专利名称：Sirt1在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种SIRTl新用途，特别是一种SIRTl在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用。
背景技术：
烧伤是与人类共存的创伤，重度烧伤一般指大面积烧伤或深度烧伤，我国将烧伤面积30%以上，三度面积10%以上的烧伤归为重度烧伤，这类烧伤病情复杂，波及全身各个系统，可发生多种并发症危及生命。随着人类现代文明的飞速发展，造成烧(创)伤损伤的因素也变的愈加复杂，现代工业中各种高性能燃料的使用、现代战争及恐怖活动等使重度烧(创)伤的发生率更是有增无减。因此，新形势下重度烧(创)伤的研究依然是重症医学研究的焦点及难点。沉默信息调节因子I (silentinformationregulatorl, SIRT1)是 NAD+依赖的蛋白去乙酰化酶，属于Sirtuin家族，可在哺乳动物中表达主要表达于细胞核，最初定义为NAD依赖的去乙酰化酶家族，可使多种蛋白质的赖氨酸残基发生去乙酰化；是一类进化上高度保守的蛋白质，参与细胞内多种生物学事件的发生，由于SIRTl的作用依赖于NAD+，其作用与机体对氧化和代谢反应有关。研究发现SIRTl在DNA损伤修复、细胞周期控制、抑制细胞凋亡、有机体的能量代谢、线粒体功能保护、抵抗氧化应激和延长细胞寿命方面起着重要作用。因此SIRTl作为不同疾病治疗的靶点，逐渐被人们重视。但，目前尚未见到SIRTl、SIRTl激动剂在治疗重度烧(创)伤救治方面研究、应用的相关报道及文字记载。`
发明内容
本发明的目的是提供一种SIRTl在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用，本发明可降低严重烧伤大鼠的死亡率，显著改善严重烧伤早期大鼠的生存状态，降低多脏器(心脏、肺脏、肾脏等)的组织细胞凋亡，在重度烧(创)伤救治中具有重要作用以及具有广阔的应用前景。本发明涉及的方案是=SIRTl在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用。该应用是以SIRTl为治疗靶点，外源调控SIRTl的表达及活性在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用。所述的外源调控SIRTl的表达及活性外源物为SIRTl的激动剂为白藜芦醇或激活SIRTl的化合物或SIRTl的模拟物。所述的药物为纯化的重组SIRTl蛋白或适用于人体内表达的重组SIRTl表达载体。所述的适用于人体内表达的重组SIRTl表达载体包括原核表达载体系统、真核表达载体系统或病毒表达载体系统。所述的药物的剂型为注射剂或气雾剂。
所述注射剂为皮内注射剂、皮下注射剂、静脉注射剂或肌肉注射剂。本发明的特点:1、首次将SIRTl作为重度烧(创)伤救治的分子祀点,用于重度烧(创)伤的救治。目前国内、外并无在重度烧(创)伤的救治中，以该分子为治疗靶点药物制备和临床应运的专利以及上市产品，因此，该项产品若上市，将成为临床重度烧(创)伤的救治研究的新亮点，很大程度上提高重度烧(创)伤救治水平。2、本发明实验中所采用的SIRTl激动剂可显著降低严重烧伤早期大鼠的生存率。3、本发明实验中所采用的SIRTl激动剂可显著改善严重烧伤大鼠的生存状态。4、本发明实验中所采用的SIRTl激动剂可显著改善严重烧伤大鼠多脏器损伤。5、本发明实验中所采述的SIRTl分子式明确可人工合成，药物结构单一，效果明确，副作用少。6、本发明所公开的重度烧(创)伤救治的分子靶点SIRT1，结构清晰明确，方便其表达载体的构建及模拟物的合成，用于基因工程药物的生产。下面结合具体实施例和附图来说明本发明的实质。应理解，这些实施例使本发明所说的以SIRTl为治疗靶点，活化SIRTl在重度烧(创)伤救治中的用途得以证实，而不用于限制本发明的范围。下述实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
