专利名称：一种协同提高抗足癣作用的大黄与黄柏药对提取物的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种协同提高抗足癣作用的大黄-黄柏药对提取物。
背景技术：
足癖(Tinea pedis)俗称脚气、香港脚，主要是由红色毛癖菌(Trichophytonrubrum)等皮肤浅部致病菌引起的传染性脚部皮肤病，容易反复发作，我国足癣发病率高达45.2%，而74.5%的人却没有得到有效治疗，市场上很多抗真菌药物用来治疗皮肤癣菌的感染，大多都难以根治足癣，而且随着抗真菌药物的广泛应用、新的菌种的出现及患者个体情况的差异，抗真菌药物的耐药问题也越来越严重。近年来，由于抗生素的不合理使用和药物的乱用，导致致病菌耐药性不断增强，临床耐药菌株不断增加。细菌的耐药性是全球关注的热点，中草药降低或抑制细菌的耐药性是防止细菌耐药性产生的措施之一。中草药作为我国的优势国药，其品种多，来源广泛，对人体的毒副作用小，易于代谢，抗菌作用明显，不易产生耐药性，因此其广阔前景凸显出来。本课题组旨在探究大黄-黄柏药对提取物对红色毛癣菌等皮肤浅部致病菌的抑菌活性，为中草药在临床上治疗由红色毛癣菌等皮肤浅部致病菌引起的传染性皮肤病提供科学依据。
发明内容
1、一种协同提高抗足癣作用的大黄-黄柏药对提取物的制备，其特征在于包括以下步骤:(1)称取大黄和黄柏各25.0g,加500-600mL水浸泡3_4h，煎煮30min，用4层絹布过滤，得滤液，滤渣再加400-500mL水煎煮lOmin，用4层絹布过滤，得滤液；(2)合并⑴中两次滤液，浓缩至相当于大黄-黄柏药对重量lg/mL，调pH值到7.4 7.6之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后0 4°C保存，待用。2、大黄-黄柏药对提取物用于制备抗足癣作用的药物制剂。
具体实施例方式本发明所述的一种协同提高抗足癣作用的大黄-黄柏药对提取物包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1:1、一种协同提高抗足癣作用的大黄-黄柏药对提取物的制备，其特征在于包括以下步骤:(1)称取大黄和黄柏各25.0g，加500mL水浸泡3h，煎煮30min，用4层絹布过滤，得滤液，滤渣再加400mL水煎煮lOmin，用4层絹布过滤，得滤液；(2)合并⑴中两次滤液，浓缩至相当于大黄-黄柏药对重量lg/mL，调pH值到7.4 7.6之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后O 4°C保存，待用。
2、大黄-黄柏药对提取物用于制备抗足癣作用的药物制剂。实施例2:1、一种协同提高抗足癣作用的大黄-黄柏药对提取物的制备，其特征在于包括以下步骤:(I)称取大黄和黄柏各25.0g，加600mL水浸泡4h，煎煮30min，用4层絹布过滤，得滤液，滤渣再加500mL水煎煮lOmin，用4层絹布过滤，得滤液；(2)合并⑴中两次滤液，浓缩至相当于大黄-黄柏药对重量lg/mL，调pH值到
7.4 7.6之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后O 4°C保存，待用。2、大黄-黄柏药对提取物用于制备抗足癣作用的药物制剂。药理试验大黄-黄柏药对提取物协同提高抗足癣作用试验I材料及方法1.1供试材料1.1.1供试菌株本实验所使用的三种具有代表性皮肤浅部致病菌均培养自山东大学(威海)微生物实验室，分别是HS (红色毛癣菌T.rubrum)，DC (大肠埃希氏菌E.coli), JH(金黄色葡萄球菌S.aureus)。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别为革兰阳性和革兰阴性细菌，且金黄色葡萄球菌常引起疖、痈和毛囊炎等皮肤感染，大肠杆菌则是最常见的泌尿道感染病原菌；红色毛癣菌是人皮肤癣病最常见的病原菌，因此，选择上述细菌和真菌作为受试菌有较好的代表性。1.1.2 培养基实验菌株所需培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、牛肉膏蛋白胨培养基、沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂(SDA)。