专利名称：苦碟子注射液在制备治疗痴呆药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂的新用途，即苦碟子注射液在制备治疗痴呆药物中的应用。
背景技术：
在现有技术中，《中药大辞典》2004年4月版上册记载抱茎苦荬菜(Ixerissonchifolia Hance)(又称苦碟子)为菊科多年生草本植物，全草入药。全草含黄酮类化合物，具有镇痛、镇静和解平滑肌痉挛作用，还具清热解毒、凉血、活血、排浓之功效，并具一定的消炎作用。抱茎苦荬菜为多年生草本植物，植物形态系多年生草本，株高70-80cm，高者可过IOOcm左右，主茎粗0. 3-0. 5cm,分枝为0. 1-0. 3cm。苦碟子注射液(曾用名碟脉灵注射液)列入国家药品标准产品(国药准字Z20025450)，由通化华夏药业有限责任公司生产。处方抱莖苦荬菜IOOOg,制成1000ml。制法取抱茎苦荬菜，加水煎煮二次，第一次I小时，第二次0. 5小时，合并煎液，浓缩至每Iml相当于原生药0. 5g，放冷至40°C以下，在搅拌下加10%氧化钙乳调节pH值至10，放置12小吋，离心，离心沉淀物称重，悬浮于5. 3倍量95%こ醇中(使含醇量达80% )，加50%硫酸溶液调节pH值至3-4，充分搅拌使反应完全，离心，离心液加40%氢氧化钠溶液中和PH值至7. 0，滤过，滤液回收こ醇，并挥尽こ醇，用注射用水稀释至每Iml相当于原生药4g，置-5°C以下放置12小时以上，滤过，滤液加0. 1-0. 2%药用活性炭粉末，煮沸15分钟，置_5°C以下放置24小时以上，滤过，滤液加注射用水稀释至规定量，调节pH值至7. 0-7. 5，用微孔滤膜(孔径0.22i!m)滤过，灌封，在105°C灭菌45分钟，即得。性状本品为浅黄棕色至黄棕色的澄明液体。含量测定本品每IOml含总黄酮以无水芦丁(C27H3tlO16)计，不得少于4. Omg0含抱茎苦荬菜以腺苷(CltlH12N5O4)计，不得少于0. 025mg。功能主治活血止痛，清热祛瘀。用于瘀血闭阻的胸痹，证见胸闷、心痛，ロ苦，舌暗红或存瘀斑等。适用于冠心病、心绞痛见上述病状者。亦可用于脑梗塞者。用法用量静脉滴注，一次10_40ml，一日I次；用5%葡萄糖或0. 9%氯化钠注射液稀释至250-500ml后应用；14天为ー疗程；或遵医嘱。规格每支装(I)10ml, (2) 20ml, (3)40ml。阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)即老年痴呆,是老年人常见的ー种多发慢性进行性神经退化性疾病，临床上表现为记忆障碍、失认、空间记忆能力损害、抽象思维和计算能力损害、人格和行为改变等特征。随着全球人口老龄化，又缺乏有效的治疗手段，老年痴呆的发病率呈逐年上升的趋势，发病年龄逐渐偏低，已经成为危害人类健康，减低生活质量的致死性疾病。研究报道，苦碟子注射液还有适用于眼底病，肺炎、抗病毒、抗单纯疱疹病毒病状者，但在治疗痴呆药物中的应用未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对上述不足而提供一种苦碟子注射液的新用途，即苦碟子注射液在制备治疗痴呆药物中的应用。 本发明的技术解决方案是苦碟子注射液在制备治疗痴呆疾病药物中的应用。苦碟子注射液可直接用于对痴呆患者注射使用。本发明的优点是1、通过苦碟子注射液对ム@脑内注射致痴呆大鼠的影响实验，实验结果表明苦碟子能通过增加脑部供血量，改善脑部微循环，加强A 3的代谢，降低注射区域的AP沉积，发挥保护神经元的作用；同时苦碟子可能通过降低血脂，保护心脑血管，減少AP诱导的氧化损伤，起到保护神经元的作用。2、掲示了苦碟子注射液新的药用用途，増加了苦碟子注射液的适应症，对痴呆疾病有疗效。下面将结合药效学实验对本发明作进ー步详细描述。
图I是定位航行学习训练大鼠的逃避潜伏期图；图2是定位航行学习训练大鼠的游泳距离图；图3是大鼠记忆检测逃避潜伏期图；图4是大鼠穿越平台次数图；图5是HE染色观察苦碟子对A P 1-40致AD大鼠海马的影响(X 4)图；图6是苦碟子对AP卜4(|致AD大鼠海马硫磺素S染色的影响(X4)图。
