用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法

用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法
【专利摘要】本文提供了使用与RGMc结合的抗体以治疗和诊断铁相关病症的方法。
【专利说明】用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法
[0001] 相关申请信息 本申请要求于2011年12月14日提交的美国临时专利申请号61/570, 715的权益，所 述申请的内容通过引用完全结合到本文中。
[0002] 序列表 本申请包含经由EFS-Web以ASCII格式提交的序列表并在此通过引用以其整体结 合。所述ASCII副本创建于2013年2月13日，命名为029996-1767-W001SL.txt，大小为 1〇5, 782 字节。 发明领域
[0003] 本发明涉及抗体和使用所述抗体来治疗和诊断铁相关病症的方法。
[0004] 背景 铁稳态对于机体的正常功能来说是至关重要的。因为铁对于血红蛋白的产生是极为重 要的，铁水平不足导致缺铁性贫血。铁过载也可通过不适当地增加肠道铁吸收而扰乱铁平 衡。这样的增加通常导致在肝、胰、心脏、脑垂体和其它器官的铁沉积，导致这些器官的组织 损伤和正常功能受损。
[0005] 各种铁相关疾病可以至少部分地归因于铁的错误调节并且难以诊断和治疗。这类 病症包括肝病、性腺功能减退、糖尿病、肝硬化、心肌病、缺铁性贫血和慢性病贫血（"ACD ")， 其表征为与感染、恶性肿瘤和/或慢性炎症相关的铁的不良分布。因为涉及铁相关病症的 症状往往是模糊不清的并且所导致的效果并非倾向于立即出现，所以目前的程序往往不能 适当诊断和治疗铁病症。这些困难可导致在给予合适疗法上的延迟。
[0006] 因此，需要诊断和治疗铁相关病症的可靠方法。铁相关病症（包括慢性病贫 血）的目前治疗选择，包括给予红细胞生成剂，例如依泊汀〇、依泊汀β和达贝泊汀 (darbepoetin)。进一步的治疗包括口服或肠胃外（parental)铁疗法和/或输血。然而， 铁疗法具有有限的功效，通常不建议用于ACD受试者。另外，输血具有多器官衰竭的持续问 题并增加病危护理患者的死亡率。因此，需要治疗铁相关疾病的新方法，所述方法高度特 异、良好耐受并且对于依泊汀及其相关类似物无反应的受试者而言可以足够方式作为有用 的疗法。
[0007] 发明概述 一方面，本发明涉及分离的抗体或其抗体片段，其结合到排斥性导向分子c (Repulsive Guidance Molecule c，"RGMc"）上。所述抗体包含选自以下的域或区：（a) 重链可变域区，其包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:4 的氨基酸序列，（c)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:5的氨基酸序列，（d)轻链可变域区， 其包含SEQ ID N0:6的氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:7的氨基酸序 列，（f)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:8的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:9的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:10的氨基酸序列，（i)可变 重链，其含有包含SEQ ID N0:11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:12的 氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的⑶R3,（j)可变轻链，其含有包 含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的CDR2,和包含 SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的⑶R3,（k)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序 列的CDR1，包含SEQIDN0:18的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :19的氨基酸序列的 CDR3,（1)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:20的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:21 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的⑶R3,（m)可变重链，其含有 包含SEQIDN0:23的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :24的氨基酸序列的CDR2，和包 含SEQ ID N0:25的氨基酸序列的CDR3,（η)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:27的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:28的氨基酸 序列的⑶R3,（ο)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR3,（p)可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:32的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :33的氨基酸序列的CDR2，和 包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR3,（q)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基 酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13的氨基酸 序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的⑶R3,（r)可变重链，其 含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2， 和包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO:20的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:21的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:22的氨 基酸序列的⑶R3,（s)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻 链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:27的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:28的氨基酸序列的CDR3，（t)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:29 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO:31的 氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:33的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:34的氨基酸序列的CDR3。所述抗体 可以是免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单域抗体、 CDR-移植抗体、双链抗体、人源化抗体、人抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体（dual specific antibody)、DVD、Fab'、双特异性抗体、F(ab'）2和Fv。权利要求2的分离的抗体 或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是单克隆抗体、人源化抗体或人抗体。所述抗体或抗 体片段包含选自以下的重链免疫球蛋白恒定域：人IgM恒定域、人IgG4恒定域、人IgGl恒 定域、人IgE恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域和人IgA恒定域。
[0008] 所述分离的抗体或抗体片段可含有包含SEQ ID N0:3的氨基酸序列的重链可变域 区，包含SEQ ID N0:5的氨基酸序列的重链可变域区，包含SEQ ID N0:7的氨基酸序列的重 链可变域区，或包含SEQ ID N0:9的氨基酸序列的重链可变域区。所述抗体可含有包含SEQ ID N0:4的氨基酸序列的轻链可变域区，包含SEQ ID N0:6的氨基酸序列的轻链可变域区， 包含SEQ ID N0:8的氨基酸序列的轻链可变域区，或包含SEQ ID N0:10的氨基酸序列的轻 链可变域区。所述抗体可含有包含SEQ ID N0:3的氨基酸序列的重链可变域区和包含SEQ ID N0:4的氨基酸序列的轻链可变域区。
[0009] 所述抗体可含有包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域区和包含SEQ ID N0:6的氨基酸序列的轻链可变域区。所述抗体可含有包含SEQ ID N0:7的氨基酸序列的 重链可变域区和包含SEQ ID N0:8的氨基酸序列的轻链可变域区。所述抗体可含有包含 SEQ ID N0:9的氨基酸序列的重链可变域区和包含SEQ ID N0:10的氨基酸序列的轻链可 变域区。所述抗体可包含可变重链，其含有包含SEQ ID N0:11的氨基酸序列的互补决定区 (CDR)1，包含SEQIDN0:12的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :13的氨基酸序列的 CDR3。
[0010] 所述抗体可包含可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:14的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQ ID N0:15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:16的氨基酸序列的⑶R3。所述抗 体可包含可变重链，其含有包含SEQ ID N0:17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:18的 氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3。
[0011] 所述抗体可包含可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:20的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQ ID N0:21的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:22的氨基酸序列的CDR3。
[0012] 所述抗体可包含可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:24的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:25的氨基酸序列的CDR3。所述抗 体可包含可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:27 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的⑶R3。所述抗体可包含可变 重链，其含有包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:30的氨基酸序列 的⑶R2,和包含SEQ ID N0:31的氨基酸序列的⑶R3。所述抗体可包含可变轻链，其含有包 含SEQIDN0:32的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :33的氨基酸序列的CDR2，和包含 SEQ ID N0:34的氨基酸序列的⑶R3。所述抗体可包含可变重链，其含有包含SEQ ID N0:11 的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的 CDR3。
[0013] 所述抗体可包含可变重链，其含有包含SEQ ID N0:17的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:18的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:19的氨基酸序列的CDR3，以及可变 轻链，其含有包含SEQ ID N0:20的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:21的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:22的氨基酸序列的CDR3。
[0014] 所述抗体可包含可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:24的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:25的氨基酸序列的CDR3，以及可变 轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:27的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:28的氨基酸序列的CDR3。
[0015] 所述抗体可包含可变重链，其含有包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:30的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:31的氨基酸序列的CDR3，以及可变 轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:33的氨基酸序列 的⑶R2,和包含SEQ ID N0:34的氨基酸序列的⑶R3。所述抗体或抗体片段可进一步包含 选自以下的试剂：免疫粘附分子、成像剂和治疗药。所述成像剂可以是放射性标记、酶、荧光 标记、发光标记、生物发光标记、磁标记或生物素。所述放射性标记可以是3H、14C、35S、90Y、 99Tc、lllIn、125I、131I、177Lu、166Ho 或 153Sm。
[0016] 另一方面，本发明也涉及编码本文所述抗体或其片段的任何一个的分离的核酸。 本公开内容也涉及药物组合物，其包含本文所述的抗体、抗体片段、其混合物或其衍生物。
[0017] 另一方面，本发明也涉及治疗铁代谢疾病的方法。所述方法包括将治疗或预防有 效量的抗体给予有需要的受试者的步骤，其中所述抗体包含选自以下的域或区：(a)重链 可变域区，其包含SEQ ID N0:3的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:4的 氨基酸序列，（c)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:5的氨基酸序列，（d)轻链可变域区，其 包含SEQ ID N0:6的氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:7的氨基酸序列， (f)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:8的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:9的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列，（i)可变重 链，其含有包含SEQ ID N0:11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:12的 氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的⑶R3,（j)可变轻链，其含有包 含SEQ ID N0:14的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:15的氨基酸序列的CDR2,和包含 SEQ ID N0:16的氨基酸序列的⑶R3,（k)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:17的氨基酸序 列的CDR1，包含SEQIDN0:18的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :19的氨基酸序列的 CDR3,（1)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:20的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:21 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的⑶R3,（m)可变重链，其含有 包含SEQIDN0:23的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :24的氨基酸序列的CDR2，和包 含SEQ ID N0:25的氨基酸序列的CDR3,（η)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :27的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :28的氨基酸 序列的⑶R3,（ο)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR3,（p)可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:32的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :33的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQIDN0:34的氨基酸序列的⑶R3，（q)可变重链，其含有包含SEQIDN0 :ll的 氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:12的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:13的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:14的氨基酸序列 的⑶R1，包含SEQ ID N0:15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:16的氨基酸序列的 CDR3，（r)可变重链，其含有包含SEQIDN0:17的氨基酸序列的CDRl，包含SEQIDN0:18 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:19的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有 包含SEQIDN0:20的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :21的氨基酸序列的CDR2，和包含 SEQ ID N0:22的氨基酸序列的CDR3,（s)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序 列的CDR1，包含SEQIDN0:24的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :25的氨基酸序列的 CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:27 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:28的氨基酸序列的⑶R3,和（t)可变重链，其含有 包含SEQIDN0:29的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :30的氨基酸序列的CDR2，和包 含SEQ ID N0:31的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的氨基酸 序列的CDR1，包含SEQIDN0:33的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :34的氨基酸序 列的⑶R3,（u)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:43的氨基酸序列，（v)轻链可变域区，其 包含SEQ ID N0:44的氨基酸序列，（w)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:51的氨基酸序列， (X)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列，（y)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，（z)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列，（aa)重链可 变域区，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列，（bb)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:58的 氨基酸序列，（cc)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列，（dd)轻链可变域区， 其包含SEQ ID N0:70的氨基酸序列，（ee)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95的氨基酸 序列的互补决定区（CDR)l，包含SEQ ID N0:96的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:97 的氨基酸序列的⑶R3,（--)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:98的氨基酸序列的⑶R1，包 含SEQ ID N0:99的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID勵：100的氨基酸序列的0?3，&8) 可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 119的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 120的氨基 酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 121的氨基酸序列的⑶R3,（hh)可变轻链，其含有包含 SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的⑶R2,和包含 SEQIDN0:124的氨基酸序列的CDR3，（ii)可变重链，其含有包含SEQIDN0:125的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 126的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 127的氨基 酸序列的⑶R3，（jj)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的CDR3,（kk)可变 重链，其含有包含SEQ ID NO: 137的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 138的氨基酸序 列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的⑶R3,（11)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 140的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 141的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 142的氨基酸序列的⑶R3,（mm)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 173的氨基酸序 列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 174的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 175的氨基酸序 列的CDR3，（nn)可变轻链，其含有包含SEQIDN0:176的氨基酸序列的CDRl，包含SEQID N0:177的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:178的氨基酸序列的CDR3,（〇〇)可变重链， 其含有包含SEQ ID N0:95的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:96的氨基 酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:97的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO :98的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :99的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 100的氨基酸序列的CDR3,（pp)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 119的氨基酸序列的 CDR1，包含SEQIDN0:120的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:121的氨基酸序列的 CDR3，以及可变轻链，其含有包含SEQIDN0:122的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:123 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:124的氨基酸序列的⑶R3,（qq)可变重链，其含 有包含SEQ ID N0:125的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:126的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQ ID N0:127的氨基酸序列的CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:128的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 130的 氨基酸序列的⑶R3,（rr)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 137的氨基酸序列的⑶R1，包 含SEQ ID N0:138的氨基酸序列的CDR2,包含SEQ ID N0:139的氨基酸序列的CDR3,以及 可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:140的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:141的氨基 酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 142的氨基酸序列的⑶R3,（ss)可变重链，其含有包含 SEQ ID N0:173的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:174的氨基酸序列的⑶R2,和包含 SEQ ID N0:175的氨基酸序列的CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:176的氨基酸 序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:177的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:178的氨基酸 序列的CDR3,其中在所述受试者中治疗性或预防性治疗铁代谢疾病。例如，在所述方法中治 疗的铁代谢疾病可选自慢性病贫血（ACD)、铁-难治性缺铁性贫血、慢性肾病性贫血、红细 胞生成刺激剂抵抗和β-地中海贫血。
