脂酰辅酶a氧化酶作为糖尿病的治疗靶点的应用的制作方法

脂酰辅酶a氧化酶作为糖尿病的治疗靶点的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了脂酰辅酶A氧化酶作为糖尿病的治疗靶点的应用，揭示了一种脂酰辅酶A氧化酶抑制剂，其通过抑制糖尿病患者体内脂酰辅酶A氧化酶活性，进而显著降低靶器官或组织内氧化应激水平，改善体内胰岛素抵抗，发挥治疗糖尿病的功效。
【专利说明】脂酰辅酶A氧化酶作为糖尿病的治疗靶点的应用

【技术领域】
[0001]本发明属于生物化学和药学领域，具体而言，本发明涉及通过抑制体内脂酰辅酶A氧化酶活性治疗糖尿病的方法，脂酰辅酶A氧化酶抑制剂或脂酰辅酶A氧化酶抑制剂前体在制备治疗糖尿病的药物中的用途。

【背景技术】
[0002]糖尿病是一种由于遗传和环境因素相互作用，胰岛素相对或绝对缺乏以及靶组织胰岛素抵抗引起的碳水化合物、脂肪及蛋白质代谢紊乱的综合征，是一种持续高血糖为特征的，慢性、全身性代谢疾病。糖尿病发病后若未得到有效治疗，可出现广泛的微血管及大血管病变，出现神经、泌尿、循环等多系统的病理改变。糖尿病主要有2种类型:(I) I型糖尿病，胰岛β细胞破坏，通常导致胰岛素绝对缺乏；(2) 2型糖尿病，又称为非胰岛素依赖型糖尿病，表现为全身胰岛素抵抗伴胰岛素相对缺乏，或胰岛素分泌不足伴胰岛素抵抗。中国糖尿病患者中I型糖尿病约占糖尿病的5.6%，2型糖尿病约占糖尿病的93.7%，其他类型糖尿病仅占0.7%。
[0003]2012年全世界的糖尿病患者达3.5亿人，其潜在的最大增长人群在亚洲，约占总增长数的65%以上。中国糖尿病患者近10年增长了 2倍，患病总人数接近I亿人，居全球第一位。
[0004]目前针对I型糖尿病治疗以胰岛素治疗为主，但I型糖尿病患者常伴有胰岛素抵抗，经胰岛素治疗后血糖仍控制不稳定。针对2型糖尿病治疗，在控制体重和运动均未能有效控制血糖时，常以口服降糖药治疗，目前有两大类常用口服降糖药物，第一类为胰岛素分泌促进剂，如磺酰脲类药物等，这类药物主要副作用在于容易引起低血糖，以及对肝肾毒性较大；第二类为胰岛素增敏剂，主要有噻唑烷二酮类(TZDs)药物如吡咯列酮等和双胍类药物如二甲双胍等。噻唑烷二酮类药物早期使用较多，但容易引起肥胖，心衰以及增加患膀胱癌的风险等明显副作用，近年来使用越来越少；双胍类药物使用过程中容易出现恶心、腹泻等不良副作用。
[0005]鉴于上述糖尿病治疗药物的局限性及毒副作用，发现新的糖尿病的治疗靶点，以及开发新型更理想的糖尿病治疗药物具有重要意义。
[0006]氧化应激(Oxidative stress)是机体在受到各种有害刺激时,体内活性氧自由基(Reactive Oxygen Species, R0S)和活性氮自由基(Reactive Nitrogen Species, RNS)产生过多，机体氧化程度超过其抗氧化能力，引起组织的损伤。ROS包括超氧阴离子(02‘_)，羟自由基Γ0Η)和过氧化氢(H2O2)15氧化应激是机体胰岛素抵抗和糖尿病的发病基础。胰岛素作用的靶组织如肌肉、肝脏和脂肪细胞中产生过量的ROS导致机体氧化应激水平上升，激活一系列蛋白激酶如 protein kinase C(PKC θ / ε ), ρ38~ΜΑΡΚ, c-jun N terminalkinase (JNK), S6kinasel (S6K1)等信号蛋白，这些信号蛋白将引起胰岛素受体底物IRS-1憐酸化失活(Boura-Halfon S.and Zick Y., Am.J.Phys1l.Endocrinol.Metab., 2009，296，E581-E591)，继而引起下游信号蛋白如磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(PKB/Akt)等活性下降，导致肌肉细胞胞浆内葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)向细胞膜转位减少，肝脏肝糖原合成酶(glycogen synthase)活性显著降低,机体产生胰岛素抵抗,引起糖尿病的发生及发展(Styktal J.et.al., Free Radic.B1l.Med.，2012，52，46-58 ;Rains JL and JainSK.，Free Radic.B1l.Med.，2011，50，567-575 ；Gardner CD.et.al.，Exp.B1l.Med.2003，228,836-842)。
[0007]因此，减少胰岛素作用靶组织如肌肉、肝脏内ROS含量，能有效改善胰岛素抵抗，提高肌肉和肝脏对葡萄糖的摄取和利用，被认为是治疗糖尿病的有效手段(HoustisN.et.al.，Nature，2006，440，944-948 ；Henriksen EJ.，Free Radic.B1l.Med.，2011，51，993-999 ；Evans JL et.al.，Ant1xid.Redox Signaling，2005，7，1040-1052) 0
[0008]脂肪酸β氧化主要在线粒体和过氧化物酶体中完成，其中碳链长度小于20的脂肪酸主要在线粒体中完成氧化供能，而碳链长度大于20的长链和极长链脂肪酸则在过氧化物酶体中代谢。游离脂肪酸必须活化成为脂酰辅酶A(acyl-CoA)，才能成为线粒体和过氧化物酶体β氧化代谢酶的底物，完成β氧化过程。
[0009]脂酰辅酶A氧化酶(acyl-CoA oxidase, Α0Χ, ECl.3.3.6),是过氧化物酶体脂肪酸β氧化过程中催化第一步反应的酶，也是过氧化物酶体脂肪酸β_氧化过程的限速酶，分子量约72kDa,每分子AOX含有一分子黄素腺嘌呤二核苷酸(Flavin adeninedinucleotide, FAD)。AOX催化脂酰辅酶A碳链2_3位脱氢，形成2-烯脂酰辅酶A(2-enoyl_CoA),脱下的氢原子直接与分子氧结合，形成H2O2 (Reddy JK.and HashimotoT., Annu.Rev.Nutr.,2001,21,193-230)。
[0010]目前没有关于AOX抑制剂作为糖尿病治疗药物的任何报道。


【发明内容】

[0011]本发明的目的在于提供脂酰辅酶A氧化酶作为糖尿病的治疗靶点的用途，以及据此开发的糖尿病治疗药物。
[0012]在本发明的第一方面，提供脂酰辅酶A氧化酶抑制剂的用途，用于制备预防、改善或治疗糖尿病的药物组合物。所述脂酰辅酶A氧化酶的国际酶学分类编号为ECl.3.3.6。
