具有增强的作用持续时间和降低的免疫原性的工程改造的多肽的制作方法
【专利摘要】提供具有特别良好的作用持续时间、高效能和/或方便的给药方案(包括每周一次给药)的化合物。所述化合物是工程改造的多肽，其包含白蛋白结合结构域与一种或多种生物活性多肽的组合。还提供治疗疾病和病症的药物组合物和方法，所述疾病和病症包括脂质营养不良、血脂障碍、高血脂、超重、肥胖、下丘脑性闭经、阿尔茨海默氏病、瘦蛋白不足、脂肪肝病或糖尿病(包括I型和II型)。可通过本文所述的化合物和方法治疗的其它疾病和病症包括非酒精性脂肪肝炎(NASH)和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、代谢综合征X和亨廷顿氏病。
【专利说明】具有增强的作用持续时间和降低的免疫原性的工程改造的
多肽
[0001]序列表
本申请包含序列表，其通过EFS-Web以ASCII格式提交，并通过引用以其整体予以结合。所述ASCII副本创建于2012年7月3日，命名为1320USPR.txt，大小为450，377字节。
[0002]发明背景
本申请涉及具有良好的作用持续时间、高效能和/或方便的给药方案的化合物以及其使用方法。本文提供了工程改造的多肽，其包含白蛋白结合结构域与生物活性肽的组合。不希望被任何理论所束缚，认为因为本文所述的工程改造的多肽可结合白蛋白，因此当在循环时所述化合物可被螯合(例如，结合到白蛋白)，由于例如肾清除率和/或降解减少而导致作用持续时间增力卩。可顺从所述治疗的疾病包括脂质营养不良、血脂障碍、高血脂、超重、肥胖、下丘脑性闭经、阿尔茨海默氏病、瘦蛋白不足、脂肪肝病、糖尿病(包括I型和II型)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、代谢综合征X和亨廷顿氏病或其组合。
[0003]仍有需要开发可用于上文所述代谢疾病、病况和病症的多肽。因此，本发明的一个目标是提供可用于治疗上述病况的具有延长的半寿期的工程改造的多肽和制备及利用所述多肽的方法。
[0004]本文引用的每个专利、专利申请和出版物通过引用以其整体结合到本文中并用于所有目的。
[0005]发明简述
提供了具有对白蛋白的结合亲和力和另外治疗效用的工程改造的多肽化合物。所述化合物是工程改造的多肽，其包含能够结合白蛋白的白蛋白结合结构域(ABD)多肽和激素结构域(HD)多肽，所述HD多肽与ABD共价连接，可具有生物学活性并且可诱发有益的生物学反应。本文所述的ABD或HD多肽中的任一个可任选在工程改造的多肽中通过接头L (例如，如本文所述的LI)共价键合。不希望受任何理论的束缚，认为因为本文所述的工程改造的多肽可结合白蛋白，所述化合物可在受试者中被螯合，导致在受试者中的作用持续时间增加。
[0006]在第一方面，提供如本文所述的工程改造的多肽。所述工程改造的多肽包含白蛋白结合结构域多肽(ABD)和激素结构域(HDl)。所述激素结构域包含其为瘦蛋白、瘦蛋白的类似物或其活性片段的多肽。
[0007]在另一方面，提供用于在需要治疗的受试者中治疗疾病或病症的方法。所述方法包括将如本文所述的工程改造的多肽给予受试者。
[0008]在仍另一方面，提供药物组合物，其包含与药学上可接受的赋形剂组合的本文所述的工程改造的多肽化合物。
[0009]在仍另一方面，提供编码工程改造的多肽的多核苷酸和它们的中间体、带有所述多核苷酸的表达载体、表达所述多核苷酸的宿主细胞和用于它们表达、合成、翻译后修饰和分离的手段。[0010]附图简述
图1是可用于本文公开的工程改造的多肽的白蛋白结合多肽(SEQ ID NO:301-452,SEQID NO:454-463、SEQ ID NO: 500-593)、通过N-端甘氨酸残基而延长的来自链球菌菌株G148的蛋白G的GA3结构域(SEQ ID NO:453)和先前由Jonsson等所述的源自G148-GA3的白蛋白结合多肽(Protein Eng.Design & Selection, 2008，21:515-527 ;SEQ ID NO:454)的实例的氨基酸序列列表。
[0011]图2显示在Biacore仪器上进行的结合分析的结果，用于研究白蛋白结合多肽PEP07912 (SEQ ID NO: 456)与人血清白蛋白的结合。将三个不同浓度的纯化蛋白(40 nM，粗灰线；10 nM，黑线；2.5 nM，灰线)注入到具有955 RU的固定人血清白蛋白的表面上。
[0012]图3A-C显示通过ELISA进行的结合分析的结果，其用于研究白蛋白结合多肽PEP07913 (SEQ ID NO:453)、PEP06923 (SEQ ID NO:454)、PEP07271 (SEQ ID NO:455),PEP07912 (SEQ ID NO:457)、PEP07554 (SEQ ID NO:456)、PEP07914 (SEQ ID NO:458),PEP07968 (即，与PEP07911 (SEQ ID N0:459)缀合的D0TA)和PEP07844 (SEQ ID NO:461)与存在于126份单独的正常人血清中的IgG分子的结合，其中A)显示平均OD值，B)显示阴性血清的百分比(由OD〈0.15定义)，和C)显示阳性血清的百分比(由OD >1.0定义)。
[0013]图4A-C为显示在CD3+ CD4+细胞增殖测定法中白蛋白结合多肽PEP07913 (SEQID NO:453), PEP07912 (SEQ ID NO:457)、PEP07914 (SEQ ID NO:458)和 PEP07968 (即，与PEP07911 (SEQ ID NO:459)缀合的D0TA)的免疫原性评估的图示。A)显示，在52个高加索人供体中，与重组人白蛋白比较，响应所述白蛋白结合多肽的个体的数量。B)显示与含有重组人白蛋白的阴性对照相比，PEP07913、PEP07912、PEP07914和PEP07968的平均刺激指数(SI)。C)显示与缓冲液对照相比，对研究中所有蛋白有响应的个体的数量。
[0014]图5描述在白蛋白存在下由化合物2产生的瘦蛋白功能活性，如实施例7所描述。
[0015]图6A-6B描述如实施例8所述给予大鼠后，单一给予本文所述的指定工程改造多肽对食物摄取和体重变化的影响(％溶媒-校正)。图6A:食物摄取。图6B:体重变化(％溶媒-校正)。
[0016]图7A-7B描述如实施例9所述给予大鼠后，单一给予本文所述的指定工程改造多肽对食物摄取和体重变化的影响(％溶媒-校正)。图7A:食物摄取。图7B:体重变化(％溶媒-校正)。
[0017]图8描述如实施例10所述给予大鼠后，单一给予本文所述的指定工程改造多肽对体重变化的影响(％溶媒-校正)。
[0018]图9描述如实施例11所述给予大鼠后，单一给予本文所述的指定工程改造多肽对体重变化的影响(％溶媒-校正)。
[0019]图10为描述在两组大鼠中单独或组合给予瘦蛋白(125 μ g/kg/天)和胰岛淀粉样多肽(1500 μ g/kg/天)对体重影响的图:一组为极肥胖大鼠，另一组为热量限制下降至中等肥胖的范围。
[0020]图11为描述单独或组合给予化合物64 (120 nmol/kg)和PEG-大鼠胰岛淀粉样多肽(脱-Lysl-[Lys26(mPEG40K)]_ 大鼠胰岛淀粉样多肽(SEQ ID NO: 148) (125 nmol/kg))经4周对体重影响的图。
[0021] 图12描述如实施例16所述给予STZ-诱导的TlDM小鼠后，本文所述的指定工程改造多肽对血糖的影响。
[0022]图13描述如实施例16所述给予STZ-诱导的TlDM小鼠后，本文所述的指定工程改造多肽对血红蛋白AlC的影响。
[0023]图14描述如实施例16所述给予STZ-诱导的TlDM小鼠后，本文所述的指定工程改造多肽对食物摄取和体重的影响。
[0024]图15描述如实施例16所述给予STZ-诱导的TlDM小鼠后，本文所述的指定工程改造多肽(含和不含低剂量的胰岛素)对血糖的影响。
[0025]图16描述如实施例16所述给予STZ-诱导的TlDM小鼠后，本文所述的指定工程改造多肽(含和不含低剂量的胰岛素)对血红蛋白AlC的影响。
[0026]图17描述如实施例16所述给予STZ-诱导的TlDM小鼠后，本文所述的指定工程改造多肽(含和不含低剂量的胰岛素)对食物摄取(％溶媒-校正)和体重变化(％溶媒-校正)的影响。
[0027]发明详述 1.定义
“肥胖”和“超重”是指体重大于正常预期的哺乳动物，并且可通过例如身体外观、本领域已知的体重指数(BMI)、腰臀围比率、皮褶厚度、腰围等确定。疾病控制与预防中心(CDC)将超重定义为具有25-29.9 BMI的成人；并将肥胖定义为具有30或更高BMI的成人。存在确定肥胖的其他测定法。例如，CDC规定腰臀围比率大于1.0的人为超重。
[0028]“瘦体重”是指身体的无脂肪质量，即总体重减去身体脂肪重量为瘦体重。瘦体重可通过例如本领域已知的流体静力学称重(hydrostatic weighing)、计算机化室(computerized chamber)、双能X-射线吸收测定法、皮肤测径器、磁共振成像(MRI)和生物电阻抗分析(BIA)等方法测量。
[0029]“哺乳动物”是指通常具有毛皮或毛发的温血动物，其活胎产后代并用乳喂养其后代。哺乳动物包括人类、伴侣动物(例如狗、猫)、农畜(例如奶牛、马、绵羊、猪、山羊)、野生动物等。在一个实施方案中，所述哺乳动物为雌性。在一个实施方案中，所述哺乳动物为女人。在一个实施方案中，所述哺乳动物为猫或狗。在一个实施方案中，所述哺乳动物是糖尿病哺乳动物，例如具有2型糖尿病的人类。在一个实施方案中，所述哺乳动物是肥胖型糖尿病哺乳动物，例如具有2型糖尿病的肥胖哺乳动物。在本文所述方法的背景下，术语“受试者”是指哺乳动物。
[0030]多肽背景下的“片段”在惯例的化学意义上在本文是指多肽的一部分。例如，片段可由母体多肽N-端缺失或C-端缺失一个或多个残基产生，和/或片段可由母体多肽内部缺失一个或多个残基产生。抗体背景下的“片段”是指抗体的一部分，其可与生物学活性分子连接以调节在受试者内的溶解性、分布等。例如，本文所述的瘦蛋白A200是Fe抗体片段与瘦蛋白的缀合物，如本领域已知。参见例如WO 98/28427和US2007/002084。多肽背景下的术语“母体”在惯例意义上是指作为修饰(例如插入、缺失和/或取代)前的参照结构的多肽。本文所述的工程改造的多肽背景下的术语“缀合物”是指组分多肽(例如ABD、HD1等)之间的共价连接。本文所述的工程改造的多肽背景下的术语“融合物”是指组分多肽(例如ABD、HD1等)之间通过肽骨架的末端氨基或羧基官能团的任一个或两者的共价连接。工程改造的多肽可合成制备或重组制备。通常，融合物使用重组生物技术制备，然而还可通过本领域已知的化学合成和缀合方法制备。
[0031]多肽背景下本文所用的“类似物”是指相对于母体化合物，具有氨基酸的插入、缺失和/或取代的化合物。类似物可具有优良的稳定性、溶解性、功效、半寿期等。在一些实施方案中，类似物是与母体化合物具有至少50%、例如50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或甚至更高的序列同一性的化合物。