[0018] 另一方面，本发明也涉及判定受试者是否患有铁相关病症的方法。所述方法包括 以下步骤： a. 在来自所述受试者的样品中测量膜结合的或可溶性RGMc的水平；和 b. 将所述样品中的RGMc水平与正常对照或校准物的RGMc水平进行比较，其中RGMc 水平的改变就表明所述受试者患有铁相关病症；和 c. 将所述受试者诊断为患有铁相关病症。与对照相比的RGMc水平的改变可表明所述 受试者患有铁相关病症。在以上方法中，与正常对照的RGMc水平相比的膜结合的RGMc水平 的降低，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。在以上方法中，与正常对照的RGMc 水平相比的膜结合的RGMc水平的降低，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。在 以上方法中，与正常对照的RGMc水平相比的膜结合的RGMc水平的增加，表明所述受试者患 有铁缺乏相关的铁相关病症。在以上方法中，与正常对照的RGMc水平相比的可溶性RGMc 的水平的降低，表明所述受试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。在以上方法中，与正常对照 的RGMc水平相比的可溶性RGMc的水平的增加，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关 病症。在以上方法中，所述受试者已被或可能先前已被诊断为患有选自以下的病症：癌症、 急性感染、慢性感染、自身免疫性疾病、肝病和慢性肾病。在以上方法中，所述样品可选自血 液样品和血清样品。在以上方法中，步骤a)是免疫测定，例如酶联免疫吸附测定（ELISA)。
[0019] 具体地讲，所述ELISA可以是夹心ELISA。在以上方法中，可使用上述任何分离的 抗体，测定样品中膜结合的RGMc或可溶性RGMc的水平。
[0020] 另一方面，本发明也涉及在试验样品中测定RGMc或其片段的存在、量或浓度的方 法。所述方法包括以下步骤：通过免疫测定，使用至少一种抗体和至少一种可检测标记，测 定所述试验样品的RGMc (或其片段），并包括将在所述试验样品中作为RGMc的存在、量或 浓度的直接或间接指示的由所述可检测标记产生的信号，与在对照或校准物中作为RGMc 的存在、量或浓度的直接或间接指示的所产生的信号进行比较，其中所述至少一种抗体中 的一种是分离的抗体，其特异性结合到RGMc或其片段上，并且其中所述抗体包含选自以下 的域或区：（a)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:3的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包 含SEQ ID N0:4的氨基酸序列，（c)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:5的氨基酸序列，（d) 轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID NO: 7 的氨基酸序列，（f)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:8的氨基酸序列，（g)重链可变域区， 其包含SEQ ID N0:9的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:10的氨基酸序 列，（i)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:12的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:13的氨基酸序列的⑶R3,（j)可变轻 链，其含有包含SEQ ID N0:14的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:15的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:16的氨基酸序列的CDR3，（k)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:17 的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的 氨基酸序列的⑶R3,（1)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:20的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:21的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQIDN0:22的氨基酸序列的⑶R3，（m)可变 重链，其含有包含SEQ ID NO :23的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO :24的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:25的氨基酸序列的CDR3，（n)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:27的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :28的 氨基酸序列的⑶R3,（ο)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:30的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQIDN0:31的氨基酸序列的⑶R3，（p)可 变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:33的氨基酸序 列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:34的氨基酸序列的⑶R3,（q)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的⑶R2,和包 含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的氨基 酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸 序列的⑶R3,（r)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:20的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :21的氨基酸序列的CDR2，和 包含SEQIDN0:22的氨基酸序列的CDR3，（s)可变重链，其含有包含SEQIDN0 :23的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:24的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :25的氨基酸 序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO :27的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO :28的氨基酸序列的⑶R3,（t)可变重链，其 含有包含SEQIDN0:29的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :30的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQ ID N0:31的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:33的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:34的氨 基酸序列的CDR3,（u)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:43的氨基酸序列，（v)轻链可变域 区，其包含SEQ ID N0:44的氨基酸序列，（w)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:51的氨基 酸序列，（X)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:52的氨基酸序列，（y)重链可变域区，其包 含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，（z)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列， (aa)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列，（bb)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列，（cc)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列，（dd)轻 链可变域区，其包含SEQ ID N0:70的氨基酸序列，（ee)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95 的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:96的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:97的氨基酸序列的⑶R3,（ff)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:98的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQ ID NO :99的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :100的氨基酸序列的 CDR3，（gg)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:119的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:120 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 121的氨基酸序列的⑶R3,（hh)可变轻链，其含 有包含SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQIDN0:124的氨基酸序列的CDR3，（ii)可变重链，其含有包含SEQIDN0 :125 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 126的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 127 的氨基酸序列的⑶R3,（jj)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的⑶Rl， 包含SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的⑶R3， (kk)可变重链，其含有包含SEQIDN0:137的氨基酸序列的CDRl，包含SEQIDN0 :138的 氨基酸序列的⑶R2,包含SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的⑶R3,（11)可变轻链，其含有包 含SEQ ID NO: 140的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 141的氨基酸序列的⑶R2,和包 含SEQ ID NO: 142的氨基酸序列的CDR3,（mm)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 173的氨 基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:174的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :175的氨基 酸序列的⑶R3,（nn)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 176的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 178的氨基酸序列的CDR3,（〇〇)可变 重链，其含有包含SEQ ID NO: 95的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 96的 氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:97的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包 含SEQIDN0:98的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :99的氨基酸序列的CDR2，和包含 SEQIDN0:100的氨基酸序列的CDR3，（pp)可变重链，其含有包含SEQIDN0:119的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 120的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 121的氨基 酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 124的氨基酸序列的CDR3,（qq)可变 重链，其含有包含SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 126的氨基酸序列 的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 127的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的CDR3,（rr)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 137的氨基酸序列的 CDR1，包含SEQIDN0:138的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:139的氨基酸序列的 CDR3，以及可变轻链，其含有包含SEQIDN0:140的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:141 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 142的氨基酸序列的⑶R3,（ss)可变重链，其含 有包含SEQ ID NO: 173的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 174的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQ ID NO: 175的氨基酸序列的CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 176的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 178的 氨基酸序列的CDR3,因此在试验样品中测定RGMc或其片段的存在、量或浓度。
[0021] 在以上方法中，试验样品中的RGMc或其片段的存在、量或浓度用于判定或评价受 试者是否患有铁相关病症或处于发展该病症的风险中。在以上方法中，所述RGMc是膜结合 的RGMc或可溶性RGMc。在以上方法中，与正常对照的RGMc水平相比的膜结合的RGMc水平 的降低，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。在以上方法中，与正常对照的RGMc 水平相比的膜结合的RGMc水平的增加，表明所述受试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。在 以上方法中，与正常对照的RGMc水平相比的可溶性RGMc水平的降低，表明所述受试者患有 铁缺乏相关的铁相关病症。在以上方法中，与正常对照的RGMc水平相比的可溶性RGMc水 平的增加，表明所述受:试者患有铁过载相关的铁相关病症。在以上方法中，所述铁相关病症 选自：癌症、急性感染、慢性感染、自身免疫性疾病、肝病和慢性肾病。另外，上述方法可进一 步包括以下步骤： a. 使所述试验样品与至少一种捕获抗体接触，所述抗体结合到RGMc (或其片段）上 的表位，从而形成捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物， b. 使所述捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物与至少一种检测抗体接触，所述检测抗 体包含可检测标记并结合到所述捕获抗体未结合的RGMc (或其片段）上的表位，以形成捕 获抗体/RGMc (或其片段）/检测抗体复合物，和 c. 根据由在（b)中形成的捕获抗体/RGMc (或其片段）/检测抗体复合物中的所述可 检测标记产生的信号，在所述试验样品中测定RGMc (或其片段）的存在、量或浓度，因此在 所述试验样品中测定RGMc (或其片段）的存在、量或浓度。
[0022] 或者，上述方法可进一步包括以下步骤： a. 使所述试验样品与至少一种捕获抗体接触，所述抗体结合到RGMc (或其片段）上 的表位，从而形成捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物，并且同时地或序贯地，以任一顺序， 使所述试验样品与可检测标记的RGMc (或其片段）接触，所述可检测标记的RGMc (或其 片段）可与所述试验样品中的任何RGMc (或其片段）竞争结合到至少一种捕获抗体上，其 中所述试验样品中存在的任何RGMc (或其片段）和所述可检测标记的RGMc彼此竞争以分 别形成捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物和捕获抗体/可检测标记的RGMc (或其片段） 复合物，和 b. 根据由在（b)中形成的捕获抗体/可检测标记的RGMc (或其片段）复合物中的所 述可检测标记产生的信号，在所述试验样品中测定RGMc的存在、量或浓度，其中由在所述 捕获抗体/可检测标记的RGMc (或其片段）复合物中的所述可检测标记产生的信号与所 述试验样品中的RGMc的量或浓度成反比，因此在所述试验样品中测定RGMc的存在、量或浓 度。上述方法可进一步包括测定所述试验样品的铁调素（hepcidin)。
[0023] 另一方面，本发明也涉及判定受试者是否患有铁相关病症的方法。所述方法包括 以下步骤： a. 在来自所述受试者的第一样品中测量膜结合的或可溶性RGMc的水平； b. 在来自所述受试者的第二样品中测量铁调素水平； c. 将第一样品中的RGMc水平与与正常对照或校准物中的RGMc水平进行比较，和 d. 将第二样品中的铁调素水平与正常对照或校准物中的铁调素水平进行比较，其中 RGMc和铁调素的各自水平的改变表明所述受:试者患有铁相关病症；和 e. 将所述受试者诊断为患有铁相关病症。
[0024] 在以上方法中，与正常对照中的膜结合的RGMc水平相比的膜结合的RGMc水平的 降低，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。在以上方法中，与正常对照中的膜 结合的RGMc水平相比的膜结合的RGMc水平的增加，表明所述受试者患有铁缺乏相关的铁 相关病症。在以上方法中，与正常对照中的可溶性RGMc水平相比的可溶性RGMc水平的降 低，表明所述受试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。在以上方法中，与正常对照中的可溶性 RGMc水平相比的可溶性RGMc水平的增加，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。 在以上方法中，与正常对照中的铁调素水平相比的铁调素水平的降低，表明所述受试者患 有铁过载相关的铁相关病症。在以上方法中，与正常对照中的铁调素水平相比的铁调素水 平的增加，表明所述受:试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。
[0025] 在以上方法中，受试者已经诊断患有选自以下的病症：癌症、急性感染、慢性感染、 自身免疫性疾病、肝病和慢性肾病。在以上方法中，分别在第一和第二样品中序贯地测定膜 结合的或可溶性RGMc的水平和铁调素水平。在以上方法中，分别在第一和第二样品中同时 地测定膜结合的或可溶性RGMc的水平和铁调素水平。
[0026] 在以上方法中，所述样品选自血液样品和血清样品。在以上方法中，步骤a)是酶 联免疫吸附测定（ELISA)。例如，所述ELISA是夹心ELISA。在以上方法中，使用任何上述 分离的抗体，测定样品中的膜结合的RGMc或可溶性RGMc的水平。
[0027] 对RGMc (例如膜结合的RGMc、可溶性RGMc、膜结合的RGMc片段、可溶性RGMc片 段、RGMc变体（膜结合的或可溶性的RGMc)或其任何组合）和铁调素的任何测定可以是同 时或序贯的，以任一顺序，使用同类方法或不同方法并使用相同的或来自相同来源（例如 同一患者）的不同的试验样品。或者，所述方法也可包括使用得自相同来源（例如同一患 者）的试验样品（但在不同时间点测定或获得和测定铁调素）的测定的数据。
[0028] 另一方面，本发明也涉及用于测定试验样品的RGMc (或其片段）的试剂盒。所述 试剂盒可包含用于测定所述试验样品的RGMc (或其片段）的至少一种组分和用于测定所 述试验样品的RGMc (或其片段）的说明书，其中所述至少一种组分包含至少一种组合物， 其包含特异性结合到RGMc (或其片段）上的分离的抗体，其中所述抗体包含选自以下的 域或区：（a)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:3的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包含 SEQ ID N0:4的氨基酸序列，（c)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:5的氨基酸序列，（d)轻 链可变域区，其包含SEQ ID N0:6的氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:7的 氨基酸序列，（f)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:8的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其 包含SEQ ID N0:9的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:10的氨基酸序列， (i)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的⑶R3,（j)可变轻链，其 含有包含SEQ ID N0:14的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:15的氨基酸序列的⑶R2， 和包含SEQ ID N0:16的氨基酸序列的⑶R3，（k)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:17的氨 基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的氨基 酸序列的⑶R3,（1)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:20的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的⑶R3,（m)可变重 链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:24的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:25的氨基酸序列的CDR3，（n)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :27的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :28的 氨基酸序列的⑶R3,（ο)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:30的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQIDN0:31的氨基酸序列的⑶R3，（p)可 变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:33的氨基酸序 列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:34的氨基酸序列的⑶R3,（q)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的⑶R2,和包 含SEQ ID N0:13的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:14的氨基 酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸 序列的⑶R3,（r)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:20的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :21的氨基酸序列的CDR2，和 包含SEQIDN0:22的氨基酸序列的CDR3，（s)可变重链，其含有包含SEQIDN0 :23的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:24的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :25的氨基酸 序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的⑶R3,（t)可变重链，其 含有包含SEQIDN0:29的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :30的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQ ID