图1为伤后24小时两组 大鼠生存曲线；其中burn为对照组，burn+S为SIRTl激动剂组；图2为伤后60小时两组大鼠生存状态；其中左侧趴着不动的为对照组大鼠,对侧状态好的为实验组大鼠；图3为伤后60小时实验组大鼠状态良好；图4为伤后6小时解刨，对照组膀胱充血严重；图5为伤后6小时解刨，实验组大鼠未见膀胱充血；图6为伤后12小时主要脏器(心脏、肺脏、肾脏)的基因表达水平；图7为激活Sirtl可显著抑制严重烫伤大鼠心脏组织Caspase-3mRNA表达水平；图8为激活Sirtl可显著抑制严重烫伤大鼠肺脏组织Caspase-3mRNA表达水平；图9为激活Sirtl可显著抑制严重烫伤大鼠肾脏组织Caspase-3mRNA表达水平。
具体实施例方式本发明是以SIRTl为治疗靶点，外源调控SIRTl的表达及活性在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用。所述的外源调控SIRTl的表达及活性外源物为SIRTl的激动剂为白藜芦醇或激活SIRTl的化合物或SIRTl的模拟物。实施例实验材料:SIRTl激活剂:本实验选用的SIRTl激动剂为白藜芦醇，可直接从市场购的。本实验中白藜芦醇单购自Sigma公司。
实验所用的实验动物SD大鼠购自第四军医大学实验动物中心，饲养于二级动物房，自由饮水饮食，12小时白昼、12小时黑夜交替饲养环境。重度烧(创)伤模型的建立本实验选用的重度烧伤模型为:大于30%TBSA ΙΙΓ大鼠烫伤模型。制作流程:成年SD大鼠雌雄各半，体重(200-230) g，烫伤前24小时，异氟烷吸入麻醉，10%硫化钠背部及侧腹部脱毛形成30%-40%的烫伤区。烫伤前麻醉并固定于自制烫伤专用模具上，于95°C水中烫伤18s，腹腔注射平衡盐溶液(40ml/kg)抗休克，制备出大于30%TBSAIir烫伤模型，病理切片证实为ΙΙΓ烫伤。对上述SIRTl激动剂在严重烧伤大鼠模型中的运用实验1、观测重度烫伤大鼠早期的死亡状况，存活状态。成年SD大鼠雌雄各半，共100只，体重(200-230)g，烫伤前24小时，异氟烷吸入麻醉，10%硫化钠背部及侧腹部脱毛形成30%-40%的烫伤区。随机分为对照组(单纯烫伤组)，实验组(SIRT1激动剂治疗组)。烫伤前将大鼠麻醉并固定于自制烫伤专用模具上，于95°C水中烫伤18s，实验组烫伤即刻腹腔注射平衡盐溶液(40ml/kg)抗休克同时按40mg/kg体重给予50mg/ml的SIRTl激动剂白藜芦醇溶液，对照组烫伤即刻腹腔注射平衡盐溶液(40ml/kg)抗休克同时给予实验组等量的白藜芦醇溶剂,观测24小时内动物死亡情况，精神状态及是否有血尿发生。死亡情况统计:对照组(单纯烫伤组)在伤后5-10小时出现死亡高峰，24小时死亡率为33.47%，实验组24小时内无动物死亡。见图1，伤后24小时两组大鼠生存曲线；其中burn为对照组，burn+S为SIRTl激动剂组。·生存状态观测:对照组(单纯烫伤组)伤后60小时存活大鼠状态差，精神萎靡；实验组60小时大鼠活动自如、状态良好。见图2,3。2、重度烧伤大鼠肾脏损伤情况成年SD大鼠雌雄各半，共12只，体重(200_230)g，烫伤前24小时，异氟烷吸入麻醉，10%硫化钠背部及侧腹部脱毛形成30%-40%的烫伤区。随机分为对照组(单纯烫伤组)，实验组(SIRT1激动剂治疗组)，每组6只。同前处理构建严重烧伤大鼠模型观测大鼠血尿情况，用于评价肾脏损伤程度，于伤后6小时处死大鼠，汇同I中统计数据统计分析。经观测对照组大鼠血尿的发生率为85%，而实验过程中，实验组大鼠的则未观测到血尿的发生，说明实验组经活化SIRTl治疗，大鼠肾脏损伤较弱而对照组肾脏损伤严重。图4-5为两组大鼠6h解剖时膀胱的状况。图4伤后6小时解刨，对照组膀胱充血；图5伤后6小时解刨，实验组大鼠未见膀胱充血严重；3、SIRTl的表达及主要脏器组织细胞凋亡相关分子Caspase-3的表达水平检测成年SD大鼠雌雄各半，共40只，体重(200-230)g，烫伤前24小时，异氟烷吸入麻醉，10%硫化钠背部及侧腹部脱毛形成30%-40%的烫伤区。随机分为对照组(单纯烫伤组)，实验组(SIRT1激动剂治疗组)，每组20只。