[0032]在比较两个或更多个核酸或多肽序列的背景下，“同一性”、“序列同一性”等是指相同的或具有特定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸(即，当在比较窗或指定区域内比较和比对最大一致性时，在特定区域内约50%同一性、优选50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性)的两个或更多个序列或亚序列，如使用本领域已知 的序列比较算法例如BLAST或BLAST 2.0所测定。该定义包括具有缺失和/或添加的序列，以及具有取代的序列，以及天然存在的例如多态性或等位基因变体和人工变体。在优选的算法中，如本领域已知的，计算空位等。对于序列比较，通常一个序列作为参照序列，测试序列与其比较。当使用序列比较算法时，将测试和参照序列输入计算机，如果必要的话指定亚序列的坐标，并指定序列算法程序参数。优选地，可使用默认程序参数，或者可指定备选参数。然后，基于程序参数，序列比较算法计算测试序列相对于参照序列的百分比序列同一性。可例如通过Smith & Waterman, 1981, Adv.App1.Math.2:482 的局部同源性算法,通过 Needleman & Wunsch, 1970, J.Mol.Biol.48:443 的同源性比对算法，通过 Pearson & Lipman, 1988, Proc.Nat，1.Acad.ScL USA 85:2444的类似性检索方法，通过这些算法(Wisconsin Genetics Software Package, GeneticsComputer Group, 575 Science Dr., Madison, ffis.中的 GAP、BESTFIT、FASTA 和 TFASTA)的计算机化执行，或通过人工比对和目测进行序列比较的最优比对。参见例如Protocols in Molecular Biology (Au sub el等编辑，1995年增刊)。适于确定百分比序列同一性和序列类似性的算法的优选实例包括BLAST和BLAST 2.0算法，其描述于Altschul等，1977，Nuc1.Acids Res.25:3389-3402 和 Altschul 等，1990，J.Mol.Biol.215:403-410。如本领域已知，使用BLAST和BLAST 2.0确定本发明的核酸和蛋白质的百分比序列同一性。用于进行BLAST分析的软件是通过国家生物技术信息中心(NationalCenter for Biotechnology Information)的网站公开可得的。该算法包括首先通过鉴定查询序列中长度W的短的字码(word)来确定高得分序列对(HSP)，所述查询序列当与数据库序列中相同长度的字码进行比对时，匹配或满足某一正值阈值得分T。将T称为邻近字码得分阈值(Altschul等，履1:)。这些起始的邻近字码命中(hit)作为用于开始检索发现含有它们的更长HSP的种子。字码命中在两个方向上沿每个序列延伸，直到累积的比对得分可增加。使用例如用于核苷酸序列的参数M (对于匹配残基对的奖分；总是大于0)和N(对于错配残基的罚分；总是小于0)计算累积的得分。对于氨基酸序列，使用评分矩阵来计算累积的得分。在以下情况时，停止在每个方向上字码命中的延伸:累积比对得分从其最大获取值减少了数量X ;由于一个或多个负评分残基比对的积聚，累积得分转为零或零以下；或者到达任一个序列的末端。BLAST算法参数W、T和X决定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)默认使用字长(W)为11，期望值(E)为10，M=5，N=-4，以及双链比较。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用字长为3，期望值(E)为10，和BL0SUM62评分矩阵(参见Henikoff & Henikoff, 1989，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA 89:10915)比对(B)为50，期望值(E)为10，M=5, N=-4以及双链比较。
[0033]在数值背景下术语“约”是指数值的+/_ 10%,除非明确另外指明。
[0034]在本文所述的工程改造的多肽的组分的背景下，术语“肽”和“多肽”是同义的。
[0035]I1.化合物
在第一方面，提供工程改造的多肽化合物，其包含白蛋白结合结构域(ABD)多肽和至少一个多肽激素结构域(HDl)。术语“白蛋白结合结构域”、“ABD”等是指能够结合本文所述的白蛋白的多肽。术语“激素结构域”、“激素结构域多肽”等是指能够在受试者中诱发生物学反应的多肽。示例性激素结构域包括但不限于瘦蛋白、瘦蛋白类似物或其活性片段，但还可以是瘦蛋白衍生物例如PEG化衍生物。[0036]令人惊讶地发现，瘦蛋白、瘦蛋白类似物、活性瘦蛋白片段或其瘦蛋白衍生物可与极高亲和力的白蛋白结合结构域(ABD)融合(所述ABD源自本文所述的细菌蛋白的白蛋白结合结构域)，同时保留足够的瘦蛋白生物学活性和具有延长的作用持续时间，例如在啮齿动物中至少3天和甚至5天，其在人受试者中转变为至少I周或更长的持续时间。这令人吃惊，部分是因为所述ABD肽未曾广泛证实作为治疗蛋白载体是一个稳健的平台，它们相对疏水，其可不利地与所连接的治疗肽相互作用，并且对于至少一个家族的肽激素而言其不能作为载体。例如，大鼠胰岛淀粉样多肽化合物(例如SEQ ID NO: 108)当与本文所述的ABD缀合或融合时，在相同的啮齿动物模型未显示出任何明显的或长效的体内活性，其中发现本发明的各种瘦蛋白工程改造多肽构建体具有活性和长的作用持续时间。
[0037]此外，本文的治疗缀合物或融合物化合物令人惊讶地保留了白蛋白结合亲和力和特异性，同时具有较低的免疫原性和瘦蛋白治疗活性。所述化合物令人惊讶地具有活性，尽管在瘦蛋白、瘦蛋白类似物、活性瘦蛋白片段或瘦蛋白衍生物和ABD之间缺少血浆蛋白酶切割位点。更令人惊讶的是，认为所述治疗化合物即使当与白蛋白结合时也具有活性。本文所述的ABD化合物提供白蛋白结合亲和力和特异性，同时具有比之前所述的ABD化合物更低的免疫原性，所述之前所述的ABD化合物基于链球菌G蛋白菌株148 (G148)的白蛋白结合区并在 Jonsson 等(Protein Eng.Design & Selection, 2008, 21:515-527)中。最近，在链球菌G蛋白菌株148 (G148)的白蛋白结合区内通过实验鉴定了几个T-细胞和B-细胞表位(Goetsch等，Clin.Diagn.Lab.1mmunol.10:125-32, 2003)。作者对在疫苗中利用G148的T-细胞表位感兴趣，即利用白蛋白结合区的固有免疫刺激特性。Goetsch等另外在G148序列中发现一个B-细胞表位，即免疫后与抗体结合的区域。在用于人给予的药物组合物中，无免疫反应是合乎需要的。因此，由于白蛋白结合结构域G148的上述免疫刺激特性，从而不优选用于所述组合物中。
[0038]生物学活性组分。预期用于本文所述的化合物和方法的生物学活性化合物组分包括瘦蛋白。术语“生物学活性化合物”等在惯常意义上是指化合物例如多肽等，其可诱发生物学反应。
[0039]瘦蛋白。“瘦蛋白”和“一种瘦蛋白”分别指:瘦蛋白、瘦蛋白活性片段、瘦蛋白类似物和瘦蛋白衍生物；一种瘦蛋白、一种瘦蛋白活性片段、一种瘦蛋白类似物和一种瘦蛋白衍生物。因此，除非另外说明，否则提及“瘦蛋白”是指包括瘦蛋白、瘦蛋白活性片段、瘦蛋白类似物和瘦蛋白衍生物，如本文所公开。同样地，除非另外说明，提及“一种瘦蛋白”是指包括一种瘦蛋白、一种瘦蛋白活性片段、一种瘦蛋白类似物和一种瘦蛋白衍生物，如本文所公开。在设计、制备和利用本文所公开的工程改造多肽中可使用的示例性所述瘦蛋白包括诱发一种或多种本领域已知的生物学反应(当将瘦蛋白给予受试者时而诱发)的那些(参见例如，公布的美国专利申请号US 2007/0020284和US 2008/0207512，美国专利号 6，309，853 和 US 7，183，254，以及 PCT 公布申请号 WO 96/005309、WO 98/28427 和 WO2009/064298)，所述生物学反应例如:减少食物摄取、减少体重、减少体重增加、诱导饱食感、减少热量利用度、减少热量效率、降低代谢平台、增加胰岛素敏感度、减少高脂血症、纠正血脂障碍、减少高甘油三酯血症、改善肥胖、改善超重、改善糖尿病(包括I型糖尿病、II型糖尿病和妊娠期糖尿病)、改善胰岛素抵抗、改善与其相关的脂质营养不良病况以及本领域已知的给予瘦蛋白后而诱发的其它生物学反应(参见例如，公布的美国专利申请号US2007/0020284 和 US 2008/0207512，美国专利号 6，309，853 和 US 7，183，254，以及 PCT 公布申请号 WO 96/005309、TO 98/28427 和 WO 2009/064298)。
[0040] 适合用于设计、制备和利用本文所述的工程改造多肽的示例性瘦蛋白包括但不限于描述于美国专利号 US 5，594，101、US 5，851，995、US 5，691，309、US 5，580，954、US5，554，727、US 5，552，523、US 5，559，208、US 5，756，461、US 6，309，853，公布的美国专利申请号 US 2007/0020284，以及 PCT 公布申请号 WO 96/23517,WO 96/005309,WO 98/28427、WO 2004/039832,WO 98/55139,WO 98/12224 和 WO 97/02004 中的化合物，其各自通过引用以其整体结合到本文中并用于所有目的。在体内和体外测定瘦蛋白活性和生物学反应(包括饱食感、食物摄取抑制活性和体重减轻活性)的方法是本领域已知的，在本文中并且还在上述参考文献和本文引用的其它参考文献中描述。
[0041 ] 可使用本领域已知的任何瘦蛋白、瘦蛋白类似物、瘦蛋白活性片段或瘦蛋白衍生物，以制备和利用本文全文所公开的工程改造多肽。预期用于本文所述的工程改造多肽和方法的代表性瘦蛋白、瘦蛋白类似物、瘦蛋白活性片段和瘦蛋白衍生物还包括以下:
成熟鼠瘦蛋白:
VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC，其中第28位的Xaa是Q或不存在(SEQ ID NO:1)。
[0042]成熟鼠瘦蛋白I型: VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQVLTSLPSQ
NVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQ ID NO:143)。
[0043]成熟鼠瘦蛋白2型: VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQVLTSLPSQNVL
QIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQID NO:144)。
[0044]具有N-端甲硫氨酸的成熟鼠瘦蛋白: MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTS
MPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC，其中第29位的Xaa为Q或不存在(SEQ ID NO: 2)。
[0045] 具有N-端甲硫氨酸的成熟鼠瘦蛋白I型:MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQ ID NO:145)。
[0046]具有N-端甲硫氨酸的成熟鼠瘦蛋白2型: MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQVLTSLPSQ
NVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQ ID NO:146)。
[0047]成熟猪瘦蛋白: VPIWRVQDDTKTLIKTIVTRISDISHMQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLSLSKMDQTLAIYQQILTSLPSR
NVIQISNDLENLRDLLHLLASSKSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYSTEVVALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC(SEQ ID NO:3)ο[0048]具有N-端甲硫氣酸的成熟猪瘦蛋白: MVPIWRVQDDTKTLIKTIVTRISDISHMQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLSLSKMDQTLAIYQQILTSLPS
RNVIQISNDLENLRDLLHLLASSKSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYSTEVVALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC(SEQ ID NO:4)ο
[0049]成熟牛瘦蛋白: VPICKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLAIYQQILTSL
PSRNVVQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC，其中第28位的Xaa是Q或不存在(SEQ ID NO: 5)。
[0050]具有N-端甲硫氨酸的成熟牛瘦蛋白: MVPICKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLAIYQQILTS
LPSRNVVQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC，其中第29位的Xaa是Q或不存在(SEQ ID NO:6)。
[0051]未加工的全长人瘦蛋白(即，包含21残基的N-端信号序列): MHWGTLCGFLffLffPYLFYVQAVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTL
SKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLffQLDLSPGC (SEQ ID NO: 7)。
[0052]成熟人瘦蛋白(去除了 N-端21氨基酸的信号序列):
VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC，其中:第27位的Xaa为T或A ;和第28位的Xaa为Q或不存在(SEQ ID NO:8)。
[0053]具有N-端甲硫氨酸的成熟人瘦蛋白: MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQI
LTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC，其中:第28位的Xaa为T或A ;和第29位的Xaa是Q或不存在(SEQ ID NO: 9) ?
[0054]成熟恒河猴(rhesus)瘦蛋白: VPIQKVQSDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLTLSQMDQTLAIYQQILINLPSR
NVIQISNDLENLRDLLHLLAFSKSCHLPLASGLETLESL⑶VLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQ ID NO:10)。
【权利要求】
1.工程改造的多肽，包含:白蛋白结合结构域多肽(ABD)和选自瘦蛋白、瘦蛋白类似物或其活性片段的第一肽激素结构域(HDl)， 其中所述ABD包含选自包括以下 的氨基酸序列的氨基酸序列:
(i) LA X3 AK X6 X7 AN XlO ELD X14 YGVSDFYKRLI X26 KAKTVEGVEALK X39 X40 ILX43 X44 LP (SEQ ID NO: 300) 其中彼此独立地， X3选自E、S、Q和C ; X6选自E、S和C ; X7选自A和S ; XlO选自A、S和R; X14 选自 A、S、C和 K ; X26选自D和E ; X39选自D和E ; X40选自A和E ; X43选自A和K ; X44选自A、S和E ; 第45位的亮氨酸是存在或不存在的；和 第46位的脯氨酸是存在或不存在的；和 (?)与(i)中定义的序列具有至少95%同一性的氨基酸序列； 条件是X7不是L、E或D ; 或者备选地， 条件是所述氨基酸序列不由在PCT公布的申请号WO 2009/016043中定义的下列序列所定义:LAEAK Xa Xb A Xc Xd EL Xe KY GVSD X5 YK X8 X9 I X11 X12 A X14 TVEGV X20 AL X23X24 X25 ILAALP (SEQ ID NO: 679), 其中彼此独立地， Xa选自V和E ; Xb选自L、E和D ; X。选自N、L和I ; Xd选自R和K ; Xe选自D和K ;和 X5选自Y和F ; X8选自N、R和S ;
X9 选自 V、1、L、M、F 和 Y ；
X11 选自 N、S、E 和 D ; X12选自R、K和N ; X14选自K和R ; X2。选自 D、N、Q、E、H、S、R和 K; X23选自K、I和T ; X24 选自 A、S、T、G、H、L 和 D ;和X25选自H、E和D。
2.权利要求1的工程改造的多肽，还包含与所述HDl共价连接的第一接头(LI)。
3.权利要求1或2的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含所述ABD作为N-端部分和所述HDl作为C-端部分。
4.权利要求1或2的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含所述ABD作为C-端部分和所述HDl作为N-端部分。
5.权利要求3的工程改造的多肽，其包含结构=ABD-HDl。
6.权利要求3的工程改造的多肽，其包含结构=ABD-Ll-HDl。
7.权利要求4的工程改造的多肽，其包含结构:HD1-ABD。
8.权利要求4的工程改造的多肽，其包含结构:HD1-L1-ABD。
9.权利要求1-8中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是瘦蛋白、瘦蛋白类似物、瘦蛋白活性片段或瘦蛋白衍生物。
10.权利要求1-9中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl与选自以下的氨基酸序列具有至少 50% 的同一性:SEQ ID NO: K SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10、SEQ IDNO:11和 SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQID NO: 17,SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ IDNO:666,SEQ ID NO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672, SEQ ID NO:673, SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675, SEQ ID NO:676,SEQ IDNO:677 和 SEQ ID NO:680。
11.权利要求1-10中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl与选自以下的氨基酸序列具有至少 90% 的同一性:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10、SEQ IDNO:11和 SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQID NO: 17,SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO: 143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ IDNO:666,SEQ ID NO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672, SEQ ID NO:673, SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675, SEQ ID NO:676,SEQ IDNO:677 和 SEQ ID NO:680。
12.权利要求1-11中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl与人瘦蛋白具有至少50%的同一性。
13.权利要求1-12中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl与人瘦蛋白具有至少90%的同一性。
14.权利要求1-13中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl与SEQID NO: 20具有至少50%的同一性。
15.权利要求1-14中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl与SEQID NO: 20具有至少90%的同一性。
16.权利要求1-15中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl与鸭嘴兽瘦蛋白具有至少50%的同一性。
17.权利要求1-16中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl与海豹瘦蛋白具有至少50%的同一性。
18.权利要求1-17中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl具有1-5个氨基酸修饰，所述修饰独立选自插入、缺失、添加和取代中的任一个或组合。
19.权利要求1-18 中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO:USEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID N0:6、SEQ ID NO:7,SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO:10,SEQ ID N0:11、SEQ ID NO:12,SEQID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID N0:21、SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:24,SEQID NO:25,SEQ ID NO: 26,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:30,SEQID N0:31、SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:143,SEQ ID NO:144,SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664、SEQ ID NO:665、SEQ ID NO:666、SEQ ID NO:667、SEQ IDNO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID N0:671、SEQ ID NO:672,SEQ ID N0:673、SEQ ID NO:674、SEQ ID NO:675、SEQ ID NO:676、SEQ ID NO:677 和 SEQ ID NO:680。