[0013]在一个优选例中，所述脂酰辅酶A氧化酶抑制剂通过抑制脂酰辅酶A氧化酶降低靶器官或组织内氧化应激水平，减少胰岛素作用靶组织内氧化自由基(ROS)含量，改善胰岛素抵抗，从而预防、改善或治疗糖尿病。
[0014]在另一优选例中，所述的糖尿病包括:1型糖尿病或2型糖尿病。
[0015]在另一优选例中，所述I型糖尿病特征为体内胰岛素分泌绝对缺乏伴胰岛素抵抗，给予胰岛素治疗后不能有效控制血糖；所述2型糖尿病特征为胰岛素抵抗伴胰岛素相对缺乏，或胰岛素分泌不足伴胰岛素抵抗。
[0016]在另一优选例中，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂为抑制脂酰辅酶A氧化酶活性或表达的物质。
[0017]在另一优选例中，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂包括(但不限于):小分子有机物，小分子无机物，抗脂酰辅酶A氧化酶抗体，能与脂酰辅酶A氧化酶特异性结合并抑制其活性的核酸片段和多肽。
[0018]在另一优选例中，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂还包括抑制剂前体。
[0019]在另一优选例中，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂或抑制剂前体包括(但不限于):10, 12-二十五碳二炔酸(Pentacosadiynoic acid ;CAS 编码:66990-32_7，LH-919)或
10,12- 二十五碳二块酸辅酶 A (10，12-Pentacosadiynoyl-CoA, LH-919-CoA)。
[0020]在另一优选例中，所述的药物组合物还用于:
[0021]抑制患者体内脂酰辅酶A氧化酶活性；
[0022]改善胰岛素抵抗；
[0023]降低靶器官或组织内氧化应激水平；或
[0024]减少胰岛素作用靶组织内氧化自由基(ROS)含量。
[0025]在本发明的另一方面，提供一种用于预防、改善或治疗糖尿病的药物组合物，所述药物组合物包括:脂酰辅酶A氧化酶抑制剂(较佳地，为治疗有效量的抑制剂)；以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0026]在一个优选例中，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂为抑制脂酰辅酶A氧化酶活性或表达的物质。
[0027]在另一优选例中，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂包括(但不限于):抗脂酰辅酶A氧化酶抗体，能与脂酰辅酶A氧化酶特异性结合并抑制其活性的核酸片段和多肽，小分子有机物，小分子无机物。
[0028]在另一优选例中,所述的药物组合物还包括:药物、饮食补充剂、保健品组合物。
[0029]在另一优选例中，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂还包括抑制剂前体；较佳地包括(但不限于):10，12-二十五碳二炔酸(LH-919)或10，12-二十五碳二炔酰辅酶A(LH-919-CoA)。
[0030]在本发明的另一方面，提供一种制备预防、改善或治疗糖尿病的药物组合物的方法，所述方法包括:将脂酰辅酶A氧化酶抑制剂与药学上可接受的载体或赋形剂混合，获得所述的药物组合物。
[0031]在本发明的另一方面，提供一种预防、改善或治疗糖尿病的方法，所述方法包括:抑制需要预防、改善或治疗的患者体内的脂酰辅酶A氧化酶活性或表达。
[0032]在一个优选例中，所述的抑制脂酰辅酶A氧化酶活性或表达的方法是:给需要预防、改善或治疗的患者施用有效量的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂或脂酰辅酶A氧化酶抑制剂前体。
[0033]在另一优选例中，所述脂酰辅酶A氧化酶抑制剂作用的靶器官或组织为哺乳动物或人体内表达脂酰辅酶A氧化酶的器官组织，包括肝脏组织、肌肉组织、脂肪组织、胰岛β细胞和肾脏组织等。
[0034]在另一优选例中，所述脂酰辅酶A氧化酶抑制剂是LH-919-CoA或其前体LH-919。较佳地选择LH-919实施，其施用剂量为0.1-1000 μ g/kg/d ;较佳地，施用剂量为5-200 μ g/kg/d。
[0035]本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

【专利附图】

【附图说明】
[0036]图1.LH-919-CoA抑制纯化的AOX活性分析。AOX溶于20mM PBS缓冲液中(pH7.4)，浓度 8OnM,向酶溶液中分别加入 80nM( ▼ )、240ηΜ( Δ )、480nM( ■ )、960nM( □)LH-919-CoA,以及800nM(〇)LH-919游离酸，对照组加相同体积蒸馏水(.)，于25°C下分别孵育不同时间后，测定AOX残余酶活性。
[0037]图2.LH-919-CoA抑制AOX动力学参数测定。
[0038]图3.LH-919-CoA体外抑制大鼠肝脏过氧化物酶体AOX活性分析。
[0039]图4.不同浓度LH-919-CoA体外抑制大鼠肝脏过氧化物酶体AOX活性分析。
[0040]图5.AOX抑制剂前体LH-919体内抑制C57BL小鼠肝脏AOX活性分析。
[0041]图6.AOX抑制剂前体LH-919体内抑制Wistar大鼠肝脏AOX活性分析。
[0042]图7A.AOX抑制剂前体治疗对四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠口服糖耐受(OGTT)的影响。
[0043]图7B.AOX抑制剂前体治疗后四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠口服糖耐受血糖下线面积(AUC)比较。
[0044]图8.AOX抑制剂前体治疗对四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠血清甘油三酯的影响。
[0045]图9.AOX抑制剂前体治疗对四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠血清游离脂肪酸的影响。
