一种地骨皮活性部位及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及中药活性部位的制备领域，公开了一种地骨皮活性部位及其制备方法和应用。所述制备方法包括如下步骤：S1.将地骨皮粉碎后，用水提取，再将提取液浓缩，加入乙醇进行醇沉，取上清液浓缩得原液；S2.将原液通过大孔吸附树脂，收集洗脱液，蒸干，浓缩得样品1；S3.将样品1通过强酸型阳离子交换树脂吸附，先用水洗树脂柱，再用氨水洗脱，收集氨水洗脱液，浓缩得得样品2；S4.将样品2通过强碱性阴离子交换树脂吸附，收集水洗脱液，浓缩干燥即得地骨皮活性部位。本发明制备得到的地骨皮活性部位生物碱活性成分含量较高，可用于预防和治疗糖尿病、肥胖症、高血脂等疾病。
【专利说明】一种地骨皮活性部位及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药活性部位的制备领域，更具体地，涉及一种地骨皮活性部位及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]2009年10月份公布的的第四版糖尿病地图数据显示，中国糖尿病患者有4320万之多，但2010年3月24日发表在《新英格兰杂志》的最新流行病学调查结果表明，中国已经取代印度成为全球糖尿病患者最多的国家。最新的这项研究反映出近些年来糖尿病患病率在中国的快速增长。基于此，IDF预测世界糖尿病患病人群在2030年将直逼5亿。国内外治疗糖尿病的药物概括起来包括口服降糖药、胰岛素、外源性GLP-1受体激动剂、GLP-1类似物等，虽然西药降糖效果较好，但副作用大，不利于长期使用且不能有效控制并发症。中药在治疗糖尿病上具有显著改善临床症状和体质、副作用小、并能在多个环节上防治并发症等优点。其中中药地骨皮就有很好的降糖效果。地骨皮为茄科植物枸杞chinenseMill.或宁夏枸杞barbarum L的干燥根皮。中国药典记载地骨皮用于阴虚潮热，骨蒸盗汗，肺热咳嗽，咯血，衄血，内热消渴。地骨皮常于单味药或者复方中用于治疗糖尿病，药理作用机理研究教多，但大多以粗提物为研究对象和治疗材料，故疗效不够稳定和非常乐观，而如果对其提取物中主要活性物质成分进行精制，将对其疗效和初步定性定量方法的确定都将有很大的益处。本发明提供的地骨皮活性部位的制备，操作非常简单，重复性良好。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中对地骨皮在治疗糖尿病方面的上述不足，提供一种地骨皮活性部位的制备方法。
[0004]本发明所要解决的另一技术问题是，提供一种由上述方法制备得到的地骨皮活性部位、及其质量控制方法和保健与治疗应用。
[0005]本发明所要解决的上述技术问题通过以下方案予以实现:
一种地骨皮活性部位的制备方法，包括如下步骤:
51.将地骨皮粉碎后，用8~15倍的水，加热回流提取，再将提取液浓缩至
原体积1/3~1/5，加入浓度(体积)为90%~?00%的乙醇进行醇沉，至最终乙醇浓度(体积)为70-80%，取上清液浓缩得原液；
52.将原液通过101型大孔吸附树脂，用水洗树脂柱，收集洗脱液，浓缩得样品1;
53.将样品1通过强酸型阳离子交换树脂吸附，用3飞倍树脂体积的水冲洗树脂柱，弃去水洗脱液部分，再以3飞倍树脂体积的0.2~1Ν氨水洗脱，收集洗脱液，蒸干，得样品2 ；
54.将样品2通过强碱性阴离子交换树脂吸附，用3飞倍树脂体积的水洗脱，收集水洗脱液，浓缩干燥即得地骨皮活性部位。
[0006]作为一种优选方案，S1中用10倍的水，于100°C条件下回流提取2次，每次120分钟，再将提取液浓缩至原体积1/4，加入浓度为95%的乙醇进行醇沉，至最终乙醇浓度为70~75%。
[0007]作为一种优选方案，S2中所用大孔吸附树脂的重量为地骨皮原药材重量的f 3倍；用水量为大孔吸附树脂柱体积的2飞倍。