20.权利要求1-19中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID N0:USEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID N0:6、SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID N0:9、SEQ ID NO:10,SEQ ID N0:11、SEQ ID NO:12,SEQID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID N0:21、SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:24,SEQID NO:25,SEQ ID NO: 26,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:30,SEQID NO:31,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:143,SEQ ID NO:144,SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664、SEQ ID NO:665、SEQ ID NO:666、SEQ ID NO:667、SEQ IDNO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID N0:671、SEQ ID NO:672,SEQ ID N0:673、SEQ ID NO:674、SEQ ID NO:675、SEQ ID NO:676、SEQ ID NO:677 和 SEQ ID NO:680。
21.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:1。
22.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:2。
23.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:3。
24.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:4。
25.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:5。
26.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:6。
27.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:7。
28.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:8。
29.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:9。
30.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 10。
31.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 11。
32.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 12。
33.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 13。
34.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 14。
35.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 15。
36.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 16。
37.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 17。
38.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 18。
39.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 19。
40.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:20。
41.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:21。
42.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:22。
43.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:23。
44.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:24。
45.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:25。
46.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:26。
47.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:27。
48.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:28。
49.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:29。
50.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:30。
51.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:31。
52.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:32。
53.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:33。
54.权利要求1-53中任一项的工程改造的多肽，其中所述ABD包含选自包括以下氨基酸序列的氨基酸序列:
(i) LA X3 AK X6 X7 AN XlO ELD X14 YGVSDFYKRLI X26 KAKTVEGVEALK X39 X40 ILX43 X44 LP (SEQ ID NO: 300) 其中彼此独立地， X3选自E、S、Q和C ; X6选自E、S和C ; X7选自A和S ; XlO选自A、S和R; X14 选自 A、S、C和 K; X26选自D和E ; X39选自D和E ; X40选自A和E ; X43选自A和K ; X44选自A、S和E ; 第45位的亮氨酸是存在或不存在的；和第46位的脯氨酸是存在或不存在的。
55.权利要求1-54中任一项的工程改造的多肽，其中所述ABD包含包括以下的氨基酸序列:(ii)与(i)定义的序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。
56.权利要求1-55中任一项的工程改造的多肽，其中所述ABD包含选自包括以下氨基酸序列的氨基酸序列:
(i) LA X3 AK X6 X7 AN XlO ELD X14 YGVSDFYKRLIDKAKTVEGVEALKDA ILAALP (SEQ IDNO: 678)，其中彼此独立地，X3选自E、S、Q和C;X6选自E、S和C;X7选自A和S;X10选自A、S和R ；X14选自A、S、C和K ;第45位的亮氨酸是存在或不存在的；和第46位的脯氨酸是存在或不存在的；和 (ii)与⑴所定义的序列具有至少95%同一性的氨基酸序列，条件是X7不是L、E或D ； 或者备选地， 条件是所述氨基酸序列不由在PCT公布申请号WO 2009/016043中定义的下列序列所定义:LAEAK Xa Xb A Xc Xd EL Xe KY GVSD X5 YK X8 X9 I X11 X12 A X14 TVEGV X20 AL X23 X24X25 ILAALP (SEQ ID NO: 679)， 其中彼此独立地， Xa选自V和E ; Xb选自L、E和D ; X。选自N、L和I ; Xd选自R和K ; Xe选自D和K ;和 X5选自Y和F ; X8选自N、R和S ; X9 选自 V、1、L、M、F 和 Y ；
X11 选自 N、S、E 和 D ; X12选自R、K和N ; X14选自K和R ; X2。选自 D、N、Q、E、H、S、R和 K; X23选自K、I和T ; X24 选自 A、S、T、G、H、L 和 D ;和 X25选自H、E和D。
57.权利要求1-56中任一项的工程改造的多肽，其中所述ABD包含选自包括以下氨基酸序列的氨基酸序列:
(i) LA X3 AK X6 X7 AN XlO ELD X14 YGVSDF YKRLIDKAKT VEGVEALKDA ILAALP (SEQID NO: 678)，其中彼此独立地，X3选自E、S、Q和C ;X6选自E、S和C ;X7选自A和S ；X10选自A、S和R ；X14选自A、S、C和K ;第45位的亮氨酸是存在或不存在的；和第46位的脯氨酸是存在或不存在的。
58.权利要求1-57中任一项的工程改造的多肽，其中所述ABD包含包括以下的氨基酸序列:(ii)与(i)所定义的序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。
59.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X6为E。
60.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X3为S。
61.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X3为E。
62.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X7为A。
63.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽 ，其中在ABD中X14为S。
64.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X14为C。
65.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中XlO为A。
66.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中XlO为S。
67.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中第46位的脯氨酸是不存在的。
68.权利要求56-58中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X26为D。
