专利名称：3β,22α-二羟基羊毛甾-8,25-二烯-24-酮在制备抗病毒药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，具体涉及3 β，22 a - 二羟基羊毛甾_8，25- 二烯_24_酮在制备抗病毒药物中的应用。
背景技术：
病毒是引起感染性疾病的主要元凶，危害性极大、影响面甚广。在科学高速发展的今天，仍是发达国家和许多发展中国家面临的最大困惑之一。近年来，由于病毒的肆意蔓延，抗病毒类药物发展较快，已成为抗感染药物中举足轻重的品种，而具有高度选择性、作用于细胞病毒代谢，对宿主无明显损害的药物仍是目前研究的重点。20世纪90年代以来，在组合化学、高通量筛选技术的推动下，在对病毒学和分子生物学理论的研究中，人们对病毒的复制、发病机理、抗病毒作用靶点方面有了进一步的认识，从而使抗病毒药物快速地发展。据《Kalorama Information》公布的一项研究结果表明，2005-2006年,世界抗病毒药品市场的增长率逐渐达到一个高峰。新产品的上市和日益增长的需求推动全球的抗病毒药品达到了 160亿美元的峰值。毋容置疑，新药仍是推动市场增长的源泉，而疫情的蔓延则是拉动抗感染类药物发展的动力。在非典型肺炎、禽流感病毒、疱疹病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)和轮状病毒的轮番肆虐下，2006年全球疱疹和呼吸道抗病毒药(HRA)市场销售额约为25亿美元，在进入新世纪后连续两年创下了 13%的增长率。对病毒性疾病的治疗至今仍缺乏专属性强的药物，临床上常用的药物主要有如下几类:抑制病毒复制的抗病毒药；增强机体免疫功能的免疫调节剂；针对临床症状的止咳、镇痛、解热和消炎等治疗药；防止继发感染的抗感染药；预防病毒感染的疫苗及阻断病毒传播的消毒药等。 在某种意义上说,抗病毒药只是病毒抑制剂(Virustatic agentis),不能直接杀灭病毒和破坏病毒体，否则也会损伤宿主细胞。抗病毒药的作用在于抑制病毒的繁殖，使宿主免疫系统抵御病毒侵袭，修复被破坏的组织，或者缓和病情使之不出现临床症状。至今，某些病毒性疾病如脊髓灰质炎和狂犬病还没有抗病毒治疗药，只能靠疫苗预防，一旦错过防疫期，后果十分严重。由于病毒变异的速度远远高于新药的研制速度，并且容易对人工合成的化学药物产生抗药性，因此在药物市场中，天然药物在提高免疫和抑制病毒方面发挥重要作用。
发明内容
本发明公开了 3 β，22 α - 二羟基羊毛甾_8，25- 二烯_24_酮在制备抗病毒药物中的应用。3 β，22 α - 二羟基羊毛甾_8，25- 二烯_24_酮分子式为C3tlH48O3,分子量为456，其结构如图1所示。本文所涉及3 β，22 α - 二羟基羊毛留_8，25- 二烯_24_酮是从桦褐孔菌子实体中分离纯化所得。所述分离纯化方法为:1.收集桦褐孔菌子实体原料，经干燥及粉碎后，在常温下，采用95%的乙醇进行浸提，料液比为1:20，每次2小时，总共提取3次；收集浸提液并真空干燥浓缩，得到黑褐色的乙醇提取物浸膏，按照质量体积比原料:水=3:1加入IOOOml水溶解并混匀，再按照质量体积比原料:7jC =1:1加入乙酸乙酯有机溶剂，萃取3次，收集乙酸乙酯萃取液并真空浓缩，得到到乙酸乙酯萃取物及水溶物。2.取乙酸乙酯萃取物，进行正相硅胶柱层析，拌样硅胶比例1:1.5，上柱硅胶比例1:20，柱内径为12.5cm，梯度洗脱为:氯仿:甲醇分别为100:098:295:590:1080:200:100 收集馏分186.05L，经正相薄层色谱分析，合并组分。