(I)SDA:葡萄糖 40.0g、蛋白胨 10.0g、琼脂 15.0g、蒸懼水 IOOOmL ；(2) PDA:马铃薯 200.0g、葡萄糖 20.0g、琼脂 15.0g、蒸馏水 IOOOmL ；(3)牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、蒸馏水 IOOOmL ρΗ7.0 7.2。1.1.3供试中草药本实验选取植物中草药为大黄(DH)-黄柏(HB)，购自威海市颐和堂医药连锁山大店。1.1.4试验仪器超净工作台、真菌培养箱、高压灭菌锅、电子天平、冷藏用冰箱、数码照相机、烘箱、离心机、旋转蒸发仪、电子游标卡尺等。1.2实验方法1.2.1菌悬液的制备细菌菌株经活化后，接种于固体平板于37°C过夜培养，挑取适量菌苔接种于液体培养基，置于振荡培养箱内37°C培养24h，浑浊后平板涂布计数，稀释至lX106cfu/L备用。红色毛癣菌于28°C用PDA活化7d,挑取适量菌苔接种于液体培养基制备菌悬液，振荡15s，浑浊后涂布平板计数并调整至lX106cfu/L。1.2.2大黄-黄柏药对提取物的制备
称取大黄和黄柏各25.0g,加600mL水浸泡4h，煎煮30min，用4层絹布过滤，得滤液，滤洛再加500mL水煎煮lOmin,用4层絹布过滤,得滤液；合并两次滤液,浓缩至相当于大黄-黄柏药对重量lg/mL，调pH值到7.4 7.6之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后O 4 °C保存，待用。1.2.3大黄-黄柏药对提取物对皮肤浅部致病菌抑菌活性试验采用平板扩散法，制备直径为IOcm平板厚度4mm的PDA固体培养基和牛肉膏蛋白胨培养基平板，各菌悬液加100 μ I涂布均匀后放置20min，平板底部十字划线平分为四个区域，以每区域中心为打孔器打孔中 心打孔，打孔器直径为5_另外配制对照组:空白对照组(培养基)、阴性对照组(培养基、菌悬液、无菌水)、阳性对照组(培养基、菌悬液、红霉素)，来观察细菌的生长情况、培养基和大黄-黄柏药对提取物对细菌生长的影响。每种菌做四个平行，于各个孔滴加提取液50 μ L，结束后放置50min。放置完毕后将培养有细菌的平板置于37°C培养箱内培养24h，，将培养有真菌的平板置于28°C培养箱内培养3d，游标卡尺测量抑菌圈直径。抑菌效果的判定参照参考文献，抑菌圈直径> 20mm为极敏，以“***”表示；15-19mm为高敏，以“**” 表示；10_14为中敏，以表示；10以下为低敏，以表示。2结果与分析大黄-黄柏药对提取物对皮肤浅部致病菌抑制作用表1大黄-黄柏药对提取物对皮肤浅部致病菌的抑制活性(η = 4)
权利要求
1.一种协同提高抗足癣作用的大黄-黄柏药对提取物的制备，其特征在于包括以下步骤: (1)称取大黄和黄柏各25.0g,加500-600mL水浸泡3_4h，煎煮30min，用4层絹布过滤，得滤液，滤渣再加400-500mL水煎煮lOmin，用4层絹布过滤，得滤液； (2)合并⑴中两次滤液，浓缩至相当于大黄-黄柏药对重量lg/mL，调pH值到7.4 7.6之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后O 4°C保存，待用。
2.按权利要求1所述方法制备的大黄-黄柏药对提取物的用途，其特征在于用于制备抗足癣作用的药物制剂。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种协同提高抗足癣作用的大黄-黄柏药对提取物。称取大黄和黄柏各25.0g，加500-600mL水浸泡3-4h，煎煮30min，用4层绢布过滤，得滤液，滤渣再加400-500mL水煎煮10min，用4层绢布过滤，得滤液；合并两次滤液，浓缩至相当于大黄-黄柏药对重量1g/mL，调pH值到7.4～7.6之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后0～4℃保存，待用。其特征在于用于制备抗足癣作用的药物制剂。
文档编号A61P31/10GK103083448SQ20131001952
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月4日 优先权日2013年1月4日
发明者张崇禧, 王超, 张成城, 侯欣池, 李永斌, 江长优, 戚婷, 刘朝辉, 张婷婷 申请人:山东大学(威海)