[0008]作为一种最优选方案，S2中所用的大孔吸附树脂的重量为地骨皮原药材重量的3倍；用水量为大孔吸附树脂柱体积的3倍。
[0009]作为一种优选方案，S3所述的强酸型阳离子交换树脂为交联聚苯乙烯系的强酸性树脂；S4所述的强碱性阴离子交换树脂为交联聚苯乙烯系的强碱性树脂。
[0010]作为一种最优选方案，交联聚苯乙烯系的强酸性树脂的型号为001X7或001X4或001 X 14.5 ;交联聚苯乙烯系的强碱性树脂的型号为201X7。
[0011]作为一种优选方案，S3所述的氨水的浓度为0.5N。
[0012]一种由上述制备方法制备得到的地骨皮活性部位。
[0013]作为一种优选方案，所述的地骨皮活性部位，其主要成分为生物碱。
[0014]作为一种优选方案，活性部位中主要成分的分子量范围为125~193。
[0015]上述地骨皮活性部位在制备抑制α -葡萄糖苷酶活性的药物中的应用。
[0016]上述地骨皮活性部位在制备用于预防和治疗糖尿病、肥胖症或高血脂的药物中的应用。
[0017]有益效果:本发明制备得到的地骨皮活性部位生物碱活性成分含量较高，全部为天然的α-葡萄糖苷酶抑制剂，具有作用机理清晰，疗效确切，成本低廉等特点，可用于预防和治疗糖尿病、肥胖症、高血脂等`疾病。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1为本发明地骨皮活性部位的高效液相色谱图。
[0019]图2为本发明地骨皮活性部位对糖苷霉抑制曲线图。
[0020]图3地骨皮活性部位的ES1-MS测试图谱。
【具体实施方式】
[0021]以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
[0022]实施例1.地骨皮活性部位的制备方法
S1.将地骨皮粉碎后，用10倍的水，于100°C条件下加热回流提取2次，每次120分钟，将提取液抽滤浓缩至原体积1/4，加入95%乙醇进行醇沉，终乙醇浓度约为75%，取上清液加压浓缩得原液。
[0023]S2.将原液通过大孔吸附树脂，地骨皮原药材与树脂的比例(重量)为1:3，用3倍的树脂床体积的去离子水洗树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩得样品I。
[0024]S3.将样品I通过强酸型阳离子交换树脂交换(型号为001X7的交联聚苯乙烯系的强酸性树脂)，用3倍树脂体积去离子水冲洗树脂柱，弃水洗脱液，再以3倍0.5N的氨水洗脱，收集洗脱液，减压蒸干，得样品2。
[0025]S4.将样品2通过强碱性阴离子交换树脂交换(型号为201X7交联聚苯乙烯系的强碱性树脂)，用3倍的树脂体积的去离子水洗脱，收集洗脱液，减压浓缩冷冻干燥即得地骨皮活性部位。
[0026]实施例2.地骨皮活性部位的一种液相分析方法
FM0C-C1 (芴甲氧基羰酰氯)是一种较新的氨基衍生化试剂，主要适用于伯胺和仲胺的衍生化，反应后的衍生物具有紫外吸收。而地骨皮的抗糖尿病活性分子中具有仲胺结构，因此可以采用FM0C-C1作为衍生化试剂进行衍生化。取实施例1中的样品3溶液50 μ 1于1.5ml的离心管中，加入0.4mol/L硼酸钾缓冲溶液200μ 1，再加入5mmol/L FM0C-C1 (50%乙腈配置)250μ 1,摇匀，室温放置30分钟,再加入lmol/L甘氨酸(Gly) 25 μ 1中止反应，再加入体积分数为1%的醋酸溶液80 μ 1,加水定容至1000 μ 1,最后溶液用有机膜过滤,即得测试液。结果如高效液相图1所示。
[0027]实施例3地骨皮活性部位对α-葡萄糖苷酶活性的抑制
地骨皮活性部位(实施例1制备得到)对α -葡萄糖苷酶活性的抑制:取ρΗ6.8磷酸盐缓冲溶液L 85 ml，依次加入0.1 U.πι 1的α -葡萄糖苷酶50 μ L，不同浓度的地骨皮活性部位溶液(0、1、2、3、4、5、6、7 mg ?π 1) 50 μ L,0.0116 mol.L-1 pNPG 50 yL，将上述反应体系在37°C恒温水浴保温30 min后，立即加入0.1 mol 的Na2C03溶液8 ml终止反应，每个浓度平行做3份，取平均值。