3.分别利用单纯疱疹病毒(HSV)、猴艾滋病毒(SIV)和肠道病毒(EV71)中的一种或多种对所得对上述馏分进行活性追踪检测。选择活性效果最好的组分进行进一步正相硅胶柱层析，搅拌并收集馏分。4.可选地，分别 利用单纯疱疹病毒(HSV)、猴艾滋病毒(SIV)和肠道病毒(EV71)中的一种或多种对所得对上述馏分进行活性追踪检测。选择活性效果最好的组分进行进一步正相硅胶柱层析，搅拌并收集馏分。5.可选地，分别利用单纯疱疹病毒(HSV)、猴艾滋病毒(SIV)和肠道病毒(EV71)中的一种或多种对所得对上述馏分进行活性追踪检测。选择活性效果最好的组分进行进一步正相硅胶柱层析，搅拌并收集馏分。6.分别利用单纯疱疹病毒(HSV)、猴艾滋病毒(SIV)和肠道病毒(EV71)中的一种或多种对所得对上述馏分进行活性追踪检测。选择活性效果最好的组分进行进一步用制备高效液相色谱分离，收集馏分得到化合物组分。7.利用核磁共振及质谱分析鉴定此组分为3 β，22 α - 二羟基羊毛留_8，25- 二烯-24-酮(3 β，22 a-dihydroxylanosta-8, 25-diene-24_one),分子式为 C30H48O3,分子量为456.36。本发明所述病毒为猴艾滋病毒(SIV)或单纯疱疫病毒(HSV)或肠道病毒(EV71)。。经过发明人大量实验发现，3 β，22 α-二羟基羊毛甾_8，25_ 二烯_24_酮对猴艾滋病毒(SIV)、单纯疱疹病毒(HSV)、肠道病毒(EV71)等都有显著的抑制作用，使得3β，22 α -二羟基羊毛留-8，25-二烯-24-酮可用于制作广谱抗病毒药物，该药物含有治疗有效量的3 β，22 α - 二羟基羊毛留-8，25- 二烯_24_酮及药学上可接受的载体。
图1为3β, 22 α-二羟基羊毛甾_8，25-二烯-24-酮的结构图。
具体实施例方式以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。实施例1:从桦褐孔菌子实体中分离纯化得到3 β，22 α - 二羟基羊毛甾_8，25- 二烯_24_酮1、收集3Kg桦褐孔菌子实体原料，经干燥及粉碎后，在常温下，采用95%的乙醇进行浸提，料液比为1:20，每次2小时，总共提取3次；收集浸提液并真空干燥浓缩，得到黑褐色的乙醇提取物浸膏780g，加入IOOOml水溶解并混匀，加入3000ml乙酸乙酯有机溶剂，萃取3次，收集乙酸乙酯萃取液并真空浓缩，得到到乙酸乙酯萃取物111.7g，水溶物650g。2、取其中乙酸乙酯萃取物111.7g，进行正相硅胶柱层析，拌样硅胶比例1: 1.5，上柱硅胶比例1:20，柱内径为12.5cm,进行梯度洗脱为:氯仿:甲醇:100:098:295:590:1080:200:100,平均 1400ml 为一个馏分，共收集馏分 186.05L,经正相薄层色谱分析，共合并出9个组分，分别为Fr.1=3.21g, Fr.2=31.53g, Fr.3=5.58g,Fr.4=24.57g, Fr.5=10.81g, Fr.6=11.58g, Fr.7=8.20g, Fr.8=10.75g, Fr.9=8.9g。3、取组分Fr.5=10.81g进一步正相娃胶柱层析,拌样娃胶比例1:1.5,上柱娃胶比例1:25，柱内径为4cm，进行梯度洗脱:氯仿:丙酮100:098:295:5，90:10，80:20，最后甲醇冲柱，平均500ml为一个馏分，共收集馏分50L，经正相薄层色谱分析，共合并出5个组分，分别为 Fr5-10.24g, Fr5-21.2g, Fr5-34.250g, Fr5-41.012g, Fr5-52.459g。