专利名称：北五味子提取物及其制备方法、应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及北五味子提取物及其制备方法、应用。
背景技术：
北五味子根为木兰科五味子属北五味子(Schisandra chinensis (Turcz.)Baill)根。北五味子国内外久负盛名，味酸、甘，性温。我国常用名贵中药材，对人体具有益气、滋肾、敛肺、涩精、生津、止渴、益智、安神等功效，临床主要用于治疗慢性肝炎、失目民、多梦心悸等疾病。药理研究证明，北五味子具有保肝、抗衰老、改善心血管疾病、抗炎、抗氧化，镇静安神、增强免疫力等作用。北五味子的化学成分有木脂素、三萜、倍半萜、有机 酸、挥发油及多糖等成分。其中，北五味子有效部位药理作用的研究表明，其主要活性成分是木脂素类化合物，木脂素是以1，2，3，4_联苯1，3环辛二烯为母核的化合物，其总含量达2%-8%。木脂素成分按结构类型可分为联苯环辛二烯木脂素、螺苯骈呋喃联苯环辛二烯木脂素、4-芳基-四氢萘木脂素、2，3- 二甲基-I，4- 二芳基丁烷木脂素、2，5- 二芳基四氢呋喃木脂素五大类等150余个成分，包括五味子素、五味子甲素、五味子乙素(Y-五味子素)、五味子丙素、伪-Y-五味子素、五味子醇甲、醇乙、五味子酚、五味子酯甲、酯乙等化学成分以及日本学者提取的戈米辛A、B、D、G、H、前戈米辛等木脂素成分，五味子素丙等具有肝保护作用，五味子甲素、乙素等显示其抗肿瘤活性，常用作检测的成分主要有五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙等。在我国，一直以来都是以北五味子的果实和种子入药，很不少用北五味子种子以外的其它部位，造成非常大的浪费。近年来研究发现北五味子种子以外的其它部位也含有木脂素类成分，从北五味子的藤莖中分离五味子甲素乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲、schisandrin B、( +) 2schizandrol
B,五味子素C、( - ) 2schisandrinc、2deoxyschizandrin、( +)化合物等多种木脂素类成分，从北五味子叶中分离得到五味子乙素、丙素、酯乙、醇甲、(-)-戈米辛Ml及(-)_戈米 辛LI，北五味子果柄中分离得到了五味子丙素、甘五酸、五味子醇乙、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素，从北五味子根中分离得到了五味子乙、五味子甲素、五味子酯甲、顺芷酰戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙。不同部位五味子醇甲、甲素、乙素三种木脂素类含量比较研究表明，北五味子根中的三种成分的含量仅次于果实大于其它部位(种子35. 7g/kg,颗粒27. 8g/kg)。本发明人也在进行北五味子不同部位化学成分比较研究时发现，北五味子根含有多种木质素类化合物，其中五味子素乙和五味子素丙的含量最多，并且这些成分是北五味子中具有肝保护和抗氧化及抗肿瘤的主要成分。北五味子根或北五味子根茎在北五味子药材基地中采集时或药材的加工过程中北五味子根茎木质部留落不少，常常把这些北五味子根茎木质部当做无用的木心材料遗弃，于是我们将分析北五味子根茎木质部的化学成分后证明其含有的木脂素类成分在其化学组成和比例上与北五味子根相当，为了利用资源起见提出了本专利要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种北五味子提取物，具体是指含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物或含有18%五味子醇甲的北五味子根茎木质部乙醇提取物，及其制备方法，以及该提取物在解酒保肝方面的应用。
本发明的技术方案如下
一种北五味子提取物，其从北五味子根中提取得到的提取物中含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物。一种北五味子提取物，从北五味子根茎木质部中提取得到的提取物中含有18%五味子醇甲的北五味子根茎木质部乙醇提取物。一种北五味子提取物的制备方法，该方法包括以下过程
