专利名称：与人癌细胞的永生化相关的基因及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及与癌细胞的永生化相关的基因(永生化规定基因)以及对以具有该基因的永生化癌细胞为靶标的选择性癌治疗有用的方法。更具体而言，本发明涉及以永生化规定基因为指标的永生化癌细胞的判断方法、以及该判断中使用的试剂。本发明还涉及筛选以永生化癌细胞为靶标的选择性抗癌剂(永生化癌细胞增殖抑制剂)的有效成分的方法、以及该抗癌剂(永生化癌细胞增殖抑制剂)。
背景技术：
人实体癌除非进行根治手术，否则就会预后不良，其主要原因是因为目前的化学疗法效果并不充分。以往的化学疗法药物以核酸合成过程、DNA、微管为作用点，以抑制从核酸至蛋白质生成过程为基本，因此不仅对癌细胞进行抑制，也无法避免对进行细胞增殖的再生性组织正常细胞的抑制。最近，逐渐鉴定出在癌细胞中特异性表达的分子，以其为靶标的抑制剂能够使对正常细胞的有害反应止于最小限度，其结果是给药量也能够增大。对这样的分子靶标治疗药也进行了开发，但其最大的缺点是，并非对大多病例有效，而是因各个病例的不同而效果不同，给药前所进行的预测是不完全的。作为分子靶标治疗药的效果因各个病例而大不相同的原因，可以举出被作为治疗靶标的分子是与癌症发生过程、转移相关的基因。癌症发生过程不仅因癌类型的不同而不同，即使在同类型癌中也是多种多样的，因此可以认为，作为靶标的分子与癌增殖相关的程度因各个病例而不同。因此，如果能鉴定出无论癌类型而普遍地发挥核心作用的分子，就可以开发出能够期待对多种癌症具有普遍效果的分子靶标治疗药。包括人在内的所有脊椎动物的染色体的两末端连续有称为“TTAGGG”的简单重复序列(人中约为lokb，小鼠约为数倍)，在每次伴随细胞分裂的DNA复制时不能完全复制末端而每次少量(人中约为200碱基)缩短。该末端结构为“端粒”，当端粒随着细胞分裂而缩短至一定(人非癌细胞中约为5kb)以下时，细胞就已经变得无法分裂。如果癌化则能够继续分裂，但如果端粒缩短到极限(约2kb)，则细胞消亡。通过将该缩短的端粒延长而稳定保持端粒长度能够延长细胞分裂寿命的是逆转录酶“端粒酶”(参照非专利文献I)，该端粒酶不在通常的正常体细胞中表达，因此能够分裂的次数仅限于数十次，而在能够无限增殖的生殖细胞和永生化癌细胞中高度表达。以往普遍认为癌细胞均永生化，但由如下的情况，即，存在即使是临床上明显的癌也未必检测出端粒酶活性的例子(参照非专利文献2和3等)；即便使端粒酶成分TERT在非癌细胞中强制表达，也不显现癌细胞的性状(参照非专利文献4)等情况，目前认为癌化与永生化是不同的现象。
非专利文献I =Harley CB, Mutation Res, 256 :271-82,1991非专利文献2 Kim NW 等，Science 266 :2011-5,1994非专利文献3 :Hiyama K 等，J Natl Cancer Inst 87 :895-902,1995非专利文献4 =Morales CP 等，Nat Genet 21 :115-8,1999非专利文献5:Shay Jff, Bacchetti S，Eur J Cancer 33 :787-91,1997非专利文献6 :Hiyama K 等，J Tmmunol 155:3711-5,1995非专利文献7 Hiyama E 等，Int J Oncol 9:453-8,1996非专利文献8 :Forsyth NR 等，Aging Cell 2 :235-43,2003非专利文献9 :Bodnar AG 等，Exp Cell Res 228 :58-64,1996非专利文献10 =Hiyama K 等，Int J Oncol 27 :87-95,200
发明内容
本发明涉及永生化癌细胞的判断方法、以及该判断中使用的试剂。本发明还涉及筛选具有特异性抑制永生化癌细胞的增殖的作用、且作为选择性抗癌剂而有用的永生化癌细胞增殖抑制剂的有效成分的方法以及该永生化癌细胞增殖抑制剂。本发明人等致力于能够期待对癌治疗、尤其是普遍对多种癌病例具有效果的分子靶标治疗药的开发，着眼于与癌细胞的癌化(恶性化)性状不同的另一性状“永生化”。即，即使体内出现癌细胞，只要抑制无限增殖，则不仅不会增大、转移直至使宿主死亡，而且还可以期待通过采用通常的化学疗法、非根治性手术来减少一定程度残留的癌细胞数，从而使在其再次增大之前分裂寿命耗尽而自然消亡。由如下的情况等，即，在迄今为止检测的数千样本中临床癌样本的80%以上表达端粒酶(参照非专利文献5);在迄今为止检测的所有癌类型中均确认了端粒酶的表达；来源于人癌的细胞株几乎全部都表达端粒酶(参照非专利文献2);—度表达了端粒酶的癌细胞不能自然转为阴性等情况，从而可以认为，与多种多样的癌症发生过程不同，该永生化过程是在多数癌细胞中极普遍地共有存在的过程。即，通过将规定永生化的分子作为靶标，能够期待无论癌类型而普遍对多数病例有效的癌的无限增殖抑制成为可能。