专利名称：一种二萜Libertellenone G及其制备方法与用途的制作方法
技术领域：
本发明属于微生物工程技术领域,具体涉及一种二職(Libertellenone G)及其制备方法与用途。
背景技术：
植物内生菌是指是指那些生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌或细菌(包括放线菌)，被感染的植物(至少暂时)不表现出外在病症，可通过组织学方法或从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内直接扩增出微生物DNA的方法来证明其内生。内生菌由于其独特的生境,造就了其独特的代谢方式,并且其代谢产物常具有新颖的结构和多种生物活性，在农业和医药领域都具有重要的应用前景，逐渐成为国内外研究的热点。阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s Disease，AD)又称早老性痴呆症，是以进行性认知功能障碍为主要特征的神经退行性病变，现已成为继心血管疾病和肿瘤之后严重威胁老年人生命健康的主要疾病之一。目前，美国FDA批准的5种临床治疗AD的药物中4种为乙酰胆碱酯酶抑制剂，因此，通过抑制乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE)降解乙酰胆碱，从而提高乙酰胆碱水平的方法是一种有效的AD治疗途径。因此，从天然产物中寻找有效的乙酰胆碱酯酶抑制药物已成为国内外重要的研究课题。
发明内容
本发明需要解决的问题是:
1.提供一类具有乙酰胆碱酯酶抑制作用的二職(LibertellenoneG)。
2.提供一种发酵生产及提取分离二職(LibertellenoneG)的方法。
3.提供本发明的二職(LibertellenoneG)在作为抑制乙酰胆碱酯酶化合物,制备治疗阿尔茨海默氏病药物中的应用。本发明通过下述技术方案予以实现。
本发明所述二職(Libertellenone G),从植物内生菌液体发酵提取物中分离得到,其结构式为:
权利要求
1.一种红花青藤(llligera rhodantha Hance)种子内生真菌,菌株编号为sp.S12,其特征是在PDA平板上，菌落暗白，平展，菌丝贴基拧结，经鉴定为链霉菌属Phomopsis，现保藏在中国典型培养物保藏中心，地址:武汉珞珈山武汉大学内，保藏编号为CCTCCM2013026，保藏日期为2013年I月17日，从其麦芽培养基液体发酵提取物中分离纯化获得具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的二職Libertellenone G。
2.—种权利要求1所述红花青藤内生真菌发酵液制备的二職Libertellenone G的结构为:
3.根据权利要求2所述的二職LibertellenoneG的制备方法,其特征是由以下步骤构成: 1)将新鲜的从红花青藤(11ligera rhodantha Hance )种子中分离纯化得到的Phomopsis属菌菌丝体块接种到每瓶含有400mL麦芽培养基的IOOOmL锥形瓶中，麦芽培养基成分为生麦芽200g，蔗糖20g，蒸馏水1L，于摇床上在150rpm，28°C条件下培养4天作为种子液，然后将20mL种子液接种于含有400mL的麦芽培养基的IOOOmL锥形瓶中，在150rpm、20-30°C条件下发酵12天； 2)将步骤I所得发酵液经纱布过滤，滤液用乙酸乙酯萃取，真空浓缩干燥得棕色粗浸膏Fl ; 3)将粗浸膏Fl用适量的甲醇溶解，然后把溶液置于_4°C的冰箱过夜，过滤除去析出的蜡状固体，将滤液减压浓缩，得浸膏F2 ； 4)对浸膏F2进行硅胶柱层析，依次用4倍体积的氯仿、氯仿:甲醇=100:1、氯仿:甲醇=100: 2、氯仿:甲醇=100: 4、氯仿:甲醇=100: 8、氯仿:甲醇=100: 16、甲醇进行洗脱，浓缩氯仿:甲醇=100: 4段得到黄棕色浸膏F3; 5)对浸膏F3，用反相柱ODS进行分离，先用20%甲醇，酒精计测量，进行洗脱除去大极性杂质，然后用45%甲醇洗脱，真空浓缩洗脱液得黄色固体F4 ； 6)对浸膏F4进行SephadexLH-20分离，洗脱液为甲醇，共得17瓶，将7-9瓶合并得浸膏F5 ； 7)对浸膏F5,用高效液相色谱法分离得到二職LibertellenoneG。
4.根据权利要求2所述的二萜作为抑制乙酰胆碱酯酶化合物在制备治疗阿尔茨海默氏病药物中的应用。
全文摘要
本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及一种二萜(Libertellenone G)及其制备方法与用途。从红花青藤(IlligerarhodanthaHance)种子内生真菌的发酵液中提取到的二萜(Libertellenone G对乙酰胆碱酯酶有很强的抑制作用，因此Libertellenone G可作为抑制乙酰胆碱酯酶的化合物，在制备新治疗阿尔茨海默氏病药物中得到应用。
文档编号A61P25/28GK103073527SQ20131003964
公开日2013年5月1日 申请日期2013年1月31日 优先权日2013年1月31日
发明者谭仁祥, 卫蔚, 姜荣, 赵国琰 申请人:南京大学