[0046]图10.AOX抑制剂前体治疗对四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠肝脏AOX活性的影响。
[0047]图11.AOX抑制剂前体治疗对四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠血清MDA的影响。
[0048]图12.AOX抑制剂前体治疗对四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠肝脏H2O2含量的影响。
[0049]图13.AOX抑制剂前体治疗对四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠肝脏MDA的影响。
[0050]图14A.AOX抑制剂前体治疗对ob/ob小鼠口服糖耐受(OGTT)的影响。
[0051]图14B.AOX抑制剂前体治疗对ob/ob小鼠口服糖耐受血糖下线面积(AUC)影响。
[0052]图15.AOX抑制剂前体治疗对ob/ob小鼠血清胰岛素的影响。
[0053]图16.AOX抑制剂前体治疗对ob/ob小鼠血清甘油三酯的影响。
[0054]图17.AOX抑制剂前体治疗对ob/ob小鼠血清游离脂肪酸的影响。
[0055]图18.AOX抑制剂前体治疗对ob/ob小鼠肝脏AOX活性的影响。
[0056]图19.AOX抑制剂前体治疗对ob/ob小鼠肝脏H2O2含量的影响。
[0057]图20.AOX抑制剂前体治疗对ob/ob小鼠肝脏MDA的影响。
[0058]图21.AOX抑制剂前体治疗对db/db小鼠血清胰岛素的影响。
[0059]图22.AOX抑制剂前体治疗对db/db小鼠血清甘油三酯的影响。
[0060]图23.AOX抑制剂前体治疗对db/db小鼠血清游离脂肪酸的影响。
[0061 ]图24.AOX抑制剂前体治疗对db/db小鼠肝脏AOX活性的影响。
[0062]图25.AOX抑制剂前体治疗对db/db小鼠肝脏MDA的影响。

【具体实施方式】
[0063]本发明首次揭示脂酰辅酶A氧化酶抑制剂(或抑制剂前体)在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。具体而言，本发明中揭示了通过给予脂酰辅酶A氧化酶抑制剂，抑制糖尿病患者体内脂酰辅酶A氧化酶活性，进而显著降低靶器官或组织内氧化应激水平，改善体内胰岛素抵抗，治疗糖尿病。
[0064]如本文所用，所述的LH-919指代10，12- 二十五碳二炔酸(10，12-Pentacosadiynoic acid)，其 CAS 编码:66990-32-7。LH-919 为 LH-919-CoA 的前体，LH-919在体内能够转化为LH-919-CoA。
[0065]如本文所用，所述的LH-919-CoA指代10，12- 二十五碳二炔酰辅酶A(10， 12-Pentacosadiynoyl-CoA)。
[0066]在本发明的具体实施方案中，以肝脏为例，作为AOX抑制剂作用的靶器官，测试AOX抑制剂在体外对肝脏AOX的抑制作用，以及AOX抑制剂或AOX抑制剂前体(precursor)在体内对肝脏AOX的抑制作用。需要特别指出的是，AOX抑制剂或AOX抑制剂前体在体内作用的靶器官或组织不限于肝脏，包括哺乳动物或人体内一切表达AOX蛋白的器官，例如肌肉组织、脂肪组织、胰岛β细胞、肾脏组织等，因为体内这些不同器官表达的AOX蛋白为同一基因转录产物，氨基酸序列一致，且具有相同的生理活性。
[0067]具体而言，本发明具体实施例中包括以下3个方面内容:
[0068]1.AOX抑制剂的制备及体外抑制作用
[0069]本发明人制备了 LH-919-CoA。以LH-919酸为原料，制备了高纯度LH-919-CoA，测试其对AOX的抑制作用。由游离脂肪酸制备脂酰辅酶A的合成方法参照文献实施(Li D.et.al.，J.Am.Chem.Soc.，2001,121,9034-9042)。
[0070]本发明人首次发现，LH-919-CoA在体外能显著抑制肝脏AOX活性。首先采用重组表达并高度纯化的大鼠肝AOX作为靶蛋白，测定LH-919-CoA对AOX的抑制效果，结果LH-919-CoA能迅速抑制AOX活性，且这种抑制作用是不可逆的。游离LH-919酸对AOX没有抑制作用。
[0071]采用大鼠肝脏完整过氧化物酶体作为测定对象，测试LH-919-CoA在体外对过氧化物酶体中AOX抑制作用，结果LH-919-CoA能迅速且显著地抑制大鼠肝脏过氧化物酶体AOX活性。
[0072]2.AOX抑制剂前体体内抑制AOX活性
[0073]LH-919-CoA是LH-919在体内转化物。本发明一实施例中，将一定剂量LH-919给予Wistar大鼠灌胃，经完全吸收后处死，迅速解剖大鼠，摘取肝脏，分离肝脏过氧化物酶体，通过对大鼠肝脏过氧化物酶体内含物分析，检测到过氧化物酶体中存在LH-919-CoA。因此LH-919在体内吸收后，在肝脏转化为LH-919-CoA。
[0074]事实上，游离脂肪酸在细胞内活化为脂酰辅酶A的机制已经非常清楚，以过氧化物酶体为例，在过氧化物酶体膜上存在长链/极长链脂酰辅酶A合成酶(acyl-CoAsynthetase),将游离脂肪酸(NEFA)活化为脂酰辅酶A (acyl_CoA),后进入过氧化物酶体，作为催化底物进入AOX蛋白活性中心(Reddy JK.and Hashimoto T., Annu.Rev.Nutr.,2001,21,193-230)。
[0075]本发明一实施例中，将LH-919给予C57BL小鼠灌胃，于灌胃3h后处死，迅速解剖小鼠，摘取肝脏，分离过氧化物酶体，测定AOX酶活性，结果与对照组相比，灌药组C57BL小鼠肝脏AOX活性显著降低，且抑制作用强度与灌药剂量成正比关系。
[0076]本发明另一实施例中，将LH-919给予Wistar大鼠灌胃，于灌胃3h后处死，迅速解剖大鼠，摘取肝脏，分离过氧化物酶体，测定AOX活性，结果与对照组相比，灌药组Wistar大鼠肝脏AOX活性显著降低，且抑制作用强度与灌药剂量成正比关系。
[0077]通过体外抑制实验得知，游离LH-919对AOX无抑制作用。LH-919在体内吸收后，转化为LH-919-CoA抑制AOX活性。
[0078]因此，LH-919是AOX抑制剂LH-919-CoA的前体，LH-919在体内代谢产物LH-919-CoA能快速且不可逆地抑制AOX活性。