在此意义上，也尝试了以端粒酶本身为靶标的抗癌战略。然而，本发明人等由如下的情况等，S卩，已发现即使是正常体细胞，在再生性组织的前体细胞、淋巴细胞中也检测出了端粒酶活性(参照非专利文献6和7);而且即便使端粒酶成分TERT在非癌细胞中强制表达，也未必会永生化(参照非专利文献8);表达端粒酶的正常前体细胞、淋巴细胞也并非永生化，而仅是延长寿命(参照非专利文献6和9)等情况，从而表明，仅凭端粒酶的表达细胞并不能永生化。即，要使人细胞永生化，延长染色体末端端粒的酶即端粒酶的活化几乎是必须的，但却并不充分，除了端粒酶活化之外，还存在永生化所不可或缺的分子，可以设想该分子在癌细胞中特异性地发挥作用。事实上，本发明人等确认，在正常体细胞中导入TERT而使端粒酶强制表达从而永生化的克隆中，特异性地表达变化的基因与已报道的癌细胞中的表达变化完全不同(参照非专利文献10)。由这样的 事实也可以说与正常细胞的永生化和癌细胞的永生化相关的基因是不同的。如果以端粒酶本身作为靶标，则淋巴细胞、血液前体细胞和消化道粘膜隐窝细胞等的分裂能力受到抑制，作为癌治疗的有害现象而致命的免疫功能、造血功能和消化道功能受损害的危险性高，但如果以仅在癌细胞中起作用的永生化规定因子作为靶标，则可以认为能够在不损害端粒酶活性阳性的正常干/前体细胞、淋巴细胞等的功能的情况下进行癌细胞特异性无限增殖的抑制。在该见解的基础上，本发明人等为了发现与人癌细胞的永生化普遍相关的基因进行了悉心研究。其结果是想到，该基因与正常细胞中基于端粒酶活化而延续生命无关，而是对癌细胞的增殖维持起特异性作用，从而特定了该永生化规定基因13个基因(参照表I)。其概要如下。首先，将无论癌类型而普遍表达增强的基因通过基因芯片分析而提取出来，从得到的基因中，选择如下的13种基因，即，在由永生化的癌细胞构成的临床癌组织中，比由未永生化的癌细胞构成的癌组织的表达水平表达增强，并且在正常细胞中导入端粒酶而使其表达的细胞中表达未增强的基因。然后，在永生化癌细胞内通过siRNA来抑制得到的13种基因的表达，确认永生化癌细胞的增殖均得到了抑制。本发明人等在上述见解的基础上进一步进行了反复研究，结果完成了本发明。即，本发明具有下述方式。第I项.一种用于判断癌细胞的永生化的基因标记，由多核苷酸构成，该多核苷酸与序列编号I 13中任一个所示的碱基序列内的至少15个碱基长的连续碱基序列特异性杂交、且具有15个碱基长以上的碱基序列。第2项.根据第I项所述的用于判断癌细胞的永生化的基因标记，是探针或引物。第3项.一种永生化癌细胞的判断方法，包括下述工序(I) (3)(I)使RNA或该RNA的衍生物与第I或2项中任一项所述的基因标记结合的工序，其中，所述RNA由从被测者采集的能够含有癌细胞的机体试样制备；(2)以上述基因标记为指标测定与上述基因标记结合的RNA或其衍生物的量；(3)将上述工序⑵中得到的RNA或该RNA的衍生物的量(以下，将其总称为“RNA量”)与未永生化的正常或癌细胞中相应的RNA或该RNA衍生物的量(以下，将其总称为“对照RNA量”)进行比较的工序。第4项.根据第3项所述的永生化癌细胞的判断方法，还包括下述工序(4)(4)当工序⑵的RNA量比对照RNA量高时，判断为被测者的癌细胞永生化，当不高时，判断为被测者的癌细胞未永生化的工序。第5项.一种抗体，识别由序列编号14 26中任一个所示的氨基酸序列构成的多肽。该抗体优选用于判断癌细胞的永生化。第6项.一种永生化癌细胞的判断方法，包括下述工序(Γ ) (3’)(I’ )使含有多肽的蛋白质含有级分与第5项所述的抗体结合的工序，其中，所述含有多肽的蛋白质含有级分由从被测者采集的能够含有癌细胞的机体试样制备；(2’ )以该抗体为指标测定与所述抗体结合的多肽的量的工序；(3’)将上述工序(2’)中得到的多肽量与未永生化的正常或癌细胞中相应的多肽量(以下，称为“对照多肽量”)进行比较的工序。第7项.根据第6项所述的永生化癌细胞的判断方法，还包括下述工序(4’ )(4’)当工序(2’)的多肽量比对照多肽量高时，判断为被测者的癌细胞永生化，当不高时，判断为被测者的癌细胞未永生化的工序。 第8项.一种永生化癌细胞判断用试剂盒，含有选自第I项所述的基因标记和第5项所述的抗体中的至少I种作为永生化细胞判断用试剂。
第9项.一种抑制永生化癌细胞增殖的物质的筛选方法，包括下述工序(A)
