专利名称：华中五味子藤茎中木脂素的提取方法
华中五味子藤茎中木脂素的提取方法技术领域
本发明属于天然药物成分木脂素的提取技术领域，具体涉及一种从植物华中五味子的藤茎中提取木脂素的方法。
背景技术：
Ψ ^ Ji ^ (Schisandra sphenanthera Rehd. et ffils.)力 _ 〒禾斗 (Schisandraceae)五味子属(Schisandra Michx.)多年生落叶木质藤本，其干燥成熟果实被称为南五味子，收录于中华人民共和国药典2010年版第一部，具有收敛固涩、益气生津、 补肾宁心之功效。五味子属植物药用成分主要是木脂素和挥发油，其中木脂素是其主要活性成分，具有降酶保肝、抗衰老、抗肿瘤、抗艾滋病毒等作用。
华中五味子藤茎在自然状况下生长量很大，与花芽的分化和果实的生长争夺营养物质，为了保证植株的正常开花结果，人工野生抚育华中五味子每年都要进行枝条修剪，剪下的枝条重量占原藤的三分之一左右。目前，对华中五味子同属植物五味子(Schisandra chinensis)的藤茎研究表明，其含有与果实相同的木脂素成分，三年以上藤茎的木脂素含量与果实相当，可作为代替果实入药之选。生产实践表明，长期以来都将华中五味子修剪掉的藤茎当作废物抛弃，造成了资源的巨大浪费。因此，有效的提取华中五味子藤茎中木脂素，充分利用自然资源，变废为宝，对提高药农的经济收入和降低药品生产成本均具有深远的意义。发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服上述华中五味子修剪掉的藤茎当作废物抛弃的缺点，提供一种操作简单、成本低廉、提取效率高的从华中五味子藤茎中提取木脂素的方法。
解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成
1、处理藤茎
取1 2年生直径小于0. 5cm的华中五味子藤茎或者取3年生以上直径为0. 5 2cm的华中五味子藤茎，自然阴干，粉碎，过60目筛，得到华中五味子藤茎粉末。
2、提取华中五味子藤茎中的木脂素
将华中五味子藤茎粉末与提取剂混合均勻，每克华中五味子藤茎粉末中加入5 20mL提取剂，密封，升温至40°C，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声处理30 60 分钟，25°C浸泡6 12小时，蒸除提取剂，加入甲醇溶解，置于75°C水浴中加热至液体完全蒸干，得到木脂素。
上述的提取剂为乙醇、甲醇、乙腈中的任意一种。
本发明的提取剂优选乙腈，在提取华中五味子藤茎中的木脂素步骤2中，优选将华中五味子藤茎粉末与乙腈混合均勻，每克华中五味子藤茎粉末中加入IOmL乙腈，密封， 升温至40°C，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声处理30分钟，25°C浸泡12小时。
本发明充分利用野生抚育中被修剪掉或废弃掉的藤茎作为原料，成本低廉，而且对藤茎的生长年限要求不高，藤茎可以一年四季随时获得，从而解决了生产上严格的时间限制，减少了工作强度；采用超声处理法提取华中五味子藤茎中的各种木脂素，操作简单， 华中五味子藤茎中各种木脂素的提取效率高，新生藤茎提取的五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲的含量平均值分别为0. 7394%,0. 2229%,0. 1474%和0. 1237%, 多年生藤茎提取的五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲的含量平均值分别为 1. 1901%,0. 4760%,0. 2850%和 0. 1768%，可用于产业化生产。
图1是五味子酯甲的标准曲线。
图2是五味子甲素的标准曲线。
图3是五味子乙素的标准曲线。
图4是五味子醇甲的标准曲线。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1
1、处理藤茎
取2010年5月赴陕西省柞水县华中五味子野生抚育基地采集1 2年生直径小于0. 5cm的华中五味子藤茎，自然阴干，粉碎，过60目筛，得到华中五味子藤茎粉末。
2、提取华中五味子藤茎中的木脂素
称取华中五味子藤茎粉末5. Og置于IOOmL烧瓶中，加入50mL乙腈，混合均勻，密封，升温至40°C，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声处理30分钟，25°C浸泡12小时，用旋转蒸发仪蒸掉乙腈，冷却至室温，加入5mL甲醇，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声5分钟，使固体充分溶解，置于75°C水浴中加热至液体完全蒸干，得到木脂素。
实施例2
在实施例1的处理藤茎步骤1中，取2010年5月赴陕西省柞水县华中五味子野生抚育基地采集3年以上生直径为0.5 2cm的华中五味子藤茎，自然阴干，粉碎，过60目蹄， 得到华中五味子藤茎粉末。其他步骤与实施例1相同，得到木脂素。
实施例3
在实施例1 2的提取华中五味子藤茎中的木脂素步骤2中，称取华中五味子藤茎粉末5. Og置于IOOmL烧瓶中，加入25mL乙腈，混合均勻，密封，升温至40°C，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声处理60分钟，25°C浸泡10小时，用旋转蒸发仪蒸掉乙腈， 冷却至室温，加入5mL甲醇，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声5分钟，使固体充分溶解，置于75°C水浴中加热至液体完全蒸干，得到木脂素。其他步骤与相应实施例相同， 得到木脂素。
实施例4