[0079]3.AOX抑制剂或AOX抑制剂前体在体内抑制AOX活性，治疗糖尿病
[0080]在糖尿病状态下，由于机体胰岛素抵抗引起葡萄糖利用障碍，因此组织更多地利用体内脂肪氧化提供能量，血液中游离脂肪酸(non-esterified fatty acid,NEFA)含量显著升高，进入肝脏、肌肉、胰岛β细胞等组织的NEFA也随之增多，导致这些组织过氧化物酶体内参与脂肪酸β_氧化的代谢酶活性及脂肪酸β_氧化水平均代偿性显著升高(Horie
S.et.al.，J.B1chem.，1981，90，1691-1696 ；Asayama K.et al.，Mol.Cell.B1chem.，1999，194，227-234)。
[0081]本发明实施例中，糖尿病大/小鼠肝脏AOX活性均较正常组显著升高。
[0082]本发明人首次发现，在糖尿病产生后，通过抑制体内靶器官或组织AOX活性，可以减少体内靶器官或组织内H2O2的生成，降低这些器官或组织内氧化应激水平，显著改善体内胰岛素抵抗，获得意想不到的治疗糖尿病的效果。
[0083]AOX抑制剂前体在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途，所述AOX抑制剂前体在哺乳动物或人体内转化为AOX抑制剂，并抑制AOX活性。例如本发明实施例中，LH-919是AOX抑制剂前体，LH-919经体内吸收后，在肝脏转化为LH-919-CoA，能快速显著抑制AOX活性。
[0084]应当理解，AOX抑制剂和AOX抑制剂前体在哺乳动物或人体内的生理活性是相同的，即抑制靶器官或组织AOX活性。
[0085]AOX抑制剂或AOX抑制剂前体可以治疗I型糖尿病和2型糖尿病。
[0086]其中所述I型糖尿病特征为体内胰岛素分泌绝对缺乏伴胰岛素抵抗，给予胰岛素治疗后不能有效控制血糖；所述2型糖尿病特征为胰岛素抵抗伴胰岛素相对缺乏，或胰岛素分泌不足伴胰岛素抵抗。
[0087]具体而言，本发明实施方案中，针对一种I型糖尿病动物模型和二种2型糖尿病动物模型进行了药效试验。
[0088]本发明实施方案以一种AOX抑制剂前体LH-919为例，进行动物药效试验。LH-919在体内转化物LH-919-CoA是AOX抑制剂，在体内能快速显著地抑制AOX活性。
[0089]药效试验中，LH-919治疗糖尿病的有效剂量为0.1_1000 μ g/kg/d，较佳剂量为10-200 μ g/kg/d。AOX抑制剂前体LH-919治疗糖尿病具有剂量依赖性。
[0090]本发明一实施方案，首先针对I型糖尿病，采用四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠模型，由于四氧嘧啶选择性破坏胰岛β细胞，引起胰岛素绝对缺乏，血糖急剧升高，因此给予四氧嘧啶糖尿病大鼠皮下注射低剂量长效胰岛素，防止由于血糖过高引起的酮症酸中毒。成模后，糖尿病大鼠空腹血糖显著升高且伴有胰岛素抵抗，血清甘油三酯和游离脂肪酸显著升高，肝脏AOX活性和体内氧化应激水平均显著升高。
[0091]给予不同剂量AOX抑制剂前体治疗后，治疗组血糖较对照组显著降低(ρ〈0.01)，口服糖耐受(OGTT)能力显著增强，血清甘油三酯和游离脂肪酸(NEFA)含量显著降低(ρ〈0.01)。经AOX抑制剂前体治疗后，糖尿病大鼠肝脏AOX活性显著降低(ρ〈0.01)，体内氧化应激水平随之显著降低，表现在血清丙二醛(malondialdeyde，MDA)含量显著降低(ρ〈0.01)，肝脏H2O2和MDA含量显著降低(ρ〈0.01)。
[0092]因此，对于I型糖尿病伴胰岛素抵抗动物模型，给予胰岛素治疗后，因体内胰岛素抵抗，不能有效控制血糖。经AOX抑制剂或AOX抑制剂前体治疗后，通过抑制体内AOX活性，能显著减轻体内氧化应激水平，改善胰岛素抵抗，降低血糖，提高机体糖耐受能力，从而治疗I型糖尿病。
[0093]本发明另2个实施方案，针对2型糖尿病，选用ob/ob小鼠、db/db小鼠两种动物模型，这2种动物模型均为自发性2型糖尿病动物模型，具有胰岛素抵抗、高血糖、高胰岛素血和高血脂等特征。同时肝脏AOX活性也显著升高，体内氧化应激水平较正常组显著升高。
[0094]分别给这两种2型糖尿病动物以AOX抑制剂前体治疗后，治疗组血糖和血清胰岛素水平较对照组显著降低(P〈0.01)，胰岛素抵抗指数HOMA-1R显著下降，口服糖耐受(OGTT)显著增强。血清甘油三酯和游离脂肪酸(NEFA)含量也显著降低(p〈0.01)。经AOX抑制剂前体治疗后，ob/ob小鼠和db/db小鼠肝脏AOX酶活性显著降低(p〈0.01)，从而体内氧化应激水平显著降低，表现在肝脏H2O2含量和MDA含量均显著降低(p〈0.01)。
[0095]因此，对于2型糖尿病动物模型，给予AOX抑制剂或AOX抑制剂前体治疗，抑制体内AOX活性，能显著减轻体内氧化应激水平，降低血糖，提高机体糖耐受能力，从而治疗2型糖尿病。
[0096]基于本发明人的上述新发现，本发明提供了一种AOX的抑制剂的用途，用于制备预防、改善或治疗糖尿病的药物。
[0097]如本文所用，所述的AOX抑制剂包括了下调剂、阻滞剂、拮抗剂、阻断剂等。
[0098]所述的AOX抑制剂是指任何可降低AOX蛋白的活性、降低AOX基因或蛋白的稳定性、下调AOX蛋白的表达、减少AOX蛋白有效作用时间、或抑制AOX基因的转录和翻译的物质，这些物质均可用于本发明，作为对于下调AOX有用的物质，从而可用于预防或治疗糖尿病。例如，所述的抑制剂包括:小分子有机物、小分子无机物、小分子化合物、特异性与AOX结合的抗体或配体、能与AOX特异性结合并抑制其活性的核酸片段和多肽等，特异性干扰AOX基因表达的小干扰RNA分子或反义核苷酸等。
[0099]作为本发明的优选方式，所述的AOX抑制剂是化合物LH-919-CoA或其前体LH-919。本发明还包括上述化合物的异构体、外消旋体、药学上可接受的盐、水合物。所述的“药学上可接受的盐”是指所述化合物与无机酸、有机酸、碱金属或碱土金属等反应生成的盐。化合物具有一个或多个不对称中心。所以，这些化合物可以作为外消旋的混合物、单独的对映异构体、单独的非对映异构体、非对映异构体混合物、顺式或反式异构体存在。所述的“前体”指当用适当的方法服用后，该化合物的前体在病人体内进行代谢或化学反应而转变成该化合物，或由该化合物所组成的盐或溶液。