(D)(A)使被测物质与能够表达由序列编号I 13中任一个所示的碱基序列构成的基因的细胞接触的工序；(B)对于与被测物质接触的细胞，测定由序列编号I 13中任一个所示的碱基序列构成的基因的表达量的工序；(C)将上述工序(B)中得到的基因的表达量与未与被测物质接触的对照细胞中相 应的基因的表达量进行比较的工序；以及(D)当上述工序(B)中得到的基因的表达量比对照表达量低时，选择该被测物质作为抑制永生化癌细胞增殖的物质的工序。第10项.一种抑制永生化癌细胞增殖的物质的筛选方法，包括下述工序(A’ ) (D，)(A’ )使被测物质与由序列编号14 26中任一个所示的氨基酸序列构成的多肽接触的工序；(B’ )测定与被测物质接触的由序列编号14 26中任一个所示的氨基酸序列构成的多肽的活性的工序；(C’)将上述工序(B’)中得到的多肽的活性与未与被测物质接触的对照的活性进行比较的工序；(D’ )当上述工序(B’ )中得到的多肽的活性比对照的活性低时，选择该被测物质作为抑制永生化癌细胞增殖的物质的工序。第11项.一种永生化癌细胞增殖抑制剂，以多核苷酸作为有效成分，该多核苷酸与序列编号I 13中任一个所示的碱基序列的至少15个碱基长以上的连续碱基序列特异性杂交、且由15个碱基以上的碱基序列构成。第12项.根据第11项所述的永生化癌细胞增殖抑制剂，所述多核苷酸是由序列编号27 76中任一个所不的碱基序列构成的多核苷酸。第13项.一种抗癌疗法，具有将第11或12项所述的永生化癌细胞增殖抑制剂导入患者的癌细胞中的工序。第14项.一种多核苷酸在制造永生化癌细胞增殖抑制剂中的应用，该多核苷酸与序列编号I 13中的任一个所示的碱基序列的至少15个碱基长以上的连续碱基序列特异性杂交、且具有15个碱基以上的碱基序列。第15项.根据第14项所述的应用，所述多核苷酸是由序列编号27 76中任一个所示的碱基序列构成的多核苷酸。根据本发明，弄清了在多数癌类型中，在永生化癌细胞中特异性地表达增强、且无论癌类型而普遍地控制癌细胞的永生化的基因。根据本发明的永生化癌细胞的判断方法以及在该判断方法中使用的试剂，能够识别该永生化规定基因的表达程度，并由该程度鉴别用通常的病理诊断无法判断的永生化细胞和有限寿命细胞。而且根据该鉴别，在癌的早期诊断、治疗选择、预后预测中的临床应用成为可能。根据本发明的以永生化规定基因作为靶标的筛选方法，还能够得到能够特异性抑制永生化癌细胞增殖的抗癌剂的有效成分。
图I是表示人细胞的癌化永生化的机制的概略2是表示在本发明中进行的靶标基因提取方法的概略图。图3表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的UBE2S基因的表达水平。图4表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的RFC4基因的表达水平。图5表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的PTGES2基因的表达水平。图6表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的MAFl基因的表达水平。图7表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的ACVR2B基因的表达水平。图8表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的FAMl 19A基因的表达水平。图9表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的LTB4DH基因的表达水平。图10表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的DPM2基因的表达水平。图11表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的SEPXl基因的表达水平。图12表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的PSMA3基因的表达水平。图13表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的CHCHD3基因的表达水平。图14表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的LSM3基因的表达水平。图15表示基于寡阵列的各种永生化癌细胞的GTSEl基因的表达水平。图16表示癌细胞株中基于siRNA的UBE2S基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图17表示癌细胞株中基于siRNA的RFC4基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图18表示癌细胞株中基于siRNA的PTGES2基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图19表示癌细胞株中基于siRNA的MAFl基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图20表示癌细胞株中基于siRNA的ACVR2B基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图21表示癌细胞株中基于siRNA的FAMl 