烫伤前将大鼠麻醉并固定于自制烫伤专用模具上，于95°C水中烫伤18s，实验组烫伤即刻腹腔注射平衡盐溶液(40ml/kg)抗休克同时按40mg/kg体重给予50mg/ml的SIRTl激活剂白藜芦醇溶液，于伤后12，24小时分批处死大鼠，收集主要脏器(心脏、肺脏、肾脏等)检测SIRTl及脏器损伤凋亡相关分子Caspase-3的基因表达水平。经检测，重度烫伤大鼠即可给予SIRTl激动剂白藜芦醇可显著提高SIRTl的基因表达水平，抑制严重烧伤大鼠脏器损伤凋亡相关分子Caspase-3的基因表达水平，拮抗多脏器损伤。SIRTl的表达与拮抗脏器损伤程度成正相关，见图6-9。SIRTl的表达水平检测:图6为伤后12小时主要脏器(心脏、肺脏、肾脏)的基因表达水平。伤后12，24小时主要脏器组织细胞凋亡相关分子Caspase-3的表达水平:图7为激活Sirtl可显著抑制严重烫伤大鼠心脏组织Caspase-3mRNA表达水平；图8为激活Sirtl可显著抑制严重烫伤大鼠肺脏组织Caspase-3mRNA表达水平；图9为激活Sirtl可显著抑制严重烫伤大鼠肾脏组织Caspase-3mRNA表达水平。实验结果综上所述SIRTl为重度烧(创)伤救治的理想分子靶点。通过使用SIRTl的激动剂活化SIRTl表达，可降低严重烧伤大鼠的死亡率，显著改善严重烧伤早期大鼠的生存状态，降低多脏器(心脏、肺脏、肾脏等)的组织细胞凋亡。
所述的外源调控SIRTl表达及活性物质可以单独使用或与其他药用载体混合，配制成在临床上使用的注射剂、气雾剂；方便使用。所述注射剂为皮内注射剂、皮下注射剂、静脉注射剂或肌肉注射剂。这些剂型的配制方法都采用本医药领域公知或常用手段，这里不
叙述。SIRTl在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用，其中，药物为纯化的重组SIRTl蛋白或适用于人体内表达的重组SIRTl表达载体(包括原核表达载体系统、真核表达载体系统或病毒表达载体系统)。本实施例没有详细叙述的部分和英文缩写属本行业的公知常识，在网上可以搜索至IJ，这里不一一叙述。
权利要求
1.SIRTl在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的SIRTl在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用，其特征是:该应用是以SIRTl为治疗靶点，外源调控SIRTl的表达及活性在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的SIRTl在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用，其特征是:所述的外源调控SIRTl的表达及活性外源物为SIRTl的激动剂为白藜芦醇或激活SIRTl的化合物或SIRTl的模拟物。
4.根据权利要求1-3任一项所述的SIRTl在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用，其特征是:所述的药物的剂型为注射剂或气雾剂。
5.根据权利要求4所述的SIRTl在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用，其特征是:所述注射剂为皮内注射剂、·皮下注射剂、静脉注射剂或肌肉注射剂。
全文摘要
本发明公开了SIRT1的用途，特别是SIRT1在制备治疗重度烧伤或创伤药物中的应用，本发明的新用途可降低严重烧伤大鼠的死亡率，显著改善严重烧伤早期大鼠的生存状态，降低多脏器(心脏、肺脏、肾脏等)的组织细胞凋亡，在重度烧(创)伤救治中具有重要作用以及具有广阔的应用前景。
文档编号A61K48/00GK103239716SQ20131006171
公开日2013年8月14日 申请日期2013年2月27日 优先权日2013年2月27日
发明者白晓智, 胡大海, 汤朝武, 石继红, 朱雄翔, 韩军涛, 董茂龙 申请人:中国人民解放军第四军医大学