，稳定Ig，并且因此使得可以获得在相对长的时间段内具有非常高稳定性的制剂，而另一方面，提供低粘度，因此使得可以以快速且简单的方式来给药制剂。如所述的，降低粘度的作用对于具有高Ig浓度的Ig制剂，尤其是具有至少15%质量-体积百分比的Ig制剂特别相关。在优选的实施方案中，本发明涉及的Ig制剂中所含的Ig基本上由IgG组成。在本发明的其他优选实施方案中，Ig制剂中所含的Ig基本上由IgA或基本上由IgM组成。在本发明的意思中，15%的质量-体积百分比意思是150g/升。根据第二个方面，本发明还涉及用于制备含有至少18%质量-体积百分比免疫球蛋白的免疫球蛋白制剂的方法，其中所述方法包括加入脯氨酸来降低制剂粘度的步骤。因此，可以以非常简单且直接的方法来获得具有高Ig浓度并且同时具有相对低粘度的Ig制剂。根据本发明方法的特别优选的实施方案，将制剂浓缩至至少18%质量-体积百分比的免疫球蛋白之前，以低于15%，优选低于14%，更优选低于13%，并且最最优选低于12%质量-体积百分比的免疫球蛋白加入脯氨酸。与Ig制剂配制的常规方法相反，在最终浓缩步骤之前加入稳定剂(在这种情况下，为脯氨酸)。因此，浓缩产品中的蛋白质较少地接受应激条件(例如，剪切力)，而如果在浓缩步骤后加入稳定剂，则会出现这种情况。因此根据该实施方案的方法可以非常温和地处理产品。如上所示，本发明方法中所用的脯氨酸优选是L-脯氨酸。根据本发明方法进一步优选的实施方案，添加的脯氨酸的含量使得免疫求蛋白质制剂中的脯氨酸浓度范围为约10至约1000mmol/l,更优选约100至约500mmol/l,并且最优选约 250mmol/l。根据该方法特别优选的实施方案，制备了包含18 %至低于20%质量-体积百分比Ig的Ig制剂，由此以使得粘度低于13mPa · s,优选低于IlmPa · s,更优选低于IOmPa · s,并且最优选低于9mPa · s的含量加入脯氨酸。根据可替换的特别优选的实施方案，制备了包含至少20%质量-体积百分比Ig的Ig制剂，其中以使得粘度低于19mPa · s,优选低于17mPa · s,更优选低于15mPa · s,并且最优选低于13mPa · s的含量加入脯氨酸。从本发明的教导中已经得知，本领域技术人员容易认识到怎样选择代表性的脯氨酸含量，以获得目标粘度。根据第三个方面，本发明涉及通过以上方法可获得的Ig制剂。特别地，本发明因此涉及包含18%至20%质量-体积百分比Ig的Ig制剂，其中所述制剂包含其含量使得粘度低于13mPa · s的脯氨酸，优选低于IlmPa · S，更优选低于IOmPa · s,并且最优选低于9mPa · S。更特别地,本发明涉及包含18%至19%质量-体积百分比Ig的Ig制齐LI，其中所述制剂包含其含量使得粘度低于12mPa · s，优选低于IlmPa · s的脯氨酸，并且涉及包含超过19%至低于20%质量-体积百分比Ig的Ig制剂，其中所述制剂包含其含量使得粘度低于15mPa · s,优选低于13mPa · s的脯氨酸。或者，本发明还涉及包含至少20%质量-体积百分比Ig的Ig制剂，其中所述制剂包含其含量使得粘度低于19mPa · s,优选低于17mPa · s,更优选低于15mPa · s,并且最优选低于13mPa · s的脯氨酸。更特别地，本发明涉及包含超过20%并且至多22%质量-体积百分比Ig的Ig制剂，其中所述制剂包含其含量使得粘度低于19mPa · s，优选低于17mPa · s，更优选低于14mPa · s,并且最优选低于12mPa · s的脯氨酸,并且涉及包含超过22%质量-体积百分比Ig的Ig制剂，其中所述制剂包含其含量使得粘度低于27mPa · s，优选低于20mPa · s的脯氨酸。除了以上限定的Ig制剂，根据本发明通过使用脯氨酸可以获得以下Ig制剂包含超过16%并且至多17%质量-体积百分比Ig的Ig制剂，其中所述制剂包含其含量使得粘度低于8mPa · s,优选低于7mPa · s,更优选低于6mPa · s的脯氨酸,和包含超过17%并且低于18%质量-体积百分比Ig的Ig制剂，其中所述制剂包含其含量使得粘度低于IOmPa · s,优选低于9mPa · s,更优选低于8mPa · s的脯氨酸。对于以上所述的目的，特别优选高度浓缩的Ig制剂，特别是包含约20%质量-体积百分比Ig的Ig制剂。这样高度浓缩的Ig制剂优选用于皮下给药于病人，非限制性实例为用于PID或CVID的治疗。优选，如上所述，本发明的Ig制剂中所含的Ig基本上由IgG组成，但并不限于此。在本发明制剂的其他优选实施方案中，Ig基本上由IgA或基本上由IgM组成。