69.权利要求56-58中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X39为D。
70.权利要求56-58中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X40为A。
71.权利要求56-58中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X43为A。
72.权利要求56-58中任一项的工程改造的多肽，其中在ABD中X44为A。
73.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中ABD与白蛋白结合，使得相互作用的koff值为至多5 X 1(T5 s'
74.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中ABD与白蛋白结合，使得相互作用的koff值为至多5 X 1(T6 s'
75.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中ABD选自SEQID NO:301-452,455-463 和 500-593 中的任一个。
76.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中ABD选自以下氨基酸序列:其选自 SEQ ID N0:313、SEQ ID NO:448,SEQ ID NO:463,SEQ ID NO:500,SEQ ID N0:501和 SEQID NO:502中的任一个。
77.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述ABD还包含位于(i)所定义的序列的N-端和/或C-端上的一个或多个另外的氨基酸残基。
78.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述一个或多个另外的氨基酸残基包括在ABD的N-端上的丝氨酸残基。
79.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述一个或多个另外的氨基酸残基包括在ABD的N-端上的甘氨酸残基。
80.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述一个或多个另外的氨基酸残基包括在ABD的N-端上的半胱氨酸残基。
81.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述一个或多个另外的氨基酸残基包括在ABD的C-端上的甘氨酸残基。
82.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述一个或多个另外的氨基酸残基包括在ABD的C-端上的半胱氨酸残基。
83.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中ABD包含选自SEQID NO:445-450和SEQ ID NO:462-463中任一个的氛基酸序列。
84.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中ABD包含不超过2个半胱氨酸残基。
85.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中ABD包含不超过I个半胱氨酸残基。
86.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中HDl通过多肽的X14位上的半胱氨酸残基的疏基与ABD缀合。
87.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI是1-30个氨基酸或小于30个氨基酸的肽。
88.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI选自20个天然存在的氨基酸。
89.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI是通过化学合成掺入、翻译后化学修饰掺入或通过在宿主细胞中重组表达而体内掺入的非天然氨基酸。
90.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI氨基酸选自丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸和赖氨酸。
91.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含大部分无空间位阻的氨基酸。
92.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含以下的一种或多种:酸性接头、碱性接头和结构基序。
93.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含多聚甘氨酸、多聚丙氨酸、多聚(Gly-Ala)或多聚(Gly-Ser)。
94.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含(Gly)3、(Gly)4(SEQ ID NO: 116)或(Gly)5 (SEQ ID NO: 117)的多聚甘氨酸。
95.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含(Gly)3Lys(Gly)4 (SEQ ID NO: 118)、(Gly)3AsnGlySer (Gly)2 (SEQ ID NO: 119)、(Gly)3Cys(Gly)4 (SEQ ID NO: 120)和 GlyProAsnGlyGly (SEQ ID NO: 121)。
96.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含Gly和Ala的组八口 ο
97.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含Gly和Ser的组口 O
98.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含Gly和Glu的组口 O
99.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含Gly和Lys的组口 ο
100.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含选自以下的序列:[Gly-SerJn (SEQ ID NO: 122)、[Gly- Gly- Ser]n (SEQ ID NO: 123)、[Gly-Gly-Gly-Ser]n (SEQ ID NO: 124)和[Gly-Gly-Gly-Gly-SerJn (SEQ ID NO: 125);其中 η 为 1、2、3、4、5、6、7、8、9 或 10。
101.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含选自以下的序列:[Gly-Glu] n (SEQ ID NO: 126)、[Gly-Gly-Glu] n (SEQ ID NO: 127)、[Gly-Gly-Gly-Glu]n (SEQ ID NO: 128), [Gly-Gly-Gly-Gly-Glu]n (SEQ ID NO: 129)、[Gly-Asp] n (SEQID NO: 130)、[Gly-Gly-Asp] n (SEQ ID NO: 131)、[Gly-Gly-Gly-Aspln (SEQ ID NO:132), [Gly-Gly-Gly-Gly-Aspln (SEQ ID NO: 133);其中 n 为 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。
102.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含选自以下的序列:[Gly-Glu] n (SEQ ID NO: 126)、[Gly-Gly-Glu] n (SEQ ID NO: 127)、[Gly-Gly-Gly-Glu]n (SEQ ID NO: 128), [Gly-Gly-Gly-Gly-Glu]n (SEQ ID NO: 129)、[Gly-Asp] n (SEQID NO: 130)、[Gly-Gly-Asp] n (SEQ ID NO: 131)、[Gly-Gly-Gly-Aspln (SEQ ID NO:132), [Gly-Gly-Gly-Gly-Aspln (SEQ ID NO: 133);其中 n 为 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。
103.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含选自以下的序列:[Gly-Lys] n (SEQ ID NO: 134)、[Gly-Gly- Lys] n (SEQ ID NO: 135)、[Gly-Gly-Gly-Lys]n (SEQ ID NO: 136), [Gly-Gly-Gly-Gly- Lys]n (SEQ ID NO: 137)、[Gly- Arg] n (SEQID NO: 138)、[Gly-Gly- Arg] n (SEQ ID NO: 139)、[Gly-Gly-Gly- Arg]n (SEQ ID NO:140)、[Gly-Gly-Gly-Gly- Arg]n (SEQ ID NO: 141);其中 n 为 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。
104.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含选自以下的序^lJ: [Glu-Ala-Ala-Ala-Lysln (SEQ ID NO: 142)，其中 η 为 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。
105.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含选自以下的序列:[Gly-Gly-Glu] 6 (SEQ ID NO: 153), [Gly-Gly-Lys] 6 (SEQ ID NO: 154)、[Glu-Ala-Ala-Ala-Lys]3 (SEQ ID NO: 155)、[Glu-Ala-Ala-Ala_Lys]4 (SEQ ID NO: 156)或[Glu-Ala-Ala-Ala-Ly s]5 (SEQ ID NO: 157)。
106.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含N-端TG二肽。
107.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含C-端AS二肽。
108.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含N-端TG二肽和C-端AS 二肽。
