用于眼部病症的补体抑制素和其类似物的制作方法

用于眼部病症的补体抑制素和其类似物的制作方法
【专利摘要】本发明描述补体抑制素和其补体抑制类似物的用途，其用于治疗和/或预防年龄相关性黄斑变性和涉及黄斑变性的其它病况、脉络膜新生血管和/或视网膜新生血管。本发明也提供包含补体抑制素或其补体抑制类似物和第二治疗药剂的组合物。本发明也提供包含补体抑制素或其补体抑制类似物和凝胶形成材料(例如可溶性胶原)的组合物，以及投与所述组合物的方法。
【专利说明】用于眼部病症的补体抑制素和其类似物
[0001] 本申请是申请日为2006年10月6日，申请号为200680046037.1，发明名称为“用于眼部病症的补体抑制素和其类似物”的发明专利申请的分案申请。
_2] 相关申请交叉参考案
[0003]本申请案主张优先于2005年10月8日申请的临时申请案USSN 60/725, 484,2005年10月12日申请的临时申请案USSN 60/726，447、和2006年I月19日申请的临时申请案USSN 60/760, 974并主张所述临时申请案的权益，所有所述临时申请案皆以引用方式并入本文中。
【技术领域】【背景技术】
[0004]黄斑是眼视网膜中的小区域，约3至5毫米大小，Btt邻视神经。其为视网膜中最敏感区域并含有中央凹，中央凹是允许高视敏度且含有密集浓度视锥细胞的凹陷区，而视锥细胞是负责色觉的光感受器。
[0005]术语黄斑变性是指特征为黄斑中发生变性变化的多种不同疾病，其皆可导致中央视觉丧失。年龄相关性黄斑变性(ARMD)是发达国家中50岁以上年龄者功能性盲的最普遍病因(Seddon, JM.年龄相关性黄斑变性的流行病学(Epidemiology of Age-RelatedMacular Degeneration), Ogden, TE 等人编辑，Ryan SJ 主编，视网膜(Retina),第 II 卷，第3版，圣路易(St.Louis)，M0:莫斯拜(Mosby) ；2001:1039-50)。所述疾病的特征是视网膜、视网膜色素上皮(RPE)和底部脉络膜(位于 RPE下、视网膜和巩膜之间的的高度血管化组织)的进行性变性。据信视网膜色素上皮层对光感受器健康具有关键作用。此层中的细胞可每天再利用视色素(视紫红质)、吞噬光感受器尖端作为视杆细胞和视锥细胞再生的部分，并跨膜将流体运输至脉络膜，据信此可有助于预防神经视网膜分离。当RPE中的细胞停止正常作用时，其可导致光感受器变性，而使中央视觉恶化。
[0006]多种因素可以仍未完全理解的方式促使ARMD发病，这些因素包括氧化应激、可能具有自身免疫组份的炎症、遗传背景(例如突变)和环境或行为因素(例如吸烟和饮食)。不论根本病因为何，ARMD的临床标志是脉络膜疣(在RPE与布鲁赫氏(Bruch' s)膜间的空间积累的脂蛋白性物质的局部沉积物)的出现，其使RPE与脉络膜血管(脉络膜毛细血管层)分离。通常脉络膜疣是ARMD中最早的临床发现，并且脉络膜疣的存在、位置和数量可用于将疾病归类为不同阶段以及用于监测疾病进程(Ambati，J.等人，眼科调查(Surv.0phthalmol), 48 (3) =257-293,2003 优选实践模式:年龄相关性黄斑变性(PreferredPractice Pattern:Age_Related Macular Degeneration)，，，美国眼科学会(AmericanAcademy of Ophthalmology), 2003)。通常脉络膜抚是ARMD中最早的临床发现。
[0007]已将ARMD归类为“干性”和“湿性”(渗出性或新生血管性)形式。干性ARMD比湿性ARMD普遍得多，但干性形式可发展为湿性形式，并且这两种形式在众多病例中可同时发生。通常干性ARMD的特征在于RPE层中的细胞、上层光感受器细胞、以及通常脉络膜毛细血管层中的底部细胞的进行性细胞凋亡。伴随上层光感受器萎缩的RPE细胞死亡的融合区域(最小直径通常为至少175μπι)称为地图状萎缩。患有这种形式ARMD的患者的中央视觉经历缓慢的进行性恶化。
[0008]湿性ARMD的特征在于流体从自RPE和黄斑下脉络膜血管(脉络膜毛细血管层)长出的异常血管中流出和/或渗漏，此可导致视觉的突然和失能性丧失。据估计患者所经历的视觉丧失许多可归因于此类脉络膜新生血管(CNV)和其次级并发症。已鉴定新生血管性ARMD的亚型，其中血管瘤性增生源自视网膜并且随后扩张至视网膜下空间中，在某些病例中最终与脉络膜新血管相连(Yannuzzi，L.A.等人，视网膜，21 (5) =416-34, 2001) 0这种新生血管性ARMD形式(称为视网膜血管瘤性增生(RAP))可特别严重。黄斑脉络膜疣的存在是发生湿性和干性两种形式的ARMD的重要风险因素(上述Ambati，J.等人)。
