一种治疗癌症的中药组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种治疗癌症的中药组合物，由下述原料按重量份配比组成：肿节风15份，生地20份，焦瓦楞15份，海蛤壳30份，赭石子10份，威灵仙10份，白头翁12份，无花果12份，焦麦芽20份，荆芥穗10份，生薏仁30份，柳树根60份，炙内金15份，夏枯草12份，木贼草40份，山萸肉20份，防风10份，王不留行15份。体内体外实验研究结果显示，该中药组合物对人肺癌A549细胞系和人肺癌NCI-H460细胞的生长有明显的抑制作用。本发明可用于治疗癌症，特别是用于治疗肺癌。
【专利说明】一种治疗癌症的中药组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药领域，具体涉及一种治疗癌症的中药组合物及其制备方法。
【背景技术】[0002]恶性肿瘤，也称癌症，是指细胞失去控制，异常增殖，持续生长进而侵犯临近正常组织，并可经血管、淋巴管及体腔转移到身体其他部位，最终危及人类生命的一类严重疾病。在我国恶性肿瘤在各种死因中已经排在第二位，在部分城市则已排到首位；并且近20年，肿瘤的发病率及死亡率呈明显上升趋势，其中肺癌发病率居首位。目前，肿瘤的临床治疗主要应用手术切除、放疗、化疗、生物治疗和中药治疗等方法。由于肿瘤的恶性程度高，目前的治疗手段难以取得良好疗效，导致肿瘤的复发和转移，并存在一些治疗手段的不足，如化疗的毒副作用常常导致骨髓抑制。因此，开发新的抗肿瘤药物对治疗肿瘤具有重要意义。我国传统的中医药在肿瘤治疗上具有十分重要的价值，已经积累了许多宝贵的经验，用于无法手术和术后的患者，并在减少放疗、化疗和生物治疗中毒副作用等方面具有辅助治疗作用。因此，有效的中药复方在临床治疗肿瘤中已经发挥了重要的作用。
[0003]扶正祛邪是中医学治疗疾病的通用法则，可用于肿瘤的预防和治疗。本发明的中药组合物由18位药品组成，主要针对肺癌肺阴亏耗，脾阴不振，痰涎壅盛、气滞血瘀，土弱金衰等设方立法，用于治疗癌症，特别是用于治疗肺癌。
【发明内容】
[0004]针对现有技术的不足，本发明提供了一种中药组合物。该中药组合物对人肺癌A549细胞系和人肺癌NC1-H460细胞的生长有明显的抑制作用，可用于治疗癌症，特别是用于治疗肺癌。
[0005]本发明涉及一种中药组合物，其由以下原料按相应的重量份配比组成:肿节风15份，生地20份，焦瓦楞15份，海蛤壳30份，赭石子10份，威灵仙10份，白头翁12份，无花果12份，焦麦芽20份，荆芥穗10份，生薏仁30份，柳树根60份，炙内金15份，夏枯草12份，木贼草40份，山萸肉20份，防风10份，王不留行15份。优选地，该中药组合物可由下列重量的原料组成:肿节风15克，生地20克，焦瓦楞15克，海蛤壳30克，赭石子10克，威灵仙10克，白头翁12克，无花果12克，焦麦芽20克，荆芥穗10克，生薏仁30克，柳树根60克，炙内金15克，夏枯草12克，木贼草40克，山萸肉20克，防风10克，王不留行15克。
[0006]本发明同时提供一种制备上述中药组合物的方法，该方法包含如下步骤:将前述的原料按相应的重量配比混合，包括肿节风15份、生地20份、焦瓦楞15份、海蛤壳30份、赭石子10份、威灵仙10份、白头翁12份、无花果12份、焦麦芽20份、荆芥穗10份、生薏仁30份、柳树根60份、炙内金15份、夏枯草12份、木贼草40份、山萸肉20份、防风10份以及王不留行15份；先用清水冲洗两遍，以去掉灰尘、农药、化肥残留；然后将其用温水浸泡，100°C煎二遍，成流浸膏状，再稀释三倍，摇匀得浸膏；最后将所述浸膏低温密闭或贮存。该浸膏可作药用，也可用于如动物抑瘤实验。[0007]具体地，该中药组合物可由下列原料按相应的重量混合，包括肿节风15克、生地20克、焦瓦楞15克、海蛤壳30克、赭石子10克、威灵仙10克、白头翁12克、无花果12克、焦麦芽20克、荆芥穗10克、生薏仁30克、柳树根60克、炙内金15克、夏枯草12克、木贼草40克、山萸肉20克、防风10克以及王不留行15克；先用清水冲洗两遍，以去掉灰尘、农药、化肥残留；然后将其用温水浸泡，100°C煎二遍，成流浸膏状，再稀释三倍，摇匀得浸膏；最后将所述浸膏低温密闭或贮存。该浸膏可作药用，也可用于如动物抑瘤实验。