19A基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图22表示癌细胞株中基于siRNA的LTB4DH基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图23表示癌细胞株中基于siRNA的DPM2基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图24表示癌细胞株中基于siRNA的SEPXl基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图25表示癌细胞株中基于siRNA的PSMA3基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图26表示癌细胞株中基于siRNA的CHCHD3基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。
图27表示癌细胞株中基于siRNA的LSM3基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。图28表示癌细胞株中基于siRNA的GTSEl基因的表达抑制及其增殖抑制效果(实施例2)。
序列编号27表示与UBE2S基因相关的siRNA_l (44-64)的有义链的碱基序列。序列编号28表示与UBE2S基因相关的siRNA_l (146-166)的有义链的碱基序列。序列编号29表示与UBE2S基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号30表示与UBE2S基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号31表示与RFC4基因相关的siRNA_l (897-917)的有义链的碱基序列。序列编号32表示与RFC4基因相关的siRNA_l (189-209)的有义链的碱基序列。序列编号33表示与RFC4基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号34表示与RFC4基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号35表示与PTGES2基因相关的siRNA_l (2003-2023)的有义链的碱基序列。序列编号36表示与PTGES2基因相关的siRNA_l (1105-1125)的有义链的碱基序列。序列编号37表示与PTGES2基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号38表示与PTGES2基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号39表示与MAFl基因相关的siRNA_l (1538-1558)的有义链的碱基序列。序列编号40表示与MAFl基因相关的siRNA_l (1031-1051)的有义链的碱基序列。序列编号41表示与MAFl基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号42表示与MAFl基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号43表示与ACVR2B基因相关的siRNA_l (626-646)的有义链的碱基序列。序列编号44表示与ACVR2B基因相关的siRNA_l (208-228)的有义链的碱基序列。序列编号45表示与ACVR2B基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号46表示与ACVR2B基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号47表示与FAM119A基因相关的siRNA_l (754-774)的有义链的碱基序列。序列编号48表示与FAMl 19A基因相关的siRNA_l (1068-1088)的有义链的碱基序列。序列编号49表示与FAMl 19A基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号50表示与FAMl 19A基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号51表示与LTB4DH基因相关的siRNA_l (775-795)的有义链的碱基序列。序列编号52表示与LTB4DH基因相关的siRNA_l (658-678)的有义链的碱基序列。序列编号53表示与LTB4DH基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号54表示与LTB4DH基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号55表示与DPM2基因相关的siRNA_l (145-165)的有义链的碱基序列。序列编号56表示与DPM2基因相关的siRNA_l (84-104)的有义链的碱基序列。序列编号57表示与DPM2基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。
