专利名称：一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊的制作方法
技术领域：
本发明属于ー种对阴道炎具有治疗和预防作用的药物，尤其涉及一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊。
背景技术：
阴道炎是ー种非常常见的阴道感染性疾病，近年来，随着微生态学的发展，医学界逐渐认识到了阴道微生态平衡在女性阴道炎的发病中占有极为重要的地位，阴道微生态学观点认为，健康女性阴道内存在一个由数以亿计的细菌所构成的的微生态系统，其中90%以上的细菌是阴道乳酸杆菌，他们是阴道防御功能的主要执行者，阴道乳酸杆菌可以通过产生乳酸，維持酸性环境，竞争粘附、增强阴道粘膜免疫力等机制抵御霉菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等致病菌的入侵，阴道内乳酸杆菌含量多的女性的阴道炎发病几率都远小于 阴道内含有大量乳酸杆菌的女性。基于这一点，国内外都随之开发出来了许多阴道用微生态制剂来治疗阴道炎。但是阴道微生态制剂所用菌种都不是阴道内优势菌种，因为国内外大多数研究都证明，在健康女性阴道中最常见的乳酸杆菌亚种是卷曲乳杆菌(L. crispatus)，这种最容易在女性阴道内定植。Verhelst等开展的研究发现，阴道清洁度为I度的阴道分泌物样本中，卷曲乳杆菌(L. crispatus)的分离率最高，可以达到52. 1%，由此可见阴道清洁度I度和卷曲乳杆菌的关联最为紧密(Rita Verhelst, 2005)。Kwok等对101例育龄妇女的研究发现,卷曲乳杆菌(L. crispatus)对阴道上皮细胞的粘附性较强，并且与近期性交次数、是否使用杀精剂等无明显相关性。这些都说明卷曲乳杆菌在阴道内定植能力较强，是最适合作为阴道微生态制剂的菌种。然而，菌种因素只是乳酸杆菌在阴道内的定植的ー个因素，好的菌种只能够说明它在阴道中定植的可能性较大，乳酸杆菌在阴道内的定植是ー个极为复杂的过程，是人类长期自然进化的一个结果，是宿主和细菌的相互选择的结果，迄今为止，在女性从阴道内分离出来的乳酸杆菌已经多达16种，宿主本身的阴道微环境和机体的免疫功能状态都决定了是否适合某种乳酸杆菌的定植。所以，単一菌种制成的微生态制剂中的乳酸杆菌不可能都适合在所有的宿主阴道中定植，母女阴道内乳酸杆菌菌种不同就在一定程度上证明了这一事实，另外，在自然界也非常难找到ー种对所有致病菌都有很强抑制能力的菌种，需要花费大量的时间和资金，但是解决这些问题的一个有效且简单的措施就是选用ー种以上的乳酸杆菌亚种来制备阴道微生态制剂。另外，阴道只是人体的一个组成部分，阴道炎的发生和机体整体的免疫功能和代谢状态尤其是肠道之间存在着非常紧密的联系。主要表现为4点1、肠道和阴道在解剖上虽然是分隔开来的，但是距离由非常接近，肠道内的许多细菌如乳酸杆菌、双歧杆菌、肠球菌和大肠杆菌等都可以定植于阴道内，成为阴道的有益菌或致病菌，抑制肠道内致病菌数量则可以降低阴道炎发病概率；2、二者同属于粘膜屏障系统，通过肠道粘膜可以诱导包括阴道粘膜在内的全身的粘膜免疫反应，反之亦然，但是因为肠道内淋巴系统比阴道内丰富的多，通过肠道更容易诱导全身的粘膜反应，ー些分泌性IgA可以循环全身，并可以经阴道粘膜分泌至阴道内，从而可以增强阴道粘膜的抗感染能力；3、女性患者使用了大剂量抗生素治疗后，肠道和阴道都会发生菌群失调，可同时导致肠炎和阴道炎，只是阴道炎表现相对更为明显；4、肠道功能正常与否直接影响这人体的消化吸收功能而影响机体整体功能状态，从而影响机体对抗包括阴道炎在内的其它各种疾病能力。综上所述，开发阴道炎，尤其是对于广谱抗生素所致阴道炎的治疗药物吋，不能仅仅局限于重建阴道菌群平衡这一局部生态系统，应该将人体看成ー个整体，在调整阴道菌群的同时也要注意调整肠道菌群，同时提高机体的粘膜免疫力，调整机体的整体状态，本发明从整体入手，开发出能同时调整肠道和阴道菌群失调，着重预防和治疗阴道炎的乳酸菌月父囊。申请号为200710193035. I的发明涉及了 ー种德氏乳杆菌胶囊，其中的乳酸杆菌是德氏乳杆菌，根据文献报道，德氏乳杆菌在健康妇女阴道中分离率较低，不足1%，这种乳酸杆菌更常见于肠道中，从其根源上将并不非常适合在大多数人的阴道中定植。申请号为200910024226. 4的发明涉及了ー种活肠链球菌胶囊，肠链球菌是肠球菌的ー种，虽然也是 乳酸菌，但是它在健康妇女阴道中分离率低，也是更常见于肠道中，并且根据文献报道，肠链球菌为条件致病菌，虽然在正常条件下不治病，但是有可能会引起尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等，存在潜在危险，其安全性不如乳酸杆菌，国际益生菌协会(International Probiotics Association )和世界卫生组织(WHO)均建议益生菌中不宣使用肠球菌。另外，因为这两项发明的思路也过于狭窄，仅仅局限在了调整阴道菌群上，并没有将人体作为ー个整体去考虑。