4、取组分Fr5_21.2g进一步正相硅胶柱层析，拌样硅胶比例1:1.5，上柱硅胶比例1:100，柱内径为3cm，进行梯度洗脱:氯仿:丙酮100:098:295 =5,90:10,80:20，最后甲醇冲柱，平均250ML为一个馏分，共收集馏分50.L，经正相薄层色谱分析，共合并出3个组分，组分 Fr5-2-10.2g, Fr5-2-20.5g, Fr5-2-30.35g。5、取组分Fr5-2_2进一步用制备高效液相色谱分离，洗脱条件为:甲醇:水=90:10,柱:Agilent Prep C_185um*4.6mm*250mm,保留时间为 7.852min，收集懼分得至Ij化合物组分，利用核磁共振及质谱分析鉴定此组分为3 β，22 α - 二羟基羊毛留-8，25- 二烯-24-酮(3β，22 a -dihydroxylanosta-8, 25-diene-24_one),分子式为 C3tlH48O3,分子量为 456.36。实施例2: 3 β，22 α - 二羟基羊毛留-8，25- 二烯_24_酮对猴艾滋病毒(SIV)的抑制效果实验用二甲基亚砜(DMSO)溶解实施例1中得到的3 β，22 α - 二羟基羊毛甾-8，25- 二烯-24-酮来配制母液，再用细胞培养基RPM1-1640稀释成所需要的浓度，得到不同浓度的样品溶液，加入等量的CEMX 174细胞与病毒混合液。每个梯度3个重复，出现合包体后(作用4天后)，吹散细胞团，使之分散。计算每孔合包体数目。取这样每个梯度的6个平均值。抑制率=(对照孔合包体数目一给药孔合包体数目)/对照孔合包体数目X 100%抑制率效果如表I所不。表I
权利要求
1.3 β，22 α - 二羟基羊毛留-8，25- 二烯_24_酮在制备抗病毒药物中的应用。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于，所述3β，22 α - 二羟基羊毛甾_8，25- 二烯-24-酮是从桦褐孔菌子实体中分离纯化所得，所述3 β，22 α - 二羟基羊毛留_8，25- 二烯-24-酮的分子式为C3tlH48O3,分子量为456。
3.根据权利要求I所述的应用，其特征在于，所述病毒为猴艾滋病毒、单纯疱疹病毒、肠道病毒中的一种或多种。
4.一种抗病毒药物，其特征在于，含有有效含量的3β，22 α-二羟基羊毛留-8，25-二烯-24-酮及药学上可接受的载体。
全文摘要
本发明属于医药领域，具体涉及3β,22α-二羟基羊毛甾-8,25-二烯-24-酮(3β,22α-dihydroxylanosta-8,25-diene-24-one)在制备抗病毒药物中的应用。经过发明人大量实验发现，3β,22α-二羟基羊毛甾-8,25-二烯-24-酮对猴艾滋病毒(SIV)、单纯疱疹病毒(HSV)、肠道病毒(EV71)等都有显著的抑制作用，使得3β,22α-二羟基羊毛甾-8,25-二烯-24-酮可用于制作广谱抗病毒药物，该药物含有有效含量的3β,22α-二羟基羊毛甾-8,25-二烯-24-酮及药学上可接受的载体。
文档编号A61P31/12GK103251628SQ20131019990
公开日2013年8月21日 申请日期2013年5月24日 优先权日2013年5月24日
发明者潘鸿辉, 谢意珍, 余雄涛, 黄纪国, 李向敏, 焦春伟 申请人:广东省微生物研究所, 广东粤微食用菌技术有限公司