专利名称：丹参与三七不同提取部位及其组合抑制平滑肌细胞增生和防治冠状动脉术后再狭窄的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及丹参三七超声、热回流提取，提取物经SP825大孔树脂进行醇水梯度洗脱的方法，以及50%洗脱部位、95%洗脱部位、50% +95%组合、50% +80% +95%组合及其单体组合等在抑制平滑肌细胞增生和预防冠状动脉扩张成形术(PTCA)术后再狭窄的用途。
背景技术：
三七为五加科多年生草本植物三七[Panax Notoginseng (Burk.)F.H.Chen]的根，具有活血化淤、消肿定痛的功效，皂苷类是其主要有效成分，如人参皂苷Rbl、Rgl。三七主要含有多种与人参皂苷类似的成分，如人参皂苷Rbl，Rd, Rgl，三七皂苷Rl，R2等皂苷类成分，总皂苷为其主要有效成分。近年来，国内对其化学和药理进行了广泛的研究，证实三七总皂苷(PNS)具有实验性治疗心肌缺血、心律失常，降低动脉血压，抗衰老及改善物质代谢；对中枢神经有抑制和镇痛作用。丹参为唇形科植物丹参[Slauia miltiorrhiza Bunge]的干燥根及根莖。具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦之功。现代中药药理学研究表明，丹参能够增加冠状动脉血流量、降血脂、抑制血栓形成或抗血栓、改善微循环作用。心血管疾病严重威胁着人类的健康，是全球范围内造成死亡人数最多的疾病。根据世界卫生组织统计2004年约有1710万人死于心血管疾病，占全球死亡人数的29%。其中约有720万人死于冠心病。冠心病(coronary artery heart disease),简称CHD,是一种最常见的心脏病，是指因冠状 动脉狭窄、供血不足而引起的心肌机能障碍和(或)器质性病变，故又称缺血性心脏病(IHD)。症状表现胸腔中央发生一种压榨性的疼痛，并可迁延至颈、颌、手臂、后背及胃部。发作的其他可能症状有眩晕、气促、出汗、寒颤、恶心及昏厥。严重患者可能因为心力衰竭而死亡。2009年中国卫生部第四次国家卫生服务调查显示，心脏病、脑血管病和高血压等循环系统疾病明显增加，总病例数达到1.14亿，其中脑血管病患者从500万增长到1300万，高血压患者从1400万增长到7300万，而从2009至2025年中国65岁以上老年人口占总人口比例将从7%上升到12%，中国循环系统疾病未来前景极其严峻，势必构成医疗支出的巨大负担。根据最新出版的《中国心血管病报告2008-2009》数据显示:中国心血管病(冠心病、脑卒中、心衰、高血压等)现患病人数2.3亿，每十个成年人中有2人是心血管病。其中高血压2亿，脑卒中700万、心肌梗死200万、心衰420万、肺心病500万，风心病250万，先心病200万。估计中国每年死于心血管病的约300万人，其中一半与高血压有关。中国总死亡人数中，每死亡3个人中就有I人是心血管病。中国每天心血管病死亡8200多人，估算每10秒就有I人死于心血管病。中国心血管病死亡率高居首位,高于肿瘤及其他疾病。每年消耗很大的国家财力和人力资源。采用外科手术已能对冠状动脉疾病做有效的治疗。尤其是冠状动脉扩张成形术的快速发展，其对冠心病的治疗价值已经得到众多随机临床机制试验的证实。冠状动脉扩张术成行术是从内部将动脉狭窄部位扩张，恢复正常血液流量。但是经皮腔内冠状动脉扩张成形术(PTCA)术后3-6个月约有30% -50%的患者会出现血管内膜增生再狭窄，极大地影响了 PTCA的远期疗效。PTCA术后再狭窄的防治已经成为当今世界上心血管疾病防治研究中最重要的课题之一。
发明内容