发明内容
本发明的目的是提供一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是
一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，所述的胶囊内包裹有赋形剂和乳酸菌混合菌粉，所述的乳酸菌混合菌粉包括卷曲乳杆菌菌粉和具有调整肠道菌群作用的其它乳酸菌亚种菌粉。进ー步，所述的卷曲乳杆菌菌粉和具有调整肠道菌群作用的其它乳酸菌亚种菌粉的重量比为I:(广100)，所述的赋形剂和乳酸菌混合菌粉的重量比为(广10) :1。进ー步，所述的卷曲乳杆菌是健康妇女阴道中分离出来的菌株。进ー步，所述的具有调整肠道菌群作用的其它乳酸菌亚种菌粉指的是嗜酸乳杆菌菌粉、发酵乳杆菌菌粉、鼠李糖乳杆菌菌粉和双歧杆菌菌粉中的ー种或ー种以上的混合物。进ー步，所述的具有调整肠道菌群作用的乳酸菌亚种菌粉是鼠李糖乳杆菌菌粉。进ー步，所述的赋形剂为微晶纤维素。进ー步，所述的卷曲乳杆菌菌粉的活菌总数的为IX IO6至IX IO12个/g之间，所述的嗜酸乳杆菌菌粉的活菌总数的为I X IO6至I X IO12个/g之间，发酵乳杆菌菌粉的活菌总数的为I X IO6至I X IO12个/g之间，鼠李糖乳杆菌菌粉的活菌总数的为I X IO6至I X IO12个/g之间，双歧杆菌菌粉的活菌总数的为I X IO6至I X IO12个/g之间。进ー步，所述的ー种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊内的乳酸菌混合菌粉的活菌总数的为I X IO6至I X IO12个/粒胶囊之间。本发明的优选方案为ー种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，所述的胶囊内包裹有赋形剂和乳酸菌混合菌粉，所述的乳酸菌混合菌粉包括卷曲乳杆菌菌粉和鼠李糖乳杆菌菌粉，所述赋形剂为微晶纤维素，其中卷曲乳杆菌菌粉鼠李糖乳杆菌菌粉赋形剂的重量比为1:1:1。进ー步，所述的对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊的给药途径为ロ服和/或阴道途径。本发明的有益效果
与现有发明的比较，本发明的优势是
I、首选选择了ー种在健康妇女阴道中更常见的乳酸杆菌亚种——卷曲乳杆菌，有大量的文献和试验认为卷曲乳杆菌更适合在阴道内定植，这是人类的阴道和乳酸杆菌长期相互 选择的结果，使用这种乳酸杆菌也就更容易重建阴道的菌群平衡；同时本发明是由两种乳酸杆菌亚种所组成的，増加了阴道的选择范围，适和定植的宿主范围将进ー步扩大。一个菌种要想长期发挥作用，必须能够在阴道中长期定值，否则，再怎么优选的菌种，对也只是过路菌，不能长期发挥预防和治疗作用。2、上述两种发明中的菌种因为在人群中存在比例较低，要想获取上述两项发明中所说菌种，犹如大海捞针，需要投入大量的精力和时间，非常难以获取。而本发明中所用的乳酸杆菌菌种都比较常见，非常容易获取。3、原来的发明的思路也过于狭窄，仅仅局限在了调整阴道菌群上，并没有将人体作为ー个整体去考虑，本发明的一种菌种在阴道定植力強，在肠道的定植能力弱，一种菌种在肠道内定植能力强，在阴道的定植能力弱(強弱只是相对而言的)，在强调重建阴道菌群的基础上也注重调整肠道菌群，提高机体的整体粘膜免疫力。本发明中的乳酸菌胶囊可以同时采取ロ服和阴道内使用两种途径去治疗阴道炎，ロ服乳酸杆菌可以通过激发肠道粘膜免疫反应而有效地提高粘膜免疫力，调整人体的整体功能状态，这样才能更好地治疗阴道炎。此外，乳酸杆菌在肠道内大量増殖可以抑制肠道细菌的生长，也可减少阴道感染肠道细菌的风险。