[0028]根据上述的方法和计算公式得到地骨皮活性部位对α -葡萄糖苷酶的抑制作用图，如图2所示。从图中可以明显地看出，地骨皮活性部位对α-葡萄糖苷酶具有很强的抑制作用。
[0029]实施例4地骨皮活性部位对正常小鼠餐后血糖的影响
地骨皮活性部位(实施例1制备得到)对正常小鼠餐后血糖的影响将体重18~22 g的正常小鼠按体重随机分为空白对照组(生理盐水)、阳性对照组(4.0 mg / kg阿卡波糖)和2个给药组,每组8只，2个给药组分别给药剂量为4.0mg/kg、8.0mg/kg。室温条件下喂养，饲以标准饲料，自由饮水，试验前16h禁食不禁水，分别取一定浓度的地骨皮精制部位、阿卡波糖给正常小鼠灌喂，同时灌喂淀粉(3g/kg)，分别在给药后0分钟、30分钟、60分钟、120分钟断尾采血，采用血糖仪测定小鼠血糖值。并做好实验记录。
[0030]表1.地骨皮活性部位对正常小鼠糖耐量的影响
【权利要求】
1.一种地骨皮活性部位的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: S1.将地骨皮粉碎后，用8~15倍的水，加热回流提取，再将提取液浓缩至 原体积1/3~1/5，加入浓度为90%~?00%的乙醇进行醇沉，至最终乙醇浓度为70~80%，取上清液浓缩得原液； S2.将原液通过大孔吸附树脂，用水洗树脂柱，收集洗脱液，浓缩得样品I; S3.将样品I通过强酸型阳离子交换树脂吸附，用3飞倍树脂体积的水冲洗树脂柱，弃去水洗脱液部分，再以3飞倍树脂体积的0.2~1Ν氨水洗脱，收集洗脱液，蒸干，得样品2 ； S4.将样品2通过强碱性阴离子交换树脂吸附，用3飞倍树脂体积的水洗脱，收集水洗脱液，浓缩干燥即得地骨皮活性部位。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，SI中用10倍的水，于 100°C条件下回流提取2次，每次120分钟，再将提取液浓缩至原体积1/4，加入浓度为95%的乙醇进行醇沉，至最终乙醇浓度为70-75%。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S2中所用大孔吸附树脂 的重量为地骨皮原药材重量的f 3倍；用水量为大孔吸附树脂柱体积的2飞倍。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，S2中所用的大孔吸附树 脂的重量为地骨皮原药材重量的3倍；用水量为大孔吸附树脂柱体积的3倍。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S3所述的强酸型阳离子 交换树脂为交联聚苯乙烯系的强酸性树脂；S4所述的强碱性阴离子交换树脂为交联聚苯乙烯系的强碱性树脂。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S3所述的氨水的浓度为0.5N。
7.权利要求1飞任一项所述的制备方法制备得到的地骨皮活性部位。
8.根据权利要求7所述的地骨皮活性部位，其特征在于，其主要成分为生物碱。
9.权利要求7所述的地骨皮活性部位在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于制备用于预防和治疗糖尿病、肥胖症或高血脂的药物中的应用。
【文档编号】A61P3/10GK103690677SQ201310299042
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年7月16日 优先权日:2013年7月16日
【发明者】周光雄, 焦呈亮 申请人:暨南大学