[0100]作为本发明的另一种可选方式，所述的AOX抑制剂可以是一种特异性与AOX结合的抗体。所述的抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。可用AOX蛋白免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等来生产多克隆抗体；多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。与之相似的，表达AOX或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。所述的抗体也可以是单克隆抗体，此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备(见Kohler等人，Nature256 ；495,1975 ；Kohler 等人，Eur.J.1mmunol.6:511,1976 ；Kohler 等人，Eur.J.1mmunol.6:292,1976 ;Hammerling 等人，In Monoclonal Antibodies and T CellHybridomas, Elsevier, N.Y., 1981)。[0101 ] 作为本发明的另一种可选方式，所述的AOX抑制剂可以是一种AOX特异性的小干扰 RNA 分子(siRNA)。如本文所用，所述的“小干扰 RNA (small interfering RNA, siRNA) ”是指一种短片段双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰(RNA interference)过程。小干扰RNA可以制备成双链核酸的形式，它含有一个正义链和一个反义链，这两条链仅在杂交的条件下形成双链。一个双链RNA复合物可以由相互分离的正义链和反义链来制备。因此，举例来讲，互补的正义链和反义链是化学合成的，其后可通过退火杂交，产生合成的双链RNA复合物。
[0102]本发明还提供了一种药物组合物，它含有有效量的所述AOX抑制剂或AOX抑制剂前体，以及药学上可接受的载体。本发明的药物组合物可用于通过抑制AOX活性，改善机体胰岛素抵抗，治疗糖尿病。
[0103]如本文所用，“药学上可接受的”的成分是适用于人和哺乳动物而无不良副作用(如毒性、刺激和变态反应)的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。
[0104]如本文所用，术语“药物组合物”包括(但不限于):药物、饮食补充剂、保健品组合物，只要它们含有本发明的AOX抑制剂或AOX抑制剂前体，作为预防、改善或治疗哺乳动物和人糖尿病的活性成分。
[0105]本发明中，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。
[0106]本发明的药物组合物中药学上可接受的载体，包括(但并不限于):橄榄油、盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油及其组合。通常药物制剂应与给药方式相匹配。所述的药物组合物宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量。
[0107]本发明所述的药物组合物的剂型可以是多种多样的，只要是能够使活性成分有效地到达哺乳动物或人体内的剂型都是可以的。比如可选自:片剂、胶囊、粉末、颗粒、糖浆、溶液、悬浮液、或气雾剂。
[0108]在需要的情况下，本发明的药物组合物还可以与其它一种或多种对于糖尿病或代谢综合征有效的物质联合应用。例如，所述的组合物中还可含有:(C)选自以下的一种或多种的药物:其它种类的抗糖尿病药物、降脂药物、减肥药物、抗高血压药物、或抗凝血药物。当两种或两种以上的药物联合给药时，一般具有优于单独给药的效果。例如，其它种类的抗糖尿病药物选自:双胍类、磺酰脲类、格列奈类降糖药物，α-葡萄糖苷酶抑制剂、胰岛素增敏剂(如噻唑烷二酮类药物)、aP2抑制剂、DPPIV抑制剂、SGLT2抑制剂、胰岛素、胰高血糖样肽-1 (GLP-1)、或它们的类似物。
[0109]应当理解，本发明不限于这里描述的具体方法，包括采用的试验方案，分析测试方法和试剂等，这些都是可以变化的。
[0110]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社，2002中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0111]实施例1、AOX抑制剂的制备及体外抑制实验
[0112](I)AOX 抑制剂 LH-919-CoA 的制备
[0113]LH-919-CoA 的制备方法参照文献进行(Li D.et.al., J.Am.Chem.Soc.,2001,121,9034-9042)。具体操作:LH-91920mg (Sigma, St.Louis, MO)，加入 5mL 无水四氢呋喃(tetrahydrofuran, THF) (Acros, Geel, Belgium)中，在氮气保护下向溶液中添加 0.1mmol三乙胺(triethylamine) (Sigma, St.Louis, MO),混合搅拌10分钟后,在0°C下向溶液中逐滴加入 0.1mmol 氯甲酸异丁酯(isobutyl chloroformate) (Acros,Geel,Belgium),室温揽拌 Ih0 后将 50mg 辅酶 A 钠盐(Coenzyme A) (USB, Cleveland, OH)溶于蒸懼水中，加 lmol/LNaOH调pH至8.0，在氮气保护下滴加到反应液中，继续搅拌20分钟后，缓慢滴加IM盐酸，将溶液PH调至5.5?6.0。在负压下使有机溶剂挥发掉，剩下的水溶液用乙醚萃取两次去除残留的有机溶剂，收集下层水相，经离心超滤管(Millipore，Billerica，MA)过滤后通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化LH-919-CoA。RP-HPLC分离条件:色谱柱hypersilC18柱(250.ιΧ4.6πιπι，5μπι)，采用梯度洗脱，流动相A为25mM磷酸钾缓冲液(ρΗ5.9)，流动相B为85%(ν/ν)甲醇水溶液，洗脱程序流动相B占流动相总体积比为:0-5min0%B，5-24min0%-100%B, 24-35minl00%B,流速:0.8mL.mirT1,检测波长 260nm，柱温 30°C，进样量:100 μ L。LH-919-CoA出峰时间约在27min，收集LH-919_CoA组分，然后经真空冷冻干燥除去溶剂，得到LH-919-CoA冻干粉末。