具体实施例方式实验例苦碟子注射液对A ^脑内注射致痴呆大鼠的影响一、实验材料I、药品与试剂试验药物苦碟子注射液由吉林通化华夏药业股份有限公司提供，注射液，IOml/瓶；阳性药，哈伯因(石杉碱甲片)由河南竹林众生制药股份有限公司豫中制药厂生产；A 3ト40 :购自Sigma公司。2、实验动物Wistar大鼠，雄性，180_220g，上海斯莱克公司提供。ニ、实验方法I、剂量确定试验根据临床用药剂量10_40ml/天/人,常用量30_40ml/天/人,推算大鼠用量为5ml/kg，作为中剂量，上下各设ー个剂量，即设2. 5、5、10ml/kg三个剂量。由于上次试验中低剂量均显现一定疗效，因此本次试验剂量下调，设I. 25,2. 5、5ml/kg三个剂量，给药体积2ml/200g，给药途径为腹腔注射。阳性药哈伯因按0. lmg/kg剂量灌胃给药。空白组、假手术组、模型组腹腔注射给予生理盐水。2、A P 的老化A^ ^40按照说明书以PBS溶液配制成I. 4mg/ml，于37°C培养箱中孵育5天使其形成聚集态。3、动物分组与给药取大鼠，随机分为7组正常组、假手术组、模型组、苦碟子注射液低、中、高剂量组、阳性药哈伯因组，每组12只动物。大鼠经戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻酔后固定于脑立体定位仪上，常规备皮消毒，切开皮肤，暴露前囟，海马CAl区定位參照包新明等的《大鼠脑立体定向图谱》(前囟后3. Omm,中缝旁开2. 2mm，硬膜下2. 8mm) 。模型组及给药组分别于右侧海马CAl区用微量进样器垂直颅骨进针，缓慢注入凝聚态A P 5 Ul (I y 1/min)，留针5min，以使A ^充分弥散，然后缓慢撤针，縫合手术切ロ，保温苏醒。对照组注入等量灭菌PBS，余步骤同前。术前7天开始给予相应药物，连续给药至实验结束。三、实验检测指标Morris水迷宫实验术后第11天进行Morris水迷宮实验。各组大鼠每天训练I次，连续训练4天(训练至80%大鼠能够找到平台)，即定位航行实验，记录动物找到平台所用时间(即逃避潜伏期)。约120s未找到站台者，引导其按直线方向游向平台并在平台上站立30s，诱导其学习记忆。定位航行实验结束后，间隔I天，撤去平台，将大鼠从入水点放入水中，记录第一次到达原平台时间以及穿越原平台的次数。评价动物的学习记忆功能。数据分析采用单因素方差分析(one-way AN0VA)。大鼠脑生化指标测定和组织切片检测取材、染色迷宫测试后24h，部分大鼠深度麻醉(10%水合氯醛0.35mL/Kg)，经主动脉快速灌入含有肝素钠10U/mL的0. IM PBS IOOmL,然后灌入含4 %多聚甲醛的PBS(4°C )200mL。断头取脑，置新配4%多聚甲醛固定液固定24h，制备切片。注射点附近连续冠状切片，片厚8 ym，HE染色淘汰无注射点切片。切片进行刚果红染色实验检测A 3。行为学测试完毕24h后，取血。取血后快速断头，打开颅腔，在冰台迅速取出脑组织，冷生理盐水冲洗后放入离心管，置冰盒中保存备用。用时称重，用0.9%生理盐水制成10%的脑组织匀浆。按试剂盒说明分别测定血脂、TXB2、6-Keto_PGFla、丙ニ醛(MDA)含量、及超氧化物岐化酶(S0D)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和钠钾ATP酶(Na+-K+_ATPase)、钙 ATP 酶(Ca2+_ATPase)活性。四、实验结果在学习训练试验中，大鼠的逃避潜伏期和到达平台前游泳距离随大鼠训练时间的増加明显减少，第三天已经有80%大鼠能够找到平台，苦碟子给药组大鼠表现出学习能力较好的趋势，具有统计学意义(如图1、2，表I所示。图1、2中KDZL为苦碟子低剂量；KDZM为苦碟子中剂量；KDZH为苦碟子高剂量；n = 12，X 土 SE)。但是在第四天成绩出现反弾，因此在结束第四天的训练后取消第五天的训练。在第六天的记忆测试试验中，对于首次到达原平台时间这一行为学指标，苦碟子给药组的中、高剂量(即上次试验的低、中剂量)均表现出一定的改善记忆能力，且具有统计学意义(如图3、4，表I所示。*p < 0. 05vs模型组；#p < 0.05vs假手术组)。而对于穿越原平台的次数，苦碟子低、中、高剂量组相对模型组有较明显改善，具有统计学意义(如图3、4，表I所示)。对于到达平台前游泳距离和游泳距离百分比两个指标，给药组无明显影响(表I)。另外由体重表观察，此次给予苦碟子的大鼠，体重增加较空白组无明显差別。生化指标检测结果发现，苦碟子给药组的血脂、TXB2和6-Keto-PGFl a含量相对模型组有较明显降低，其中血脂和6-Keto-PGFl a两个指标的中、高剂量组具有统计学意义，而TXB2的高剂量组具有统计学意义(如表I所示)。但是模型组相对于假手术组没有显著性变化。