N0:31的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:33的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:34的氨 基酸序列的CDR3,（u)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:43的氨基酸序列，（v)轻链可变域 区，其包含SEQ ID N0:44的氨基酸序列，（w)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:51的氨基 酸序列，（X)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:52的氨基酸序列，（y)重链可变域区，其包 含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，（z)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列， (aa)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列，（bb)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列，（cc)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列，（dd)轻 链可变域区，其包含SEQ ID N0:70的氨基酸序列，（ee)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95 的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:96的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:97的氨基酸序列的⑶R3,（ff)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:98的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQ ID NO :99的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :100的氨基酸序列的 CDR3，（gg)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:119的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:120 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 121的氨基酸序列的⑶R3,（hh)可变轻链，其含 有包含SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQIDN0:124的氨基酸序列的CDR3，（ii)可变重链，其含有包含SEQIDN0 :125 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 126的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 127 的氨基酸序列的⑶R3,（jj)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的⑶Rl， 包含SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的⑶R3， (kk)可变重链，其含有包含SEQIDN0:137的氨基酸序列的CDRl，包含SEQIDN0 :138的 氨基酸序列的⑶R2,包含SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的⑶R3,（11)可变轻链，其含有包 含SEQ ID NO: 140的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 141的氨基酸序列的⑶R2,和包 含SEQ ID NO: 142的氨基酸序列的CDR3,（mm)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 173的氨 基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :174的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :175的氨基 酸序列的⑶R3,（nn)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 176的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 178的氨基酸序列的CDR3,（〇〇)可变 重链，其含有包含SEQ ID NO: 95的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 96的 氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:97的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包 含SEQIDN0:98的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :99的氨基酸序列的CDR2，和包含 SEQIDN0:100的氨基酸序列的CDR3，（pp)可变重链，其含有包含SEQIDN0:119的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 120的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 121的氨基 酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 124的氨基酸序列的CDR3,（qq)可变 重链，其含有包含SEQ ID N0:125的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:126的氨基酸序列 的⑶R2,和包含SEQ ID N0:127的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的CDR3,（rr)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 137的氨基酸序列的 CDR1，包含SEQIDN0:138的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:139的氨基酸序列的 CDR3，以及可变轻链，其含有包含SEQIDN0:140的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:141 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 142的氨基酸序列的⑶R3,（ss)可变重链，其含 有包含SEQ ID NO: 173的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 174的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQ ID NO: 175的氨基酸序列的CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 176的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 178的 氨基酸序列的CDR3,其中所述抗体任选被可检测标记。在以上试剂盒中，在所述试验样品中 测定的RGMc或其片段用于判定或评价受试者是否患有铁相关病症或处于发展该病症的风 险中。另外，所测定的RGMc是膜结合的RGMc或可溶性RGMc。所述试剂盒可进一步包括用 于测定试验样品的铁调素的至少一种组分和用于测定所述试验样品的铁调素的说明书。
[0029] 附图简述 图1显示涉及铁稳态的信号转导途径的简化示意图。
[0030] 图2显示涉及铁稳态的信号转导途径的另一简化示意图。
[0031] 图3是直方图，显示人源化5F9. 23 (h5F9. 23)在大鼠中增加血铁水平。图3显示来 自每周一次经静脉内注射0、20、60或200 mg/kg而治疗的大鼠的数据。血铁水平在所用的 所有h5F9. 23剂量时都显著增加（显著性：**P〈0. 01 ;*** P〈0. 001)。该数据显示h5F9. 23 在大鼠中增加血铁水平。
[0032] 图4是直方图，显示h5F9. 23在大鼠中增加饱和转铁蛋白1水平（%)。在每周一次 经IV注射0、20、60或200 mg/kg h5F9. 23而治疗的大鼠中测定饱和转铁蛋白1水平。饱 和转铁蛋白1水平在所有h5F9. 23剂量时都显著增加（显著性：*** p〈 0. 001)。
[0033] 图5是直方图，显示h5F9. 23在大鼠中增加饱和转铁蛋白2水平（%)。在每周一次 经IV注射0、20、60或200 mg/kg h5F9. 23而治疗的大鼠中测定饱和转铁蛋白2水平。饱 和转铁蛋白2水平在所有h5F9. 23剂量时都显著增加（显著性：** p〈0. 01 ;*** p〈0. 001)。
[0034] 图6是直方图，显示h5F9. 23在大鼠中降低不饱和铁结合力（UIBC)。在每周一次 经IV注射0、20、60或200 mg/kg h5F9. 23而治疗的大鼠中也测定不饱和铁结合力（UIBC)。 WBC水平在所有h5F9. 23剂量中都显著降低（显著性：*林p〈 0. 001)。
[0035] 图7显示用普鲁士蓝染色的固定的大鼠肝样品（对照）（X100放大倍数）。箭头指 向肝叶的门静脉周区。
[0036] 图8显示用普鲁士蓝染色的固定的大鼠肝样品（治疗-200 mg/kg/周h5F9. 23) (χιοο放大倍数）。箭头指向肝叶的门静脉周区。黑色颗粒代表铁。
[0037] 图9显示用普鲁士蓝染色的固定的大鼠脾脏样品（对照）（X40放大倍数）。铁负 载的巨噬细胞显示在介于淋巴滤泡（F)间的红髓中。
[0038] 图10显示用普鲁士蓝染色的固定的大鼠脾脏样品（治疗- 200 mg/kg/周的 h5F9. 23) (X40放大倍数）。介于淋巴滤泡（F)间的红髓中的巨噬细胞将铁释放到血清中。
[0039] 图11显示在293HEK细胞中的RGMc-介导的BMP报告测定，用于评价阻断RGMc功 能的选择性h5F9亲和力成熟的Ab。（A) RGM-介导的BMP报告测定的示意图。（B)大鼠杂 交瘤mAb 5F9、h5F9. 23及其亲和力成熟的Ab以剂量依赖性方式抑制RGMc-介导的luc活 性。IC50值在图例旁边显示。Y轴代表萤光素酶活性，以相对光单位（RLU)计。
[0040] 图12是直方图，显示实施例5中的结果，其中雌性食蟹猴（cyno monkey)用不同剂 量的人源化抗体5F9. 23 (h5F9. 23)治疗。猴子经皮下注射60 mg/kg (sc)或静脉内注射 20、60、200 mg/kg (iv)，每周一次，共4周。在第22天，在施加抗体后（第4剂量）0.5小 时、4小时、24小时采集灵长动物血清血。使用质谱方法测定铁调素。*** p〈 0.001:相 对于预测试的显著性，* P〈 0.05:相对于预测试的显著性，* p〈 0.05:相对于对照 的显著性。
[0041] 图13是直方图，显示实施例6的结果，其中雌性Sprague Dawley大鼠用不同剂量 的抗体h5F923.AM8治疗。大鼠经静脉内注射2.5 mg/kg、5 mg/kg 10mg/kg或20 mg/kg，每 周一次，共4周。在第4周结束时，采集血清并进行以下测定：（1)游离血铁水平（图13A) 和（2)不饱和铁结合力（图13B)。***相对于磷酸缓冲盐水（PBS)(浅灰色）的显著性， *** p〈0. 01:相对于单克隆抗体人IgG (黑色）的显著性。对照是针对IL-18的人IgG抗 体，得自Abbott Laboratories, Worcestser, MA。该对照与大鼠 IL-18蛋白无交叉反应 性。
[0042] 图14是直方图，显示实施例7的结果，其中雌性Sprague Dawley大鼠用不同剂量 的抗体h5F923.AM8治疗。大鼠经静脉内注射0.02 mg/kg、0.2 mg/kg 2.0 mg/kg或20 mg/ kg，每周一次，共4周。在第4周结束时，采集血清并进行以下测定：（1)游离血铁水平（图 14A)和（2)不饱和铁结合力（图14B)。*#ρ〈0· 001显著性，相对于溶媒对照；# ρ〈0· 01 显著性，相对于溶媒对照；*Ρ〈〇. 05显著性，相对于溶媒对照。溶媒对照包含30mM组氨酸、 8% w/v蔗糖、pH 6. 0加上0. 02%吐温80的水溶液。
[0043] 图15是直方图，显示实施例8中所述的第一组实验的结果，表明h5F923.AM8和 1A-2989在A⑶大鼠中在第30天通过增加血红蛋白水平而改善贫血。也如该图所示， dorsomorphin是无活性的。
[0044] 图16是直方图，显示实施例8中所述的第二系列实验的结果。具体地讲，图16A 显示对照抗体hlgG在第41、47和51天不显著改变贫血大鼠的低血红蛋白水平。*p〈0. 05: 相对于DO血红蛋白水平的显著性。图16B显示对RGM A具有选择性的人源化单克隆抗体 在第41、47和51天不显著改变贫血大鼠的低血红蛋白水平。*p〈0. 05，** p〈 0. 01，相 对于D0血红蛋白水平的显著性。图16C显示抗体h5F9. AM8在第41、47和51天显著增加 贫血大鼠的低血红蛋白水平（D24)。*#p〈0. 001，相对于第0天（D0)血红蛋白水平的显著 性。D41: *p〈0. 05相对于D24的显著性，D47/55: *p〈0. 05相对于D24的显著性。图16D 显示抗体h5F9. 23在第41、47和51天增加贫血大鼠的低血红蛋白水平（第24天（D24)。 *p〈0. 05 ;#p〈0. 001，在第41天相对于D0血红蛋白水平的显著性：*p〈0. 05相对于第24、 47和51天的显著性：*p〈0. 05相对于天的显著性。
[0045] 发明详述 RGMc是糖基磷脂酰肌醇（"GPI"）锚定的膜蛋白，其在肌肉、视网膜和门静脉周围肝 细胞中表达。RGMc通过信号转导蛋白与铁调素共同作用，以维持机体的铁稳态。参见例 如，Severyn 等人，Biochem. J·，422:393-403 (2009)和 Pietrangelo, J. Hepatology, 54:173-181 (2011)。细胞膜RGMc结合到再生蛋白（neogenin)并通过骨形态发生蛋白 (BMPs)促进信号转导，所述蛋白通过下游效应器触发胞内信号转导，以促进铁调素基因表 达。另见例如，Pietrangelo, J. Hepatology, 54:173-181 (2011)。由丝氨酸蛋白酶、蛋 白裂解酶（matriptase)-2 (TMPRSS6)裂解膜结合的RGMc，释放可溶性RGMc。通过降低胞 外铁浓度诱导可溶性RGMc的释放，相反，通过增加胞外铁浓度抑制可溶性RGMc的释放。另 外参见，例如，Severyn 等人，Biochem. J·，422:393-403 (2009)和图 1。RGMc 的可溶性 形式将BMP6与膜结合的RGMc隔绝，从而阻止对铁调素表达的诱导。参见图2。
[0046] 当BMP结合到BMP受体I和II后，与再生蛋白、BMP6和RGMc形成膜结合的复合 物。该复合物，连同称为Smads (Smads 1、5和8)的胞内蛋白，转导胞外信号，从而启动信 号转导途径，其控制铁调素表达，并最终控制系统性铁代谢。另见例如，Pietrangelo，J. ifepatology，54:173-181 (2011)和图1。铁调素结合到铁转运蛋白，该蛋白是哺乳动物专 有的铁输出者。铁调素结合到铁转运蛋白后，铁转运蛋白被巨噬细胞和十二指肠肠细胞内 在化，该蛋白在此被降解，从而关闭铁输出途径。参见例如，Hentz等人，Cell, 142:24-38 (2010)和 Cheng 等人，Clin. Exp. Med.，11:33-42 (2011)。
[0047] 巨噬细胞和十二指肠肠细胞均表达铁转运蛋白；在高铁调素水平，铁调素-诱导 的铁转运蛋白的降解关闭了唯一可用的铁输出途径。结果，巨噬细胞和十二指肠肠细胞都 积聚大量胞内铁。参见图1。慢性病贫血（"ACD"）是常见结果，因为这些细胞不再能够将 铁释放到血液中。另见例如，Cheng等人，Clin. Exp. Med.，11:33-42 (2011)。
[0048] RGMc-特异性抗体中断铁调素的正常表达，其直接调节血浆中的铁浓度和铁向各 种组织的分布。所述抗体可阻止BMPs和RGMc之间的结合。所述抗体可阻止BMPs和RGMc 的N-末端之间的结合。该作用的结果就是降低或抑制铁调素表达。当铁调素水平降低，增 加了铁转运蛋白-依赖性的铁输出，因为铁调素不再能够结合铁转运蛋白并诱导其内在化 和降解。参见图2。
[0049] 本发明人已经做出了意想不到的发现：结合到排斥性导向分子c ( "RGMc"）的抗 体可用于调节铁代谢。本文中提供的是中断铁调素的正常表达的抗体，其直接调节血浆中 的铁浓度和铁向各种组织的分布。铁调素水平过量导致铁限制性贫血。例如，已有报道，在 患有ACD的患者和患有急性炎症（AI)的患者中铁调素水平明显增加。在患有ACD和缺铁性 贫血（A⑶-IDA)的患者中观察到铁调素水平稍微增加。仅患有缺铁性贫血（IDA)的患者表 现出降低血清铁调素水平的趋势。例如，已经证明血清铁调素水平，在健康对照中为177, 58 4区/1(+/-119,84)，在六〇)患者中为434,83 48//1(+/-217)，在六1患者中为410,08 48/ 1 (+/-299, 96)，在 ACD-IDA 患者中为 238, 32 Pg/l (+/-93, 85)，在 IDA 患者中稍微降低的 血清铁调素水平为110, 79 Pg/l (+/-19, 22)。相比之下，血色素沉着病的特征在于低血清 铁调素水平。另外，β_地中海贫血是铁调素水平可能低的一种疾病。
[0050] 本文公开的抗体可用于治疗铁代谢疾病。另外，本文公开的抗体可用于判定受试 者是否患有铁相关病症的诊断测定。
[0051] 1.定义 本文所用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，并非旨在限制性。正如本说明书和 所附权利要求书所用的，单数形式"一个"、"一种"和"所述"包括复数对象，除非上下文另 有说明。
[0052] a.约 "约"在本文中可用于指所述数值的约+/- 10%变化。应理解，这样的变化通常包括在 本文提供的任何给定值中，无论是否有具体指出。
[0053] b.亲和力成熟的抗体 "亲和力成熟的抗体"在本文中用于指在其一个或多个CDRs中具有一个或多个改变 的抗体，与不具有这些改变的母体抗体相比，所述改变导致抗体对靶抗原的亲和力（即KD、 kd或ka)改善。示例性的亲和力成熟的抗体将对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和 力。产生亲和力成熟的抗体的各种程序是本领域已知的，包括筛选使用生物展示而制备的 组合抗体文库。例如，Marks等人，BioTechnology, 10: 779-783 (1992)描述了通过VH 和VL域改组的亲和力成熟。CDR和/或框架残基的随机诱变由以下文献描述：Barbas等 人，Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 91: 3809-3813 (1994) ;Schier 等人，Gene, 169: 147-155 (1995) ;Yelton等人，J. Immunol·, 155: 1994-2004 (1995) Jackson等人，丄 Immunol·，154(7): 3310-3319 (1995);和Hawkins等人，J. Mol. Biol·，226: 889-896 (1992)。在选择性诱变位置和在接触或超变位置上用增强活性的氨基酸残基的选择性突变 描述于美国专利号6, 914, 128B1。
[0054] c.抗体和抗体 "抗体"如本文所用，是指单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体（完全或部 分人源化）、动物抗体（例如但不限于，鸟（例如鸭或鹅）、鲨鱼、鲸鱼和哺乳动物，包括非 灵长类（例如牛、猪、胳骑、美洲骑、马、山羊、兔、绵羊、仓鼠、豚鼠、猫、狗、大鼠、小鼠等）、或 者非人灵长类（例如，猴、黑猩猩等）、重组抗体、嵌合抗体、单链Fv( "scFv"）、单链抗体、 单域抗体、Fab片段、F(ab'）片段、F(ab'）2片段、二硫键连接的Fv( "sdFv"）和抗独特型 ("抗-Id"）抗体、双域抗体、双重可变域（DVD)或三重可变域（TVD)抗体（双重可变域免 疫球蛋白及其制备方法描述于Wu，C·，等人，Nature BioTechnology, 25(11):1290-1297 (2007)和PCT国际申请W0 2001/058956,所述文献内容各自通过引用结合到本文中），以 及任何上述的功能活性的表位结合片段。特别地，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白 分子的免疫活性片段，即，含有分析物-结合位点的分子。免疫球蛋白分子可以是任何类型 (例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)、类别（例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2) 或亚类。为了简化起见，针对分析物的抗体在本文中通常被称为"抗分析物抗体"或仅称为 "分析物抗体"（例如，抗RGMc抗体或RGMc抗体）。
[0055] d.抗体片段 "抗体片段"如本文所用，是指完整抗体的一部分，其包含抗原结合位点或可变区。该部 分不包含完整抗体的Fc区的重链恒定域（即CH2、CH3或CH4,取决于抗体同种型）。抗体 片段的实例包括但不限于Fab片段、Fab'片段、Fab' -SH片段、F(ab'）2片段、Fd片段、Fv片 段、双链抗体、单链Fv (scFv)分子、仅含一个轻链可变域的单链多肽、含有轻链可变域的3 个CDR的单链多肽、仅含一个重链可变区的单链多肽、和含有重链可变区的3个CDR的单链 多肽。
[0056] e.结合常数 "结合常数"描述于本文中。术语"结合速率常数"、"k。/或"ka"如本文所用，是指表明 抗体与其靶抗原的结合速率或抗体与抗原间形成复合物的速率的值，如下式所示： 抗体（Ab) + 抗原（Ag) - Ab-Ag. 术语"解离速率常数"、"k# "或"kd"在本文中可互换使用，是指表明抗体与其靶抗原的 解离速率或Ab-Ag复合物随时间分开为游离抗体和抗原的解离速率的值，如下式所示： 抗体（Ab) +抗原（Ag) - Ab-Ag. 测定结合速率常数和解离速率常数的方法是本领域众所周知的。使用基于荧光的技 术提供了高灵敏度和在生理缓冲液中在平衡时检查样品的能力。可使用其它实验方法和仪 器例如BIAcore? (生物分子相互作用分析）测定（例如可得自以下公司的仪器：BIAcore International AB, a GE Healthcare company, Uppsala, Sweden)。另夕卜，也可使用 KinExA? (动力学排除测定）测定，其可得自 Sapidyne Instruments (Boise, Idaho)。
[0057] 术语"平衡解离常数"或"KD"在本文中可互换使用，是指解离速率U除以结合 速率（k m)得到的数值。结合速率、解离速率和平衡解离常数用于代表抗体对于抗原的结合 亲和力。
[0058] f.结合蛋白 "结合蛋白"在本文中用于指与结合配偶体结合而形成复合物的单体或多聚体蛋白，例 如，多肽、抗原、化合物或其它分子或任何类别的底物。结合蛋白与结合配偶体特异性结合。 结合蛋白包括抗体、及其抗原-结合片段以及本领域已知的并描述于下文的其它不同形式 及其衍生物、以及包含结合到抗原分子或抗原分子上的特定位点（表位）上的一个或多个 抗原结合域的其它分子。因此，结合蛋白包括但不限于，抗体、四聚体免疫球蛋白、IgG分子、 IgGi分子、单克隆抗体、嵌合抗体、CDR-移植抗体、人源化抗体、亲和力成熟的抗体、和保留 与抗原结合能力的任何所述抗体的片段。
[0059] g.双特异性抗体 "双特异性抗体"在本文中用于指通过如下生产的全长抗体：四源杂交瘤（quadroma) 技术（参见 Milstein 等人，Nature, 305(5934): 537-540 (1983))，两种不同的单克 隆抗体的化学缀合（参见，Staerz 等人，Nature, 314(6012): 628-631 (1985))，或 knob-into-hole或类似方法，其在Fc区中引入突变（参见Holliger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90(14): 6444-6448 (1993))，产生多种不同的免疫球蛋白种类，其中仅 一种是功能性双特异性抗体。双特异性抗体结合其2个结合臂（一对HC/LC)之一上的一 个抗原（或表位），且结合其第二个臂（不同的一对HC/LC)上的不同抗原（或表位）。通 过这个定义，双特异性抗体具有2个不同的抗原结合臂（特异性和CDR序列两方面），且对 于其结合的每种抗原而言是单价的。
[0060] h. CDR "CDR"在本文中用于指在抗体可变序列内的"互补决定区"。在重链和轻链的每个可 变区中存在3个⑶R，所述⑶R对于每个可变区命名为"⑶R1"、"⑶R2"和"⑶R3"。如本文 使用的，术语"⑶R组"指在结合抗原的单个可变区中出现的3个⑶Rs的组。这些⑶Rs的 确切边界已根据不同系统分别定义。由Kabat (Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987)和 (1991))描述的系统，不仅提供了可应用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，还提供 了定义这3个⑶R的精确残基边界。这些⑶R可以被称为"Kabat⑶R"。Chothia和同事 们（Chothia 和 Lesk, J. Mol. Biol·，196: 901-917 (1987);和 Chothia 等人，Nature, 342: 877-883 (1989))发现Kabat⑶R内的某些亚部分采取几乎相同的肽主链构象，尽管 在氨基酸序列水平上具有大的多样性。这些亚部分命名为"L1"、"L2"和"L3"或"ΗΓ'、"Η2" 和"Η3"，其中"L"和"Η"分别指轻链和重链区域。这些区域可以被称为Chothia⑶R，其具 有与Kabat⑶Rs重叠的边界。定义与Kabat⑶Rs重叠的⑶Rs的其它边界已由Padlan, FASEBJ·，9: 133-139 (1995)和 MacCallum, J. Mol. Biol·, 262(5): 732-745 (1996) 描述。再其它的CDR边界定义可能不严格地遵循本文中的系统之一，但仍将与Kabat CDR重 叠，尽管按照特定残基或残基组或甚至整个CDRs并不显著影响抗原结合的预测或实验发 现，它们可缩短或加长。本文使用的方法可以利用根据这些系统中的任何一种限定的CDRs， 尽管某些实施方案使用Kabat或Chothia限定的⑶R。
[0061] i.组分 "组分"或"至少一种组分"通常是指可包含在试剂盒中的捕获抗体、检测或缀合物、校 准物、对照、灵敏度组、容器、缓冲液、稀释剂、盐、酶、酶的辅因子、检测试剂、预处理试剂/ 溶液、底物（例如作为溶液）、终止液等，用于依照本文所述的方法和本领域已知的其它方 法来测定试验样品，例如患者尿、血清或血浆样品。某些组分可以是在溶液中或被冻干，用 于重构以用于测定。
[0062] j.共有序列 "共有序列"如本文所用，是指根据对具体抗原的多个亚型比对的分析而构建的合成的 核酸序列或相应的多肽序列。所述序列可用于针对具体抗原的多个亚型或血清型而诱导广 泛免疫力。合成的抗原，例如融合蛋白，可被操纵为共有序列（或共有抗原）。
[0063] k.对照 "对照"如本文所用，是指已知不含目标分析物（"阴性"）的组合物，所述分析物例如， RGMc (例如膜结合的RGMc、可溶性RGMc、膜结合的RGMc片段、可溶性RGMc片段、RGMc变体 (膜结合的或可溶性RGMc)或其任何组合），或含有目标分析物（"阳性对照"）的组合物， 所述分析物例如，RGMc (例如膜结合的RGMc、可溶性RGMc、膜结合的RGMc片段、可溶性RGMc 片段、RGMc变体（膜结合的或可溶性RGMc)或其任何组合）。阳性对照可包含已知浓度的 RGMc。"对照"、"阳性对照"和"校准物"在本文中可互换使用，是指包含已知浓度的RGMc的 组合物。"阳性对照"可用于建立测定性能特性并且是有用的试剂（例如，分析物）完整性 指示物。"正常对照"可指无铁相关疾病或病症的样品或受试者。