本发明的目的在于建立三七与丹参超声提取物经不同浓度乙醇洗脱的方法及其洗脱部位在抑制平滑肌细胞增生和预防PTCA术后再狭窄的预防与治疗的用途。本实验室模拟PTCA术后血管再狭窄，用球囊损伤SD大鼠左侧颈总动脉作为模型，在动物体内反复实验验证，证明丹参三七提取物不同洗脱部位及其不同浓度组合对大鼠血管内膜增生的抑制；不同提取物中主要有效单体组合也能有效抑制大鼠血管内膜增生，从而完成了本发明。本发明所用丹参、三七为常用中药，所用提取物的洗脱部位为丹参三七提取物过SP825打孔树脂，用不同浓度乙醇洗脱。所用单体组合人参皂苷Rbl，Rgl，丹参酮IIA(可用丹参酮IIA磺酸钠代替)可以是从三七丹参药材中提取的单体化合物，也可以化学合成，还可以是主要成分为这些单体的提取物。在实际生产中可以通过改变优化提取工艺提高主要有效成分含量，减少用药量和提高疗效。复方丹参片在目前生产工艺内可以制备成除片剂之外的剂型，如滴丸剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂等；三七丹参提取物不同乙醇洗脱部位及其中含有的主要有效单体人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl、丹参酮IIA也可以制成各种不同的剂型，通过不同的给药途径用于PTCA术后再狭窄的预防和治疗。 本发明具有以下优点:1、发现了三七、丹参的提取方法及其不同乙醇洗脱部位的洗脱方法。2、发现了三七、丹参的不同乙醇洗脱部位及其组合对血管术后损伤再狭窄的治疗作用，可以很好地抑制血管内膜的增厚和官腔狭窄，这些作用有助于提高冠状动脉成形术的远期疗效，改善患者生活质量。3、发现了人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl、丹参酮IIA不同组合可以有效地抑制血管平滑肌细胞的增殖及治疗血管术后内膜球囊损伤再狭窄。4、本实验所得出提取部位及其组合以及有效单体组合，可以使用药量比复方丹参片等中药用药量减少。
图1:三七和丹参超声和热回流法提取各部位薄层图。图2:三七和丹参超声和热回流法提取各部位高效液相色谱图。图3:不同浓度的三七和丹参提取物洗脱部位对SD大鼠动脉血管内膜增生的影响。图4:不同丹参、三七提取物不同洗脱部位组合对SD大鼠动脉血管内膜增生的影响。图5:不同丹参、三七提取物及其单体有效成分组合对SD大鼠动脉血管内膜增生的影响。图6:三七和丹参提取洗脱方法流程图。图7.不同浓度的三七和丹参提取物洗脱部位对SD大鼠动脉血管球囊损伤各组血清中MDA检测结果。图8.不同浓度的三七和丹参提取物洗脱部位对SD大鼠动脉血管球囊损伤各组血清中NO检测结果。图9.不同浓度的三七和丹参提取物洗脱部位对SD大鼠动脉血管球囊损伤各组血清中SOD检测结果。图10.不同浓度丹参和三七提取物不同洗脱部位组合对SD大鼠动脉血管球囊损伤各组血清中MDA检测结果。图11.不同浓度丹参和三七提取物不同洗脱部位组合对SD大鼠动脉血管球囊损伤各组血清中NO检测结果。图12.不同浓度丹参和三七提取物不同洗脱部位组合对SD大鼠动脉血管球囊损伤各组血清中SOD检测结果。图13.不同丹参、三七提 取物及其单体有效成分组合对SD大鼠动脉血管球囊损伤各组血清中MDA检测结果。图14.不同丹参、三七提取物及其单体有效成分组合对SD大鼠动脉血管球囊损伤各组血清中NO检测结果。图15.不同丹参、三七提取物及其单体有效成分组合对SD大鼠动脉血管球囊损伤各组血清中SOD检测结果。
具体实施例方式下面结合实施案例对本发明作进一步的说明:下面通过以下实施例来阐述本发明所述三七丹参提取物不同洗脱部位及其组合，以及其有效单体不同组合对抑制血管内膜增厚作用的评价，但并不限于以下途径。这些生物实验主要包括:1.三七丹参提取物不同洗脱部位的洗脱方法的建立及优化。2.不同浓度三七丹参提取物不同洗脱部位及其配伍对SD大鼠颈总动脉球囊损伤再狭窄的治疗作用。
