专利名称：电位滴定法测定五味子提取物中总有机酸的含量的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药成分的含量测定方法，特别涉及一种中药组五味子提取物中总有机酸的含量
背景技术：
五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinen-sis (Turcz. )Baill.的干燥成熟果实，习称北五味子。其味酸、甘，性温，入肺、心、肾经，收敛固涩、益气生津、补肾宁心。用于久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、短气脉虚、内热口渴。五味子含多种有效成分如木脂素、有机酸、挥发油、多糖，木脂素类成分可滋补肝肾、治疗肝炎，琥珀酸、苹果酸等多种有机酸具有祛痰和镇咳作用，木脂素类成分检测方法较多，但有机酸测定的文献报道较少。本实验采用直接电位滴定的方法测定五味子提取物中总有机酸的量，避免酸碱滴定法中有机酸提取液较深颜色对滴定终点的干扰。 本发明使用的五味子提取物为注射用益气复脉(冻干)生产过程的中间产品，工艺为五味子药材经水提醇沉-氢氧化钠调pH-冻干所得。在“调pH”时五味子中有机酸与碱反应生成盐，所以测定提取物中有机酸时首先需要将盐还原成酸。本发明从该五味子提取物中分离得到琥珀酸、肉桂酸、对羟基苯甲酸等有机酸，其中琥珀酸比例最大，达1%以上，所以本实验以琥珀酸为对照品测定五味子提取物中总有机酸的含量。
发明内容
因此，本发明提供一种新的测定五味子提取物中总有机酸的含量的方法，该方法包括以下步骤步骤1，对照品溶液的制备称取琥珀酸，用水溶解备用。步骤2、供试品溶液的制备取五味子提取物加水溶解，过阳离子交换树脂用水洗脱，得到流出液和洗脱液。步骤3、取对照品溶液和供试品溶液，按照《中国药典》(2010年版)附录VIIIA电位滴定法进行滴定；步骤4、以所用滴定液的量计算供试品溶液中有机酸的含量。优选的本发明的测定法包括以下步骤步骤1，对照品溶液的制备准确称取琥珀酸76. 12mg，置IOOmL量瓶中，用水定容，
摇匀，备用。步骤2、供试品溶液的制备取五味子提取物约O. 3g，精密称定，置离心管中，加20mL水溶解，离心(3000rpm) 5min,上清液过001*1阳离子交换树脂(经过酸-水-碱-水-酸-水预处理，水洗至中性)；再按上述方法提取两次，依次上样，流出液及水洗脱液定容至IOOmL容量瓶中，摇匀，即得。步骤3、分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20mL，按照《中国药典》(2010年版)附录VIIIA电位滴定法进行滴定；步骤4、以所用滴定液的量计算供试品溶液中有机酸的含量。本发明的方法是经过筛选获得的，研究过程如下I.仪器和试药I. I主要仪器HI9025便携式PH计，EMS-10型磁力搅拌器，碱式滴定 管；AL 204型万分之一电子分析天平，XS 105型十万分之一电子分析天平(瑞士 METTLER公司);L550低速自动平衡离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)。1.2试药及试剂琥珀酸(分析纯)；五味子提取物(批号20081001)； 氢氧化钠、盐酸、邻苯二甲酸氢钾、酚酞、超纯水等。2.方法和结果2. I溶液的制备2. 2. I对照品溶液的制备准确称取琥珀酸76. 12mg,置IOOmL量瓶中，用水定容，
摇匀，备用。2.1.2供试品溶液的制备取五味子提取物约O. 3g，精密称定，置离心管中，加20mL水溶解，离心(3000rpm) 5min,上清液过001*1阳离子交换树脂(经过酸-水-碱-水-酸-水预处理，水洗至中性)；再按上述方法提取两次，依次上样，流出液及水洗脱液定容至IOOmL容量瓶中，摇匀，即得。2.2电位滴定的可行性研究2. 2. I琥珀酸对照品突跃范围试验准确称取琥珀酸O. 6526g，置IOOmL量瓶中，用水定容，摇匀，精密吸取20mL，按照《中国药典》(2010年版)附录VIIIA电位滴定法进行滴定，并用空白校正。采用ORIGIN软件绘制一阶导数曲线(△E/AVhV。一阶导数曲线最高点对应的体积即为滴定终点体积。结果见图I。由图可见，滴定终点突越明显，实际消耗O. 1024mol/L NaOH滴定液为24. 9mL。由公式(Vw= 2CmYm/Cm)计算，理论消耗NaOH滴定液为21.5mL，相对误差为I. 84%，二者相吻合。反应公式H00CH2C-CH2C00H+2Na0H— Na00CH2C_CH2C00Na+2H202. 2. 2五味子提取物突跃范围试验精密称取五味子提取物约O. 