[0064] 1.衍生物 抗体的"衍生物"如本文所用，可以指与真正的或母体抗体相比在其氨基酸序列上具有 一个或多个修饰并表现出修饰的域结构的抗体。衍生物可仍然能够呈现天然抗体中存在的 典型域构型、以及氨基酸序列，其能够特异性结合到靶（抗原）上。抗体衍生物的典型实 例是偶联到其它多肽上的抗体、重排抗体域或抗体片段。衍生物也可包含至少一种额外化 合物，例如蛋白域，所述蛋白域通过共价或非共价键连接。所述连接可基于根据本领域已知 的方法的基因融合。在包含依据本发明使用的抗体的融合蛋白中存在的额外域可以优选 地通过柔性接头连接，所述接头最好是肽接头，其中所述肽接头包含多个亲水的肽-键合 的氨基酸，其长度足以跨越额外蛋白域的C端末端和所述抗体的N-端末端间的距离或反之 亦然。所述抗体可以连接到具有以下构型的效应分子，所述构型适合于生物活性或选择性 结合到例如固体支持物、生物活性物（例如细胞因子或生长激素）、化学剂、肽、蛋白或药物 上。
[0065] m.双重-特异性抗体 "双重-特异性抗体"在本文中用于指可以在其2个结合臂的每一个中（一对HC/LC) 结合2种不同抗原（或表位）的全长抗体（参见PCT公开W0 02/02773)。因此双重-特异 性结合蛋白具有2个相同的抗原结合臂，具有相同的特异性和相同的CDR序列，且对于其结 合的每种抗原是二价的。
[0066] η·双重可变区 "双重可变区"在本文中用于指结合蛋白上的两个或更多个抗原结合位点，其可以是二 价（2个抗原结合位点）、四价（4个抗原结合位点）或多价结合蛋白。DVD可以是单特异性 的，即能够结合一个抗原（或一个特异性表位），或多特异性，即能够结合两个或更多个抗 原（即相同靶抗原分子的两个或更多个表位或者不同靶抗原的两个或更多个表位）。优选 的DVD结合蛋白包含2个重链DVD多肽和2个轻链DVD多肽并且称为"DVD免疫球蛋白"或 "DVD-Ig"。因此这样的DVD-Ig结合蛋白是四聚体并联想到IgG分子，但提供多于IgG分子 的抗原结合位点。因此，四聚体DVD-Ig分子的每一半联想到IgG分子的一半并且包含重 链DVD多肽和轻链DVD多肽，但不同于提供单个抗原结合域的IgG分子的一对重链和轻链， DVD-Ig的一对重链和轻链提供两个或更多个抗原结合位点。
[0067] DVD-Ig结合蛋白的每个抗原结合位点都可衍生自供体（"母体"）单克隆抗体并 因此包含重链可变域（VH)和轻链可变域（VL)，每个抗原结合位点总共有6个CDR参与抗 原结合。因此，结合2个不同表位（即2个不同抗原分子的2个不同表位或相同抗原分子 的2个不同表位）的DVD-Ig结合蛋白包含衍生自第一母体单克隆抗体的抗原结合位点和 第二母体单克隆抗体的抗原结合位点。
[0068] DVD-Ig结合分子的设计、表达和表征的描述在以下文献中提供：PCT公布号W0 2007/024715、美国专利号 7, 612, 181 和 Wu 等人，Nature Biotech·, 25: 1290-1297 (2007)。这类DVD-Ig分子的优选的实例含有：包含结构式VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2)n的重 链，其中VD1是第一重链可变域，VD2是第二重链可变域，C是重链恒定域，XI是接头且条 件是它不是CH1，X2是Fc区，η是0或1，但优选1 ;和包含结构式VDl-(Xl)n-VD2-C-(X2) η的轻链，其中VD1是第一轻链可变域，VD2是第二轻链可变域，C是轻链恒定域，XI是接头 且条件是它不是CH1，X2不包含Fc区；和η是0或1，但优选1。这样的DVD-Ig可包含2条 这样的重链和2条这样的轻链，其中每条链包含串联连接的可变域，在可变区间没有间插 的恒定区，其中重链和轻链缔合而形成串联功能性抗原结合位点，并且一对重链和轻链可 以与另一对重链和轻链缔合而形成具有4个功能性抗原结合位点的四聚体结合蛋白。在另 一实例中，DVD-Ig分子可包含重链和轻链，其各自包含串联连接的3个可变域（VD1、VD2、 VD3)，在可变域间没有间插的恒定区，其中一对重链和轻链可以缔合而形成3个抗原结合 位点，并且其中一对重链和轻链可以与另一对重链和轻链缔合而形成具有6个抗原结合位 点的四聚体结合蛋白。
[0069] 在一个优选的实施方案中，本发明的DVD-Ig结合蛋白不仅结合其母体单克隆抗 体所结合的同一靶分子，而且具有一个或多个其母体单克隆抗体的一个或多个所需性质。 优选地，这样的额外性质是一个或多个母体单克隆抗体的抗体参数。可自一个或多个其母 体单克隆抗体促成DVD-Ig结合蛋白的抗体参数包括但不限于抗原特异性、抗原亲和力、效 能、生物学功能、表位识别、蛋白稳定性、蛋白溶解度、生产效率、免疫原性、药物动力学、生 物利用度、组织交叉反应性和直系同源抗原结合。
[0070] DVD-Ig结合蛋白结合RGMc的至少一个表位。DVD-Ig结合蛋白的非限制性实例包 括：结合RGMc的一个或多个表位的DVD-Ig结合蛋白，结合人RGMc的表位和另一物种（例 如小鼠）的RGMc的表位的DVD-Ig结合蛋白，和结合人RGMc的表位和另一靶分子（例如 VEGFR2或VEGFR1)的表位的DVD-Ig结合蛋白。
[0071] 〇·表位 "表位"或"目标表位"是指被识别并可结合到其特异性结合配偶体上的互补位点的任 何分子上的位点。所述分子和特异性结合配偶体是特异性结合对的部分。例如，表位可在 多肽、蛋白、半抗原、碳水化合物抗原（例如但不限于糖脂、糖蛋白或脂多糖）或多糖上。其 特异性结合配偶体可以是、但不限于抗体。
[0072] ρ·框架或框架序列 如本文使用的，术语"框架（FR) "或"框架序列"可指减去CDR的可变区的剩余序列。 因为CDR序列的确切定义可以由不同系统（例如，参见以上）确定，所以对框架序列的含 义进行相应不同的解释。6个⑶Rs (轻链的⑶R-Ll、-L2和-L3,以及重链的⑶R-Hl、-H2 和-H3)也将轻链和重链上的框架区分成在每条链上的4个亚区（FR1、FR2、FR3和FR4)，其 中CDR1位于FR1和FR2之间，CDR2位于FR2和FR3之间，且CDR3位于FR3和FR4之间。不 将特定亚区指定为FR1、FR2、FR3或FR4,如其它人提及的，框架区代表单个天然存在的免疫 球蛋白链可变区内的组合FR。如本文使用的，FR代表4个亚区之一，且FRs代表构成框架 区的4个亚区中的2个或更多。
[0073] 人重链和轻链FR序列是本领域已知的，其可用作重链和轻链"接纳体"框架序列 (或简而言之，"接纳体"序列），以使用本领域已知的技术而使非人抗体人源化。在一个实施 方案中，人重链和轻链接纳体序列选自列于例如V -base (超文本传送协议http://vbase. mrc-cpe.cam.ac.uk/)或在国际ImMunoGeneTics? (IMGT?)信息系统（超文本传送协议 http://imgt. cines. fr/texts/IMGTrepertoire/LocusGenes/)等公众可得的数据库中所 列的框架序列。
[0074] q.功能性抗原结合位点 "功能性抗原结合位点"如本文所用，可以指能够结合靶抗原的结合蛋白（例如抗体） 上的位点。抗原结合位点的抗原结合亲和力可能不如该抗原结合位点所来源的母体结合蛋 白例如母体抗体那么强，但抗原结合能力必须是使用已知用于评价蛋白（例如抗体）结合 到抗原上的各种方法的任何一种而可测量的。此外，多价蛋白（例如本文的多价抗体）的 每个抗原结合位点的抗原结合亲和力不必在定量上相同。
[0075] r.人源化抗体 "人源化抗体"用于本文中以描述包含来自非人物种（例如，小鼠）的重链和轻链可变 区序列的抗体，但其中至少部分VH和/或VL序列已改变成更"人-样"，即更类似于人种系 可变序列。"人源化抗体"是抗体或其变体、衍生物、类似物或片段，其免疫特异性地结合目 的抗原，并且其包含基本上具有人抗体的氨基酸序列的框架（FR)区、和基本上具有非人抗 体的氨基酸序列的互补决定区（CDR)。如本文使用的，在CDR的背景下，术语"基本上"指具 有与非人抗体⑶R的氨基酸序列有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少 99%同一性的氨基酸序列的⑶R。人源化抗体包含基本上所有至少一个、且一般为2个可变 域（Fab、Fab'、F(ab'） 2、FabC、Fv)，其中所有或基本上所有CDR区对应非人免疫球蛋白（即， 供体抗体）的那些，且所有或基本上所有框架区是人免疫球蛋白共有序列的那些。在一个 实施方案中，人源化抗体也包含至少部分免疫球蛋白恒定区（Fc)，一般为人免疫球蛋白恒 定区。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链以及重链的至少可变域。抗体还可以包括 重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，人源化抗体只包含人源化轻链。 在一些实施方案中，人源化抗体只包含人源化重链。在具体实施方案中，人源化抗体只包含 轻链的人源化可变域和/或人源化重链。
[0076] 人源化抗体可以选自任何类别的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，和任 何同种型，包括但不限于IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可包含来自不止一个类别 或同种型的序列，并且可使用本领域众所周知的技术来选择具体的恒定区，以优化所需的 效应功能。
[0077] 人源化抗体的框架区和⑶R不必准确对应于母体序列，例如，可通过取代、插入和 /或缺失至少一个氨基酸残基而诱变供体抗体CDR或共有框架，使得在该位点的CDR或框架 残基不对应于供体抗体或共有框架。在一个优选的实施方案中，这样的突变却并非广泛的。 通常，至少80%、优选地至少85%、更优选地至少90%、和最优选地至少95%的人源化抗体残基 将对应于母体FR和CDR序列的那些。如本文所用，术语"共有框架"是指共有免疫球蛋白序 列中的框架区。如本文所用，术语"共有免疫球蛋白序列"是指自相关免疫球蛋白序列家族 中的最频繁发生的氨基酸（或核苷酸）而形成的序列（参见例如，Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, 1987))。"共有免疫球蛋白序列"因此可包 含"共有框架区"和/或"共有CDR"。在免疫球蛋白家族中，在共有序列中的每一位置都被 该家族中的在该位置上最频繁发生的氨基酸占据。如果2个氨基酸以相等频率发生，这两 者之一可包括在共有序列中。
[0078] s.相同或同一性 "相同"或"同一性"如本文在两个或更多个多肽或多核苷酸序列的情况下使用时，可指 各序列在特定区内具有特定的相同残基百分比。该百分比可通过以下方法计算：优化比对 两个序列，在特定区内比较两个序列，确定两个序列中出现的相同残基的位置数而得到匹 配位置数，将匹配位置数除以特定区内的总位置数，并将结果乘以100,得到序列同一性的 百分比。在两个序列具有不同长度或比对产生一个或多个交错末端和比较的特定区仅含单 一序列的情况下，单一序列的残基包括在分母中，而不在计算的分子中。
[0079] t.分离的多核苷酸 "分离的多核苷酸"如本文所用，可指这样的多核苷酸（例如，基因组的、CDNA、或合成 来源的、或其组合）：由于其来源，分离的多核苷酸不与在自然界中发现该"分离的多核苷 酸"与之结合的全部或部分多核苷酸结合；与在自然界中它不与之连接的多核苷酸操作性 连接；或在自然界中不作为较大序列的部分存在。
[0080] u.标记和可检测标记 "标记"和"可检测标记"如本文所用，是指连接于抗体或分析物的部分，以使抗体和分 析物之间的反应可以检测，而将这样标记的抗体或分析物称为"可检测标记的"。标记可产 生可通过目视或仪器工具检测的信号。各种标记包括信号-产生物质，例如色原、荧光化合 物、化学发光化合物、放射性化合物等。标记的代表性实例包括产生光的部分，例如吖啶化 合物，和产生荧光的部分，例如荧光素。其它标记描述于本文中。在这一点上，所述部分自 身可以是不可检测的，但与另一部分反应后成为可检测的。术语"可检测标记的"的使用意 图包括这样的标记。
[0081] 本领域已知的任何合适的可检测标记都可使用。例如，可检测标记可以是放射性 标记（例如 3H、125I、35S、14C、32P和 33P)、酶标记（例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖 6-磷酸脱氢酶等）；化学发光标记（例如吖啶酯、硫酯或磺酰胺；鲁米诺、异鲁米诺、菲啶酯 (phenanthridinium esters)等）；突光标记（例如突光素（例如,5-突光素、6-羧基突光 素、3' 6-羧基荧光素、5 ￠)-羧基荧光素、6-六氯-荧光素、6-四氯荧光素、异硫氰酸荧光 素等））、罗丹明、藻胆蛋白、R-藻红蛋白、量子点（例如硫化锌封端的硒化镉）、温度测量标 记、或免疫-聚合酶链式反应标记。有关标记物、标记程序和标记检测的介绍可参见Polak 和 Van Noorden, Introduction to Immunocytochemistry, M 2 IK , Springer Verlag, N. Y. (1997)和 Haugland, Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals (1996)，这是一本综合手册和目录，Molecular Probes, Inc.，Eugene, Oregon 出版。突光 标记可用于FPIA (参见例如，美国专利号5, 593, 896、5, 573, 904、5, 496, 925、5, 359, 093和 5, 352, 803,所述文献通过引用全部结合到本文中）。吖啶化合物在均质化学发光测定中可 用作可检测标记（参见例如，Adamczyk 等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. 16: 1324-1328 (2006) ;Adamczyk 等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. 4: 2313-2317 (2004) ;Adamczyk 等 人，Biorg. Med. Chem. Lett. 14: 3917-3921 (2004);和 Adamczyk 等人，Org. Lett. 5: 3779-3782 (2003))。
[0082] -方面，所述吖啶化合物是吖啶-9-甲酰胺。吖啶9-甲酰胺的制备方法描述 于 Mattingly, J. Biolumin. Chemilumin. 6: 107-114 (1991) ;Adamczyk 等人，J. Org. Chem. 63: 5636-5639 (1998) ;Adamczyk 等人，Tetrahedron 55: 10899-10914 (1999) ;Adamczyk等人，Org. Lett. 1: 779-781 (1999) ;Adamczyk等人，Bioconjugate Chem. 11: 714-724 (2000) ;Mattingly 等人，散子 Luminescence BioTechnology: Instrumentsand Applications ；Dyke, K. V. Ed. ；CRC Press: Boca Raton,第 77 - 105 页（2002) ;Adamczyk等人，Org. Lett. 5: 3779-3782 (2003);和美国专利号5, 468, 646、 5, 543, 524和5, 783, 699 (对于其关于上述的教导，各自通过引用全部结合到本文中）。
[0083] 吖啶化合物的另一实例是吖啶-9-羧酸芳基酯。式II的吖啶-9-羧酸芳基酯的一 个实例是10-甲基-9-(苯氧基羰基）Π 丫陡氟磺酸酯（可得自Cayman Chemical, Ann Arbor, MI)。卩丫陡9_羧酸芳基酯的制备方法描述于McCapra等人，Photochem. Photobiol.4: 1111-21 (1965) ;Razavi 等人，Luminescence 15: 245-249 (2000) ;Razavi 等人， Luminescence 15: 239-244 (2000);和美国专利号5, 241，070 (对于其关于上述的教导， 各自通过引用结合到本文中）。这样的吖啶-9-羧酸芳基酯对于通过至少一种氧化酶的分 析物氧化中产生的过氧化氢（就信号强度和/或信号快速性而言）来说是有效的化学发光 指示剂。对于吖啶-9-羧酸芳基酯的化学发光发射的过程是快速完成的，即在1秒钟内，而 吖啶-9-甲酰胺的化学发光发射延长超过2秒钟。然而，吖啶-9-羧酸芳基酯，在蛋白存在 时失去其化学发光性能。因此，其使用要求在信号产生和检测期间蛋白不存在。在样品中 分离或除去蛋白质的方法是本领域技术人员众所周知的，并且包括但不限于超滤、提取、沉 淀、透析、色谱和/或消化（参见例如，Wells, //i# 如-- 免》/-- Preparation. Methods and Automation Strategies, YAseNierr {2WyS))。队咸验猜·^^ 除去或分离的蛋白量可为约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约 80%、约85%、约90%或约95%。对于吖啶-9-羧酸芳基酯及其使用的进一步细节阐述于美国 专利申请号11/697,835 (2007年4月9日提交）。可将吖啶-9-羧酸芳基酯溶于任何合适 的溶剂，例如脱气的无水A 二甲基甲酰胺（DMF)或胆酸钠水溶液。
[0084] ν·连接序列和连接肽序列 "连接序列"或"连接肽序列"是指连接到一个或多个目标多肽序列（例如全长、片段 等）的天然或人工多肽序列。术语"连接"是指连接序列与目标多肽序列的连接。这样的 多肽序列优选通过一个或多个肽键连接。连接序列的长度可以是约4至约50个氨基酸。 优选地，连接序列的长度是约6至约30个氨基酸。天然连接序列可以被氨基酸取代、添加 或缺失修饰，以产生人工连接序列。示例性的连接序列包括但不限于：（i)组氨酸（His)标 签，例如6X His标签，其具有氨基酸序列HHHHHH (SEQ ID N0:83)，可用作连接序列，以便于 目标多肽和抗体的分离和纯化；（ii)肠激酶切割位点，例如His标签，用于目标蛋白和抗 体的分离和纯化。通常，肠激酶切割位点与His标签一起用于目标蛋白和抗体的分离和纯 化。多个肠激酶切割位点是本领域已知的。肠激酶切割位点的实例包括但不限于氨基酸序 列 DDDDK (SEQ ID N0:84)及其衍生物（例如，ADDDDK (SEQ ID N0:85)等）；（iii)各种序 列可用于连结或连接单链可变区片段的轻链和/或重链可变区。其它连接序列的实例可参 见 Bird 等人，Science 242: 423-426 (1988) ;Huston 等人，PNAS USA 85: 5879-5883 (1988);和McCafferty等人，Nature 348: 552-554 (1990)。连接序列也可以被修饰而具 有额外功能，例如连接药物或连接到固体支持物上。在本公开内容的背景下，单克隆抗体， 例如可含有连接序列，例如His标签、肠激酶切割位点、或这两者。
[0085] w.多价结合蛋白 "多价结合蛋白"在本文中用于指包含2个或更多个抗原结合位点（在本文中也称为 "抗原结合域"）的结合蛋白。多价结合蛋白优选经工程改造而具有3个或更多个抗原结合 位点，且一般不是天然存在的抗体。术语"多特异性结合蛋白"指能够结合2种或更多种相 关或无关靶的结合蛋白，包括能够结合同一靶分子的两个或更多个不同表位的结合蛋白。 [0086] X.预定截止和预定水平 "预定截止"和"预定水平"一般指测定截止值，其用于通过将测定的结果与预定截止 /水平比较，来评估诊断/预测/治疗功效结果，其中预定截止/水平已经与各种临床参数 (例如疾病严重程度、进展/非进展/改进等）联系或相关。本公开内容提供示例性预定水 平。然而，众所周知，截止值可能依赖于免疫测定的性质（例如采用的抗体等）而变化。另 夕卜，完全在本领域普通技术人员的一般能力内的是，基于本公开内容使本文公开内容适于 其它免疫测定以获得关于那些其它免疫测定的免疫测定特异性截止值。尽管在各测定之间 预定截止/水平的精确值可能不同，但本文所述的相关性应当是普遍适用的。
[0087] y.预处理试剂 如在本文所述的诊断测定中所用的，"预处理试剂"，例如裂解、沉淀和/或增溶试剂， 是将存在于试验样品中的任何细胞裂解和/或任何分析物增溶的试剂。如本文进一步所述 的，不是所有样品都需要预处理。除了其它的之外，增溶分析物（即RGMc (例如膜结合的 RGMc、可溶性RGMc、膜结合的RGMc片段、可溶性RGMc片段、RGMc变体（膜结合的或可溶性 RGMc)或其任何组合））需要分析物从存在于样品中的任何内源结合蛋白释放。预处理试 剂可以是均质的（不需要分离步骤）或异质的（需要分离步骤）。使用异质的预处理试剂 时，在进行到测定的下一个步骤前，从试验样品将任何沉淀的分析物结合蛋白除去。预处理 试剂任选可包含：(a) -种或多种溶剂和盐，（b) -种或多种溶剂、盐和去垢剂，（c)去垢 齐Md)去垢剂和盐，或（e)适合细胞裂解和/或分析物增溶的任何试剂或试剂组合。
[0088] ζ·质量控制试剂 在本文所述的免疫测定和试剂盒的情况下，"质量控制试剂"包括但不限于校准物、对 照、和灵敏度组（sensitivity panel)。为了确立校准（标准）曲线以内插（interpolation) 分析物（例如抗体或分析物）的浓度，一般使用"校准物"或"标准"（例如，一种或多种，例 如多种）。或者，可以使用接近预定阳性/阴性截止的单个校准物。可以共同使用多个校准 物（即，多于一个校准物或不同量的校准物），从而构成"灵敏度组"。
[0089] aa.重组抗体 "重组抗体"是指通过一个或多个步骤制备而来的抗体，所述步骤包括通过重组技术将 编码一种或多种单克隆抗体的全部或一部分的核酸序列克隆到合适的表达载体，然后在合 适的宿主细胞中表达所述抗体。该术语包括但不限于重组产生的单克隆抗体、嵌合抗体、人 源化抗体（完全或部分人源化）、从抗体片段形成的多特异性或多价结构、双功能性抗体、 杂缀合Abs、DVD_Ig?和在本文的（i)中所述的其它抗体。（双重-可变域免疫球蛋白和制 备它们的方法描述于Wu, C·，等人，Nature BioTechnology, 25:1290-1297 (2007))。术 语"双功能性抗体"如本文所用，是指包含对一个抗原位点具有特异性的第一臂和对不同抗 原位点具有特异性的第二臂的抗体，即双功能性抗体具有双重特异性。
[0090] bb.样品、试验样品和患者样品 "样品"、"试验样品"和"患者样品"在本文中可替换使用。样品，例如尿、血清、血浆、羊 膜液、脑脊液、胎盘细胞或组织、内皮细胞、白细胞或单核细胞等样品，可自患者获取而直接 使用，或者可经预处理，例如通过过滤、蒸馏、萃取、浓缩、离心、使干扰组分钝化、添加试剂 等，从而用本文所述的某种方式或本领域已知的其它方式改变样品的性质。
[0091] cc.校准组合物系列 "校准组合物系列"是指包含已知浓度的Cys-RGMcC的多个组合物，其中每个组合物的 Cys-CRGMc浓度不同于系列中的其它组合物。
[0092] dd.固相 "固相"是指不溶的、或可通过后续反应使之不溶的任何材料。可针对固相吸引和固定 捕获剂的固有能力而选择固相。或者，固相可连接具有吸引和固定捕获剂能力的连接剂。 连接剂可包括例如带电荷的物质，其相对于捕获剂本身具有相反电荷或相对于缀合到捕获 剂上的带电荷物质具有相反电荷。一般而言，连接剂可以是任何结合配偶体（优选地特异 性），其固定在（连接在）固相并通过结合反应而具有固定捕获剂的能力。连接剂使得在 进行测定之前或在进行测定期间能够将捕获剂间接结合到固相材料上。固相可以是例如 塑料、衍生塑料、磁性或非磁性金属、玻璃或硅，包括例如，试管、微量滴定板孔、片层、珠、微 粒、芯片和本领域普通技术人员已知的其它结构。
[0093] ee.特异性结合 "特异性结合"或"特异性地结合"如本文所用，可指抗体、蛋白、或肽与第二化学物类 的相互作用，其中相互作用取决于化学物类上的特定结构（例如，抗原决定簇或表位）的存 在；例如，抗体识别且与特定蛋白结构结合而不是一般地与蛋白结合。如果抗体对表位"A" 具有特异性，那么在包含标记的"A"和抗体的反应中，包含表位A (或游离的、未标记的A) 的分子的存在，将减少与抗体结合的标记的A的量。
[0094] ff.特异性结合配偶体 "特异性结合配偶体"是特异性结合对成员。特异性结合对包含两种不同分子，其通过 化学或物理方式彼此特异性地结合。因此，除了常见的免疫测定的抗原和抗体特异性结合 对之外，其它特异性结合对可包括生物素和抗生物素蛋白（或链霉抗生物素）、碳水化合物 和凝集素、互补的核苷酸序列、效应物和受体分子、辅因子和酶、酶和酶抑制剂，等等。此外， 特异性结合对可包括原始特异性结合成员的类似物的成员，例如，分析物-类似物。免疫反 应性特异性结合成员包括抗原、抗原片段和抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体及其复合 物和其片段，无论是分离的还是经重组产生的。
[0095] gg.严格条件 "严格条件"在本文中用于描述以下条件：在6x氯化钠/柠檬酸钠（SSC)中，在约 45° C，杂交到滤膜结合的DNA上，然后在0. 2xSSC/0. 1% SDS中，在约50-65° C-次或多次 洗涤。术语"在高度严格条件下"是指这样的条件：在6xSSC中在约45° C杂交到滤膜结合 的核酸上，然后在〇. lxSSC/0. 2% SDS中在约68° C -次或多次洗涤，或在其它严格性杂交 条件下。参见例如，Ausubel, F. M.等人，编著，1989，Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc.和 John Wiley & Sons, Inc., New York，在第 6. 3. 1-6. 3. 6 和 2. 10. 3 页。
[0096] hh. "治疗（Treat) "、"治疗（treating) " 或"治疗（treatment) " "治疗（Treat) "、"治疗（treating)"或"治疗（treatment)"在本文中可替换使用，用 于描述逆转、缓解或抑制该术语所适用的疾病进程、或所述疾病的一个或多个症状。根据受 试者的情况，该术语也是指预防疾病，和包括预防疾病的发作，或预防疾病的相关症状。治 疗可以急性或慢性方式进行。该术语还指在患病之前降低疾病或所述疾病相关症状的严重 程度。在患病之前的这种对疾病严重程度的预防或降低是指将本发明的抗体或药物组合物 给予受试者，在给药时所述受试者未患病。"预防"还指预防疾病或所述疾病相关的一个或 多个症状的复发。"治疗"和"治疗性地"是指治疗行动，如上文对"治疗"所定义的。
[0097] ii.示踪剂 "示踪剂"如本文所用，是指缀合到标记上的分析物或分析物片段，例如缀合到荧光素 部分的Cys-CRGMc，其中缀合到标记上的分析物可与分析物有效竞争对该分析物具有特异 性的抗体上的位点。
[0098] jj.变体 "变体"在本文中用于描述这样的肽或多肽：所述肽或多肽通过氨基酸的插入、缺失或 保守取代而在氨基酸序列上有所不同，但保持至少一种生物活性。"生物活性"的代表性 实例包括被特异性抗体结合的能力或引发免疫应答的能力。变体在本文中也用于描述这 样的蛋白：所述蛋白的氨基酸序列与保留至少一种生物活性的参考蛋白的氨基酸序列基 本上相同。氨基酸保守取代，即，将氨基酸用具有相似特性（例如，亲水性和带电区域的程 度和分布）的不同氨基酸替换，在本领域中被认为一般涉及小改变。如本领域所理解的， 可以部分通过考虑氨基酸的亲水性指数而确定这些小改变。Kyte等人，J. Mol. Biol. 157:105-132 (1982)。氨基酸的亲水性指数基于对其疏水性和电荷的考虑。本领域已知， 可以取代具有相似亲水性指数的氨基酸，而仍然保持蛋白功能。一方面，取代具有亲水性指 数±2的氨基酸。也可以使用氨基酸亲水性来揭示将引起保持生物学功能的蛋白的取代。 就肽而言，考虑氨基酸的亲水性允许对该肽的最大局部平均亲水性的计算，这是据报道与 抗原性和免疫原性良好关联的有用的量度。美国专利号4, 554, 101，通过引用全部结合到 本文中。如本领域所理解的，具有相似亲水性值的氨基酸的取代可以产生保持生物学活性 的肽，所述生物学活性例如免疫原性。用彼此具有±2以内的亲水性值的氨基酸来实施取 代。氨基酸的疏水性指数和亲水性值都受该氨基酸的具体侧链影响。与这一观察一致，将 与生物学功能相容的氨基酸取代理解为取决于氨基酸，且尤其是那些氨基酸侧链的相对相 似性，如通过疏水性、亲水性、电荷、大小和其它特性所揭示的那样。"变体"也可用于指抗 RGMc抗体的抗原反应性片段，其在氨基酸序列上不同于抗RGMc抗体的相应片段，但仍然具 有抗原反应性，并且可与抗RGMc抗体的相应片段竞争与RGMc的结合。"变体"也可用于描 述已经经过不同加工（例如蛋白酶解、磷酸化或其它翻译后修饰）而仍然保持其抗原反应 性的多肽或其片段。
