一测多评法测定苦碟子注射液中有机酸含量的制作方法
【专利摘要】本发明涉及中药成分分析领域，即一测多评法测定苦碟子注射液中有机酸含量。其步骤如下：（1）色谱条件；（2）对照品溶液的制备；（3）供试品溶液的制备；（4）校正因子计算。以菊苣酸为内参物，计算菊苣酸与单咖啡酰基酒石酸、绿原酸、咖啡酸的相对校正因子，将其作为常数用于含量测定。以苦碟子注射液中有效活性成分且含量较高的菊苣酸作为内标物，计算校正因子，对碟子注射液中单咖啡酰基酒石酸、绿原酸、咖啡酸成分含量进行计算，可同时测定注射液中4种有机酸成分的含量，可实现科学、灵敏、快速地监控工业生产中苦碟子注射液的质量，同时可解决因对照品缺乏而无法客观合理地控制苦碟子注射液质量的问题。
【专利说明】-测多评法测定苦碟子注射液中有机酸含量
[0001]
【技术领域】 本发明涉及中药成分分析领域，即一测多评法测定苦碟子注射液中有机酸含量。
【背景技术】
[0002] 在现有技术中，苦碟子别名满天星，苦卖菜，主要分布于我国东北及内蒙古等地， 为菊科植物抱茎苦卖菜（Ixeris sonchifolia炬ge. )Hance)的当年生干燥全草，性寒，味 苦、辛，具有清热解毒、排賊止痛之功效W。苦碟子（碟脉灵）注射液是W苦碟子为原料提 取精制而成的静脉注射液，具有活血化癒，改善微循环的作用该注射液已上市多年， 疗效确切。实验研究表明，苦碟子注射液化学成分比较复杂，而与其临床疗效相关的主要活 性成分为有机酸类、黄丽类和核巧类成分。
[0003] 苦碟子注射液（曾用名：碟脉灵注射液）列入国家药品标准产品（国药准字 Z20025450)，由通化华夏药业有限责任公司生产。
[0004] 处方；抱茎苦卖菜lOOOg,制成1000ml。
[0005] 制法；取抱茎苦卖菜，加水煎煮二次，第一次1小时，第二次0. 5小时，合并煎液， 浓缩至每1ml相当于原生药0. 5g，放冷至4(TC W下，在揽拌下加10%氧化巧乳调节抑值至 10,放置12小时，离也，离也沉淀物称重，息浮于5. 3倍量95%己醇中（使含醇量达80%)，力口 50%硫酸溶液调节抑值至3 - 4,充分揽拌使反应完全，离也，离也液加40%氨氧化轴溶液 中和抑值至7. 0,滤过，滤液回收己醇，并挥尽己醇，用注射用水稀释至每1ml相当于原生 药4g，置-5C W下放置12小时W上，滤过，滤液加0. 1 - 0. 2%药用活性炭粉末，煮沸15分 钟，置-5C W下放置24小时W上，滤过，滤液加注射用水稀释至规定量，调节抑值至7. 0 -7. 5,滤过，灌封，灭菌，即得。性状：本品为浅黄踪色至黄踪色的澄明液体。
[000引含量测定；含量测定；本品每10ml含总黄丽W无水芦下（C2化。0ie)计，不得少于 4. Omg。含抱茎苦卖菜W腺巧（CinHi2Ns04)计，不得少于0. 025mg。
[0007] 功能主治：活血止痛，清热巧癒。用于癒血闭阻的胸瘍，证见：胸闷、也痛，口苦，舌 暗红或存癒斑等。适用于冠也病、也绞痛见上述病状者。亦可用于脑梗塞者。
[0008] 用法用量：静脉滴注，一次10 - 40ml，一日1次；用5%葡萄糖或0. 9%氯化轴注射 液稀释至250 - 500ml后应用；14天为一疗程；或遵医嘱。
[0009] 规格；每支装（1) 10ml，（2) 20ml，（3) 40ml。
[0010] 实验研究表明，苦碟子注射液化学成分比较复杂，而与其临床疗效相关的主要活 性成分为有机酸、黄丽类和核巧类成分。
[0011] 关于苦碟子注射液中有机酸含量测定，中国发明专利申请书公开了一种名称 为"HPLC-DAD法同时测定苦碟子注射液中五种有机酸类成分含量的方法，专利申请号： 201310071078. 8"，具体是HPLC-DAD法同时测定苦碟子注射液中五种有机酸类成分含量 的方法，其步骤如下；（1)混合对照品溶液的配制。（2)供试品溶液的配制。（3)测定法： HPLC-DAD法。色谱条件；色谱柱；Diamonsil Ci8 (2);柱温；4(TC;检测波长：325 nm;流 速；1血-min-i;进样量；10 uL;流动相；己膳，0. 1%甲酸水；梯度洗脱条件；0-15 min, 9%己膳线性增加至11%，15-16 min线性增加至18%己膳，16-30 min线性增加至20%己膳， 30-40 min线性增加至49%己膳，其缺点是测定时需要五种有机酸的对照品，部分对照品价 格较高，且该方法检验周期长，测定操作复杂，难W满足产品质检和生产过程质控高通量样 本测定的要求。