a、取北五味子根,用4-10倍于北五味子根重量的水浸泡12-24小时,然后取出北五味子根干燥，备用；
b、取上述干燥的北五味子根,用5-10倍于北五味子根重量的75-95%乙醇回流提取2_4次，合并各乙醇提取液；过滤，浓缩之无醇味，加水分散，进行水蒸汽蒸馏，接受水蒸汽蒸馏液于北五味子根重量的1-3倍，弃去蒸馏液，提取物放置12-24小时，分离出下面的水层，若水层分离不清可以加北五味子根量的1/2-2倍量的溶剂汽油，分出水层后取出上清物回收溶剂，得纯度较高的含5-8%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物；
C、上述的北五味子根乙醇提取物用大孔吸附树脂精制，按北五味子根提取物与大孔吸附树脂比例1-3上柱，分别用水、50%乙醇及90%乙醇梯度洗脱，收集90%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得到含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物。一种北五味子提取物的制备方法，该方法包括以下过程
a、取北五味子根莖木质部,用5-10倍于北五味子根莖木质部重量的75-95%乙醇回流提取2-4次，合并各乙醇提取液；过滤，浓缩之无醇味，得北五味子根茎木质部乙醇提取物；
b、上述的北五味子根茎木质部乙醇提取物用大孔吸附树脂精制，按北五味子根茎木质部提取物与大孔吸附树脂比例1-3上柱，分别用水，60%乙醇及95%乙醇梯度洗脱，收集95%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得到含有18%北五味子醇甲的北五味子根茎木质部乙醇提取物。上述的北五味子提取物在解酒保肝方面的应用。本发明根据目前北五味子资源的开发现状，如上所述已经对北五味子种子、藤茎、北五味子叶及北五味子果柄综合研究的基础，对北五味子根及根茎木质部化学成分研究基础，针对北五味子根和五味子根茎木质部的浪费现象对北五味子根及根茎化学成分及提取技术进行了系统的研究。分别开发了含有一种含有五味子醇甲15%的北五味子根乙醇提取物和含有五味子醇甲18%的北五味子根茎木质部乙醇提取物。通过对北五味子根，北五味子根茎木质部的研究，找到了一种能代替北五味子果实，北五味子藤茎的提取物入药的新的提取物，一方面能够解决北五味子原料紧缺的状况，另一方面也充利用了北味子根及加工中扔掉的北五味子根茎木质部资源，减少了浪费，同时提供五味子醇甲等木脂素含量高，同时与北五味子果实和藤茎相比木脂素组成与含量不同的提取物，药理活性上表现出独特的活性。本发明中北五味子根中的主要成分是木脂素类化合物，亲脂性较大，不溶于水或混溶于水的极性大的有机溶剂中。可以用不能溶解木脂素的大极性的溶剂预先去除极性大的杂质如氨基酸、蛋白质、糖类物质及一些皂苷类物质，可以纯化总木脂素提取物。不能溶解木脂素类化合物的溶剂包括水，碱水，低浓度乙醇。用水或低浓度乙醇浸溃或温浸北五味子药材的方法从中去除以上列出的杂质。本发明中北五味子根中木脂素类化合物在植物体中常于小分子萜类化合物和挥发性物质同时存在，并且其极性大小相差不大，给提取和纯化带来一定的困难，用水蒸汽蒸馏法可以去除挥发性的小分子萜类化合物和其它挥发性物质进一步纯化北五味子根提取物。本发明中由上法得到的北五味子根提取物尽管纯度较高，但是提取物中还有很多分子大小不同的低极性和极性化合物，进一步利用大孔吸附树脂根据其分子筛和吸附性的特性，从北五味子根提取物中除掉分子量大的杂质和比北五味子木脂素极性大的化合物从而得到纯度高的北五味子根提取物。 本发明中的质量控制可以选用高效液相色谱法、紫外分光光度法。本发明还涉及一种产品，其包括含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物或含有18%五味子醇甲的五味子根茎木质部的乙醇提取物及药学上可以接受的赋形剂或载体。本发明进一步涉及含有15%五味子醇甲的北五味子根提取物，含有18%五味子醇甲的北五味子根茎木质部提取物在制备保健功能产品中的用途。根据本发明，所指保健功能是肝保护，解酒毒，免疫增强。从前的专利和文献中还没有查到北五味子和北五味子根提取物解酒毒的保健功能，从前的专利和文献中还没有查到北五味子根及北五味子根茎乙醇提取物保护肝、增强免疫的作用。因为北五味子根中提取的木脂素类化合物如，五味子丙素等具有很好的肝保护及抗氧化作用，有助于乙醇代谢和解酒作用，对解酒毒起补足作用。