[0008]进一步，本发明还提供由前述浸膏配成的工作液。将前述浸膏加入一定体积的蒸馏水，配制成浓度为100mg/ml的母液，高压灭菌后，将该母液用滤器过滤2_3遍，并稀释可制成一定梯度浓度工作液。该工作液可低温密闭或贮存，可作药用，也可用于研究，如细胞水平的研究。
[0009]具体来说，本发明提供的所述中药组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、微丸、分散片、口腔崩解片、丸剂、口服液体制剂；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂和基质中的一种或几种。
[0010]此外，本发明还涉及所述中药组合物在制备治疗癌症药物中的应用。更具体地，本发明涉及所述中药组合物在制备治疗肺癌药物中的应用。
[0011]本发明中的中药组成物由18味中药组成，主要针对肺癌肺阴亏耗，脾阴不振，痰涎壅盛、气滞血瘀，土弱金衰等设方立法，其方解如下:“肺主气，朝百脉”，人体气血津液正常运行全赖气的推动。肺癌患者气血瘀滞，必然影响肺津正常输布，肺不布津则津液停聚，郁积不行，进而转化为痰浊。由于本方未见报道，仅对方中各中药的治疗功效表述如下:
[0012](1)肿节风:性味苦辛平。入心经、肝经。可清热凉血，活血消斑，祛风通络，有抗癌作用；
[0013](2)生地:性味甘寒。入心经、肝经、肾经。凉血清热、养阴生津、破瘀生新、润燥滑肠、止痛。多用于治疗阴虚内热、骨蒸劳热、舌绛烦渴、发斑发疹等；
[0014](3)焦瓦楞:性味咸平。归肺经、胃经、肝经。消痰化瘀，软坚散结，制酸止痛。用于顽痰积结，粘稠难咯，瘿瘤，瘰疬，瘕痞块，胃痛泛酸等；
[0015](4)海蛤壳:性味咸平。入心经、肾经。可清热利水，软坚化痰。用于治疗热痰喘嗽，水肿，瘿瘤积聚，血结胸痛等；
[0016](5)赭石子:性味苦甘平。入肝经、胃经、心胞经。可平肝潜阳，降逆止血。用于眩晕耳鸣，喘息，噫气，呕吐，呃逆，吐血，紐血等；
[0017](6)威灵仙:性味辛咸温，有毒。入膀胱经。可祛风除湿，通络止痛，消痰水，散癖积；
[0018](7)白头翁:性味苦寒;归胃经、大肠经。具有清热解毒，凉血止痢，燥湿杀虫的功效。可治疗痈疮，瘰疬等；
[0019](8)无花果:性味甘微辛平，有小毒。主治痔疮肿痛等；
[0020](9)焦麦芽:性味甘平。归脾经、胃经。可健脾养胃，消导食积；
[0021](10)荆芥穗碳:性味辛涩微热。归肺经、肝经。可收涩止血；
[0022](11)生薏仁:性味凉甘淡。可健脾渗湿，除痹止泻。可用于治疗水肿、小便不利、湿痹拘挛、脾虚泄泻；
[0023]( 12)柳树根:可祛风利湿、消肿止痛；[0024](13)炙内金:性昧甘寒。归脾经、胃经、小肠经、膀胱经。可消食健胃助消化，涩精止遗。用于治疗消化不良、面色萎黄、不思纳谷、小儿疳积、形体消瘦、腹大腹胀、脾胃虚弱、食积胀满等病症；
[0025](14)夏枯草:性味寒甘辛微苦，具有清泄肝火、散结消肿、清热解毒、祛痰止咳、凉血止血的功效，适用于淋巴结核、甲状腺肿、乳痈等病症。现代药理研究表明，夏枯草有抑制癌细胞的作用；[0026](15)木贼草:性味甘苦平，无毒，微寒。入心经、肝经、胃经、膀胱经。可止血，清肝明目，利尿通淋，用于治疗咳嗽、目赤肿痛、肠风下血等病症；
[0027](16)山萸肉:性味酸涩微温。如肝经、肾经。可补益肝肾，收敛固涩、固精缩尿，止汗生津。可用于腰膝酸痛，大汗虚脱，内热消渴等病症；