4、近年来，临床上开始大量使用广谱抗生素治疗感染性疾病，这种治疗方法在清除感染性细菌的同时，也杀死了肠道和阴道内的有益菌，主要就是乳酸菌，可造成肠道和阴道菌群失调，从而引发阴道炎、肠炎等一系列的疾病，对于女性而言，阴道炎的表现更为明显，因为相对于肠道菌群而言，阴道内菌群结构相对単一，更加脆弱，服用大量抗生素以后，女性患者主要表现为阴道炎，但是一般也同时存在着不同程度的肠道菌群失调。本发明用ー种胶囊可以解决两种表现不同但本质相同的菌群失调所致阴道炎和肠炎，这是前所未用的创造。5、普通阴道胶囊长期用药时采用阴道途径比较麻烦，而本发明则可以经ロ服给药，也可以经阴道给药，可以采取两种途径同时治疗，患者可以自由选择给药途径，选择ロ服给药可以提高用药依从性，长期ロ服具有类似于酸奶但优于的保健效果，并可预防阴道炎的复发；此外，本发明可以选用微晶纤维素作为赋形剂，阴道用药时可以快速吸水，加快胶囊崩解，促进活性乳酸杆菌释放，它本身就是ー种膳食纤维，ロ服后还可以起到调整肠道的作用。
6、本发明所选菌种均要求来自于健康人体阴道、肠道或酸奶之中，不存在任何潜在致病危险，安全性良好。
具体实施例方式下面结合具体的实施例对本发明做进ー步的说明。实施例I飞
本发明的第一步就是建立相应的乳酸菌种子库。
卷曲乳杆菌种子库的建立
I、收集无阴道炎病史的女性阴道分泌物，使用生理盐水将分泌物进行系列稀释后放入4°C冰箱中备用，保存时间不超过3天。2、配置标准MRS固体培养基，121°C高压灭菌后倒入10 cm平皿中，待冷却凝固后放入4°C冰箱中备用。3、吸取200微升阴道分泌物稀释液到MRS平板中，使用涂布棒涂布均匀后置入厌氧培养罐中，在37°C条件下培养48小吋。4、挑取单个细菌克隆，进行革兰染色，将革兰阳性杆菌克隆扩大培养，使用常规的细菌菌种鉴定所需生化和分子生物学技术进行鉴定，将鉴定为卷曲乳杆菌的菌种和40%的甘油按1:1的比例混合后放入_80°C冰箱中保存，作为卷曲乳杆菌原始种子库。5、使用卷曲乳杆菌原始种子进行扩大培养，建立卷曲乳杆菌工作种子库。具有调整肠道菌群作用的乳酸菌亚种种子库的建立是
I、收集采集健康人体粪便、健康婴儿粪便或者市售酸奶标本，使用生理盐水将收集到的标本进行系列稀释后放入4°C冰箱中备用，保存时间不超过3天。2、配置标准MRS固体培养基，121°C高压灭菌后倒入10 cm平皿中，待冷却凝固后放入4°C冰箱中备用。3、吸取200微升标本稀释液到MRS平板中，使用涂布棒涂布均匀后置入厌氧培养罐中，在37°C条件下培养48小时。4、挑取单个细菌克隆，进行革兰染色，将革兰阳性杆菌克隆扩大培养，使用常规的细菌菌种鉴定所需生化和分子生物学技术进行鉴定，将鉴定为鉴定为嗜酸乳杆菌(L. acidophilus)、发酵乳杆菌(L. fermentum)、鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)分别和40%的甘油按I: I的比例混合后放入_80°C冰箱中保存，作为嗜酸乳杆菌(L. acidophilus)原始种子库、发酵乳杆菌(L. fermentum)原始种子库、鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)原始种子库和双歧杆菌(Bifidobacterium)原始种子库。5、分别使用嗜酸乳杆菌(L. acidophilus)原始种子、发酵乳杆菌(L. fermentum)原始种子、鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)原始种子和双歧杆菌(Bifidobacterium)原始种子进行扩大培养，建立嗜酸乳杆菌(L. acidophilus)工作种子库、发酵乳杆菌(L. fermentum)工作种子库、鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)工作种子库和双歧杆菌(Bifidobacterium)工作种子库。实施例I
一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊的制备 一、从阴道分泌物中分离卷曲乳杆菌并建立卷曲乳杆菌种子库I、收集无阴道炎病史的女性阴道分泌物，使用生理盐水将分泌物进行系列稀释后放入4°C冰箱中备用，保存时间不超过3天。2、配置标准MRS固体培养基，121°C高压灭菌后倒入10 cm平皿中，待冷却凝固后放入4°C冰箱中备用。3、吸取200微升阴道分泌物稀释液到MRS平板中，使用涂布棒涂布均匀后置入厌氧培养罐中，在37°C条件下培养48小吋。4、挑取单个细菌克隆，进行革兰染色，将革兰阳性杆菌克隆扩大培养，使用常规的细菌菌种鉴定所需生化和分子生物学技术进行鉴定，将鉴定为卷曲乳杆菌的菌种和40%的甘油按1:1的比例混合后放入_80°C冰箱中保存，作为卷曲乳杆菌原始种子库。5、使用卷曲乳杆菌原始种子进行扩大培养，建立卷曲乳杆菌工作种子库。ニ、卷曲乳杆菌菌粉的制备