对于丙ニ醛(MDA)含量、及超氧化物岐化酶(S0D)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和钠钾ATP酶(Na+-K+_ATPase)、钙ATP酶(Ca2+_ATPase)活性五个指标，给药组 中高剂量均可降低丙ニ醛(MDA)含量，増加及超氧化物岐化酶(S0D)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和钠钾ATP酶(Na+-K+_ATPase)、钙ATP酶(Ca2+_ATPase)的活力，具有统计学意义(见表3)。大鼠脑切片HE染色结果(见图5)显示，假手术组海马CAl区细胞丰富，核膜及核仁清晰，海马注射18天后，模型组海马损伤明显，CAl区神经元细胞形态不规则，且排列杂乱，神经元有缺失，注射区域可见锥体细胞条带中断，结构紊乱，细胞体积变小，密度降低。而苦碟子组中、高剂量组与模型组相比，CAl区细胞形态规则，排列明显有序，锥体细胞有明显恢复，中断条带不明显。阳性药哈伯因组与模型组相比，也发现CAl区的神经元有明显改善。硫磺素染色结果(见图6)显示在荧光显微镜下，空白组和假手术组在AP注射部位无明显硫磺素的黄緑色荧光，而模型组在A 3注射部位呈现明亮的黄緑色荧光；与模型组相比，苦碟子组中、高剂量组注射部位荧光强度明显减少。五、讨论在行为学试验中，苦碟子给药组中、高剂量组大鼠的逃避潜伏期及穿越原平台的次数均较模型组有明显的改善，且具有统计学意义。这表明苦碟子对A3诱导的痴呆大鼠模型的学习、记忆能力具有一定改善作用。生化指标中，丙ニ醛(MDA)含量代表氧化损伤的程度，而超氧化物岐化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)代表了机体的抗氧化能力。实验结果表明，苦碟子能够降低丙ニ醛(MDA)含量，増加及超氧化物岐化酶(S0D)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力，从而减少神经元细胞的氧化损伤。脑组织中钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)、钙ATP酶(Ca2+-ATPase)的活力是脑组织细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。实验结果表明，苦碟子给药组大鼠脑组织中钠钾ATP酶(Na+-K+_ATPase)、钙ATP酶(Ca2+_ATPase)的活カ较模型组有较明显的提高，提示苦碟子能够改善A3诱导的神经元细胞能量代谢及功能的损伤情況。苦碟子同时具有降低血脂的功效，而降低血脂是保护心脑血管的ー种重要途径。TXB2具有收缩血管、诱导血小板聚集和形成血栓等作用，苦碟子能够减少TXB2的含量，減少血管的收缩和血栓的形成，有利于提高脑组织供血，改善脑部的微循环，加强注射区域
的代谢。因细胞受损伤时，细胞膜的通透性和完整性同时被破坏，导致细胞膜透性増加，使细胞内蓄积的前列腺素(PGl)流到细胞外液，由于PGl不稳定，目前难以直接检测。因此国内外以检测6-keto-PGFla作为判断脑神经、心肌、肺组织损伤的敏感性指标[1，2]。实验结果表明，苦碟子给药组6-Keto-PGFl a的含量明显降低，表明苦碟子能够减少脑组织中神经元的损伤。脑组织切片结果显示，模型组大鼠的脑组织受损明显，且注射区域有明显的A3沉积。而苦碟子给药组能够明显改善大鼠脑组织受损情况，降低注射区域的A3沉积。综上所述，苦碟子可能通过增加脑部供血量，改善脑部微循环，加强A 3的代谢，降低注射区域的AP沉积，发挥保护神经元的作用；同时苦碟子可能通过降低血脂，保护心脑血管，減少AP诱导的氧化损伤，起到保护神经元的作用。表I.苦碟子对A脑内注射所致痴呆大鼠模型的影响(n = 12,X±SE )
权利要求
1.苦碟子注射液在制备治疗痴呆疾病药物中的应用。
2.如权利要求I所述的苦碟子注射液在制备治疗痴呆疾病药物中的应用，其特征在于苦碟子注射液可直接用于对痴呆患者注射使用。
全文摘要
本发明涉及一种中药制剂的新用途，即苦碟子注射液在制备治疗痴呆药物中的应用。苦碟子注射液可直接用于对痴呆患者注射使用。通过苦碟子注射液对Aβ脑内注射致痴呆大鼠的影响实验，实验结果表明苦碟子能通过增加脑部供血量，改善脑部微循环，加强Aβ的代谢，降低注射区域的Aβ沉积，发挥保护神经元的作用；同时苦碟子可能通过降低血脂，保护心脑血管，减少Aβ诱导的氧化损伤，起到保护神经元的作用。揭示了苦碟子注射液新的药用用途，增加了苦碟子注射液的适应症，对痴呆疾病有疗效。
文档编号A61P25/28GK102626433SQ201210126908
公开日2012年8月8日 申请日期2012年4月27日 优先权日2012年4月27日
发明者华玉强 申请人:通化华夏药业有限责任公司