[0028](17)防风:性味辛甘微温。入膀胱经、肺经、脾经、肝经。可祛风解表、胜湿止痛、解痉止痒。用于治疗外感风寒，头痛身痛，风湿痹痛，骨节酸痛，腹痛泄泻等症；
[0029](18)王不留行:性味苦平。入肝经，胃经。可行血调经、消肿止痛、活血通乳、催生下乳、产后胸腺疏通。用于治疗血瘀经闭，痛经，难产，乳痈肿痛等病症。
[0030]在这一组方的基础上可以增加其他佐药和/或使药，以进一步提闻疗效。
[0031]本发明的优势在于提供的中药组合物在治疗癌症、特别是治疗肺癌方面具有显著的疗效。发明人通过实验发现，该组合物对人永生化肝细胞L02的抑制率达到70%，对裸鼠肿瘤的抑制率可达75%，在临床试验中对患者肺癌的症状有明显的改善和治疗作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0032]图1中药组合物作用于人永生化肝细胞L02在48小时后的形态学照片。
[0033]图2中药组合物作用于人肺癌细胞A549在48小时后的形态学照片。
[0034]图3中药组合物作用于人肺癌细胞NC1-H460在48小时后的形态学照片。
[0035]图4中药组合物作用人永生化肝细胞L02在48小时后的台盼蓝染色结果Cp1=0.0417，*p〈0.05，**p〈0.01，***p〈0.001)。
[0036]图5中药组合物作用人肺癌细胞48小时后台盼蓝染色结果(P1=0.0053，P2=0.0013 ；p3=0.0048)。
[0037]图6中药组合物作用人肺癌细胞NC1-H460在48小时后的台盼蓝染色(P1=0.0075，P2=0.0158, P3=0.0167)。
[0038]图7中药组合物作用永生化肝细胞L02在48小时后的MTT检测结果(P1=0.0163)。
[0039]图8中药组合物作用人肺癌细胞A549在48小时后MTT检测结果(Pl=0.017，P2=0.0070, P3=0.0061)。
[0040]图9中药组合物作用人肺癌细胞NC1-H460在48小时后的MTT结果(Pl=0.0125，P2=0.0358, P3=0.0167)。
[0041]图10中药组合物作用人永生化肝细胞L02在48小时后的流式结果。
[0042]图11中药组合物作用肺癌细胞A549在48小时后的流式结果。
[0043]图12BALB/C裸鼠重量随时间的变化关系。
[0044]图13BALB/C裸鼠肿瘤体积随时间的变化关系。
[0045]图14BALB/C裸鼠灌胃给药45天后的肿瘤块照片(每组6只)。[0046]图15BALB/C裸鼠灌胃给药45天后的肿瘤块重量柱状图。
[0047]图16用于基因芯片检测的RNA质量分析结果。
【具体实施方式】
[0048]实施例1中药组合物及其制备
[0049][I]中药组合物成分及其制备[0050]中药组合物由下述原料按重量份配比为:肿节风15份，生地20份，焦瓦楞15份，海蛤壳30份，赭石子10份，威灵仙10份，白头翁12份，无花果12份，焦麦芽20份，荆芥穗10份，生薏仁30份，柳树根60份，炙内金15份，夏枯草12份，木贼草40份，山萸肉20份，防风10份，王不留行15份。
[0051]在本实施例中，所述中药组合物由肿节风15克，生地20克，焦瓦楞15克，海蛤壳30克，赭石子10克，威灵仙10克，白头翁12克，无花果12克，焦麦芽20克，荆芥穗10克，生薏仁30克，柳树根60克，炙内金15克，夏枯草12克，木贼草40克，山萸肉20克，防风10克以及王不留行15克组成。
[0052]该中药组合物的制备，包括以下步骤:
[0053]a)前述种类和分量的原料先用清水冲洗两遍，以去掉灰尘、农药、化肥残留；
[0054]b)用温水浸泡，100°C煎二遍，成流浸膏状、稀释三倍，摇匀得浸膏；
[0055]c)将所述浸膏低温密闭或贮存。
[0056]该浸膏具有治疗效果，可以用于动物抑瘤实验，也可作药用。