I、从卷曲乳杆菌工作种子库取I毫升菌种，进行20ml、400 ml,8000ml和160L的逐级放大培养，培养条件为37°C，低速不连续搅拌培养，培养22小吋，期间抽样检测pH值和菌体OD值估计其生长情況。2、使用4°C、4500转、离心15分钟的条件收集菌体，使用高压灭菌后的液体冻干保护剂重悬菌体，静置I小吋。3、将菌液倒入冷冻干燥机装料盘内，液面不超过12 mm,然后在_80度的条件下预冻6小时，之后在真空条件下进行干燥36小时，干燥结束后即得到卷曲乳杆菌菌粉，装入铝塑袋中密封后放入-20°C备用。制备的卷曲乳杆菌菌粉的活菌总数为I X IO6至IX IO12个/g之间。三、鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)种子库及菌粉的制备
I、收集采集健康人体粪便、健康婴儿粪便或者市售酸奶标本，使用生理盐水将收集到的标本进行系列稀释后放入4°C冰箱中备用，保存时间不超过3天。2、配置标准MRS固体培养基，121°C高压灭菌后倒入10 cm平皿中，待冷却凝固后放入4°C冰箱中备用。3、吸取200微升标本稀释液到MRS平板中，使用涂布棒涂布均匀后置入厌氧培养罐中，在37°C条件下培养48小时。4、挑取单个细菌克隆，进行革兰染色，将革兰阳性杆菌克隆扩大培养，使用常规的细菌菌种鉴定所需生化和分子生物学技术进行鉴定，将鉴定为鉴定为鼠李糖乳杆菌(しrhamnosus)分别和40%的甘油按I: I的比例混合后放入_80°C冰箱中保存,作为鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)原始种子库。5、使用鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)原始种子进行扩大培养,建立鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)工作种子库。6、选取鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus)工作种子库作为菌种的来源,其它的步骤与卷曲乳杆菌菌粉的制备中的步骤相同。制备的鼠李糖乳杆菌(しrhamnosus)菌粉的活菌总数为IX IO6至IX IO12个/g之间。四、一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊的制备
将卷曲乳杆菌菌粉和鼠李糖乳杆菌菌粉按1:1的重量比混合，得到乳酸菌混合菌粉，然后再按照I g乳酸菌混合菌粉和I g微晶纤维素的重量比例，混合菌粉和赋形剂，最后填充胶囊即制成一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊。所制备的ー种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊中活菌总数为I X IO6至I X IO12个/粒胶囊之间。实施例2飞
一、卷曲乳杆菌菌粉的制备
与实施例I的制备过程相同，制备的卷曲乳杆菌菌粉的活菌总数为I X IO6至I X IO12个/g之间。ニ、鼠李糖乳杆菌菌粉、嗜酸乳杆菌菌粉、发酵乳杆菌菌粉和双歧杆菌菌粉的制备 采用和实施例I中制备鼠李糖乳杆菌种子库相似的方法，分别建立鼠李糖乳杆菌エ
作种子库、嗜酸乳杆菌工作种子库、发酵乳杆菌工作种子库和双歧杆菌工作种子库，然后參照实施例I中的卷曲乳杆菌菌粉的制备步骤，分别制备鼠李糖乳杆菌菌粉、嗜酸乳杆菌菌粉、发酵乳杆菌菌粉和双歧杆菌菌粉，所制备的鼠李糖乳杆菌菌粉的活菌总数为IXIO6至I X IO12个/g之间、嗜酸乳杆菌菌粉的活菌总数为I X IO6至I X IO12个/g之间、发酵乳杆菌菌粉的活菌总数为I X IO6至I X IO12个/g之间和双歧杆菌菌粉的活菌总数为I X IO6至I X IO12个/g之间。三、一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊的制备