109.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述接头LI包含选自以下的氨基酸序列:TG-(GGGS)1 (SEQ ID NO: 215)、TG-(GGGS)2 (SEQ ID NO: 216)、TG-(GGGS)3(SEQ ID NO: 217)、TG-(GGGS)4 (SEQ ID NO: 218)、TG-(GGGS)5 (SEQ ID NO: 219)、(GGGS)「AS (SEQ ID NO: 220)、(GGGS)2-AS (SEQ ID NO: 221)、(GGGS)3-AS (SEQ ID NO:222)、(GGGS) 4-AS (SEQ ID NO: 223)、(GGGS)「AS (SEQ ID NO: 224)、TG-(GGGS)「AS (SEQID NO: 225)、TG-(GGGS)2-AS (SEQ ID NO: 226), TG-(GGGS)3-AS (SEQ ID NO: 227)、TG-(GGGS)4-AS (SEQ ID NO: 228)和 TG-(GGGS)5_AS (SEQ ID NO: 229)。
110.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述TG二肽TG和/或所述二肽AS是不存在的，或被一对选自T、A、S和G的氨基酸置换。
111.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述多肽还包含一个或多个另外的接头。
112.前述权利要求中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含选自SEQ ID NO: 594-663和681的氨基酸序列。
113.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 594所示的氨基酸序列。
114.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 595所示的氨基酸序列。
115.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 596所示的氨基酸序列。
116.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 597所示的氨基酸序列。
117.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 598所示的氨基酸序列。
118.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 599所示的氨基酸序列。
119.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 600所示的氨基酸序列。
120.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 601所示的氨基酸序列。
121.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 602所示的氨基酸序列。
122.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 603所示的氨基酸序列。
123.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 604所示的氨基酸序列。
124.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 605所示的氨基酸序列。
125.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 606所示的氨基酸序列。
126.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 607所示的氨基酸序列。
127.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 608所示的氨基酸序列。
128.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 609所示的氨基酸序列。
129.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 610所示的氨基酸序列。
130.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 611所示的氨基酸序列。
131.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 612所示的氨基酸序列。
132.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 613所示的氨基酸序列。
133.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 614所示的氨基酸序列。
134.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 615所示的氨基酸序列。
135.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 616所示的氨基酸序列。
136.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 617所示的氨基酸序列。
137.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 618所示的氨基酸序列。
138.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 619所示的氨基酸序列。
139.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 620所示的氨基酸序列。
140.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 621所示的氨基酸序列。
141.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 622所示的氨基酸序列。
142.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 623所示的氨基酸序列。
143.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 624所示的氨 基酸序列。
144.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 625所示的氨基酸序列。
145.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 626所示的氨基酸序列。
146.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 627所示的氨基酸序列。
147.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 628所示的氨基酸序列。
148.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 629所示的氨基酸序列。
149.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 630所示的氨基酸序列。
150.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 631所示的氨基酸序列。
151.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 632所示的氨基酸序列。
152.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 633所示的氨基酸序列。
153.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 634所示的氨基酸序列。
154.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 635所示的氨基酸序列。
155.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 636所示的氨基酸序列。
156.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 637所示的氨基酸序列。
157.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 638所示的氨基酸序列。
158.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 639所示的氨基酸序列。
159.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 640所示的氨基酸序列。
160.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 641所示的氨基酸序列。
161.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 642所示的氨基酸序列。
162.权利要求1- 112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 643所示的氨基酸序列。
163.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 644所示的氨基酸序列。
164.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 645所示的氨基酸序列。
165.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 646所示的氨基酸序列。
166.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 647所示的氨基酸序列。
167.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 648所示的氨基酸序列。
168.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 649所示的氨基酸序列。
169.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 650所示的氨基酸序列。
170.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 651所示的氨基酸序列。
171.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 652所示的氨基酸序列。
172.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 653所示的氨基酸序列。
173.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 654所示的氨基酸序列。
174.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 655所不的氨基酸序列。