[0099] kk.载体 "载体"在本文中用于描述能够运输已与之连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的 载体是"质粒"，它指额外DNA区段可以连接到其内的环状双链DNA环。另一种类型的载体 是病毒载体，其中额外DNA区段可以连接到病毒基因组内。某些载体能够在它们已引入其 内的宿主细胞中自主复制（例如，具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体）。 其它载体（例如非附加型哺乳动物载体）在引入宿主细胞内后可以整合到宿主细胞基因组 内，且因此连同宿主基因组一起进行复制。此外，某些载体能够指导它们与之操作性连接的 基因的表达。这样的载体在本文中被称为"重组表达载体"（或简称"表达载体"）。一般而 言，在重组DNA技术中有用的表达载体通常为质粒的形式。"质粒"和"载体"可以互换使用， 因为质粒是最常用的载体形式。然而，也使用其它形式的表达载体，例如提供等同功能的病 毒载体（例如，复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒）。在这一点上，RNA形式的载 体（包括RNA病毒载体）也可用于本公开内容的情况。
[0100] 对于本文中的数字范围的叙述，明确涵盖每个居间的数字，其具有同样的精确度。 例如，对于范围6-9,除了 6和9之外还涵盖数字7和8,对于范围6. 0-7. 0,明确涵盖数字 6· 0、6· 1、6· 2、6· 3、6· 4、6· 5、6· 6、6· 7、6· 8、6· 9 和 7. 0。
[0101] 2.抗 RGMc 抗体 本文中提供的是结合到RGMc并中断铁调素正常表达的抗体，而铁调素直接调节血浆 中的铁浓度并将铁分布到各种组织中。
[0102] a. RGMc 如本文中先前所述，RGMc是糖基磷脂酰肌醇（"GPI"）锚定的膜蛋白，其在肌肉、视网 膜和门静脉周围肝细胞中表达。RGMc通过信号转导蛋白与铁调素共同作用，以维持机体的 铁稳态。铁调素是通过结合到铁转运蛋白而调节系统性铁代谢的小肽（20 - 25个氨基酸）， 该肽是哺乳动物专有的铁输出者。慢性病贫血（"ACD"）是常见结果，因为这些细胞不再能 够将铁释放到血液中。铁调素诱导的铁转运蛋白的降解可以发生在大于300 mg/1铁调素、 大于325 mg/1铁调素、大于350 mg/1铁调素、大于375 mg/1铁调素、大于400 mg/1铁调 素、大于425 mg/1铁调素、大于450 mg/1铁调素或大于475 mg/1铁调素的水平。
[0103] 人RGMc，具有预测的N-末端的31个氨基酸的信号肽和C-末端45个氨基酸的 GPI-连接信号的一种426个氨基酸的蛋白，当在人基因中的突变与一种严重铁过载病症即 青少年血色素沉着病关联时，首次提出其参与系统性铁代谢。铁调素表达受到肝细胞表面 上表达的膜结合的RGMc和人血液中存在的浓度约1 Pg/ml的可溶性RGMc的控制。由蛋 白裂解酶-2 (TMPRSS6)裂解膜结合的RGMc，产生可溶性RGMc。RGMc的可溶性形式结合到 BMP-6并使之隔绝，从而防止对铁调素表达的诱导。膜形式的RGMc具有相反效应：它增加 铁调素表达。
[0104] 人RGMc可具有以下氨基酸序列： MGEPGQSPSPRSSHGSPPTLSTLTLLLLLCGHAHSQCKILRCNAEYVSSTLSLRGGGSSGALRGGGGGGRGG GVGSGGLCRALRSYALCTRRTARTCRGDLAFHSAVHGIEDLMIQHNCSRQGPTAPPPPRGPALPGAGSGLPAPDPCD YEGRFSRLHGRPPGFLHCASFGDPHVRSFHHHFHTCRVQGAWPLLDNDFLFVQATSSPMALGANATATRKLTIIFKN MQECIDQKVYQAEVDNLPVAFEDGSINGGDRPGGSSLSIQTANPGNHVEIQAAYIGTTIIIRQTAGQLSFSIKVAED VAMAFSAEQDLQLCVGGCPPSQRLSRSERNRRGAITIDTARRLCKEGLPVEDAYFHSCVFDVLIS⑶PNFTVAAQAA LEDARAFLPDLEKLHLFPSDAGVPLSSATLLAPLLSGLFVLWLCIQ (SEQ ID N0:1)。人 RGMc 可以是 SEQ ID NO: 1的片段或变体。
[0105] RGMc片段的长度可以是介于约5和约425个氨基酸、介于约10和约400个氨基 酸、介于约50和约350个氨基酸、介于约100和约300个氨基酸、介于约150和约250个氨 基酸、介于约200和约300个氨基酸、或介于约75和约150个氨基酸。所述片段可包含来 自RGMc的连续数量的氨基酸。
[0106] RGMc片段可具有以下氨基酸序列： AHSQCKILRCNAEYVSSTLSLRGGGSSGALRGGGGGGRGGGVGSGGLCRALRSYALCTRRTARTCRGDLAFH SAVHGIEDLMIQHNCSRQGPTAPPPPRGPALPGAGSGLPAPDPCDYEGRFSRLHGRPPGFLHCASFGDPHVRSFHHH FHTCRVQGAWPLLDNDFLFVQATSSPMALGANATATRKLTIIFKNMQECIDQKVYQAEVDNLPVAFEDGSING⑶RP GGSSLSIQTANPGNHVEIQAAYIGTTIIIRQTAGQLSFSIKVAEDVAMAFSAEQDLQLCVGGCPPSQRLSRSERNRR GAITIDTARRLCKEGLPVEDAYFHSCVFDVLIS⑶PNFTVAAQAALEDARAFLPDL (SEQ ID N0:2)。所述 RGMc片段可以是SEQ ID NO:2的变体。
[0107] b. RGMc -识别抗体 所述抗体是结合到人RGMc (例如膜结合的RGMc、可溶性RGMc、膜结合的RGMc片段、 可溶性RGMc片段、RGMc变体（膜结合的或可溶性RGMc)或其任何组合）的抗体。所述抗 体可以是抗RGMc抗体片段或其变体或其衍生物。所述抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗 体。所述抗体可以是嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、完全人抗体或抗体片段，例如Fab 片段或其混合物。所述抗体可以是免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、亲和力成熟的抗体、 scFv、嵌合抗体、单域抗体、CDR-移植抗体、双链抗体、人源化抗体、完全人抗体、多特异性抗 体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab'、双特异性抗体、F(ab'） 2或Fv。抗体片段或衍生物可 包含F(ab'）2、Fv或scFv片段。所述抗体衍生物可通过模拟肽而产生。此外，用于生产单 链抗体的所述技术可根据本领域已知方法而改变，以产生单链抗体。此外，转基因动物可用 于表达人源化或完全人抗体。
[0108] 所述抗体可以识别和特异性结合RGMc多肽或如上所述的变体上存在的表位（例 如，SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:1的变体中含有的表位）。表位可以是SEQ ID N0:2或SEQ ID NO:2的变体中含有的表位。
[0109] 所述抗体与已知抗RGMc抗体是可以区分的，优选具有与本领域已知的抗RGMc 抗体不同的生物学功能。例如，除了识别和结合到膜结合的RGMc之外，所述抗体优选具 有额外生物活性，例如，增加或降低铁调素表达的能力。另外，或备选，所述抗体具有阻断 RGMc-再生蛋白相互作用和/或RGMc-BMP-6 (骨形态发生蛋白6)相互作用的能力。
[0110] (1)抗体结合特性 所述抗体可以免疫特异性地结合到RGMc (膜结合的RGMc、可溶性RGMc或其组合）、其 片段或其变体并且其k# (或k,)为至少约l.OxKT3 s'为至少约l.OxKT4 s'为至少约 LOxlO-5 s-1，为至少约 LOxlO-6 s-1，或者其kf (或k,)范围为约 1. ΟχΚΓ3 s-1 至约 l.OxlO-6 s \约1. 0x10 3 s 1至约1. 0x10 5 s 1或约1. 0x10 3 s 1至约1. 0x10 4 s L所述片段可以是 SEQ ID N0:2。
[0111] 所述抗体可以免疫特异性地结合到RGMc (膜结合的RGMc、可溶性RGMc或其组 合）、其片段或其变体并且其(或k3)为至少约2. 4χ104 Μ?，为至少约2. 5χ104 Μ?， 为至少约3·3χ104 Μ?，为至少约5·0χ104 Μ?，为至少约1·25χ107 Μ?，为至少约 1. 35χ107 Μ?，为至少约1. ΟχΙΟ8 Μ?为至少约1. ΟχΙΟ9 Μ?或者其(或k3)范围 为约 5· ΟχΙΟ4 Μ? 至约 1. ΟχΙΟ8 Μ?，约 3· 3χ104 Μ? 至约 1. ΟχΙΟ9 Μ?，约 2· 5xl04 Μ?至约L 25χ107 Μ?，约2· 4χ104 Μ?至约L 35χ107 Μ?。所述片段可以是SEQ ID N0:2。
[0112] (2)抗体结构 (a)重量和轻链的可变区及重链和轻链的⑶R 所述抗体可以免疫特异性地结合到RGMc、其片段或其变体上并且包含可变重链和/或 可变轻链，如表1所示。所述抗体可以免疫特异性地结合到RGMc、其片段或其变体上并且包 含一个或多个重链或轻链的CDR序列，也如表1和/或表2所示。
[0113] 表1.人源化抗RGMc抗体VH区和VL区的氨基酸序列列表
【权利要求】
1. 分离的抗体或其抗体片段，其结合到排斥性导向分子c ("RGMc"）上，其中所述抗 体包含选自以下的域或区：（a)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:3的氨基酸序列，（b)轻链 可变域区，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，（c)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:5的 氨基酸序列，（d)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:6的氨基酸序列，（e)重链可变域区，其 包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，（f)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列， (g)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列，（p)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区 (CDR)1，包含SEQIDN0:12的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :13的氨基酸序列的 CDR3，（q)可变轻链，其含有包含SEQIDN0:14的氨基酸序列的CDRl，包含SEQIDN0:15 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的⑶R3,（r)可变重链，其含有 包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包 含SEQIDN0:19的氨基酸序列的⑶R3，（s)可变轻链，其含有包含SEQIDN0 :20的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:21的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :22的氨基酸 序列的⑶R3,（t)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的CDR3,（u)可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:26的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :27的氨基酸序列的CDR2，和 包含SEQIDN0:28的氨基酸序列的CDR3，（ V)可变重链，其含有包含SEQIDN0:29的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :30的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:31的氨基酸 序列的⑶R3,（w)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO :33的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :34的氨基酸序列的CDR3,（X)可变重链，其 含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的⑶R2， 和包含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的 氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨 基酸序列的⑶R3,（y)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻 链，其含有包含SEQ ID N0:20的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:21的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:22的氨基酸序列的CDR3，（z)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:24的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:25的 氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:27的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:28的氨基酸序列的CDR3，和（aa) 可变重链，其含有包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:30的氨基酸 序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:31的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:33的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 34的氨基酸序列的⑶R3。
2. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体选自免疫球蛋白分子、二硫键 连接的Fv、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单域抗体、CDR-移植抗体、双链抗体、单克 隆抗体、人源化抗体、人抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab'、双特异性抗 体、F(ab'）2 和 Fv。
3. 权利要求2的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是单克隆抗体、人 源化抗体或人抗体。
4. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的 重链免疫球蛋白恒定域：人IgM恒定域、人IgG4恒定域、人IgGl恒定域、人IgE恒定域、人 IgG2恒定域、人IgG3恒定域和人IgA恒定域。
5. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体含有包含SEQ ID N0:3的氨 基酸序列的重链可变域区，包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域区，包含SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的重链可变域区，或包含SEQ ID NO: 9的氨基酸序列的重链可变域区。
6. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体含有包含SEQ ID N0:4的氨 基酸序列的轻链可变域区，包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链可变域区，包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变域区，或包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变域区。
7. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体含有包含SEQ ID NO: 3的氨基 酸序列的重链可变域区和包含SEQ ID N0:4的氨基酸序列的轻链可变域区。
8. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体含有包含SEQ ID NO: 5的氨基 酸序列的重链可变域区和包含SEQ ID N0:6的氨基酸序列的轻链可变域区。
9. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体含有包含SEQ ID NO: 7的氨基 酸序列的重链可变域区和包含SEQ ID N0:8的氨基酸序列的轻链可变域区。
10. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体含有包含SEQ ID N0:9的氨 基酸序列的重链可变域区和包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列的轻链可变域区。
11. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变重链，其含有包含 SEQ ID N0:11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:12的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的CDR3。
12. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变轻链，其含有包含 SEQIDN0:14的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQIDN0:15的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的CDR3。
13. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变重链，其含有包含 SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的CDR3。
14. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变轻链，其含有包含 SEQIDN0:20的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:21的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR3。
15. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变重链，其含有包含 SEQIDN0:23的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:24的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的CDR3。
16. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变轻链，其含有包含 SEQIDN0:26的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQIDN0:27的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR3。
17. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变重链，其含有包含 SEQIDN0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQIDN0:30的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR3。
18. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变轻链，其含有包含 SEQIDN0:32的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQIDN0:33的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR3。
19. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变重链，其含有包含 SEQ ID N0:11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:12的氨基酸序列的 CDR2，和包含SEQIDN0:13的氨基酸序列的CDR3，以及可变轻链，其含有包含SEQIDN0:14 的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的 氨基酸序列的⑶R3。
20. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变重链，其含有包含 SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQIDN0:21的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :22的氨基酸序列的 CDR3。
21. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变重链，其含有包含 SEQIDN0:23的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:24的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID N0:25的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQIDN0:27的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :28的氨基酸序列的 CDR3。
22. 权利要求1的分离的抗体或抗体片段，其中所述抗体包含可变重链，其含有包含 SEQIDN0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQIDN0:30的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQ ID N0:31的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQIDN0:33的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :34的氨基酸序列的 CDR3。
23. 权利要求1-22的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段进一步包含选自以 下的试剂：免疫粘附分子、成像剂和治疗药。
24. 权利要求23的分离的抗体或抗体片段，其中所述成像剂选自放射性标记、酶、荧 光标记、发光标记、生物发光标记、磁标记和生物素。
25. 权利要求24的分离的抗体或抗体片段，其中所述放射性标记选自3H、14C、35S、 90Y、99Tc、lllIn、125I、131I、177Lu、166Ho 和 153Sm。
26. 分离的核酸，其编码SEQ ID N0s:3-34的任何一个。
27. 分离的核酸，其编码权利要求1或5-22中任一项的抗体或抗体片段。
28. 药物组合物，其包含权利要求1或5-22的抗体、抗体片段、其混合物或其衍生物。
29. 治疗铁代谢疾病的方法，包括将治疗或预防有效量的抗体给予有需要的受试者， 其中所述抗体包含选自以下的域或区：（a)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序 列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，（c)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，（d)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，（e)重链可 变域区，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，（f)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:8的氨 基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:9的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包 含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列，（i)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的 互补决定区（CDR)1，包含SEQIDN0:12的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:13的氨 基酸序列的⑶R3,（j)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的⑶R3,（k)可变重 链，其含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:19的氨基酸序列的CDR3，（1)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:20 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:21的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :22的 氨基酸序列的⑶R3,（m)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:24的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:25的氨基酸序列的CDR3，（n)可变 轻链，其含有包含SEQ ID NO: 26的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 27的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:28的氨基酸序列的CDR3，（o)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:29 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO:31的 氨基酸序列的⑶R3,（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:33的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:34的氨基酸序列的CDR3，（q)可变 重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 12的 氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包 含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的CDR2,和包含 SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的CDR3,（r)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序 列的CDR1，包含SEQIDN0:18的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :19的氨基酸序列的 CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:20的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:21 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:22的氨基酸序列的⑶R3,（s)可变重链，其含有 包含SEQIDN0:23的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :24的氨基酸序列的CDR2，和包 含SEQ ID NO: 25的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 26的氨基酸 序列的CDR1，包含SEQIDN0:27的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :28的氨基酸序 列的⑶R3,和（t)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:32的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :33的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQ ID NO: 34的氨基酸序列的CDR3,其中在所述受试者中治疗性或预防性治疗铁代 谢疾病。