[0009]ARMD的治疗选择是有限的，并且没有一种完全有效(Ambati，J.等人，眼科调查，48(3):257-293，2003，和其中的参考文献)。因此业内需要新方法来治疗ARMD以及特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、视网膜血管瘤性增生和/或血管渗漏的其它眼部疾病和病况。所述疾病和病况包括(但不限于)糖尿病性视网膜病和早产儿视网膜病。业内同样需要新方法来治疗特征为眼部炎症的眼部病症。

【发明内容】

[0010]本发明特别阐述上述需要。本发明提供治疗眼部病症的方法，其包括(i)提供需要治疗眼部病症的受试者；和(ii)将包含补体抑制素(compstatin)或其补体抑制类似物的组合物投与所述受试者。可治疗多种眼部病症中的任一种病症。例如，可治疗特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、眼部炎症或其任一组合的病症。
[0011]本发明另外提供包含以下物质的组合物:(i)补体抑制素或其补体抑制类似物；和(ii)与存在于受试者眼中的组份结合的部分，所述受试者易患或患有特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、眼部炎症或其任一组合的眼部病症。组份可为细胞标记或非细胞实体，例如存在于患有黄斑变性、眼部炎症等的受试者眼中所发现沉积物中的分子或复合物。`
[0012]本发明另外提供包含以下的组合物:(i)补体抑制素或其补体抑制类似物；和
(ii)血管生成抑制剂。
[0013]本发明另外提供包含多个补体抑制素类似物分子或部分的组合物，所述分子或部分与补体抑制素分子和/或补体抑制素类似物的聚合骨架或支架或多聚体相连。补体抑制素类似物部分可相同或不同。组合物可含有(例如)2、3、4或更多与聚合骨架或支架相连的不同补体抑制素类似物。
[0014]本发明另外提供包含以下的组合物:(i)补体抑制素或其补体抑制类似物；和(?)可溶性凝胶形成材料。在引入体内后，例如在与生理性流体接触后，组合物形成凝胶。在一实施例中，补体抑制素类似物与聚合骨架或支架相连。在一实施例中，组合物包含多个彼此互相连接的补体抑制素类似物分子。在上述组合物的某些实施例中，可溶性凝胶形成材料为可溶性胶原。组合物可另外包含纤维状胶原固体。在本发明某些实施例中，包含可溶性凝胶形成材料的任一组合物可另外包含血管生成抑制剂。可在体外使组合物形成凝胶植入体且可将其投与至眼中或眼附近。[0015]本发明另外提供包含补体抑制素或其补体抑制类似物的眼部植入体和聚合递送媒剂。在本发明某些实施例中，组合物另外包含与存在于受试者眼中的组份结合的部分，所述受试者易患或患有特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管或其任一组合的眼部病症。在本发明某些实施例中，任一上述组合物另外包含血管生成抑制剂。
[0016]本发明另外提供超分子复合物，其包含补体抑制素或其补体抑制类似物，或包含补体抑制素和其一或多种补体抑制类似物，或包含补体抑制素的多种不同补体抑制类似物。在某些实施例中，组合物含有多个补体抑制素分子(和/或补体抑制素类似物分子)，其与补体抑制素分子(和/或补体抑制素类似物)的聚合骨架或支架或多聚体相连。在某些实施例中，组合物另外包含可溶性凝胶形成材料。
[0017]本发明另外提供治疗特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、眼部炎症或其任一组合的眼部病症的方法，其包括将任一本发明组合物投与易患或患有所述眼部病症的受试者。组合物可作为唯一疗法来投与，或者也可同时或依序投与用于所述病症的一或多种其它治疗。所述治疗包括(但不限于)激光凝固、光动力学治疗(例如维速达尔(Visudyne)藝)、或抗血管生成疗法。
[0018]也提供测试本发明组合物和方法的方法。
[0019]也提供制备本发明组合物的方法。
[0020]在本发明任一实施例中，眼部病症可为黄斑变性相关病况、糖尿病性视网膜病、早产儿视网膜病、眼葡萄膜炎、角膜炎、巩膜炎、色素性视网膜炎、或特征为脉络膜和/或视网膜新生血管和/或眼部炎症的任何病况。在某些实施例中，眼部病症为黄斑变性相关病况，例如ARMD。在某些实施例中，眼部病症为糖尿病性视网膜病。
[0021]可用本发明组合物和方法治疗的眼部病症包括其中存在视网膜血管瘤性增生(RAP)的眼部病症。RAP涉及视网膜血管的异常`增生(视网膜新生血管)并且是新生血管性ARMD亚型的特性，但本发明组合物和方法可用于治疗任一病因的RAP，而不论其是否与黄斑变性相关。由此本发明提供抑制特征为视网膜血管瘤性增生的眼部病症的方法，其包括(i)提供需要治疗所述眼部病症的受试者；和(ii)将包含补体抑制素或其补体抑制类似物的组合物投与所述受试者。可使用本文所述任一方法投与组合物。在某些实施例中，将组合物经玻璃体内递送或紧邻眼后段递送。