在实施例1 2的提取华中五味子藤茎中的木脂素步骤2中，称取华中五味子藤茎粉末5. Og置于IOOmL烧瓶中，加入IOOmL乙腈，混合均勻，密封，升温至40°C，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声处理45分钟，25°C浸泡6小时，用旋转蒸发仪蒸掉乙腈，冷却至室温，加入5mL甲醇，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声5分钟，使固体充分溶解，置于75°C水浴中加热至液体完全蒸干，得到木脂素。其他步骤与相应实施例相同，得到木脂素。
实施例5
在实施例1 4的提取华中五味子藤茎中的木脂素步骤2中，所用乙腈用等体积的乙醇替换，该步骤的其他步骤与相应实施例相同。其他步骤与相应实施例相同，得到木脂ο
实施例6
在实施例1 4的提取华中五味子藤茎中的木脂素步骤2中，所用乙腈用等体积的甲醇替换，该步骤的其他步骤与相应实施例相同。其他步骤与相应实施例相同，得到木脂ο
为了确定本发明的最佳工艺条件，发明人进行了大量的实验室研究试验，各种试验情况如下
实验材料华中五味子新生藤茎(为1 2年，包括2年，直径范围小于0. 5cm,表皮绿色)、华中五味子多年生藤茎(为3年生以上藤茎，直径范围0. 5 2cm，表皮褐色)， 于2010年5月21日采自陕西省柞水县华中五味子野生抚育基地，标本保存于陕西师范大学生命科学学院，藤茎阴干，干燥保存备用；五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲标准品，由中国药品生物制品检定所提供；乙醇、乙腈为分析纯，甲醇为色谱纯。
实验仪器LC_2010高效液相色谱仪(日本Siimadzu公司)；50g手提式高速中药粉碎机(温岭市林大机械有限公司)；SL202N型药物电子天平(上海明桥精密科学仪器有限公司)；MILLI-Q超纯水仪(美国Millipore公司)；KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；反相色谱柱岛津α8(150πιπιΧ4·6πιπι，5μπι)(日本Shimadzu公司)； RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
1、绘制标准曲线
精密称取五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲标准品各ang，分别以甲醇作溶剂，定容于5mL容量瓶中，配制成0. 4mg/mL的标准品溶液，4°C避光保存备用。
将标准品溶液用0.45口!11滤器过滤到进样小瓶，分别进样2、6、10、14、18、22、26、 30 μ L，采用高效液相色谱法分别测定四种木脂素标准品溶液，色谱条件为以甲醇与蒸馏水的体积比为70 30的混合液为流动相、流速0. SmL/分钟、检测波长^Onm、柱温30°C、 进样量8 μ L、检测时间50分钟，记录色谱峰的峰面积，以各木脂素标准品溶液的进样量⑴ 为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，分别绘制标准曲线(见图1 图4)，计算线性回归方程，并计算R2值，计算结果见表1。
表1五味子木脂素线性回归方程
木脂素回归方程R2线性范围五味子酯甲y = 448075x+1918260. 99990. 8 12 μ g
权利要求
1.一种华中五味子藤茎中木脂素的提取方法，其特征在于它由下述步骤组成(1)处理藤茎取1 2年生直径小于0. 5cm的华中五味子藤茎或者取3年生以上直径为0. 5 2cm的华中五味子藤茎，自然阴干，粉碎，过60目筛，得到华中五味子藤茎粉末；(2)提取华中五味子藤茎中的木脂素将华中五味子藤茎粉末与提取剂混合均勻，每克华中五味子藤茎粉末中加入5 20mL提取剂，密封，升温至40°C，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声处理30 60分钟，25°C浸泡6 12小时，蒸除提取剂，加入甲醇溶解，置于75°C水浴中加热至液体完全蒸干，得到木脂素；上述的提取剂为乙醇、甲醇、乙腈中的任意一种。
2.根据权利要求1所述的华中五味子藤茎中木脂素的提取方法，其特征在于所述的提取剂为乙腈。
3.根据权利要求2所述的华中五味子藤茎中木脂素的提取方法，其特征在于在提取华中五味子藤茎中的木脂素步骤O)中，将华中五味子藤茎粉末与乙腈混合均勻，每克华中五味子藤茎粉末中加入IOmL乙腈，密封，升温至40°C，用超声波发生器功率为IOOHz的超声波超声处理30分钟，25°C浸泡12小时。
全文摘要
一种华中五味子藤茎中木脂素的提取方法，以被修剪掉或废弃掉的华中五味子藤茎作为原料，成本低廉，而且对藤茎的生长年限要求不高，藤茎可以一年四季随时获得，从而解决了生产上严格的时间限制，减少了工作强度；采用超声处理法提取华中五味子藤茎中的各种木脂素，操作简单，华中五味子藤茎中各种木脂素的提取效率高，新生藤茎提取的五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲的含量平均值分别为0.7394％、0.2229％、0.1474％和0.1237％，多年生藤茎提取的五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲的含量平均值分别为1.1901％、0.4760％、0.2850％和0.1768％，可用于产业化生产。
文档编号A61K135/00GK102552408SQ20121002113
公开日2012年7月11日 申请日期2012年1月30日 优先权日2012年1月30日
发明者刘锦, 孙茂, 王喆之, 顾蔚 申请人:陕西师范大学