序列编号58表示与DPM2基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号59表示与SEPXl基因相关的siRNA_l (870-890)的有义链的碱基序列。序列编号60表示与SEPXl基因相关的siRNA_l (794-814)的有义链的碱基序列。序列编号61表示与SEPXl基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。
序列编号62表示与SEPXl基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号63表示与PSMA3基因相关的siRNA_l (853-873)的有义链的碱基序列。序列编号64表示与PSMA3基因相关的siRNA_l (686-706)的有义链的碱基序列。序列编号65表示与PSMA3基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号66表示与PSMA3基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号67表示与CHCHD3基因相关的siRNA_l (546-566)的有义链的碱基序列。序列编号68表示与CHCHD3基因相关的siRNA_l (1450-1470)的有义链的碱基序列。序列编号69表示与CHCHD3基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号70表示与CHCHD3基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号71表示与LSM3基因相关的siRNA_l (540-560)的有义链的碱基序列。序列编号72表示与LSM3基因相关的siRNA_l (37-57)的有义链的碱基序列。序列编号73表示与LSM3基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号74表示与LSM3基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。序列编号75表示与GTSEl基因相关的siRNA_2的有义链的碱基序列。序列编号76表示与GTSEl基因相关的siRNA_3的有义链的碱基序列。
具体实施例方式(I)永生化规定基因本发明中，所谓“未永生化癌细胞”，是指癌细胞中，(I)端粒酶活性为阴性、(2)端粒长度缩短、且(3)不能确认端粒酶蛋白的表达的有限寿命细胞。另一方面，本发明中，所谓“永生化癌细胞”，是指癌细胞中，不具有上述(I) (3)中的至少一项特征的细胞，即，是指端粒酶活性为阳性、或者端粒长度延长、或者能够确认端粒酶蛋白的表达的细胞，是能够无限地进行细胞增殖的细胞。本发明中，所谓“永生化规定基因”，是指规定癌细胞的永生化的基因。作为本发明对象的癌细胞没有特别限制，作为其来源，可以列举例如肺癌、乳癌、食道癌、头颈部癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胆囊、胆管癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫颈癌等。作为永生化规定基因，具体来说，可以列举(1)UBE2S基因、⑵RFC4基因、(3)PTGES2 基因、(4) MAFl 基因、(5)ACVR2B 基因、(6)FAM119A 基因、(7)LTB4DH 基因、(8) DPM2基因、(9) SEPXl 基因、(10)PSMA3 基因、(11)CHCHD3 基因、(12)LSM3 基因以及(13) GTSEl 基因，这些基因的基因库登记号、正式的基因名、基因符号以及表不这些基因的喊基序列的序列编号示于下述表I。此外，表中的基因名、基因符号等根据NCBI中互联网公开(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)的数据来记载。[表 I]
权利要求