175.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 656所示的氨基酸序列。
176.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 657所示的氨基酸序列。
177.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 658所示的氨基酸序列。
178.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 659所示的氨基酸序列。
179.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 660所示的氨基酸序列。
180.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 661所示的氨基酸序列。
181.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 662所示的氨基酸序列。
182.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 663所示的氨基酸序列。
183.权利要求1-112中任一项的工程改造的多肽，其中所述工程改造的多肽包含SEQID NO: 681所示的氨基酸序列。
184.权利要求1-183中任一项的工程改造的多肽，其对血清白蛋白的亲和力具有小于约1(T6 mo I/L的解离常数。
185.权利要求1-184中任一项的工程改造的多肽，其对血清白蛋白的亲和力具有小于约1(T9 mo I/L的解离常数。
186.权利要求1-185中任一项的工程改造的多肽，其对血清白蛋白的亲和力具有小于约1(T12 mo I/L的解离常数。
187.权利要求1-186中任一项的工程改造的多肽，其中所述多肽的作用持续时间为至少I天。
188.权利要求1-187中任一项的工程改造的多肽，其中所述多肽的作用持续时间为至少3天。
189.权利要求1-188中任一项的工程改造的多肽，其中所述多肽的作用持续时间为至少5天。
190.权利要求1-189中任一项的工程改造的多肽，其中所述多肽在人受试者中的作用持续时间为至少5天。
191.用于治疗受试者中疾病或病症的方法，包括以有效治疗所述疾病或病症的量给予有需要的受试者权利要求1-190中任一项的工程改造的多肽。
192.权利要求191的方法，其中所述疾病或病症是脂质营养不良、血脂障碍、高血脂、超重、肥胖、下丘脑性闭经、阿尔茨海默氏病、瘦蛋白不足、脂肪肝病、糖尿病(包括I型和II型)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、代谢综合征X和亨廷顿氏病。
193.权利要求191或权利要求192的方法，其中所述疾病或病症是脂质营养不良、血脂障碍、高血脂、超重、肥胖、下丘脑性闭经、阿尔茨海默氏病、瘦蛋白不足、脂肪肝病或糖尿病。
194.权利要求191-193中任一项的方法，其中所述疾病或病症是I型糖尿病或II型糖尿病。
195.权利要求191-193中任一项的方法，其中所述疾病或病症是肥胖。
196.权利要求191-193中任一项的方法，其中所述疾病或病症是脂质营养不良或瘦蛋白不足。
197.包含权利要求1-190中任一项的工程改造的多肽和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
198.权利要求197的药物组合物，其中所述药物组合物是可注射的药物组合物。
199.权利要求197-198中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物是持续释放或长效的药物组合物。
200.权利要求197-199中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物是每天一次的药物组合物。
201.权利要求197-199中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物是每周一次的药物组合物。
202.权利要求197-201中任一项的药物组合物，其用于治疗受试者中的疾病或病症。
203.权利要求197-202中任一项的药物组合物，其中所述疾病或病症是脂质营养不良、血脂障碍、高血脂、超重、肥胖、下丘脑性闭经、阿尔茨海默氏病、瘦蛋白不足、脂肪肝病、糖尿病(包括I型和II型)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、代谢综合征X和亨廷顿氏病。
204.权利要求202或权利要求203的药物组合物，其中所述疾病或病症是脂质营养不良、血脂障碍、高血脂、超重、肥胖、下丘脑性闭经、阿尔茨海默氏病、瘦蛋白不足、脂肪肝病或糖尿病。
205.权利要求202-204中任一项的方法，其中所述疾病或病症是I型糖尿病或II性糖尿病。
206.权利要求202-204中任一项的方法，其中所述疾病或病症是肥胖。
207.权利要求202-204中任一项的方法，其中所述疾病或病症是脂质营养不良或瘦蛋白不足。
208.权利要求1-18中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl选自: (a)选自以下的瘦蛋白的氨基酸序列1-146:SEQ ID NO: USEQ ID NO: 2,SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:10,SEQ ID NO:ll、SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:15,SEQ IDNO: 16,SEQ ID NO: 17,SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ IDNO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:28,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:3USEQ ID NO:32,SEQ ID NO:33,SEQ IDNO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664、SEQ ID NO:665、SEQ ID NO:666、SEQ ID NO:667、SEQ ID NO:668、SEQ ID NO:669、SEQ ID NO:670、SEQ IDN0:671、SEQ ID NO:672, SEQ ID NO:673, SEQ ID NO:674, SEQ ID NO:675, SEQ ID NO:676和SEQ ID N0:677;其中在以下位置的一个或多个上不同的氨基酸被取代，且保持相同的编号(甚至在缺少第28位的谷氨酰基残基的情况下):4、32、33、35、50、64、68、71、74、77、78、.89、97、100、102、105、106、107、108、111、118、136、138、142 和 145 ； (b)子部分(a)的氨基酸序列，其中第28位的谷氨酰基残基是不存在的； (c)子部分(a)或(b)的氨基酸序列，其中在N-端添加甲硫氨酰基残基； (d)由(a)、(b)或(C)的氨基酸序列的片段组成的瘦蛋白，所述氨基酸序列的片段选自: ⑴氨基酸98-146 ； (?)氨基酸1-32 ；
(iii)氨基酸40-116 ；
(iv)氣基酸1_99 和 112_146 ； (V)氨基酸1-99和112-146，其中氨基酸100-111中的一个或多个位于氨基酸99和.112之间； (vi)子部分⑴的氨基酸序列，其中氨基酸100、102、105、106、107、108、111、118、136、.138、142和145中的一个或多个被另一氨基酸取代； (vii)子部分(ii)的氨基酸序列，其中氨基酸4、8和32中的一个或多个被另一氨基酸取代； (viii)子部分(iii)的氨基酸序列，其中氨基酸50、53、60、64、66、67、68、71、74、77、.78、89、97、100、102、105、106、107、108、111和112中的一个或多个被另一氨基酸置换； (ix)子部分(iv)的氨基酸序列，其中氨基酸4、8、32、33、35、48、50、53、60、64、66、67、.68、71、74、77、78、89、97、112、118、136、138、142 和 145 中的一个或多个被另一氨基酸置换；和 (X)子部分(V)的氨基酸序列，其中氨基酸4、32、33、35、50、64、68、71、74、77、78、89、.97、100、102、105、106、107、108、111、118、136、138、142 和 145 中的一个或多个被另一氨基酸置换； (xi)子部分(i)-(x)中任一个的氨基酸序列，其中在N-端添加甲硫氨酸； (e)子部分(a)至(d)中任一个的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与化学部分连接； (f)子部分(e)的氨基酸序列，其中所述化学部分是水溶性聚合物部分； (g)子部分(f)的氨基酸序列，其中所述水溶性聚合物部分选自:聚乙二醇、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧基甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二氧戊烷、聚-1，3，6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、多聚氨基酸同聚物、多聚氨基酸随机共聚物、白蛋白、Fe蛋白、聚(η-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇同聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙二醇丙醛、琥珀酸盐、苯乙烯、羟乙基淀粉；和 (h)子部分(g)的氨基酸序列，其中所述水溶性聚合物部分是聚乙二醇；和 (i)子部分(g)的氨基酸序列，其中所述水溶性聚合物是选自白蛋白、抗体、Fe蛋白和多聚赖氨酸部分的多聚氨基酸。
209.权利要求1-18和208中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中一个或多个氨基酸被取代。
210.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中一个氨基酸被取代。
211.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中两个氨基酸被取代。
212.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:17,SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中三个氨基酸被取代。
213.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中四个氨基酸被取代。
214.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中五个氨基酸被取代。
215.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中六个氨基酸被取代。