30. 权利要求29的方法，其中所述铁代谢疾病选自慢性病贫血（ACD)、铁-难治性缺铁 性贫血、慢性肾病性贫血、红细胞生成刺激剂抵抗和β -地中海贫血。
31. 权利要求29的方法，其中所述抗体或抗体片段选自免疫球蛋白分子、二硫键连接 的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单域抗体、CDR-移植抗体、双链抗 体、人源化抗体、人抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab'、双特异性抗体、 F(ab'）2 和 Fv。
32. 权利要求29的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变区，其包含选自SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7 和 SEQ ID NO:9 的序列。
33. 权利要求29的方法，其中所述抗体或抗体片段包含轻链可变区，其包含选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8 和 SEQ ID NO: 10 的序列。
34. 权利要求29的方法，其中所述抗体或抗体片段包含轻链可变域，其包含SEQ ID N0:14、SEQIDN0:15和SEQIDN0:16、或SEQIDN0:20、SEQIDN0:21和SEQIDN0:22、 或SEQIDN0:26、SEQIDN0:27和SEQIDN0:28、或SEQIDN0:32、SEQIDN0:33和SEQ ID NO:34的互补决定区（CDR)残基。
35. 权利要求29的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID N0:11、SEQIDN0:12和SEQIDN0:13、或SEQIDN0:17、SEQIDN0:18和SEQIDN0:19、 或 SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24 和 SEQ ID NO: 25、或 SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30 和 SEQ ID NO:31的互补决定区（⑶R)残基。
36. 权利要求29的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 13的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQIDN0:14、SEQIDN0:15和SEQIDN0:16的互补决定区（CDR)残基。
37. 权利要求29的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO: 19的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQ ID N0:20、SEQ ID N0:21 和 SEQ ID N0:22 的互补决定区（CDR)残基。
38. 权利要求29的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24和SEQ ID NO: 25的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQIDN0:26、SEQIDN0:27和SEQIDN0:28的互补决定区（CDR)残基。
39. 权利要求29的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQ ID N0:32、SEQ ID N0:33 和 SEQ ID N0:34 的互补决定区（CDR)残基。
40. 判定受:试者是否患有铁相关病症的方法，包括： (a) 在来自所述受试者的样品中测量膜结合的或可溶性RGMc的水平；和 (b) 将所述样品中的RGMc水平与正常对照进行比较， 其中RGMc水平的改变就表明所述受试者患有铁相关病症， 其中使用包含选自以下的域或区的抗体测量RGMc的水平：(a)重链可变域区，其包含 SEQ ID NO:3的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，（c)重 链可变域区，其包含SEQ ID NO: 5的氨基酸序列，（d)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO: 6的 氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:7的氨基酸序列，（f)轻链可变域区，其 包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列， (h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列，（i)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的⑶R2,和包 含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的⑶R3,（j)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的氨基 酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸 序列的⑶R3,（k)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,（1)可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:20的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :21的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQ ID N0:22的氨基酸序列的⑶R3，（m)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨 基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :24的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :25的氨基 酸序列的⑶R3,（η)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO :27的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO :28的氨基酸序列的⑶R3,（ο)可变重 链，其含有包含SEQ ID N0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:30的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:31的氨基酸序列的CDR3，（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:33的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :34的 氨基酸序列的⑶R3,（q)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区 (CDR)1，包含SEQIDN0:12的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :13的氨基酸序列的 ⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的⑶R3,（r)可变重链，其含有 包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包 含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO:20的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO:22的氨基酸 序列的⑶R3,（s)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 24的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 25的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:26的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :27的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQ ID NO: 28的氨基酸序列的⑶R3,和（t)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 29的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:30的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:31的氨 基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 32的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:33的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:34的氨基酸序列的⑶R3。
41. 权利要求40的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变区，其包含选自SEQ IDN0:3、SEQIDN0:5、SEQIDN0:7和SEQIDN0:9的序列。
42. 权利要求40的方法，其中所述抗体或抗体片段包含轻链可变区，其包含选自SEQ IDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8和SEQIDN0:10的序列。
43. 权利要求40的方法，其中所述抗体或抗体片段包含轻链可变域，其包含SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15 和 SEQ ID NO: 16、或 SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21 和 SEQ ID NO:22、 或 SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27 和 SEQ ID NO: 28、或 SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33 和 SEQ ID NO:34的互补决定区（CDR)残基。
44. 权利要求40的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12 和 SEQ ID NO: 13、或 SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18 和 SEQ ID NO: 19、 或 SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24 和 SEQ ID NO: 25、或 SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30 和 SEQ ID NO:31的互补决定区（⑶R)残基。
45. 权利要求40的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 13的互补决定区（⑶R)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQIDN0:14、SEQIDN0:15和SEQIDN0:16的互补决定区（CDR)残基。
46. 权利要求40的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO: 19的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQ ID N0:20、SEQ ID N0:21 和 SEQ ID N0:22 的互补决定区（CDR)残基。
47. 权利要求40的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQ ID N0:26、SEQ ID N0:27 和 SEQ ID N0:28 的互补决定区（CDR)残基。
48. 权利要求40的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID N0:29、SEQ ID N0:30和SEQ ID N0:31的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQ ID N0:32、SEQ ID N0:33 和 SEQ ID N0:34 的互补决定区（CDR)残基。
49. 权利要求40的方法，其中所述抗体或抗体片段进一步包含选自以下的试剂：免疫 粘附分子、成像剂和治疗药。
50. 权利要求49的方法，其中所述成像剂选自放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、 生物发光标记、磁标记和生物素。
51. 权利要求50的方法，其中所述放射性标记选自3H、14 C、35S、90Y、99Tc、lllIn、 1251、1311、1771^1、166!1〇和1535111。
52. 权利要求40的方法，其中与正常对照相比的膜结合的RGMc水平的降低，表明所述 受:试者患有铁过载相关的铁相关病症。
53. 权利要求40的方法，其中与正常对照相比的膜结合的RGMc水平的增加，表明所述 受:试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。
54. 权利要求40的方法，其中在步骤（a)之前，所述受试者被诊断为患有选自以下的 病症：癌症、急性感染、慢性感染、自身免疫性疾病、肝病和慢性肾病。
55. 权利要求40的方法，其中所述样品选自血液样品和血清样品。
56. 权利要求40的方法，其中步骤（a)是免疫测定。
57. 权利要求56的方法，其中所述免疫测定是酶联免疫吸附测定（ELISA)。
58. 权利要求57的方法，其中所述ELISA是夹心ELISA。
59. 权利要求40的方法，其中与正常对照中的膜结合的RGMc水平相比的膜结合的 RGMc水平的降低，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。
60. 权利要求40的方法，其中与正常对照中的膜结合的RGMc水平相比的膜结合的 RGMc水平的增加，表明所述受:试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。 61 ·权利要求40的方法，其中所述RGMc是膜结合的RGMc、可溶性RGMc、膜结合的RGMc 片段、可溶性RGMc片段、膜结合的RGMc变体、可溶性RGMc变体或上述任何的组合。
62. 权利要求40的方法，其中所述方法进一步包括测定试验样品中的铁调素的存在、 量或浓度，其中或（i)测定铁调素的试验样品与测定RGMc的试验样品相同或（ii)测定铁 调素的试验样品与测定RGMc的试验样品是不同的试验样品，但是测定铁调素的试验样品 的来源和测定RGMc的试验样品的来源是相同的，因此测定试验样品中的铁调素的存在、量 或浓度。
63. 权利要求62的方法，其中同时地或序贯地以任一顺序测定一个或多个所述试验 样品中的RGMc和铁调素。
64. 权利要求63的方法，其中所述方法进一步包括使用测定试验样品中的铁调素的 存在、量或浓度的结果，其中或（i)测定铁调素的试验样品与测定RGMc的试验样品相同或 (ii)测定铁调素的试验样品与测定RGMc的试验样品是不同的试验样品，但是测定铁调素 的试验样品的来源和测定RGMc的试验样品的来源是相同的。
65. 权利要求40的方法，其中与正常对照中的可溶性RGMc水平相比的可溶性RGMc水 平的降低，表明所述受:试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。
66. 权利要求40的方法，其中与正常对照中的可溶性RGMc水平相比的可溶性RGMc水 平的增加，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。
67. 权利要求40的方法，其中所述受试者已经诊断患有选自以下的病症：癌症、急性 感染、慢性感染、自身免疫性疾病、肝病和慢性肾病。
68. 权利要求40的方法，其中所述样品选自血液样品和血清样品。
69. 权利要求40的方法，其中步骤（a)是免疫测定。
70. 权利要求70的方法，其中所述免疫测定是酶联免疫吸附测定（ELISA)。
71. 权利要求71的方法，其中所述ELISA是夹心ELISA。
72. 在试验样品中测定RGMc或其片段的存在、量或浓度的方法，所述方法包括通过 免疫测定，使用至少一种抗体和至少一种可检测标记，测定所述试验样品的RGMc (或其片 段），并包括将在所述试验样品中作为RGMc的存在、量或浓度的直接或间接指示的由所述 可检测标记产生的信号，与在对照或校准物中作为RGMc的存在、量或浓度的直接或间接指 示的所产生信号进行比较，其中所述至少一种抗体中的一种是分离的抗体，其特异性结合 到RGMc或其片段上，和其中所述抗体包含选自以下的域或区：（a)重链可变域区，其包含 SEQ ID NO:3的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，（c)重 链可变域区，其包含SEQ ID NO: 5的氨基酸序列，（d)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO: 6的 氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:7的氨基酸序列，（f)轻链可变域区，其 包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列， (h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列，（i)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的⑶R2,和包 含SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的⑶R3,（j)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的氨基 酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸 序列的⑶R3,（k)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,（1)可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:20的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :21的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的⑶R3，（m)可变重链，其含有包含SEQ ID NO:23的氨 基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :24的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :25的氨基 酸序列的⑶R3,（η)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO :27的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO :28的氨基酸序列的⑶R3,（ο)可变重 链，其含有包含SEQ ID Ν0:29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID Ν0:30的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID Ν0:31的氨基酸序列的CDR3，（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID Ν0:32 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :33的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :34的 氨基酸序列的⑶R3,（q)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区 (CDR)1，包含SEQIDN0:12的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :13的氨基酸序列的 ⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的⑶R3，（r)可变重链，其含有包 含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的CDR2,和包含 SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 20的氨基酸序 列的CDR1，包含SEQIDN0:21的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :22的氨基酸序列的 CDR3,（s)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:24 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有 包含SEQIDN0:26的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:27的氨基酸序列的CDR2，和包 含SEQ ID NO :28的氨基酸序列的⑶R3,和（t)可变重链，其含有包含SEQ ID NO :29的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:30的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :31的氨基酸 序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的⑶R2,和SEQ ID NO:34的氨基酸序列的⑶R3,因此在试验样品中测 定RGMc或其片段的存在、量或浓度。
73. 权利要求72的方法，其中试验样品中的RGMc或其片段的存在、量或浓度用于判定 或评价受试者是否患有铁相关病症或处于发展该病症的风险中。
74. 权利要求72的方法，其中所述RGMc是膜结合的RGMc或可溶性RGMc。
75. 权利要求74的方法，其中与正常对照中的膜结合的RGMc水平相比的膜结合的 RGMc水平的降低，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。
76. 权利要求74的方法，其中与正常对照中的膜结合的RGMc水平相比的膜结合的 RGMc水平的增加，表明所述受:试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。
77. 权利要求74的方法，其中与正常对照中的可溶性RGMc水平相比的可溶性RGMc水 平的降低，表明所述受:试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。
78. 权利要求74的方法，其中与正常对照中的可溶性RGMc水平相比的可溶性RGMc水 平的增加，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。
79. 权利要求73的方法，其中所述铁相关病症选自癌症、急性感染、慢性感染、自身免 疫性疾病、肝病和慢性肾病。
80. 权利要求72的方法，其中所述方法包括以下步骤： (a) 使所述试验样品与至少一种捕获抗体接触，所述抗体结合到RGMc (或其片段）上 的表位，从而形成捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物， (b) 使所述捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物与至少一种检测抗体接触，所述检测 抗体包含可检测标记并结合到所述捕获抗体未结合的RGMc (或其片段）上的表位，以形成 捕获抗体/RGMc (或其片段）/检测抗体复合物，和 (c) 根据由在（b)中形成的捕获抗体/RGMc (或其片段）/检测抗体复合物中的所述 可检测标记产生的信号，在所述试验样品中测定RGMc (或其片段）的存在、量或浓度，因此 在所述试验样品中测定RGMc (或其片段）的存在、量或浓度。