[0114](2)表达纯化重组AOX
[0115]本发明采用重组大鼠肝AOX作为靶蛋白筛选其抑制剂，应当理解，重组AOX与天然AOX具有相同的生理活性。大鼠肝AOX在E.coli中的重组表达及亲和纯化参照文献方法实施(Zeng J.et.al., Protein Express1n and Purificat1n.2004, 37,472-478),高度纯化后的AOX酶活性为1.89U/mg，蛋白纯度>95%。
[0116](3) LH-919-CoA对纯化的重组大鼠肝AOX体外抑制作用分析
[0117]将上述高度纯化的重组大鼠肝AOX溶于20mM PBS缓冲液中(pH7.4)，浓度80nM，再向酶溶液中分别加入不同浓度LH-919-CoA (抑制剂组)，对照组加相同体积蒸馏水，于25°C下分别孵育不同时间后，测定抑制剂组和对照组脂酰辅酶A氧化酶残余活性。脂酰辅酶A氧化酶活性测定方法根据文献(Luo Y.et al.，Arch.B1chem.B1phys., 2000, 384,1-8)，通过Shimadzu UV-1800紫外/可见分光光度仪测定263nm吸光度变化，即2-烯脂酰辅酶A产物的生成(ε 263nm=6.Tmr1CnT1)，来测定AOX活性。反应体系包含50mmol/L PBS缓冲液，pH7.4, 30 μ M palmitoyl-CoA (Sigma, St.Louis, MO)，及 500ng AOX,总体积 500 μ L。
[0118]结果见图1，LH-919-CoA能快速抑制AOX活性，且抑制作用随LH-919-CoA浓度增加而增强。游离LH-919酸对AOX没有抑制作用，LH-919游离酸必须活化为脂酰辅酶A即底物形式后才能抑制AOX活性。
[0119]LH-919-CoA对AOX的抑制作用是不可逆的，实验步骤如下:Α0Χ溶于20mM PBS缓冲液中，PH7.4，终浓度ΙΟΟηΜ，再向酶溶液中加入2μΜ LH-919-CoA，于25°C下孵育60min，以保证酶与抑制剂充分作用，然后将AOX与抑制剂混合物装入透析袋中(MWC0 5000)，再放入2L 20mM PBS缓冲液中(pH7.4)，于4°C对缓冲液透析24h，期间每隔4小时更换一次透析液，以充分除去游离LH-919-CoA。对照组将10nM AOX加相应体积蒸馏水，其余操作与抑制剂组相同。透析后将抑制剂组和对照组分别测定AOX酶活性，结果如表I所示，抑制剂组通过透析除去游离LH-919-CoA后，其AOX活性不能恢复，对照组酶活性没有显著变化，因此，LH-919-CoA对AOX的抑制作用是不可逆的。
[0120]表1、LH-919-CoA抑制AOX透析前后活性比较
[0121]
_对照组_抑制剂组_
_酶活性(U/mg) 相对活性(％) 酶活性(U/mg) 相对活性(％)
[0122]
透析前1.93100%0.115.7%
透析后_L84_95.3%_0.062_3.2%
[0123]注:相对活性表示各组测定的活性值与透析前对照组活性的百分比值。
[0124]由于LH-919-CoA对AOX的抑制作用是不可逆的，因此采用K1和kinart来表征抑制动力学，参照文献方法进行(Li D.et.al., J.Am.Chem.Soc.，2001，119，111-133)。实验步骤如下:50nM AOX溶于20mM PBS缓冲液中，pH7.4，再向酶溶液分别加入0.5 μ M，I μ M，3 μ M，5 μ Μ, 10 μ Μ, 15 μ M Z-919-CoA，于 25°C下孵育 Omin, 5min, 1min, 15min 和 20min 后，分别测定各剂量组AOX活性，在各LH-919-CoA浓度下，以相对残余活性取对数对孵育时间作图，采用Sigmaplotl2.0软件进行线性拟合，计算得到各抑制剂浓度下表观抑制速率k-，将各浓度下k-对抑制剂浓度双倒数作图，图2所示，计算LH-919-CoA对AOX酶抑制动力学参数K1 值为 810nM, kinact 值为 3.0SmirT1。
[0125](4) LH-919-CoA对大鼠肝脏过氧化物酶体AOX体外抑制作用分析
[0126]大鼠肝脏过氧化物酶体分离参照文献实施(Small GL.et.al.,B1chem.J., 1985,227,205-210)。操作步骤如下:准确称取大鼠新鲜肝脏组织0.5g，于冰浴上剪碎，悬浮于9倍体积匀浆缓冲液中(10%(w/v)蔗糖，3mM咪唑，20mM PBS缓冲液，pH7.4)，冰浴上电动匀浆后，4°C下5000 X g离心10分钟，吸取上清。下层沉淀再悬浮于少量匀浆缓冲液中再5000 X g离心10分钟，合并上清液于35000Xg离心30分钟，下层沉淀即为过氧化物酶体。
[0127]取200 μ g过氧化物酶体(以蛋白计)悬浮于20mM PBS缓冲液中(ρΗ7.4)，再向溶液中加入5 μ M LH-919-CoA (抑制剂组)，对照组加相应体积蒸馏水，于25°C下孵育Omin，2min, 5min, 1min和20min后，分别测定抑制剂组和对照组AOX活性。
[0128]过氧化物酶体AOX 活性参照文献测定(Johnson JK.et.al., B1chemstry, 1992,31，10564-10575 ；Luo Y.et al.，Arch.B1chem.B1phys.，2000，384，1-8)，采用分光光度法，测定 AOX 催化底物 3-1ndoleprop1ny1-CoA (IP-CoA)氧化所生成的 trans-3-1ndoIeacryloyl-CoA (IA-CoA)量来反映AOX活性，IA-CoA的消光系数ε 367nm为26.δπιΤαιΓ1。反应液含 50mmol/L PBS 缓冲液，ρΗ7.4，30 μ mol/L IP-CoA (纯度 >95%)，30 μ mol/L FAD (Sigma,St.Louis, MO),0.5g/L BSA (Sangon B1tech., Shanghai),0.02%TritonX-100(SangonB1tech., Shanghai),以及200 μ g过氧化物酶体(以蛋白计)。采用Shimadzu UV-1800紫外/可见光谱仪，测定367nm吸光值变化,分析条件下,每分钟生成lymol IA-CoA所需的过氧化物酶体蛋白量为I个酶活性单位(U)。
