离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法
【专利摘要】本发明提供一种离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法，其只需将样品经过0.45μm滤膜过滤便可得待测液，即样品处理简单，利用H2SO4溶液-乙腈为流动相，并采用IC?PAKTM?ION?Exclusion色谱柱，以0.5mL/min的流速进行梯度洗脱分离，能够在较短的时间内同时对样品中的13种有机酸的含量进行测定，而且流动相配制方便易操作，在检测有机酸的同时避免了现有技术中因使用磷酸盐而导致的可能析出造成的色谱柱和色谱系统堵塞污染的问题，另外，还具有检测准确定高、重复性好的特点，进而极大的节省了检测成本。
【专利说明】离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法
【【技术领域】】
[0001]本发明涉及化学领域中的一种测定方法，尤其涉及一种离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法。
【【背景技术】】
[0002]发酵酒是以粮谷、水果、乳类等为原料，主要经酵母发酵等工艺酿制而成的，酒精含量小于24%的饮料酒。主要包括啤酒、葡萄酒、水果酒和黄酒等 。
[0003]有机酸是酒体的重要组成成分，是酒体产香的前体物质，同时有机酸能增加酒的浓厚感，降低甜度，具有缓冲、协助其他香味成分的重要作用，有机酸的种类、浓度与葡萄酒的类型、品质优劣有很大关系，影响酒的口感、色泽及生物稳定性。黄酒中的有机酸主要包括琥珀酸、乳酸、醋酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、草酸等，适量的酸在黄酒中起到缓冲调和诸味的作用，并在贮存过程中逐步形成芳香酯，但黄酒的酸度过高，会造成黄酒酸败；酸度过低，会造成黄酒口味淡薄，品质下降。葡萄酒中的有机酸主要包括酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、乙酸等，其中乙酸含量过高则表明在葡萄酒的酿造、储存过程中已感染杂菌。因此，有机酸的检测在黄酒和葡萄酒的生产酿造和储存过程中具有重要的作用。
[0004]高效液相色谱法灵敏简便、选择性好、准确度高，在分离有机酸得到广泛应用。目前高效液相色谱法通常使用C18柱分离有机酸，多以磷酸盐为流动相，操作较为繁琐，且不利于色谱柱及色谱系统，色谱分离条件参数的优化受到一定的限制，对于某些有机酸的分离度较小。而离子排斥色谱法分离有机酸分离度好，灵敏度高，离子排斥色谱法分离有机酸具有以下优点:极适合于含水基体、对强亲水性物质不会造成损失、前处理简单、有机酸分析几乎不受无机阴离子干扰。但目前还未见利用离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的相关文献报道，尤其是对发酵酒中的草酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、乳酸、富马酸、乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸13种有机酸进行含量测定的报道。
【
【发明内容】
】
[0005]本发明所要解决的技术问题在于提供一种离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法。
[0006]本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的:一种离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法，该方法包括如下具体操作:
[0007](I)标准溶液的配制:分别称取草酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、乳酸、富马酸、乙酸、丙酸、异丁酸、及丁酸标样IOmg并混合得混合物，之后采用超纯水对该混合物进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，且该母液的浓度为lmg/mL，然后利用超纯水将母液稀释成不同浓度梯度的标准溶液，于_40°C下保存备用；
[0008](2)样品处理:将酒的样品经过0.45 μ m滤膜过滤即得待测液；
[0009](3)离子排斥色谱检测:
[0010]在色谱柱上，以体积比为98:2的H2SO4溶液-乙腈为流动相，且以0.5mL/min的流速进行梯度洗脱分离，且色谱条件如下:
[0011]色谱柱:ICPAKTM ION Exclusion ；
[0012]流动相:H2S04溶液-乙腈；
[0013]柱温:55°C;
[0014]检测波长:2IOnm;
[0015]进样量:IOyL;
[0016]流动相中H2SO4溶液浓度的变化过程:0min~40min, H2SO4溶液的浓度由0.01mol/L等度梯度上升至0.02mol/L ；40min~50min, H2SO4溶液的浓度为A0.01mol/L ；
[0017](4)测定:分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算分别得到待测液中草酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、乳酸、富马酸、乙酸、丙酸、异丁酸、及丁酸的含量。
[0018]进一步地,所述母液利用超纯水稀释成浓度分别为0.2、0.4、0.6、0.8mg/mL的标准溶液。
[0019]进一步地，所述样品处理中的酒指的是黄酒或葡萄酒。