将卷曲乳杆菌菌粉和鼠李糖乳杆菌菌粉、嗜酸乳杆菌菌粉、发酵乳杆菌菌粉和双歧杆菌菌粉按照比例混合，得到混合菌粉，然后将混合菌粉和赋形剂按照比例混合，最后填充胶囊即制成曲乳杆菌和嗜酸乳杆菌ニ联乳酸菌胶囊。具体加入的菌粉和比例见表I。
表I实旌^ 2^-6的组成成分a其配比*.·
权利要求
1.一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的胶囊内包裹有赋形剂和乳酸菌混合菌粉，所述的乳酸菌混合菌粉包括卷曲乳杆菌菌粉和具有调整肠道菌群作用的其它乳酸菌亚种菌粉。
2.根据权利要求I所述的一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的卷曲乳杆菌菌粉和具有调整肠道菌群作用的其它乳酸菌亚种菌粉的重量比为I:(广100)，所述的赋形剂和乳酸菌混合菌粉的重量比为(广10) :1。
3.根据权利要求I所述的一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的卷曲乳杆菌是健康妇女阴道中分离出来的菌株。
4.根据权利要求I或2所述的一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的具有调整肠道菌群作用的其它乳酸菌亚种菌粉指的是嗜酸乳杆菌菌粉、发酵乳杆菌菌粉、鼠李糖乳杆菌菌粉和双歧杆菌菌粉中的一种或一种以上的混合物。
5.根据权利要求I或2所述的一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的具有调整肠道菌群作用的乳酸菌亚种菌粉是鼠李糖乳杆菌菌粉。
6.根据权利要求I或2所述的一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的赋形剂为微晶纤维素。
7.根据权利要求4所述的一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的卷曲乳杆菌菌粉的活菌总数的为I X IO6至I X IO12个/g之间，所述的嗜酸乳杆菌菌粉的活菌总数的为IX IO6至IX IO12个/g之间，发酵乳杆菌菌粉的活菌总数的为I X IO6至I X IO12个/g之间，鼠李糖乳杆菌菌粉的活菌总数的为I X IO6至I X IO12个/g之间，双歧杆菌菌粉的活菌总数的为IX IO6至IX IO12个/g之间。
8.根据权利要求I或2所述的一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的胶囊内的乳酸菌混合菌粉的活菌总数的为IX IO6至IX IO12个/粒胶囊之间。
9.根据权利要求I所述的一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的胶囊内包裹有赋形剂和乳酸菌混合菌粉，所述的乳酸菌混合菌粉包括卷曲乳杆菌菌粉和鼠李糖乳杆菌菌粉，所述赋形剂为微晶纤维素，其中卷曲乳杆菌菌粉鼠李糖乳杆菌菌粉赋形剂的重量比为1:1:1。
10.根据权利要求I所述的一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，其特征在于所述的对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊的给药途径为口服和/或阴道途径。
全文摘要
本发明涉及一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊。本发明从整体入手，开发出能同时调整肠道和阴道菌群失调，着重预防和治疗阴道炎的乳酸菌胶囊，采用的技术方案为一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊，所述的胶囊内包裹有赋形剂和乳酸菌混合菌粉，所述的乳酸菌混合菌粉包括卷曲乳杆菌菌粉和具有调整肠道菌群作用的其它乳酸菌亚种菌粉。本发明中的活性乳酸菌胶囊可以同时采取口服和阴道内使用两种途径去治疗阴道炎，口服乳酸杆菌可以通过激发肠道粘膜免疫反应而有效地提高粘膜免疫力，调整人体的整体功能状态，更好地治疗阴道炎；乳酸杆菌在肠道内大量增殖可以抑制肠道细菌的生长，也可减少阴道感染肠道细菌的风险。
文档编号A61P15/02GK102727531SQ20121025394
公开日2012年10月17日 申请日期2012年7月23日 优先权日2012年7月23日
发明者刘景伟, 胡军 申请人:郑州金森生物科技工程有限公司