[0057]将前述浸膏加入一定体积的蒸馏水，配制成母液，浓度为100mg/ml，高压灭菌后，用滤器过滤2-3遍，可稀释成一定梯度浓度工作液。该工作也可低温密闭或贮存，可用于研究，例如细胞水平的研究。
[0058][2]原料加工方法
[0059]1.按处方请药材基地供应商供药。药品购进后，首先检查进药渠道手续，了解产地；其次核对方药是否相符；再次筛选，确定药品是否有杂质、掺假以及霉变药品，待无误后才能入库加工。
[0060]2.按量将药品投入反应釜，加水清洗二遍，目的是去掉灰份，保持药品洁净，同时减少农药化肥残留，另外轻洗过程中搅拌也可减少重金属含量，使药品加工后铅、砷等各种重金属含量完全符合企业、国家标准，保证药品质量。
[0061]3.上药准备就绪后，采用100°C高温煎煮二次，每次煎煮二小时，第一次加10倍水煎煮，第二次加六倍水煎煮，然后提取煎煮液倒入缸中，再将液体喷雾干燥为粉，最后将干燥粉收贮后装入密封袋中。
[0062][3]片剂加工工艺
[0063]1.将干燥半成品粉，添加玉米淀粉、硬脂酸美、微晶纤维素、二氧化硅等辅料造粒、压片。
[0064]2.药品加工后每片药品重量为550毫克，其中生药粉为420毫克、玉米淀粉为90毫克，二氧化硅15毫克、硬脂酸美5毫克。
[0065][4]干胶囊造粒方法
[0066]1.取喷雾干燥粉提取粉300毫克、微晶纤维素60毫克、二氧化硅15毫克、硬脂酸美5毫克，合计400毫克，造粒后装入0号胶囊，将提取粉和微晶纤维素混合均匀；加入80%乙醇制成适宜软材，16目尼龙筛制粒；50~60°C干燥，18目尼龙筛整粒，整粒时加入羟甲基锭粉钠，二氧化硅，硬脂酸美，混合均匀；装入0号胶囊，再装并密闭。
[0067][5]混悬液及粒丸加工方法[0068]混悬液加工的方法是，将二次煎煮液浓缩后，再加温后热灌装密闭包装瓶中，然后加热真空处理即可
[0069][6]滴丸加工方法
[0070]滴丸是将喷雾干燥经离心机处理后，将二氧碳化物等杂质去掉，剩下微粉加辅料，即可加工成滴丸。
[0071]实施例2:药效学研究
[0072][I]实验材料和仪器设备
[0073]100%乙醇(天津市化学试剂批发公司)、胎牛血清(Invitrogen，USA)、RPMI1640(Invitoogen，USA)、胰酶(生工生物工程(上海)股份有限公司)、台盼蓝(北京鼎国昌盛生物技术有限公司)、MTT (全称为 3_(4，5) -dimethylthiahiazo (-z-yl) -3, 5-d1-phenytetrazoliumromide, 3-(4, 5- 二甲基噻唑-2) -2, 5- 二苯基四氮唑溴盐,商品名噻唑蓝，Thermo,USA)、DMSO (二甲基亚砜，北京鼎国昌盛生物技术有限公司)、碘化丙啶(Sigma，USA);血球计数板(上海求精生化试剂有限公司)、低速台式离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)、酶联免疫检测仪(BIO-RAD，USA)、流式细胞仪(BD FACSDiVa，USA)、脱色摇床(北京德天佑科技发展有限公司)、C02培养箱(sanyo，Japan)、倒置显微镜(OLYMPUS，Japan)。
[0074][2]细胞培养
[0075]人非小细胞肺癌细胞株A549、人大细胞肺癌细胞株NC1-H460和人永生化肝细胞株L02购于南京凯基生物科技发展有限公司。上述细胞株应用含10%胎牛血清(HyClone，澳大利亚)的RPMI1640培养基(Gibco，USA)在37°C的5%C02培养箱中培养。
[0076][3]统计学方法
[0077]米用Student’ s t检验对数据进行统计学分析，P〈0.05和P〈0.01为差异显著。
[0078][4]形态学观察
[0079]1.配制一定浓度的中药组合物的中药母液，高压灭菌，过滤除杂2~3次，稀释成一系列梯度浓度(0.01，0.1，1.0，5.0和10.0mg/ml)备用；细胞株采用人肺癌A549细胞系、人肺癌NC1-H460细胞及人永生化肝细胞株L02 ；