216.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中七个氨基酸被取代。
217.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID N O:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中八个氨基酸被取代。
218.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中九个氨基酸被取代。
219.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID N0:677和SEQ IDNO:680 ;其中十个氨基酸被取代。
220.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:17,SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中11个氨基酸被取代。
221.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6, SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中12个氨基酸被取代。
222.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中13个氨基酸被取代。
223.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ I D NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中14个氨基酸被取代。
224.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中15个氨基酸被取代。
225.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中16个氨基酸被取代。
226.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO: 23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中17个氨基酸被取代。
227.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中18个氨基酸被取代。
228.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中19个氨基酸被取代。
229.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:664, SEQ ID NO:665, SEQ ID NO:666, SEQ IDNO:667,SEQ ID NO:668,SEQ ID NO:669,SEQ ID NO:670,SEQ ID NO:671、SEQ ID NO:672、SEQ ID NO:673,SEQ ID NO:674,SEQ ID NO:675,SEQ ID NO:676,SEQ ID NO:677和SEQ IDNO:680 ;其中20个氨基酸被取代。
230.权利要求1-18和209中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl包含选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQID NO:6,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID N O:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID
231.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 143。
232.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 144。
233.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 145。
234.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO: 146。
235.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:664。
236.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:665。
237.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:666。
238.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:667。
239.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:668。
240.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:669。
241.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:670。
242.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:671。
243.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:672。
244.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:673。
245.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:674。
246.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:675。
247.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:676。
248.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID NO:677。
249.权利要求1-20中任一项的工程改造的多肽，其中所述HDl是SEQID N0:680。
250.治疗受试者肥胖的方法，包括外周给予治疗有效量的至少两种不同的抗肥胖剂，其中至少一种抗肥胖剂是胰岛淀粉样多肽、胰岛淀粉样多肽类似物、胰岛淀粉样多肽激动剂或胰岛淀粉样多肽衍生物(即，胰岛淀粉样多肽药剂)，且至少一种抗肥胖剂是包含白蛋白结合结构域多肽(ABD)和选自瘦蛋白、瘦蛋白类似物或其活性片段的第一肽激素结构域(HDl)的工程改造的多肽，其中ABD包括选自SEQ ID NO: 301_452、455_463和500-593的肽的任一个。
251.减少受试者体重的方法，包括外周给予治疗有效量的至少两种不同的抗肥胖剂，其中至少一种抗肥胖剂是胰岛淀粉样多肽、胰岛淀粉样多肽类似物、胰岛淀粉样多肽激动剂或胰岛淀粉样多肽衍生物(即，胰岛淀粉样多肽药剂)，且至少一种抗肥胖剂是包含白蛋白结合结构域多肽(ABD)和选自瘦蛋白、瘦蛋白类似物或其活性片段的第一肽激素结构域(HDl)的工程改造的多肽，其中ABD包括选自SEQ ID NO: 301_452、455_463和500-593的肽的任一个。
252.权利要求250或251中任一项的方法，其中所述至少一种抗肥胖胰岛淀粉样多肽药剂是胰岛淀粉样多肽激动剂。
253.权利要求250-252中任一项的方法，其中所述胰岛淀粉样多肽激动剂包括胰岛淀粉样多肽类似物或衍生物。
254.权利要求250-253中任一项的方法，其中所述胰岛淀粉样多肽类似物或衍生物包括普兰林肽。
255.权利要求250-254中任一项的方法，其中所述胰岛淀粉样多肽类似物或衍生物包括表4中所公开的化合物。
256.权利要求250-255中任一项的方法，其中所述胰岛淀粉样多肽类似物或衍生物包括脱-Lysl-[Lys26(mPEG40K)]_ 普兰林肽(SEQ ID NO: 214)。
257.权利要求250-256中任一项的方法,其中所述HDl包括选自以下的氨基酸序列:
258.权利要求250-257中任一项的方法，其中所述HDl是SEQID NO: 29。
259.权利要求250-258中任一项的方法，其中所述工程改造的多肽包括表2中所公开的化合物。
260.权利要求250-259中任一项的方法，其中所述工程改造的多肽包括选自SEQIDNO: 594-663和681的氛基酸序列。
261.权利要求250-260中任一项的方法，其中所述工程改造的多肽包括SEQIDNO:595的氨基酸序列。
262.权利要求250-260中任一项的方法，其中所述工程改造的多肽包括SEQIDNO:657的氨基酸序列。
263.权利要求250-262中任一项的方法，其中有效量的胰岛淀粉样多肽药剂和有效量的工程改造的多肽包括这样的量，其使得当将胰岛淀粉样多肽药剂与工程改造的多肽组合给予所述受试者时，获得比当单独给予任一药剂时获得的体重减轻的量更大量的体重减轻。
264.权利要求250-263中任一项的方法，其中将所述两种药剂同时给予。
265.权利要求250-264中任一项的方法，其中将所述两种药剂混合在一起。
266.权利要求250-265中任一项的方法，其中受试者的BMI大于25。
267.权利要求250-266中任一项的方法，其中受试者的BMI为25-35。
268.权利要求250-267中任一项的方法，其中受试者的BMI为25-40。
269.权利要求250-268中任一项的方法，其中受试者的BMI为25-45。
270.权利要求250-269中任一项的方法，其中受试者的BMI为35-45。
271.权利要求250-270中任一项的方法，其中受试者的BMI减少至小于30。
272.权利要求250-271中任一项的方法，其中受试者的BMI减少至小于25。
273.权利要求250-272中任一项的方法，其中受试者的BMI减少至正常。
274.权利要求250-273中任一项的方法，其中在治疗4周内实现体重减轻。
275.权利要求250-274中任一项的方法，其中在治疗8周内实现体重减轻。
276.权利要求250-275中任一项的方法，其中在治疗12周内实现体重减轻。
277.权利要求250-276中任一项的方法，其中在治疗20周内实现体重减轻。
278.权利要求250-277中任一项的方法，其中在治疗24周内实现体重减轻。
279.权利要求250-278中任一项的方法，其中受试者是人。
280.权利要求250-279中任一项的方法，其中受试者是肥胖人。
281.权利要求250-280中任一项的方法，其中体重减轻减少至少10%。
282.权利要求250-281中任一项的方法，其中体重减轻减少至少12%。
283.权利要求250-282中任一项的方法，其中体重减轻减少至少15%。
【文档编号】A61K38/22GK103957926SQ201280043718
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2012年7月3日 优先权日:2011年7月8日
【发明者】M.埃里克森, D.C.利青格尔, S.S.高希, Z.郭, C.埃克布拉徳, J.D.罗思 申请人:安米林药品有限责任公司, 阿斯利康制药有限公司