81. 权利要求72的方法，其中所述方法包括以下步骤： (a) 使所述试验样品与至少一种捕获抗体接触，所述抗体结合到RGMc (或其片段）上 的表位，从而形成捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物，并且同时地或序贯地，以任一顺序， 使所述试验样品与可检测标记的RGMc (或其片段）接触，所述可检测标记的RGMc (或其 片段）可与所述试验样品中的任何RGMc (或其片段）竞争结合到至少一种捕获抗体上，其 中所述试验样品中存在的任何RGMc (或其片段）和所述可检测标记的RGMc彼此竞争以分 别形成捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物和捕获抗体/可检测标记的RGMc (或其片段） 复合物，和 (b) 根据由在（b)中形成的捕获抗体/可检测标记的RGMc (或其片段）复合物中的 所述可检测标记产生的信号，在所述试验样品中测定RGMc的存在、量或浓度， 其中由在所述捕获抗体/可检测标记的RGMc (或其片段）复合物中的所述可检测标 记产生的信号与所述试验样品中的RGMc的量或浓度成反比，因此在所述试验样品中测定 RGMc的存在、量或浓度。
82. 权利要求72-81中任一项的方法，其中所述方法进一步包括测定所述试验样品中 的铁调素。
83. 用于测定试验样品的RGMc (或其片段）的试剂盒，所述试剂盒包含用于测定所 述试验样品的RGMc (或其片段）的至少一种组分和用于测定所述试验样品的RGMc (或其 片段）的说明书，其中所述至少一种组分包括至少一种组合物，其包含特异性结合到RGMc (或其片段）上的分离的抗体，其中所述抗体包含选自以下的域或区：(a)重链可变域区，其 包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列， (c)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，（d)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，（f)轻链可变 域区，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:9的氨基 酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列，（i)可变重链，其含有包 含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:13的氨基酸序列的CDR3，（j)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:14 的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的 氨基酸序列的⑶R3,（k)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:18的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQIDN0:19的氨基酸序列的⑶R3，（1)可变 轻链，其含有包含SEQ ID NO: 20的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:22的氨基酸序列的CDR3，（m)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :24的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :25的 氨基酸序列的⑶R3,（η)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:26的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:27的氨基酸序列的⑶R2，和包含SEQIDN0:28的氨基酸序列的⑶R3，（o)可变 重链，其含有包含SEQ ID NO: 29的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 30的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID N0:31的氨基酸序列的CDR3，（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:32 的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :33的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :34的 氨基酸序列的⑶R3,（q)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的互补决定区 (CDR)1，包含SEQIDN0:12的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :13的氨基酸序列的 ⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 15 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的⑶R3，（r)可变重链，其含有包 含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的CDR2,和包含 SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 20的氨基酸序 列的CDR1，包含SEQIDN0:21的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :22的氨基酸序列的 CDR3,（s)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:23的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:24 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有 包含SEQIDN0:26的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :27的氨基酸序列的CDR2，和包 含SEQ ID NO: 28的氨基酸序列的⑶R3,和（t)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 29的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO:31的氨基酸 序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的⑶R3,其中所述抗体任 选被可检测标记。
84. 权利要求83的试剂盒，其中在所述试验样品中测定的RGMc或其片段用于判定或 评价受试者是否患有铁相关病症或处于发展该病症的风险中。
85. 权利要求84的方法，其中所述RGMc是膜结合的RGMc或可溶性RGMc。
86. 权利要求83的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含用于测定试验样品的铁调素 的至少一种组分和用于测定所述试验样品的铁调素的说明书。
87. 权利要求83或85的试剂盒，其中所述RGMc是膜结合的RGMc、可溶性RGMc、膜结 合的RGMc片段、可溶性RGMc片段、膜结合的RGMc变体、可溶性RGMc变体或上述的任何组 合。
88. 治疗铁代谢疾病的方法，包括将治疗或预防有效量的抗体给予有需要的受试者， 其中所述抗体包含选自以下的域或区：（a)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:43的氨基酸 序列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列，（c)重链可变域区，其包含 SEQ ID N0:51的氨基酸序列，（d)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:52的氨基酸序列，（e)重 链可变域区，其包含SEQ ID NO: 53的氨基酸序列，（f)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO: 54 的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列，（h)轻链可变域区， 其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:69的氨基酸序 列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列，（i)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:96的氨基酸序列的⑶R2， 和包含SEQ ID N0:97的氨基酸序列的CDR3，（j)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:98的氨 基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :99的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO :100的氨基 酸序列的⑶R3,（k)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 119的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 120的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 121的氨基酸序列的⑶R3,（1)可变 轻链，其含有包含SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 123的氨基酸序 列的⑶R2，和包含SEQIDN0:124的氨基酸序列的⑶R3，（m)可变重链，其含有包含SEQID NO: 125的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 126的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 127的氨基酸序列的⑶R3,（η)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的 CDR1，包含SEQIDN0:129的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:130的氨基酸序列的 CDR3，（o)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:137的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:138 的氨基酸序列的⑶R2,包含SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的⑶R3,（p)可变轻链，其含有包 含SEQ ID NO: 140的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 141的氨基酸序列的⑶R2,和包 含SEQIDN0:142的氨基酸序列的CDR3，（O)可变重链，其含有包含SEQIDN0 :173的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 174的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 175的氨基 酸序列的⑶R3,（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 176的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 178的氨基酸序列的CDR3,（q)可变重 链，其含有包含SEQ ID NO: 95的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID NO: 96的氨 基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:97的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含 SEQIDN0:98的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:99的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 100的氨基酸序列的CDR3,（r)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 119的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQIDN0:120的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:121的氨基酸序列的 CDR3，以及可变轻链，其含有包含SEQIDN0:122的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:123 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 124的氨基酸序列的⑶R3,（s)可变重链，其含有 包含SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 126的氨基酸序列的CDR2,和 包含SEQ ID NO: 127的氨基酸序列的CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 130的 氨基酸序列的⑶R3,（t)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 137的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQ ID NO: 138的氨基酸序列的CDR2,包含SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的CDR3,以及可 变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 140的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 141的氨基酸 序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 142的氨基酸序列的⑶R3,（u)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 173的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 174的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 175的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 176的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 178的氨基酸序列 的CDR3,其中在所述受试者中治疗性或预防性治疗铁代谢疾病。
89. 权利要求88的方法，其中所述铁代谢疾病选自慢性病贫血（ACD)、铁-难治性缺铁 性贫血、慢性肾病性贫血、红细胞生成刺激剂抵抗和β -地中海贫血。
90. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段选自免疫球蛋白分子、二硫键连接 的Fv、单克隆抗体、亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单域抗体、CDR-移植抗体、双链抗 体、人源化抗体、人抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、DVD、Fab'、双特异性抗体、 F(ab'）2 和 Fv。
91. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变区，其包含选自SEQ ID N0:43、SEQ ID N0:51、SEQ ID N0:53、SEQ ID N0:57 和 SEQ ID N0:69 的序列。
92. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段包含轻链可变区，其包含选自SEQ ID NO:44、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 58 和 SEQ ID NO: 70 的序列。
93. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段包含轻链可变域，其包含SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99 和 SEQ ID NO: 100、或 SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 123 和 SEQ ID NO: 124、或 SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 129 和 SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 141 和 SEQ ID NO: 142、或 SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 177 和 SEQ ID NO: 178 的互补决 定区（CDR)残基。
94. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID N0:95、SEQIDN0:96和SEQIDN0:97、或SEQIDN0:119、SEQIDN0:120和SEQIDN0:121、 或 SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126 和 SEQ ID NO: 127、或 SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 138 和SEQIDN0:139、SEQIDN0:173、SEQIDN0:174和SEQIDN0:175的互补决定区（CDR) 残基。
95. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID N0:95、SEQ ID N0:96和SEQ ID N0:97的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQIDN0:98、SEQIDN0:99和SEQIDN0:100的互补决定区（CDR)残基。
96. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 120和SEQ ID NO: 121的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其 包含SEQIDN0:122、SEQIDN0:123和SEQIDN0:124的互补决定区（CDR)残基。
97. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126和SEQ ID NO: 127的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其 包含SEQIDN0:128、SEQIDN0:128和SEQIDN0:130的互补决定区（CDR)残基。
98. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 138和SEQ ID NO: 139的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其 包含SEQIDN0:140、SEQIDN0:141和SEQIDN0:142的互补决定区（CDR)残基。
99. 权利要求88的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 174和SEQ ID NO: 175的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其 包含SEQIDN0:176、SEQIDN0:177和SEQIDN0:178的互补决定区（CDR)残基。
100. 用于判定受:试者是否患有铁相关病症的方法，包括： (a) 在来自所述受试者的样品中测量膜结合的或可溶性RGMc的水平；和 (b) 将所述样品中的RGMc水平与正常对照进行比较， 其中使用包含选自以下的域或区的抗体测量RGMc的水平： (a)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:43的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列，（c)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列，（d)轻链 可变域区，其包含SEQ ID NO: 52的氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID NO: 53的 氨基酸序列，（f)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其 包含SEQ ID NO: 57的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO: 58的氨基酸序列， (g)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID N0:70的氨基酸序列，（i)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95的氨基酸序列的互补决定区 (CDR)1，包含SEQIDN0:96的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :97的氨基酸序列的 CDR3,（j)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:98的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:99 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 100的氨基酸序列的⑶R3,（k)可变重链，其含有 包含SEQ ID NO: 119的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 120的氨基酸序列的⑶R2,和 包含SEQ ID NO: 121的氨基酸序列的CDR3,（1)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 122的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 124的 氨基酸序列的⑶R3,（m)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:126的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:127的氨基酸序列的CDR3，（n)可 变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 129的氨基酸 序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的⑶R3,（〇)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:137的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:138的氨基酸序列的CDR2,包含SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的⑶R3,（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 140的氨基酸序列的 CDR1，包含SEQIDN0:141的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:142的氨基酸序列的 CDR3，（o)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:173的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:174 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 175的氨基酸序列的⑶R3,（p)可变轻链，其含有 包含SEQIDN0:176的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :177的氨基酸序列的CDR2，和包 含SEQ ID N0:178的氨基酸序列的CDR3，（q)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95的氨基酸 序列的互补决定区（CDR)l，包含SEQ ID N0:96的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID N0:97 的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:98的氨基酸序列的⑶R1，包 含SEQIDN0:99的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:100的氨基酸序列的CDR3，（r) 可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 119的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 120的氨基酸 序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 121的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ IDN0:122的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :123的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQID NO: 124的氨基酸序列的⑶R3,（s)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的 CDR1，包含SEQIDN0:126的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:127的氨基酸序列的 CDR3，以及可变轻链，其含有包含SEQIDN0:128的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0:129 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的⑶R3,（t)可变重链，其含有 包含SEQ ID NO: 137的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 138的氨基酸序列的CDR2,包 含SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 140的氨基 酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 141的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 142的氨基 酸序列的⑶R3,（u)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 173的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 174的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 175的氨基酸序列的CDR3,以及可变轻 链，其含有包含SEQ ID NO: 176的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的 CDR2,和包含SEQ ID勵：178的氨基酸序列的0?3， 其中RGMc水平的改变就表明所述受试者患有铁相关病症。