【发明内容】
[0012] 本发明的目的是针对上述不足而提供一种一测多评法测定苦碟子注射液中有机 酸含量。W苦碟子注射液中有效活性成分且含量较高的菊宦酸作为内标物，计算校正因子， 对碟子注射液中单咖啡醜基酒石酸、绿原酸、咖啡酸成分含量进行计算，可同时测定注射液 中4种有机酸成分的含量，可实现科学、灵敏、快速地监控工业生产中苦碟子注射液的质 量，同时可解决因对照品缺乏而无法客观合理地控制苦碟子注射液质量的问题。
[0013] 本发明的技术解决方案是；一测多评法测定苦碟子注射液中有机酸含量，其特征 在于步骤如下： (1)色谱条件： 色谱柱；Diamonsil C18, SymmetiT C18。
[0014] 柱温；35°C ;检测波长；330nm。
[001 引 流速；1. 0 ml/min。
[0016] 进样量；10 uL。
[0017] 流动相；A为0. 4%磯酸-&0, B为己膳，按下面进行梯度洗脱。
[001 引 时间 0. lmin，A 相 98%，B 相 2% ;时间 5min，A 相 96%，B 相 4% ;时间 10min，A 相 90%，B 相 10% ;时间 36min，A 相 75%，B 相 25% ;时间 40min，A 相 50%，B 相 50%。
[0019] (2)对照品溶液的制备；精密称取单咖啡醜基酒石酸标准品4. 00 mg、咖啡酸标准 品1. 00 mg、绿原酸柄准品1. 20 mg、阿魏酸柄准品0. 400mg、鋼宦酸柄准品4. OOmg,分别直 量瓶中，先加50%甲醇溶解再定容，摇匀，即得对照品胆备液；吸取各对照品胆备液，制成含 单咖啡醜基酒石酸120. 0 y g ? m。、咖啡酸20. 00 y g ? m。、绿原酸24 . 00 y g ? m。、阿 魏酸8. 000 y g ? m。、菊宦酸120. 0 y g ? m。的混合对照品溶液。
[0020] (3)供试品溶液的制备；取苦碟子注射液，摇匀后打开，50%甲醇稀释为注射液体 积2倍，生药0. 5g ? ml/i，0. 45 y m滤膜滤过，即得供试品溶液。
[0021] (4)校正因子计算，W菊宦酸为内参物，计算菊宦酸与单咖啡醜基酒石酸、绿原酸、 咖啡酸的相对校正因子，将其作为常数用于含量测定。
[002引本发明的优点是；1、利用中药有效成分内在函数关系和比例关系，W菊宦酸为内 参物，计算菊宦酸与单咖啡醜基酒石酸、绿原酸、咖啡酸的相对校正因子，分别为1.295、 1. 410、0. 8421，将其作为常数用于含量测定。并考察了不同柱温、不同流速、不同色谱柱、不 同仪器对苦碟子注射液中单咖啡醜基酒石酸、绿原酸、咖啡酸、相对校正因子的影响。通过 只测定苦碟子注射液中的一个成分(菊宦酸）实现多个成分(其它3个有机酸）的同时测定， 可应用于测定苦碟子注射液中的多种有机酸类成分。2、试验表明采用相对保留值法对苦碟 子注射液中有机酸类待测成分进行色谱峰定位简便可行。该方法实现了简便、快捷、结果可 靠，科学、规范、一测多评的质控目标，确保了苦碟子注射液质量。具有方法先进、稳定性和 重现性好、可操作性强等优点，对控制质量和保证疗效具有重要意义。
[0023] 下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。
【专利附图】
【附图说明】