已知Ig的高浓度，因此与常规可获得的具有较低Ig浓度的制剂相比，本发明使得可以将较小体积的制剂给药于病人，同时保持功效。尽管相对高的Ig浓度，但由于低粘度，本发明可以以快速且简单的方式来给药制齐U。特别地，目前用于较低浓度的常规Ig制剂的常规方法可以用于皮下给药。由于其低粘度，因此，例如，本发明的Ig制剂可以通过从注射器直接手动推注来给药。使用简单装置(如常规注射器)的可能性提高了皮下给药的接受性，并且最终降低了治疗方案的成本。除了非常低的粘度以外，存储在室温下时，本发明的Ig制剂具有非常高的至少24个月的存储稳定性。与必须冷藏保存的其他制剂相比，这种室温稳定性给患有例如PID或 CVID的病人提供了提高的给药适应性和方便性。如上所示，脯氨酸优选是L-脯氨酸。L-脯氨酸通常存在于人体中，并且具有非常有利的毒性特征。在重复剂量的毒性研究、再现毒性研究、诱变研究和安全性药理研究中研究了 L-脯氨酸的安全性，并且注意到没有副作用。如上所示，Ig制剂优选包含浓度范围为约10至约lOOOmmol，优选约10至约500mmol/l,更优选约100至约500mmol/l,并且最优选约250mmol/l的脯氨酸,并且特别是L-脯氨酸。以该浓度范围使用的L-脯氨酸在制剂给药后快速清除，没有任何蓄积。因为通过脯氨酸，并且特别是L-脯氨酸的存在，获得了充分的稳定，因此可以避免作为稳定剂的碳水化合物的加入。根据本发明的优选实施方案，因此制剂基本上不含碳水化合物，这对耐受性具有有益作用。根据进一步优选的实施方案，Ig制剂具有4. 2至5. 4，优选4. 6至5. 0，最优选约4. 8的pH，这进一步有助于制剂的高稳定性。如以上已经描述的，本发明的一个方面是单试剂用于降低免疫球蛋白制剂的粘度并且提高稳定性的用途，其中单试剂是脯氨酸，优选L-脯氨酸。优选，添加的脯氨酸量使得免疫球蛋白制剂中的脯氨酸浓度范围为10至lOOOmmol/Ι，更优选10至500mmol/l，再更优选 100 至 500mmol/l,最优选约 250mmol/l。优选，免疫球蛋白制剂包含至少18%，更优选至少19%，最优选至少20%质量-体积百分比的免疫球蛋白。优选，免疫球蛋白制剂的免疫球蛋白基本上是纯的IgG。或者，免疫球蛋白制剂的免疫球蛋白基本上是纯的IgA或基本上是纯的IgM。如以上所给出的，如果将Ig制剂用于皮下给药于人，本发明的优点特别明显。因此，本发明还涉及Ig制剂用于制备皮下给药于人的药物的用途。例如，如S. Misbah等，Clinical and Experimental Immunology, 158 (增补 I) ;ρρ· 51-59 所报道的，制剂的皮下给药存在许多优于静脉内给药的优点。特别地，不需要静脉入口，并且减少了对皮质类固醇和抗-组胺的术前用药的需求。此外，使用皮下途径时，使用每月一次的IVIg灌输通常能看到的显著峰得到抑制，并且获得持续升高的Ig水平，导致全身性的副作用降低。由于本发明的Ig制剂的低粘度，可以以非常快速且简单的方式来进行给药，特别是如上所述的通过从注射器的直接手动推注。因此，本发明使得许多病人可以在家中自己给药Ig制剂，最终导致更好的方便性，更好的生活质量和更少的工作缺席。特别地，本发明使得制剂可以通过上述S. Misbah等综述文章中的较低浓度Ig制剂(包含16%质量-体积百分比Ig的Vivaglobin )内容中所述的“快速推注(rapidpush)”技术来给药。根据所述技术，使用注射器和23-25规格的蝶形针，在皮肤下推注SCIg，使用尽可能快的病人舒服的速度(通常I至2cc/min)。因此，通过所述技术的给药通常只需要5至20分钟。以下给出了本发明IgG制剂制备方法的特定的、非限制性实例。