[0080]2.将生长在对数期的细胞铺6孔板，放入孵箱培养至细胞长到80%~90%时，分别加不同浓度的中药200 u I,其中对照组加200 u I PBS ；
[0081]3.孵箱培养48小时，显微镜下观察不同浓度药物(0.01，0.1,1.0,5.0和10.0mg/ml)对细胞的影响，并拍照；
[0082]4.观察结果:
[0083]lmg/ml浓度的中药组合物作用于永生化肝细胞L02细胞后，从形态上观察细胞无明显变化，当药物浓度增加至5mg/ml时，L02细胞发生死亡并脱落；人肺癌A549细胞在lmg/ml的药物浓度下约1/3细胞存活,而在5mg/ml和10mg/ml的药物浓度下几乎有很少细胞存活；人肺癌NC1-H460细胞与A549细胞情况类似，在低浓度时甚至比A549细胞更加敏感。[0084][5]台盼蓝染色
[0085]1.正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞；
[0086]2.将生长在对数期的细胞铺6孔板，放入孵箱培养至细胞长到80%~90%时，分别加不同浓度的中药200μ I (0.01,0.1,1.0,5.0和10.0mg/ml )，其中对照组加200 μ I PBS ；
[0087]3.孵箱培养48小时，显微镜下观察不同浓度药物对细胞的影响。分别收集上清，胰酶分别消化不同药物浓度处理的细胞，合并上清和消化下来的细胞；800rpm离心10分钟，弃上清；加入5ml PBS重悬,800rpm离心10分钟，弃上清；加入Iml PBS重悬；
[0088]4.分别取10 μ I样品溶液和0.4%的台盼蓝溶液混匀染色3~6分钟，然后进行血球计数板计数活细胞和死细胞数目，着色的是死细胞，没着色的是活细胞；每株细胞系至少重复3次；
[0089]5.实验结果:
[0090]表1人永生化肝细胞系L02台盼蓝计数结果
[0091]
【权利要求】
1.一种治疗癌症的中药组合物，由下述原料按相应的重量份配比组成:肿节风15份，生地20份，焦瓦楞15份，海蛤壳30份，赭石子10份，威灵仙10份，白头翁12份，无花果12份，焦麦芽20份，荆芥穗10份，生薏仁30份，柳树根60份，炙内金15份，夏枯草12份，木贼草40份，山萸肉20份，防风10份，王不留行15份。
2.权利要求1所述的中药组合物，所述中药组合物由以下原料按相应重量制成:肿节风15克，生地20克，焦瓦楞15克，海蛤壳30克，赭石子10克，威灵仙10克，白头翁12克，无花果12克，焦麦芽20克，荆芥穗10克，生薏仁30克，柳树根60克，炙内金15克，夏枯草12克，木贼草40克，山萸肉20克，防风10克，王不留行15克。
3.一种制备权利要求1或2所述的中药组合物的方法，包括以下步骤: a)将权利要求1所述种类和分量的原料用清水冲洗两遍，以去掉灰尘、农药、化肥残留; b)用温水浸泡，100°C煎二遍，成流浸膏状、稀释三倍，摇匀得浸膏； c)将所述浸膏低温密闭或贮存。
4.权利要求1或2所述的中药组合物，所述药物组合物按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、微丸、分散片、口腔崩解片、丸剂或口服液体制剂，所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂和基质中的一种或几种。
5.权利要求1或2所述的中药组合物在制备治疗癌症药物中的应用。
6.权利要求1或2所述的中药组合物在制备治疗肺癌药物中的应用。
【文档编号】A61K35/56GK103479933SQ201310272903
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年6月28日 优先权日:2013年6月28日
【发明者】刘鸿生, 张晓东, 叶丽虹 申请人:天津弘昇药物研究有限公司