具体实施例方式通过下面的具体实施例可进一步了解本发明。但它们不是本发明涉及到的全部内容的限定。实施例I :北五味子根Ikg用8L水60°C浸泡12小时，放出水，取出北五味子根干燥，取干燥的北五味子根要用90%乙醇6L，5L回流提取2次，合并各乙醇提取液；过滤，浓缩之药材和提取物比I. 5L，加水至3L分散乙醇浓缩物，进行水蒸汽蒸馏，接受水蒸汽蒸馏液于药材重量的I倍，继续浓缩至1L，提取物放置过夜，分离出下面的水层，上面提取物中加90%乙醇O. 3L后浓缩得北五味子根乙醇提取物115g。上述的北五味子根乙醇提取物115g用大孔吸附树脂500g上柱，分别用水洗至无色,用50%乙醇洗脱二个柱体积，再用90%乙醇洗脱，收集90%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得到含有15%(质量百分数)五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物35. 6g。含量测定方法为，以五味子甲醇为对照品，用高效液相色谱法测定，色谱条件为色谱柱ALLTImA-C18(5 μ m，4. 6mmX 150mm) ；SCL-1OA VP紫外检测器，检测波长254nm ;流动相为甲醇-水(13 :7);流速 I. O ml/ min ;室温。实施例2 :北五味子根茎木质部100g，用800ml，95%乙醇浸泡12小时，回流提取2个小时，再加600ml95%乙醇回流提取I. 5小时，合并乙醇提取液；过滤，浓缩得北五味子根茎木质部乙醇提取物10. 5g。北五味子根茎木质部乙醇提取物用大孔吸附树脂精制，取大孔吸附树脂30g，先用水洗至无色，再用60%乙醇300ml洗，最后用95%乙醇400ml洗脱，收集95%乙醇洗脱液，减压回收乙醇得到，北五味子根茎木质部乙醇提取物3. 25g,含18%(质量百分数)五味子醇甲。含量测定是，以五味子甲醇为对照品，用高效液相色谱法测定，色谱条件为色谱柱ALLTImA-C18 (5 μ m，4. 6mmX 150mm) ；SCL-1OA VP紫外检测器，检测波长254nm;流动相为甲醇-水(13 :7);流速1.0 ml/ min ;室温。实例3五味子提取物解酒实验。通过以下实验(北五味子根及北五味子根茎木质部提取物对小鼠全血乙醇含量的影响)证明本发明的北五味子提取物在解酒保肝方面的应用。材料与方法
I. I实验材料
1.1.1实验样品和试剂由延边大学医学院动物室提供。北五味子根乙醇提取物和五味子根茎木质部乙醇提取物自制。实验用酒二锅头酒，酒精度50%(v/v)。在超市购入，用酒精计测其酒精度(未经校对)。乙醇标准液用蒸馏水配成O. 02mg/ml
1.I. 2实验动物昆明种小鼠，雌雄各半，体重8-22g。I. I. 3实验仪器气相色谱仪日本岛津GC-10A。I. 2实验方法 1.2. I色谱条件
色谱柱DB-5毛细管柱(30mx O. 25mm, O. 25 μ m);柱温程序升温，起始温度50°C，保持5min，170°C，检测器与进样口温度200°C ;气体流速氮气80ml / min，氢气50ml/min，空气50ml / min。1.2.2标准曲线绘制将标准使用液稀释成O. 002，O. 004，O. 006，O. 008，O. 010，
0.012 (mg / ml)相当于样品中乙醇含量分别为 10. 0，20. 0，30. 0，40. 0，50. 0，60. O (mg /