[0024] 图1四种有机酸高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0025] 实验例1 一测多评法测定苦碟子注射液中有机酸含量： 1实验材料 1. 1仪器 Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪（LC-20AT高压粟；SPD-M20A检测器；S比-20A进 样器，外加谱祥M0DEL320柱温箱）。Agilent 1200高效液相色谱仪（1200脱气机；1200高 压粟；1260检测器；1260柱温箱）。Satorius BT 12抓型十万分之一电子分析天平（北京 赛多利斯公司）。KH 2200B型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。
[002引 1. 2试剂 单咖啡醜基酒石酸标准品（天津一方科技有限公司，批号；AB142C，含量>98%); 咖啡酸标准品巧YSIN公司，批号；ES-10112201，含量>98%); 绿原酸标准品巧YSIN公司，批号；ES-11042802含量> 99. 0%); 阿魏酸t不准品（中国药品生物制品检定所，批号；110773-201012,含量99. 6%); 菊宦酸标准品（中国药品生物制品检定所，批号=111752- 200902,含量99.9%); 甲醇（色谱纯，康科德科技有限公司）；磯酸（分析纯，天津化学试剂批发公司）；己膳 (色谱纯，Sigma公司）；水为超纯水（杭州娃哈哈集团有限公司）。
[0027] 苦碟子注射液（通化华夏药业有限责任公司，批号；130519,130520,130521， 130522,130523,130524,130525,130601，130602,130603,130604,130605,130606,130607， 130608,130609,130610,130611，130612,130613。
[0028] 2方法与结果 2. 1色谱条件 色谱柱；Diamonsil C18(2)巧ym，200X4.6 mm)(迪马科技有限公司） SymmetiT C18 巧 y m, 150X3. 9mm) (Waters 科技有限公司） 柱温；35°C ;检测波长；330nm ; 流速：1. 0 ml/min ; 进样量；10 UL; 流动相；A为0. 4%磯酸-&0, B为己膳，按"表1"进行梯度洗脱。
[0029] 表1流动相洗脱梯度
【权利要求】
1. 一测多评法测定苦碟子注射液中有机酸含量，其特征在于步骤如下： (1) 色谱条件： 色谱柱：Diamonsil C18, Symmetry C18 ; 柱温：35°C ;检测波长：330nm ; 流速：1. 0 ml/min ; 进样量：10 UL; 流动相：A为0. 4%磷酸-H20, B为乙腈，按下面进行梯度洗脱： 时间 0. lmin，A 相 98%，B 相 2%;时间 5min，A 相 96%，B 相 4%;时间 10min，A 相 90%， B 相 10% ;时间 36min，A 相 75%，B 相 25% ;时间 40min，A 相 50%，B 相 50% ; (2) 对照品溶液的制备：精密称取单咖啡酰基酒石酸标准品4. 00 mg、咖啡酸标准品 1. 00 mg、绿原酸标准品1. 20 mg、阿魏酸标准品0. 400mg、菊苣酸标准品4. OOmg，分别置量瓶 中，先加50%甲醇溶解再定容，摇匀，即得对照品贮备液；吸取各对照品贮备液，制成含单咖 啡酰基酒石酸120. 0 ii g ? mL'咖啡酸20. 00 y g ? mL'绿原酸24 ? 00 y g ? mL'阿魏酸 8. 000 ii g ? mL'菊苣酸120. 0 ii g ? ml/1的混合对照品溶液； (3) 供试品溶液的制备：取苦碟子注射液，摇匀后打开，50%甲醇稀释为注射液体积2 倍，生药0. 5g ? mL' 0. 45 y m滤膜滤过，即得供试品溶液； (4) 校正因子计算：以菊苣酸为内参物，计算菊苣酸与单咖啡酰基酒石酸、绿原酸、咖啡 酸的相对校正因子，将其作为常数用于含量测定。
【文档编号】G01N30/88GK104502502SQ201410824718
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月27日 优先权日:2014年12月27日
【发明者】任晓亮, 李遇伯, 任德飞, 孙立丽, 邹敬韬, 杨红素 申请人:通化华夏药业有限责任公司