3.不同浓度三七丹参提取物不同洗脱部位中有效单体组合对SD大鼠颈总动脉球囊损伤再狭窄的治疗作用。4.不同浓度三七丹参提取物及其单体有效成分组合对SD大鼠动脉血管内膜增生的影响。[实施例一]三七丹参提取物不同洗脱部位的洗脱方法的建立及优化。1.三七和丹参药材饮片的购买(购自北京同仁堂药材公司大栅栏店精品部)。2.三七丹参提取洗脱方法。附图6。3.大孔树脂处理:将SP825大孔树脂用95%的乙醇浸泡3d，使其充分膨胀，湿法装柱，然后用95%的乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊现象。再用蒸馏水洗尽乙醇，直至流出液无浑浊为止。4.分别取三七和丹参各150g，按上图方法进行超声提取；另取一份按上图进行热回流提取。5.提取物回收乙醇后，SP825大孔树脂洗脱，湿法上样，按上图洗脱方法进行不同浓度乙醇溶液洗脱。6.回收不同浓度乙醇洗脱部位溶液，冷冻干燥，计算提取率(洗脱部位重量/三七丹参原药材总重量)，单位:g。7.高效液相色谱法条件设置:以C18为固定相，乙腈为流动相A，水为流动相B，进行梯度洗脱，流速为lml/min，进样量为20 μ 1，检测波长为203nm，柱温为25°C。
权利要求
1.丹参与三七超声提取物经SP825大孔树脂在50%、80 %、95 %浓度乙醇洗脱，所得50^^80^^95%洗脱部位的新方法建立。其特征在于超声后提取物上大孔树脂乙醇洗脱，较通常所用热回流法，能提高不同洗脱部位的提取率，且洗脱部位有效单体含量更高。其中50 %洗脱部位主要含有人参皂苷Rgl，80 %洗脱部位主要含有人参皂苷Rbl，95 %洗脱部位主要含有丹参酮ΠΑ。
2.根据权利要求1的应用，各洗脱部位能够用于抑制血管平滑肌细胞的增生和防治扩张成形术后再狭窄相关疾病的新用途，其特征在于:抑制血管平滑肌细胞的增殖，防治血管球囊损伤其官腔变小，对术后血管再狭窄相关疾病起到预防和治疗作用。
3.根据权利要求2的应用，丹参与三七50%、80%、95%洗脱部位在150mg/kg剂量时，对大鼠球囊损伤再狭窄治疗效果最佳。
4.根据权利要求2、3的应用，丹参与三七50%、80%、95%洗脱部位两两组合，三者组合具有抑制平滑肌细胞增生的作用，治疗预防血管术后再狭窄的作用。
5.根据权利要求1-4的应用，人参皂苷Rgl，人参皂苷Rbl，丹参酮IIA为各洗脱部位的有效单体成分，单独使用各单体及其两两组合，三者组合具有抑制平滑肌细胞增生，治疗预防血管术后再狭窄的作用。
6.根据权利要求1、5所述的制剂，活性成分为人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl、丹参酮IIA，其中丹参酮I I A可用其磺酸钠盐等易容盐类代替。
7.根据权利要求2-4的应用，含有有效剂量的三七与丹参提取物的组分及其组合可以和一种或多种符合药典规定的其它药用成分及药用赋形剂制成制剂。
8.根据权利要求1、5的应用，含有有效单体及其组合可以和一种或多种符合药典规定的其它药用成分及药用赋形剂制成制剂。
9.根据权利要求7、8的应用，其药物成分可用包括含有1%-99%的洗脱部位及其组合，有效单体及其组合和99% -1 %的药用赋形剂及其它可用组方的药物制成口服及其他剂型。
10.根据权利要求9所述的口服及其他剂型包括:片剂，丸剂，胶囊剂，软胶囊剂，颗粒齐U，滴丸，缓释制剂，控释制剂，注射剂及其他适宜的剂型。
全文摘要
丹参与三七不同提取部位及其组合抑制平滑肌细胞增生和防治冠状动脉术后再狭窄的用途。本发明涉及三七与丹参的提取工艺、提取物不同洗脱部位及其组合在抑制血管平滑肌细胞增生和防治冠状动脉扩张形成术后再狭窄的用途。实验证明丹参三七提取物中50％、95％、50％+95％组合、50％+80％+95％组合可以有效抑制血管平滑肌的增生，防治球囊损伤术后血管内膜的增厚；其中50％+95％组合、50％+80％+95％组合抑制血管平滑肌的增生，防治球囊损伤术后血管内膜的增厚优于各部位单独给药。
文档编号A61K36/537GK103191187SQ20121000292
公开日2013年7月10日 申请日期2012年1月6日 优先权日2012年1月6日
发明者王升启, 王云飞, 潘从泽, 苗雨瑞, 洪婷, 郑冰清 申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所