[0020]本发明离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法的有益效果在于:能够同时测定样品中的13种有机酸的含量，而且样品处理简单，流动相配制方便易操作，在检测有机酸的同时避免了现有技术中因使用磷酸盐而导致的可能析出造成的色谱柱和色谱系统堵塞污染的问题，另外，还具有检测准确定高、重复性好的特点，进而极大的节省了检测成本。
【【专利附图】
【附图说明】】
[0021]下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的描述。
[0022]图1是本发明中标准溶液的色谱图。
[0023]图2是本发明中实施例一待测液的色谱图。
[0024]图3是本发明中实施例二待测液的色谱图。
[0025]图4是本发明中实施例三待测液的色谱图。
[0026]图5是本发明中实施例四待测液的色谱图。
【【具体实施方式】】
[0027]结合如下实施例对本发明离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸(草酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、乳酸、富马酸、乙酸、丙酸、异丁酸、及丁酸)含量的方法进行进一步说明。
[0028]实施例1 “闽川红”黄酒中的有机酸检测
[0029](I)标准溶液的配制:分别称取草酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、乳酸、富马酸、乙酸、丙酸、异丁酸、及丁酸标样IOmg并混合得混合物，之后采用超纯水对该混合物进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，且该母液的浓度为lmg/mL，然后利用超纯水将母液稀释成浓度分别为0.2、0.4、0.6、0.8mg/mL的标准溶液,于_40°C下保存备用;[0030](2)样品处理:取“闽川红”黄酒样品并经过0.45 μ m滤膜过滤即得待测液；
[0031](3)离子排斥色谱检测:在色谱柱上，以体积比为98:2的H2SO4溶液-乙腈为流动相，且以0.5mL/min的流速进行梯度洗脱分离，且色谱条件如下:
[0032]色谱柱:ICPAKTM ION Exclusion (WAT010290)；
[0033]流动相:H2S04溶液-乙腈；
[0034]柱温:55°C；
[0035]检测波长:2IOnm；
[0036]进样量:IOyL;
[0037]流动相中H2SO4溶液浓度的变化过程:0min~40min，H2S04溶液的浓度由0.01mol/L等度梯度上升至0.02mol/L ；40min~50min, H2SO4溶液的浓度为A0.01mol/L ；
[0038](4)分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样分析测定，记录色谱图，并得到13种标样的线性回归方程，具体地，13种标样的线性回归方程如下表1所示，标准溶液的色谱图如图1所示，待测液的色谱图如图2所示；且经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算分别得到待测液中草酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、乳酸、富马酸、乙酸、丙酸、异丁酸、及丁酸的含量(见表2)；
[0039]表1有机酸检测的线性相关性
[0040]
【权利要求】
1.一种离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法，其特征在于:该方法包括如下具体操作: (1)标准溶液的配制:分别称取草酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、乳酸、富马酸、乙酸、丙酸、异丁酸、及丁酸标样IOmg并混合得混合物，之后采用超纯水对该混合物进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，且该母液的浓度为lmg/mL，然后利用超纯水将母液稀释成不同浓度梯度的标准溶液，于-40°C下保存备用； (2)样品处理:将酒的样品经过0.45 μ m滤膜过滤即得待测液； (3)离子排斥色谱检测: 在色谱柱上，以体积比为98:2的H2SO4溶液-乙腈为流动相，且以0.5mL/min的流速进行梯度洗脱分离，且色谱条件如下: 色谱柱:IC PAKTM ION Exclusion ； 流动相=H2SO4溶液-乙腈； 柱温:55°C ； 检测波长:210nm ； 进样量:10yL ; 流动相中H2SO4溶液浓度的变化过程:0min?40min，H2S04溶液的浓度由0.01mol/L等度梯度上升至0.02mol/L ；40min?50min, H2SO4溶液的浓度为A0.01mol/L ； (4)测定:分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算分别得到待测液中草酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、乳酸、富马酸、乙酸、丙酸、异丁酸、及丁酸的含量。
2.根据权利要求1所述离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法，其特征在于:所述母液利用超纯水稀释成浓度分别为0.2,0.4,0.6,0.8mg/mL的标准溶液。
3.根据权利要求1所述离子排斥色谱法测定发酵酒中有机酸含量的方法，其特征在于:所述样品处理中的酒指的是黄酒或葡萄酒。
【文档编号】G01N30/96GK103543236SQ201310475828
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2013年10月12日 优先权日:2013年10月12日
【发明者】林晓姿, 林晓婕, 魏巍, 何志刚, 李维新, 梁璋成, 任香芸 申请人:福建省农业科学院农业工程技术研究所