100 ml)浓度系列。各进样2. O μ 1，以浓度作横坐标，峰面积作纵坐标，绘制标准曲线。1.2.3样品测定取小鼠120只随机分为北五味子根乙醇提取物，北五味子根茎木质部乙醇提取物以及对照组。北五味子根乙醇提取物(O. 04mg/ml)0. 5ml/只；北五味子根茎木质部乙醇提取物(O. 04mg/ml)0. 5ml/只；对照组灌胃等量生理盐水，30分钟后三组小鼠灌二锅头酒O. 07ml/只，分别于酒后30、60、90、180分钟，取各组动物10只，每只精密吸取静脉血样1ml，于50ml容量瓶中，加水稀释后，加3. 0ml、20%三氯乙酸，定容。离心后上清液取2μ I注入色谱仪，得其峰高值，从标准曲线上查得相应乙醇浓度。2结果与讨论
2.I北五味子根和北五味子根茎木质部乙醇提取物对小鼠酒后30分至180分钟内不同时间乙醇吸收及代谢的影响见附表。表I各组小鼠血中乙醇质量浓度测定结果(叉±) mg/ml
权利要求
1.一种北五味子提取物，其特征在于从北五味子根中提取得到的提取物中含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物。
2.一种北五味子提取物，其特征在于从北五味子根茎木质部中提取得到的提取物中含有18%五味子醇甲的北五味子根茎木质部乙醇提取物。
3.—种如权利要求I所述北五味子提取物的制备方法，其特征在于该方法包括以下过程 a、取北五味子根,用4-10倍于北五味子根重量的水浸泡12-24小时,然后取出北五味子根干燥，备用； b、取上述干燥的北五味子根,用5-10倍于北五味子根重量的75-95%乙醇回流提取2-4次，合并各乙醇提取液；过滤，浓缩之无醇味，加水分散，进行水蒸汽蒸馏，接受水蒸汽蒸馏液于北五味子根重量的1-3倍，弃去蒸馏液，提取物放置12-24小时，分离出下面的水层，若水层分离不清可以加北五味子根量的1/2-2倍量的溶剂汽油，分出水层后取出上清物回收溶剂，得纯度较高的含5-8%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物； C、上述的北五味子根乙醇提取物用大孔吸附树脂精制，按北五味子根提取物与大孔吸附树脂比例1-3上柱，分别用水、50%乙醇及90%乙醇梯度洗脱，收集90%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得到含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物。
4.一种如权利要求2所述北五味子提取物的制备方法，其特征在于该方法包括以下过程 a、取北五味子根莖木质部,用5-10倍于北五味子根莖木质部重量的75-95%乙醇回流提取2-4次，合并各乙醇提取液；过滤，浓缩之无醇味，得北五味子根茎木质部乙醇提取物； b、上述的北五味子根茎木质部乙醇提取物用大孔吸附树脂精制，按北五味子根茎木质部提取物与大孔吸附树脂比例1-3上柱，分别用水，60%乙醇及95%乙醇梯度洗脱，收集95%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得到含有18%北五味子醇甲的北五味子根茎木质部乙醇提取物。
5.权利要求I或2所述的一种北五味子提取物在解酒保肝方面的应用。
全文摘要
本发明公开了一种北五味子提取物，具体是指从北五味子根中提取得到的提取物中含有15%五味子醇甲的北五味子根乙醇提取物，或是从北五味子根茎木质部中提取得到的提取物中含有18%五味子醇甲的北五味子根茎木质部乙醇提取物。本发明能够解决北五味子原料紧缺的状况，同时也充利用了北味子根及加工中扔掉的北五味子根茎木质部资源，减少了浪费，本发明提供五味子醇甲等木脂素含量高，同时与北五味子果实和藤茎相比木脂素组成与含量不同的提取物，药理活性上表现出独特的活性。本发明还公开了一种北五味子提取物制备方法及其北五味子提取物在解酒保肝方面的应用。
文档编号A61K125/00GK102755383SQ20121028590
公开日2012年10月31日 申请日期2012年8月13日 优先权日2012年8月13日
发明者金光洙, 雒佳 申请人:范惠明, 金光洙