3g，制备供试品溶液，准确吸取供试品溶液25mL按前述测定方法测定，五味子提取物的一阶导数曲线见图2。由图可见，五味子提取物供试品滴定至NaOH消耗22. ImL (E = 150. 5mV)时存在一个非常明显的滴定突跃，一阶导数曲线两边分布较为对称。2. 2. 3精密度试验精密吸取琥珀酸对照品溶液IOmL 6份，加水20mL，用O. 0097mol/L的氢氧化钠滴定液进行电位滴定，RSD为O. 81% (η = 6)，表明该方法精密度良好。2. 2. 4稳定性试验精密称取五味子提取物(批号20081001)0. 8171g，按“2. I. 2”项下制备供试品溶液，定容至250mL，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h精密吸取25mL按前述测定方法测定，计算RSD为O. 86% (η = 6)，表明供试品溶液在24h内基本稳定。2. 2. 5重复性试验精密称取五味子提取物(批号20081001)约O. 3g，按“2. I. 2”项下制备供试品溶液，平行6份。分别精密吸取供试品溶液25mL，用O. 0097mol/L的氢氧化钠滴定液进行电位滴定，计算RSD为I. 67% (η = 6)，表明该方法重复性良好。2.2.6加样回收试验精密称取已知总有机酸含量的五味子提取物(批号20081001)约O. 15g，共6份，分别加入251. 3mg/100mL的琥珀酸对照品溶液10mL，按“2. I. 2”项下制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液25mL，用O. 0097mol/L的氢氧化钠滴定液进行电位滴定，计算回收率，结果回收率分别为 99. 79%, 103. 67%, 102. 81%, 104. 89%,98. 68%, 100. 76%，平均加样 回收率为101. 77%，RSD 2.36%。结果表明该方法回收试验良好。2. 3样品含量测定精密称取6个批次的五味子提取物各约O. 3g，按“2. I. 2”项下制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液25mL，测定，结果见表I。表I.样品总有机酸含量测定结果
权利要求
1.一种五味子提取物中总有机酸的含量测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤 步骤I，对照品溶液的制备称取琥珀酸，用水溶解备用。
步骤2、供试品溶液的制备取五味子提取物加水溶解，过阳离子交换树脂用水洗脱，得到流出液和洗脱液。
步骤3、取对照品溶液和供试品溶液，按照《中国药典》(2010年版)附录VIIIA电位滴定法进行滴定； 步骤4、以所用滴定液的量计算供试品溶液中有机酸的含量。
2.根据权利要求I的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤 步骤1，对照品溶液的制备准确称取琥珀酸76. 12mg，置IOOmL量瓶中，用水定容，摇勻，备用。
步骤2、供试品溶液的制备取五味子提取物约O. 3g，精密称定，置离心管中，加20mL水溶解，离心(3000rpm)5min,上清液过001*1阳离子交换树脂(经过酸-水_碱-水_酸-水预处理，水洗至中性)；再按上述方法提取两次，依次上样，流出液及水洗脱液定容至IOOmL容量瓶中，摇匀，即得。
步骤3、分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20mL，按照《中国药典》(2010年版)附录VIIIA电位滴定法进行滴定； 步骤4、以所用滴定液的量计算供试品溶液中有机酸的含量。
3.根据权利要求I的含量测定方法，其特征在于，该方法精密度良好。
4.根据权利要求I的含量测定方法，其特征在于，供试品溶液在24h内稳定。
5.根据权利要求I的含量测定方法，其特征在于，该方法重复性良好。
6.根据权利要求I的含量测定方法，其特征在于，该方法回收试验良好。
全文摘要
本发明涉及一种电位滴定法测定五味子提取物中总有机酸的含量，该方法包括以下步骤步骤1，对照品溶液的制备称取琥珀酸，用水溶解备用，步骤2、供试品溶液的制备取五味子提取物加水溶解，过阳离子交换树脂用水洗脱，得到流出液和洗脱液，步骤3、取对照品溶液和供试品溶液，按照《中国药典》(2010年版)附录VIIIA电位滴定法进行滴定；步骤4、以所用滴定液的量计算供试品溶液中有机酸的含量。
文档编号A61K36/57GK102759558SQ20111010904
公开日2012年10月31日 申请日期2011年4月28日 优先权日2011年4月28日
发明者叶正良, 周大铮, 张奇, 李德坤 申请人:天津天士力之骄药业有限公司