专利名称：一种多肽修饰的流感病毒感染细胞靶向给药系统及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医药技术领域，涉及药物靶向递送系统，具体涉及一种新型多肽修饰的流感病毒感染细胞靶向给药系统及其制备方法和用途。
背景技术：
流感是严重危害人类生命健康的一种急性的病毒性呼吸道传染病，每年冬春季节均有大规模爆发与流行，全世界每年因流感流行可导致300 500万的严重病例，约有25万到50万的患者死亡，尤其是禽流感的爆发和2009年甲型HlNl流感的全球流行，对各国经济造成了巨大损失，给人民生活带来了恐慌。流感病毒具有传播速度快、变异快、危害大的特点，疫苗预防难度大，现有的抗流感药物品种匮乏，且极易产生耐药。新的流感大流行随时都有可能爆发，在这种情况下，研究开发高效低毒的新型抗流感药物就显得尤为重要和紧迫。反义寡核苷酸(Antisenseoligodeoxynucleotide, AS0N)是一段与 mRNA 特异性结合并阻断其基因表达的人工合成的DNA分子。体内外实验证明，ASONs能通过封闭或抑制病毒的关键基因来特异性抑制病毒的复制与增殖，是治疗病毒性传染病的潜在新型药物。作为近年来国内外研究的热点，ASONs具有作用机理新、易于设计、特异性强、效率高等特点，但其又不同于普通小分子药物，因为多聚阴离子大分子，对生物膜的通透性差，生理条件下难以通过带负电 荷的细胞膜，因此表现为生物利用度低、靶组织内聚集浓度低等状况，目前解决该难题的办法主要是开发新型的药物靶向递送系统。针对抗病毒药物，靶向给药系统能将ASONs药物专一高效地运送至被感染细胞中，减少在正常细胞内的摄取，发挥抗病毒效果的同时减少全身毒副作用。目前ASONs的靶向转运研究中多选取各类细胞表面特异性受体的配体作为靶向分子，而针对病毒表面特异性抗原或蛋白的特异性结合配体作为ASONs靶向转运的靶向分子尚未发现相关报道，因此我们提出一种通过病毒颗粒介导的ASONs药物靶向转运新策略，通过化学合成的手段将靶向分子与抗流感ASONs进行连接，借助靶分子与流感病毒表面相应抗原/蛋白的结合，在病毒入胞过程中将ASONs携带进入靶细胞中，从而增加病毒感染细胞的摄取，起到靶向转运的作用。课题组近期研究公开了一种利用噬菌体展示技术筛选出的针对流感病毒表面血凝素蛋白结合肽，该结合肽通常含有7个或12个氨基酸残基，可借助吞饮方式进入流感病毒感染细胞，并且定位于细胞浆内，靶向性明确。因此该血凝素蛋白结合肽可作为抗流感ASONs药物的特异性靶向转运分子。此外，低分子量多肽均可由化学合成得到，稳定性好，临床应用前景广阔。本发明中，血凝素蛋白结合肽通过共价连接的方式与具有抗流感活性的ASONs药物偶联成为缀合物，经过胞内摄取研究、靶向性评价和抗病毒活性研究等，证实了该缀合物可有效、专一地将ASONs药物运送至被感染细胞内的作用位点，提高了靶细胞对药物的摄取，形成有效的病毒感染细胞靶向给药系统。该系统靶向和治疗效率高，制备简便，可应用于流感病毒感染及其相关性疾病的治疗
发明内容
:本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种多肽修饰的、能靶向递送抗流感药物并将其运送到流感病毒感染细胞内的给药系统及其制备方法和用途。为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为:所述多肽修饰的流感病毒感染细胞靶向给药系统包括作为靶向分子的多肽与结合到该多肽上的抗流感病毒药物，二者通过双功能试剂共价连接成缀合物。其中所述的缀合物中的多肽为流感病毒血凝素蛋白结合肽，该结合肽是通过噬菌体展示技术获得，包括H7-3、H7-4、H7-5、H17等，其序列如SEQ ID N0.1_18所示。所述的抗流感病毒药物为反义寡核苷酸类药物，包括rocD5-1、rocD5-2、rocD5-5等，其序列如SEQ ID N0.19-所示。所述的反义寡核苷酸为与多肽进行共价偶联，在其5’端进行了巯基标记；为使其结构更加稳定，对序列进行了不同的化学修饰。
所述的反义寡核苷酸稳定结构的化学修饰包括硫代磷酸酯骨架修饰、核糖2’ -O-甲基修饰、核糖2’ -O-甲氧乙基修饰、核糖2’ -O位与4’ -C氧亚甲基桥连接修饰。所述的双功能试剂结构如⑴、(II)、(III)所示:
权利要求
1.一种多肽修饰的流感病毒感染细胞靶向给药系统，其特征在于，所述系统包括作为靶向分子的多肽与结合到该多肽上的抗流感病毒药物，二者通过双功能试剂共价连接成缀合物。
2.根据权利要求1所述的给药系统，其特征在于，所述的缀合物中的多肽为流感病毒血凝素蛋白结合肽，具有SEQ ID N0.1-18的序列。
3.根据权利要求2所述的给药系统，其特征在于，所述流感病毒血凝素蛋白结合肽是通过噬菌体展示技术获得。
4.根据权利要求1所述的给药系统，其特征在于，所述的缀合物中的抗流感病毒药物为反义寡核苷酸类药物，具有SEQ ID N0.19-25的序列。
5.根据权利要求4所述的给药系统，其特征在于，所述的反义寡核苷酸包含序列5’端巯基标记和稳定结构的化学修饰。
6.根据权利要求5所述的给药系统，其特征在于，所述的反义寡核苷酸稳定结构的化学修饰包括硫代磷酸酯骨架修饰、核糖2’ -O-甲基修饰、核糖2’ -O-甲氧乙基修饰、核糖2’ -O位与4’ -C氧亚甲基桥连接修饰。
7.根据权利要求1所述的给药系统，其特征在于，所述的双功能试剂选自下列结构之
8.一种根据权利要求1至7任一项中所述的给药系统的制备方法，其特征在于，所述系统是将流感病毒血凝素蛋白结合肽与5’端巯基标记的反义寡核苷酸通过作为空间间隔的双功能试剂进行共价连接后制备而得。
9.根据权利要求1至8中所述的多肽修饰的流感病毒感染细胞靶向给药系统在制备治疗流感病毒感染及其相关性疾病药物中的用途。
全文摘要
本发明属于生物医药技术领域，涉及药物靶向递送系统，具体涉及一种新型多肽修饰的流感病毒感染细胞靶向给药系统及其制备方法和用途。本发明针对现有的抗流感病毒感染药物靶向递送系统的不足，使用流感病毒血凝素蛋白结合肽作为靶向探针，与具有抗流感活性的反义寡核苷酸药物通过双功能试剂共价连接，形成靶向给药系统。该系统可以胞吞的方式进入流感病毒感染细胞，提高被感染细胞对药物的摄取。本发明具有靶向到流感病毒表面血凝素蛋白的作用，可有效避免其他正常细胞的摄取，靶向和治疗效率高，制备简便，可应用于流感病毒感染及其相关性疾病的治疗。
文档编号A61K47/48GK103182091SQ20131003952
公开日2013年7月3日 申请日期2013年2月1日 优先权日2013年2月1日
发明者王升启, 丁晓然, 鲁丹丹, 汪崇文, 杨静, 张莉 申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所