101. 权利要求100的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变区，其包含选自 SEQ ID N0:37,SEQ ID N0:39,SEQ ID N0:4USEQ ID N0:43,SEQ ID N0:5USEQ ID N0:53, SEQ ID N0:57 和 SEQ ID N0:69 的序列。
102. 权利要求100的方法，其中所述抗体或抗体片段包含轻链可变区，其包含选自 SEQ ID N0:38、SEQ ID N0:40、SEQ ID N0:42、SEQ ID N0:44、SEQ ID N0:52、SEQ ID N0:54、 SEQ ID N0:58 和 SEQ ID N0:70 的序列。
103. 权利要求100的方法，其中所述抗体或抗体片段包含轻链可变域，其包含SEQ ID N0:98、SEQ ID N0:99 和 SEQ ID NO: 100、或 SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 123 和 SEQ ID NO: 124、或 SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 129 和 SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 141 和 SEQ ID NO: 142、或 SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 177 和 SEQ ID NO: 178 的互补决 定区（CDR)残基。
104. 权利要求100的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID N0:95、SEQIDN0:96和SEQIDN0:97、或SEQIDN0:119、SEQIDN0:120和SEQIDN0:121、 或 SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126 和 SEQ ID NO: 127、或 SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 138 和SEQIDN0:139、SEQIDN0:173、SEQIDN0:174和SEQIDN0:175的互补决定区（CDR) 残基。
105. 权利要求100的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其包含 SEQ ID N0:98、SEQ ID N0:99 和 SEQ ID N0:100 的互补决定区（CDR)残基。
106. 权利要求100的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 120和SEQ ID NO: 121的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其 包含SEQIDN0:122、SEQIDN0:123和SEQIDN0:124的互补决定区（CDR)残基。
107. 权利要求100的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 126和SEQ ID NO: 127的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其 包含SEQIDN0:128、SEQIDN0:128和SEQIDN0:130的互补决定区（CDR)残基。
108. 权利要求100的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 138和SEQ ID NO: 139的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其 包含SEQIDN0:140、SEQIDN0:141和SEQIDN0:142的互补决定区（CDR)残基。
109. 权利要求100的方法，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变域，其包含SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 174和SEQ ID NO: 175的互补决定区（CDR)残基，以及轻链可变域，其 包含SEQIDN0:176、SEQIDN0:177和SEQIDN0:178的互补决定区（CDR)残基。
110. 权利要求100-109中任一项的方法，其中所述抗体或抗体片段进一步包含选自 以下的试剂：免疫粘附分子、成像剂和治疗药。
111. 权利要求110的方法，其中所述成像剂选自放射性标记、酶、荧光标记、发光标 记、生物发光标记、磁标记和生物素。
112. 权利要求111的方法，其中所述放射性标记选自3H、14 C、35S、90Y、99Tc、lllIn、 125I、131I、177Lu、166Ho 和 153Sm。
113. 权利要求100的方法，其中与正常对照相比的膜结合的RGMc水平的降低，表明所 述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。
114. 权利要求100的方法，其中与正常对照相比的膜结合的RGMc水平的增加，表明所 述受试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。
115. 权利要求100的方法，其中在步骤（a)之前，所述受试者被诊断为患有选自以下 的病症：癌症、急性感染、慢性感染、自身免疫性疾病、肝病和慢性肾病。
116. 权利要求100的方法，其中所述样品选自血液样品和血清样品。
117. 权利要求100的方法，其中步骤（a)是免疫测定。
118. 权利要求117的方法，其中所述免疫测定是酶联免疫吸附测定（ELISA)。
119. 权利要求118的方法，其中所述ELISA是夹心ELISA。
120. 权利要求100的方法，其中所述方法进一步包括测定试验样品中的铁调素的存 在、量或浓度，其中或（i)测定铁调素的试验样品与测定RGMc的试验样品相同或（ii)测 定铁调素的试验样品与测定RGMc的试验样品是不同的试验样品，但是测定铁调素的试验 样品的来源和测定RGMc的试验样品的来源是相同的，因此测定试验样品中的铁调素的存 在、量或浓度。
121. 权利要求120的方法，其中同时地或序贯地以任一顺序测定一个或多个试验样 品中的RGMc和铁调素。
122. 权利要求121的方法，其中所述方法进一步包括使用测定试验样品中的铁调素 的存在、量或浓度的结果，其中或（i)测定铁调素的试验样品与测定RGMc的试验样品相同 或（ii)测定铁调素的试验样品与测定RGMc的试验样品是不同的试验样品，但是测定铁调 素的试验样品的来源和测定RGMc的试验样品的来源是相同的。
123. 在试验样品中测定RGMc或其片段的存在、量或浓度的方法，所述方法包括通过 免疫测定，使用至少一种抗体和至少一种可检测标记，测定所述试验样品的RGMc (或其片 段），并包括将在所述试验样品中作为RGMc的存在、量或浓度的直接或间接指示的由所述 可检测标记产生的信号，与在对照或校准物中作为RGMc的存在、量或浓度的直接或间接指 示的所产生的信号进行比较，其中所述至少一种抗体中的一种是分离的抗体，其特异性结 合到RGMc或其片段上，和其中所述抗体包含选自以下的域或区：（a)重链可变域区，其包 含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列， (c)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:51的氨基酸序列，（d)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，（f)轻链可 变域区，其包含SEQ ID NO: 54的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID NO: 57的氨 基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包 含SEQ ID NO:69的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列， (i)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:96的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:97的氨基酸序列的⑶R3,（j)可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:98的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :99的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQIDN0:100的氨基酸序列的CDR3，（k)可变重链，其含有包含SEQIDN0 :119的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 120的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 121的 氨基酸序列的⑶R3,（1)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQIDN0:123的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:124的氨基酸序列的CDR3，（m)可 变重链，其含有包含SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 126的氨基酸 序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 127的氨基酸序列的⑶R3,（η)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的CDR3,（〇)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 137的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQ ID N0:138的氨基酸序列的CDR2,包含SEQ ID N0:139的氨基酸序列的 CDR3，（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:140的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:141 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 142的氨基酸序列的⑶R3,（ο)可变重链，其含有 包含SEQ ID Ν0:173的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID Ν0:174的氨基酸序列的CDR2,和 包含SEQ ID N0:175的氨基酸序列的CDR3,（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:176的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 178的 氨基酸序列的⑶R3,（q)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95的氨基酸序列的互补决定区 (CDR)1，包含SEQIDN0:96的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :97的氨基酸序列的 CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:98的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:99 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 100的氨基酸序列的⑶R3,（r)可变重链，其含有 包含SEQ ID N0:119的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:120的氨基酸序列的⑶R2,和 包含SEQ ID N0:121的氨基酸序列的CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:122的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 124的 氨基酸序列的⑶R3,（s)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQ ID N0:126的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:127的氨基酸序列的⑶R3,以及可 变轻链，其含有包含SEQ ID N0:128的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:129的氨基酸 序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:130的氨基酸序列的⑶R3,（t)可变重链，其含有包含SEQ IDN0:137的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :138的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQID N0:139的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:140的氨基酸序列的 CDR1，包含SEQIDN0:141的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:142的氨基酸序列的 CDR3，（u)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:173的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:174 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 175的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有 包含SEQ ID NO: 176的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和 包含SEQ ID NO: 178的氨基酸序列的⑶R3,因此在试验样品中测定RGMc或其片段的存在、 量或浓度。
124. 权利要求123的方法，其中试验样品中的RGMc或其片段的存在、量或浓度用于判 定或评价受试者是否患有铁相关病症或处于发展该病症的风险中。
125. 权利要求123的方法，其中所述RGMc是膜结合的RGMc或可溶性RGMc。
126. 权利要求123的方法，其中与正常对照中的膜结合的RGMc水平相比的膜结合的 RGMc水平的降低，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。
127. 权利要求123的方法，其中与正常对照中的膜结合的RGMc水平相比的膜结合的 RGMc水平的增加，表明所述受:试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。
128. 权利要求123的方法，其中与正常对照中的可溶性RGMc水平相比的可溶性RGMc 水平的降低，表明所述受:试者患有铁缺乏相关的铁相关病症。
129. 权利要求123的方法，其中与正常对照中的可溶性RGMc水平相比的可溶性RGMc 水平的增加，表明所述受试者患有铁过载相关的铁相关病症。
130. 权利要求124的方法，其中所述铁相关病症选自癌症、急性感染、慢性感染、自身 免疫性疾病、肝病和慢性肾病。
131. 权利要求123的方法，其中所述方法包括以下步骤： (a) 使所述试验样品与至少一种捕获抗体接触，所述抗体结合到RGMc (或其片段）上 的表位，从而形成捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物， (b) 使所述捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物与至少一种检测抗体接触，所述检测 抗体包含可检测标记并结合到所述捕获抗体未结合的RGMc (或其片段）上的表位，以形成 捕获抗体/RGMc (或其片段）/检测抗体复合物，和 (c) 根据由在（b)中形成的捕获抗体/RGMc (或其片段）/检测抗体复合物中的所述 可检测标记产生的信号，在所述试验样品中测定RGMc (或其片段）的存在、量或浓度，因此 在所述试验样品中测定RGMc (或其片段）的存在、量或浓度。
132. 权利要求123的方法，其中所述方法包括以下步骤： (a) 使所述试验样品与至少一种捕获抗体接触，所述抗体结合到RGMc (或其片段）上 的表位，从而形成捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物，并且同时地或序贯地，以任一顺序， 使所述试验样品与可检测标记的RGMc (或其片段）接触，所述可检测标记的RGMc (或其 片段）可与所述试验样品中的任何RGMc (或其片段）竞争结合到至少一种捕获抗体上，其 中所述试验样品中存在的任何RGMc (或其片段）和所述可检测标记的RGMc彼此竞争以分 别形成捕获抗体/RGMc (或其片段）复合物和捕获抗体/可检测标记的RGMc (或其片段） 复合物，和 (b) 根据由在（b)中形成的捕获抗体/可检测标记的RGMc (或其片段）复合物中的 所述可检测标记产生的信号，在所述试验样品中测定RGMc的存在、量或浓度， 其中由在所述捕获抗体/可检测标记的RGMc (或其片段）复合物中的所述可检测标 记产生的信号与所述试验样品中的RGMc的量或浓度成反比，因此在所述试验样品中测定 RGMc的存在、量或浓度。
133. 权利要求123-132中任一项的方法，其中所述方法进一步包括测定所述试验样 品中的铁调素。
134. 用于测定试验样品的RGMc (或其片段）的试剂盒，所述试剂盒包含用于测定所 述试验样品的RGMc (或其片段）的至少一种组分和用于测定所述试验样品的RGMc (或其 片段）的说明书，其中所述至少一种组分包括至少一种组合物，其包含特异性结合到RGMc (或其片段）上的分离的抗体，其中所述抗体包含选自以下的域或区：(a)重链可变域区，其 包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，（b)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列， (c)重链可变域区，其包含SEQ ID N0:51的氨基酸序列，（d)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列，（e)重链可变域区，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，（f)轻链可 变域区，其包含SEQ ID NO: 54的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包含SEQ ID NO: 57的氨 基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列，（g)重链可变域区，其包 含SEQ ID NO:69的氨基酸序列，（h)轻链可变域区，其包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列， (i)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95的氨基酸序列的互补决定区（⑶R)l，包含SEQ ID N0:96的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID N0:97的氨基酸序列的⑶R3,（j)可变轻链，其 含有包含SEQIDN0:98的氨基酸序列的CDR1，包含SEQIDN0 :99的氨基酸序列的CDR2， 和包含SEQIDN0:100的氨基酸序列的CDR3，（k)可变重链，其含有包含SEQIDN0 :119的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 120的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 121的 氨基酸序列的⑶R3,（1)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 122的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 124的氨基酸序列的CDR3,（m)可 变重链，其含有包含SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 126的氨基酸 序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 127的氨基酸序列的⑶R3,（η)可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 128的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 129的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的CDR3,（〇)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 137的氨基酸序列 的CDR1，包含SEQ ID N0:138的氨基酸序列的CDR2,包含SEQ ID N0:139的氨基酸序列的 CDR3，（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:140的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:141 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 142的氨基酸序列的⑶R3,（ο)可变重链，其含有 包含SEQ ID Ν0:173的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID Ν0:174的氨基酸序列的CDR2,和 包含SEQ ID N0:175的氨基酸序列的CDR3,（p)可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:176的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 178的 氨基酸序列的⑶R3,（q)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:95的氨基酸序列的互补决定区 (CDR)1，包含SEQIDN0:96的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0 :97的氨基酸序列的 CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:98的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:99 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 100的氨基酸序列的⑶R3,（r)可变重链，其含有 包含SEQ ID N0:119的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID N0:120的氨基酸序列的⑶R2,和 包含SEQ ID N0:121的氨基酸序列的CDR3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID N0:122的 氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 123的氨基酸序列的CDR2,和包含SEQ ID NO: 124的 氨基酸序列的⑶R3,（s)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 125的氨基酸序列的⑶R1，包含 SEQ ID NO: 126的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 127的氨基酸序列的⑶R3,以及可 变轻链，其含有包含SEQ ID NO :128的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO :129的氨基酸 序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 130的氨基酸序列的⑶R3,（t)可变重链，其含有包含SEQ ID NO: 137的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 138的氨基酸序列的CDR2,包含SEQ ID NO: 139的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有包含SEQ ID NO: 140的氨基酸序列的 CDR1，包含SEQIDN0:141的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQIDN0:142的氨基酸序列的 CDR3，（u)可变重链，其含有包含SEQ ID N0:173的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID N0:174 的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 175的氨基酸序列的⑶R3,以及可变轻链，其含有 包含SEQ ID NO: 176的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 177的氨基酸序列的CDR2,和 包含SEQ ID NO: 178的氨基酸序列的⑶R3,其中所述抗体任选被可检测标记。
135. 权利要求134的试剂盒，其中在所述试验样品中测定的RGMc或其片段用于判定 或评价受试者是否患有铁相关病症或处于发展该病症的风险中。
136. 权利要求135的方法，其中所述RGMc是膜结合的RGMc或可溶性RGMc。
137. 权利要求134的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含用于测定试验样品的铁调 素的至少一种组分和用于测定所述试验样品的铁调素的说明书。
138. 权利要求134或137的试剂盒，其中所述RGMc是膜结合的RGMc、可溶性RGMc、膜 结合的RGMc片段、可溶性RGMc片段、膜结合的RGMc变体、可溶性RGMc变体或上述的任何 组合。
【文档编号】A61K39/395GK104144947SQ201280061615
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2012年12月13日 优先权日:2011年12月14日
【发明者】B.米勒, A.波普, J.M.佩雷兹 申请人:艾伯维德国有限责任两合公司, 艾伯维公司