具体实施方案实施例制备IgG制剂的方法I.血浆集合从获自大量(>1000)捐献者的集合的人血浆分离IgG。从该悬浮液开始，进行了以下步骤a)使用乙醇沉淀人血浆，以获得沉淀物和上清液；b)将重悬浮的依据a)获得的沉淀物接受辛酸分级，接着过滤和渗滤；c)将依据b)获得的滤液在约4的pH下孵育，接着过滤；d)将依据c)获得的滤液接受阴离子交换色谱，以获得包含Ig的洗脱液，所述Ig包含纯度超过96%的IgG ;e)将依据d)获得的洗脱液接受纳米过滤，以获得基本上不含病毒的滤液；f )将依据e)获得的滤液接受渗滤和超滤，以获得具有约12%质量-体积百分比IgG的滤液；g)将脯氨酸，并且特别是L-脯氨酸，加入依据f )获得的滤液中；h)将包含脯氨酸的滤液浓缩，以获得具有约20%质量-体积浓度IgG的IgG制剂；和i)将聚山梨酸酯80加入IgG制剂中。表I中给出了最终制剂中的组分及其代表性含量。还给出了选定的物理化学参数的值以及最终Ig制剂的纯度。表I :
组合物
组分目标值
蛋白质200g,_l
L-脯氨酸*250 mmciI/L (28.8 g/L)
聚山梨酸酯8(Γ微量
钠_<10 mmoi/L_、物理化学特性_
参数_爾标值_
权利要求
1.脯氨酸用于降低蛋白质制剂粘度的用途。
2.根据权利要求I的用途，用于降低免疫球蛋白制剂的粘度。
3.根据权利要求2的用途，其中免疫球蛋白制剂包含至少18%，更优选至少19%，最优选至少20%质量-体积百分比的免疫球蛋白。
4.根据权利要求I至3任一项的用途，其中脯氨酸是L-脯氨酸。
5.一种用于制备包含至少18%质量-体积百分比免疫球蛋白的免疫球蛋白制剂的方法，其中所述方法包括加入脯氨酸来降低制剂粘度的步骤。
6.根据权利要求5的方法，其中在将免疫球蛋白制剂浓缩至至少18%质量体积百分比的免疫球蛋白之前，以低于15%质量-体积百分比的免疫球蛋白加入脯氨酸。
7.根据权利要求5或6的方法，其中脯氨酸是L-脯氨酸。
8.根据权利要求5至7任一项的方法，其中免疫球蛋白制剂的免疫球蛋白基本上由IgG组成。
9.根据权利要求5至8任一项的方法，其中脯氨酸的加入量使得免疫球蛋白制剂中的脯氨酸浓度范围为10至1000mmol/l,优选10至500mmol/l,更优选100至500mmol/l,并且最优选约250mmol/l。
10.根据权利要求5至9任一项的方法,用于制备包含18%至低于20%质量-体积百分比免疫球蛋白的免疫球蛋白制剂，其中脯氨酸的加入量使得粘度低于13mPa s，优选低于IlmPa s,更优选低于IOmPa s,并且最优选低于9mPa S。
11.根据权利要求5至9任一项的方法,用于制备包含至少20%质量-体积百分比免疫球蛋白的免疫球蛋白制剂，其中脯氨酸的加入量使得粘度低于19mPa* s，优选低于17mPa s,更优选低于15mPa s,并且最优选低于13mPa S。
12.通过权利要求5至11任一项的方法可获得的免疫球蛋白制剂。
13.根据权利要求12的免疫球蛋白制剂，其包含18%至低于20%质量-体积百分比的免疫球蛋白，其中所述制剂包含的脯氨酸含量使得粘度低于13mPa s,优选低于IlmPa s,更优选低于IOmPa s,并且最优选低于9mPa S。
14.根据权利要求12的免疫球蛋白制剂，其包含至少20%质量-体积百分比的免疫球蛋白，其中所述制剂包含的脯氨酸含量使得粘度低于19mPa s,优选低于17mPa s,更优选低于15mPa s,并且最优选低于13mPa S。
15.根据权利要求14的免疫球蛋白制剂，其包含约20%质量-体积百分比的免疫球蛋白。
16.根据权利要求12至15任一项的免疫球蛋白制剂，其中该制剂具有4.2至5. 4，优选4. 6至5. 0,并且最优选约4. 8的pH。
17.根据权利要求12至16任一项的免疫球蛋白制剂，其中该制剂基本上不含碳水化合物。
18.根据权利要求12至17任一项的免疫球蛋白制剂，用于皮下给药于人。
19.根据权利要求18的免疫球蛋白制剂，用于通过从注射器直接手动推注来皮下给药。
20.单试剂用于降低免疫球蛋白制剂的粘度和提高稳定性的用途，其中单试剂是脯氨酸，优选L-脯氨酸。
全文摘要
本发明涉及脯氨酸用于降低蛋白质制剂粘度的用途。
文档编号A61K47/18GK102753197SQ201180008195
公开日2012年10月24日 申请日期2011年2月3日 优先权日2010年2月4日
发明者P·勒希, R·F·玻利, W·梅德 申请人:瑞士杰特贝林生物制品有限公司