[0129]结果如图3所示，以大鼠过氧化物酶体为测活对象，LH-919-CoA能快速抑制大鼠过氧化物酶体AOX活性。
[0130]另一实验，取200μ g过氧化物酶体(以蛋白计)悬浮于20mM PBS缓冲液中(pH7.4)，向溶液中分别加入不同浓度LH-919-CoA(抑制剂组)，对照组加相应体积蒸馏水，于25 °C下孵育2min后，分别测定抑制剂各组和对照组AOX活性，结果如图4所示，LH-919-CoA体外抑制过氧化物酶体AOX活性与所加入抑制剂量呈正相关关系。
[0131]实施例2、AOX抑制剂前体抑制大/小鼠体内AOX作用分析
[0132](DLH-919在动物体内转化为LH-919-CoA的实验测定
[0133]SPF级Wistar大鼠6只，雄性，体重220_250g，禁食12h后，6只大鼠分为2组，对照组和药物组，每组3只，对照组给予橄榄油灌胃0.2mL/只，药物组将LH-919溶于相应体积橄榄油中，灌胃LH-919100yg/kg，于3h后将全部大鼠处死，迅速解剖摘取肝脏，立即放入液氣中保存。
[0134]肝脏细胞内亚细胞单元内含物脂酰辅酶A的测定参考文献实施(Melde K.et.al.，B1chem.J.，1991，274，395-400)。操作步骤如下:准确称取肝脏组织0.3g，于冰浴上剪碎，悬浮于9倍体积匀浆缓冲液中(10%蔗糖，3mM咪唑，20mM PBS)冰浴上电动匀浆后，40C 5000Xg离心10分钟，吸取上清。下层再悬浮于少量匀浆缓冲液中再5000Xg离心10分钟，合并上清液于30000Xg离心30分钟，得到的沉淀即为过氧化物酶体。将过氧化物酶体首先悬浮于2mL超纯水中(4°C )，然后加入200 μ L 5mM HClO4沉淀蛋白质，以及20nMLignoceryl-CoA(C24:0)作为参照样，蛋白质沉淀于16000X g离心分离,上清液用K2CO3调节pH至7.0，离心去除KClO4沉淀，上清液经冷冻干燥去除溶剂，剩余固体物溶于200 μ L超纯水中，通过RP-HPLC检测对照组和药物组各样品LH-919-CoA含量，最后通过质谱(MS)确认。RP-HPLC 操作条件,色谱柱 hypersil C18 柱(250mmX 4.6mm, 5 μ m),流动相 A 为 25mM磷酸钾缓冲液(PH5.9)，流动相B为85%甲醇水溶液，采用梯度洗脱，梯度洗脱程序流动相B 占流动相总体积比为:0-5min0%B，5-24min0%-100%B，24-35minl00%B，流速:0.8mL
检测波长260nm，柱温:30°C，进样量:25 μ L。
[0135]结果显示，药物组各样本肝脏过氧化物酶体中均检测到LH-919-CoA，对照组肝脏过氧化物酶体中没有检测到LH-919-CoA。
[0136]因此，LH-919经体内吸收进入肝脏后，转化为LH-919-CoA，进入过氧化物酶体，作为底物与AOX相互作用。
[0137](2) AOX抑制剂前体对C57BL小鼠体内肝脏AOX抑制作用分析
[0138]SPF级C57BL小鼠16只，雄雌各8只，体重20_25g，小鼠禁食12h后，16只小鼠分为2组，对照组和药物组，每组8只，雄雌各半。对照组给予橄榄油灌胃0.2mL/只；药物组将LH-919溶于相应体积橄榄油中，灌胃LH-91920-80l.! g/kg。于灌胃3h后将全部小鼠处死，迅速解剖摘取肝脏，立即放入液氮中保存。准确称取肝脏0.3g，匀浆分离得到过氧化物酶体后，分别测定对照组和药物组各样品AOX活性。
[0139]数据以X±SEM表示，用SPSS17.0软件进行统计学处理，各组之间差异性比较采用独立样本t检验。与对照组比较，*P < 0.05，#P < 0.01，< 0.001。
[0140]结果如图5所示，药物组其肝脏组织内AOX酶活性较对照组显著降低，表明AOX抑制剂前体LH-919在体内转化为LH-919-CoA，能显著抑制C57BL小鼠肝脏AOX酶活性，与体外实验结果一致。AOX抑制剂前体LH-919在C57BL小鼠体内抑制肝脏AOX酶活性具有良好的剂量依赖性。
[0141](3) AOX抑制剂前体对Wistar大鼠体内肝脏AOX抑制作用分析
[0142]SPF级Wistar大鼠12只，雄雌各6只，体重220_250g，大鼠禁食5h后，分为2组，对照组和药物组，每组6只，雄雌各半。对照组给予橄榄油灌胃0.2mL/只；药物组将LH-919溶于相应体积橄榄油中，灌胃LH-91910-80y g/kg，于3h后将全部大鼠处死，迅速解剖摘取肝脏，立即放入液氮中保存。准确称取肝脏0.3g，匀浆分离得到过氧化物酶体后，分别测定对照组和药物组各样品AOX酶活性。
[0143]数据以X±SEM表示，用SPSS17.0软件进行统计学处理，各组之间差异性比较采用独立样本t检验。与对照组比较，*P < 0.05，#P < 0.01，< 0.001。
[0144]结果如图6所示，药物组其肝脏组织内AOX酶活性较对照组显著降低，表明AOX抑制剂前体LH-919在体内转化为LH-919-CoA，能显著抑制肝脏AOX活性，与体外实验结果一致。AOX抑制剂前体LH-919抑制大鼠肝脏AOX酶活性具有良好的剂量依赖性。
[0145]实施例3、AOX抑制剂前体对四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠降血糖实验
[0146]SPF级Wistar大鼠50只，体重180_200g，喂以普通大鼠饲料，自由进水进食。大鼠适应喂养一周后，20只大鼠作为正常组，其余30只大鼠造模。30只大鼠禁食18h后腹腔注射四氧卩密唳(Sigma, St.Louis, MO) 200mg/kg, 48h后,每只大鼠皮下注射地特长效胰岛素(Determir,Novo Nordisk,Denmark)4-6U/ 只，连续 7d,给药时间 16:00-16:30,以维持其基本的生理功能,防止酮症酸中毒。第8天晨5:00am禁食，3h后从大鼠尾静脉采血测空腹血糖，血糖测定米用血糖仪(OneTouch UltraVue, Johnson and Johnson,New Brunswick,NJ)及配套试纸测定，下同。给四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠皮下注射长效胰岛素连续7d后，空腹血糖升高到22-25mmol/L，血糖趋于稳定，胰岛素抵抗已形成，共24只成模。