1.一种用于判断癌细胞的永生化的基因标记，所述基因标记由多核苷酸构成，该多核苷酸与序列编号13所示的碱基序列内的至少15个碱基长的连续碱基序列特异性杂交、且具有15个碱基长以上的碱基序列。
2.根据权利要求I所述的基因标记，其中所述基因标记为探针或引物。
3.—种永生化癌细胞的判断方法，其包括下述工序(I) (3) (1)使RNA或该RNA的衍生物与权利要求I或2所述的基因标记结合的工序，其中，所述RNA由从被测者采集的能够含有癌细胞的机体试样制备； (2)以所述基因标记为指标测定与所述基因标记结合的RNA或该RNA的衍生物的量的工序；以及 (3)将所述工序(2)中得到的RNA或其衍生物的量与未永生化的正常或癌细胞中相应的RNA或其衍生物的量进行比较的工序，其中，将所述工序(2)中得到的RNA或其衍生物的量总称为“RNA量”，将未永生化的正常或癌细胞中相应的RNA或其衍生物的量总称为“对照RNA 量”。
4.根据权利要求3所述的永生化癌细胞的判断方法，其还包括下述工序(4) (4)当工序⑵中得到的RNA量比对照RNA量高时，判断为被测者的癌细胞永生化，当工序(2)中得到的RNA量不比对照RNA量高时，判断为被测者的癌细胞未永生化的工序。
5.一种抗体，其识别具有序列编号26所示的氨基酸序列的多肽。
6.一种永生化癌细胞的判断方法，其包括下述工序(Γ ) (3’) (Γ )使含有多肽的蛋白质含有级分与权利要求5所述的抗体结合的工序，其中，所述含有多肽的蛋白质含有级分由从被测者采集的能够含有癌细胞的机体试样制备； (2’ )以该抗体为指标测定与所述抗体结合的多肽的量的工序；以及 (3’)将所述工序(2’)中得到的多肽量与未永生化的正常或癌细胞中相应的多肽量进行比较的工序，其中，将所述工序(2’ )中得到的多肽的量总称为“多肽量”，将未永生化的正常或癌细胞中相应的多肽量总称为“对照多肽量”。
7.根据权利要求6所述的永生化癌细胞的判断方法，其包括下述工序(4’) (4’)当工序(2’)中得到的多肽量比对照多肽量高时，判断为被测者的癌细胞永生化，当工序(2’ )中得到的多肽量不比对照多肽量高时，判断为被测者的癌细胞未永生化的工序。
8.—种永生化癌细胞判断用试剂盒，其含有选自权利要求I所述的基因标记和权利要求5所述的抗体中的至少一种。
9.一种抑制永生化癌细胞增殖的物质的筛选方法，其包括下述工序(A) (D) (A)使被测物质与能够表达由序列编号13所示的永生化规定基因的细胞接触的工序； (B)对于与被测物质接触的细胞，测定由序列编号13所示的永生化规定基因的表达量的工序； (C)将所述工序(B)中得到的永生化规定基因的表达量与未与被测物质接触的细胞中永生化规定基因的表达量进行比较的工序，其中，将未与被测物质接触的细胞中永生化规定基因的表达量总称为“对照表达量”；以及 (D)当所述工序(B)中得到的表达量比对照表达量低时，选择该被测物质作为抑制永生化癌细胞增殖的候选物质的工序。
10.一种抑制永生化癌细胞增殖的物质的筛选方法，其包括下述工序(A’) (D’) (A’ )使被测物质与具有序列编号26所示的氨基酸序列的多肽接触的工序； (B’ )测定与被测物质接触的具有序列编号26所示的氨基酸序列的多肽的活性的工序; (C’)将所述工序(B’)中得到的多肽的活性与未与被测物质接触的多肽的活性进行比较，识别所述工序(B’ )中得到的多肽的活性程度的工序，其中，将未与被测物质接触的多肽的活性总称为“对照活性”；以及 (D’ )当所述工序(B’ )中得到的多肽的活性比对照活性低时，选择该被测物质作为抑制永生化癌细胞增殖的候选物质的工序。
11.一种永生化癌细胞增殖抑制剂，其包含多核苷酸作为有效成分，该多核苷酸与序列编号13所示的碱基序列内的至少15个碱基长的连续碱基序列特异性杂交、且具有15个碱基以上的喊基序列。
12.根据权利要求11所述的永生化癌细胞增殖抑制剂，其中所述多核苷酸具有由序列编号75 76中任一个所不的碱基序列。
13.与序列编号13所示的碱基序列内的至少15个碱基长的连续碱基序列特异性杂交、且具有15个碱基以上的碱基序列的多核苷酸用于制备永生化癌细胞增殖抑制剂的应用。
14.根据权利要求13所述的应用,所述多核苷酸具有由序列编号75 76中任一个所不的喊基序列。
全文摘要
本发明提供与癌细胞永生化相关的基因(永生化规定基因)以及对将具有该基因的永生化癌细胞作为靶标的选择性癌治疗有用的方法。使用与序列编号1～13中的任一个所示的碱基序列内的至少15个碱基长的连续碱基序列特异性杂交、且具有15个碱基长以上的碱基序列的多核苷酸，判断永生化癌细胞。该多核苷酸在该判断方法中，作为用于检测在永生化癌细胞中特异性地高度表达的永生化规定基因的引物、探针来使用。
文档编号A61K31/7088GK102618545SQ201210084320
公开日2012年8月1日 申请日期2007年6月8日 优先权日2006年6月9日
发明者增子寻郎, 桧山桂子, 西山正彦, 谷本圭司 申请人:株式会社益力多本社