[0147]成模后糖尿病大鼠按血糖水平均匀分成3组，每组8只:糖尿病大鼠对照组，给予橄榄油灌胃0.2mL/只/天；糖尿病大鼠低剂量AOX抑制剂前体治疗组，将LH-919溶于相应体积橄榄油中，给予LH-919灌胃10 μ g/kg/d ;糖尿病大鼠高剂量AOX抑制剂前体治疗组，将LH-919溶于相应体积橄榄油中，给予LH-919灌胃20 μ g/kg/d。另外设正常大鼠对照组8只，给予橄榄油灌胃0.2ml/只/天；正常大鼠药物组8只，将LH-919溶于相应体积橄榄油中，给予LH-919灌胃20μ g/kg/d。糖尿病大鼠模型组和治疗组给药同时组继续皮下注射长效胰岛素，连续13天。期间分别于d4，d8，dl25: OOam禁食，3h后尾静脉采血测定空腹血糖。dll行OGTT实验，5:00am禁食，3h后尾静脉采血测定空腹血糖，作为基础对照(Omin)，然后糖尿病大鼠各组动物给予葡萄糖2.5g/kg灌胃，分别在此之后30min，60min，和120min尾静脉采血测定各组血糖,绘制0-120min的血糖-时间曲线，并计算血糖曲线下面积AUCQ_12Qniin。
[0148]药物治疗后第13天5:00am禁食，3h后摘眼球取血，分离血清。测定血清甘油三酯含量，采用甘油三酯检测试剂盒测定(北京北化康泰临床诊断有限公司，北京)，血清游离脂肪酸含量采用游离脂肪酸检测试剂盒测定(南京建成生物工程研究所，南京)。
[0149]分离肝细胞过氧化物酶体，测定各组肝细胞AOX活性，以IP-CoA为底物测定。各组肝细胞内H2O2含量采用H2O2检测试剂盒测定(Beyotime B1tech., Haimen)。血清和肝脏脂质过氧化物含量采用微量丙二醛(MDA)检测试剂盒测定(南京建成生物工程研究所，南京)。
[0150]数据以X土SEM表示，用SPSS 18.0软件进行统计学处理，各组之间差异性比较采用独立样本t检验。与正常大鼠对照组比较，#P < 0.05，##P < 0.01，###P < 0.001。与糖尿病大鼠模型组比较，*p < 0.05，林P < 0.01，_P < 0.001。
[0151]糖尿病大鼠在给予AOX抑制剂前体LH-919治疗4天后，血糖较给药前显著下降，下降水平一直维持稳定。血糖下降水平与给药剂量呈正相关关系，如表2所示。OGTT实验结果表明，AOX抑制剂前体LH-919能显著改善四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠的口服糖耐受，见图7A，与模型对照组比较，LH-919高、低剂量组的AUCQ_12Qmin面积均显著下降(p〈0.01)，且AUC0^120fflin面积下降程度与给药剂量呈正相关关系，如图7B所示。
[0152]表2、AOX抑制剂前体LH-919对四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠降血糖作用
[0153]

【权利要求】
1.脂酰辅酶A氧化酶抑制剂的用途，用于制备预防、改善或治疗糖尿病的药物组合物；所述脂酰辅酶A氧化酶的国际酶学分类编号为ECl.3.3.6。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的糖尿病包括:1型糖尿病或2型糖尿病。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂为抑制脂酰辅酶A氧化酶活性或表达的物质。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂包括:小分子有机物，小分子无机物，抗脂酰辅酶A氧化酶抗体，能与脂酰辅酶A氧化酶特异性结合并抑制其活性的核酸片段和多肽。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂还包括抑制剂前体。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂或抑制剂前体包括:10，12- 二十五碳二炔酸，其CAS编码为66990-32-7 ;或10，12- 二十五碳二炔酰辅酶A。
7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物还用于: 抑制患者体内脂酰辅酶A氧化酶活性； 改善胰岛素抵抗； 降低靶器官或组织内氧化应激水平；或 减少胰岛素作用靶组织内氧化自由基含量。
8.一种用于预防、改善或治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括: 脂酰辅酶A氧化酶抑制剂；以及 药学上可接受的载体或赋形剂。
9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂为抑制脂酰辅酶A氧化酶活性或表达的物质。
10.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂包括:抗脂酰辅酶A氧化酶抗体，能与脂酰辅酶A氧化酶特异性结合并抑制其活性的核酸片段和多肽，小分子有机物，小分子无机物。
11.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂还包括抑制剂前体；较佳地包括:10，12- 二十五碳二炔酸，其CAS编码为66990-32-7 ;或10，12- 二十五碳二炔酰辅酶A。
12.—种制备预防、改善或治疗糖尿病的药物组合物的方法，其特征在于，所述方法包括:将脂酰辅酶A氧化酶抑制剂与药学上可接受的载体或赋形剂混合，获得所述的药物组合物。
13.一种预防、改善或治疗糖尿病的方法，其特征在于，所述方法包括:抑制需要预防、改善或治疗的患者体内的脂酰辅酶A氧化酶活性或表达。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的抑制脂酰辅酶A氧化酶活性或表达的方法是:给需要预防、改善或治疗的患者施用有效量的脂酰辅酶A氧化酶抑制剂或脂酰辅酶A氧化酶抑制剂前体。
【文档编号】A61K39/395GK104162163SQ201310185274
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2013年5月17日 优先权日:2013年5月17日
【发明者】曾嘉 申请人:曾嘉