[0022]在特性为血管生成抑制剂之本发明任一实施例中，血管生成抑制剂可为业内已知的任一血管生成抑制剂。例如，血管生成抑制剂可(但不必须)选自由以下组成的群组:哌加他尼钠(Macugen)馨或另一 VEGF核酸配体；路塞提斯(Lucentis)參、阿伐斯丁(Avastin) ?、或另一抗VEGF抗体；考不他汀(combretastatin)或其衍生物或前药(例如考不他汀A4前药)(CA4P) ;VEGF-肼(Trap) ;EVIZ0N? (角鲨胺乳酸盐)；AG_013958 (辉瑞(Pfizer)公司)；JSM6427(杰瑞尼(Jerini AG))、β2_ 糖蛋白 I ( β 2-GP1)、和抑制一或多种VEGF同型异构体(例如VEGF165)表达或抑制VEGF受体(例如VEGFR1)表达的短干扰RNA(siRNA)。
[0023]除非另外说明，否则本发明可利用分子生物学、化学、细胞培养、动物饲养、眼科学检验、和向受试者投与治疗药剂等的标准方法，并使用业内已接受的术语含义。本申请案涉及各种专利和出版物。本申请案中所提及的所有科学文献、书籍、专利和其它出版物的内容均以引用方式并入本文中。此外，以下出版物是以引用方式并入本文中:分子生物学的现行实验方案(Current Protocols in Molecular Biology)、免疫学的现行实验方案(CurrentProtocols in Immunology)、蛋白质科学的现行实验方案(Current Protocols in ProteinScience)和细胞生物学的现行实验方案(Current Protocols in Cell Biology),约翰威利公司(John ffiley&Sons)，N.Y., 2002 年 7 月出版；Sambrook> Russell 和 Sambrook,分子克隆:实验室指南(Molecular Cloning:A Laboratory Manual),第三版,冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press),冷泉港(Cold Spring Harbor),2001 ;库柏免疫学(Kuby Immunology),第四版，Goldsby, R.A.、Kindt, T.J.和 Osborne,B.(编辑)，W.H.弗里曼(Freeman)，2000 ;古德曼和吉尔曼的治疗的药理学基础(Goodmanand Gilman' s The Pharmacological Basis of Therapeutics),第十版，麦格罗-希尔(McGraw Hill), 2001 ；Katzung, B.(编辑)，基础和临床药理学(Basic and ClinicalPharmacology),麦格罗-希尔/阿尔普顿和兰格(Appleton&Lange);第九版(2003年12月);眼外科手术:原理和实践(Ophthalmic Surgery !Principles and Practice),第三版，W.B.桑德斯(Saunders)公司，2002 ;Albert, DM 和 Lucarelli, MJ(编辑)，眼外科手术程序的临床图册(Clinical Atlas of Procedures in Ophthalmic Surgery),美国医学会(American Medical Association), 2003。应了解业内技术发展程度已经超过了某些本文所引用参考文献中所阐述的内容。如果任一引用参考文献与本说明书冲突或不一致，除非通过修正案修改，否则通常以本说明书为准，并且应理解是由
【发明者】的判断来确定是否存在冲突或不一致并且可在任何时刻做出确定。对于标准氨基酸本文使用业内接受的缩略语。【专利附图】

【附图说明】
[0024]图1A-1E展示眼前段和后段(1A和1B)以及眼外层(1C-1E)的示意图。图1C绘示正常眼。图1D绘示患有干性ARMD的眼。图1E绘示患有渗出性ARMD的眼。ONL =外核层；IS =内节；0S =外节；RPE =视网膜色素上皮层；BM =布鲁赫氏膜；CC =脉络膜毛细血管层。自 Tezel, T.等人，分子医学动态(Trends in Molecular Medicine)，10 (9)，417—420,2004修改。
[0025]图2展示补体抑制素和相对补体抑制素具有增强的补体抑制活性的补体抑制素类似物(SEQ ID NO: 14)的示意图。所述图也展示补体抑制素和补体抑制素类似物抑制人类补体的IC5(I。所述图上面部分所绘示肽链中的氨基酸4和9是如左下针对补体抑制素所示和右下针对补体抑制素类似物所示。因此肽链中的标记框“X4”和“X9”代表所述图下面部分分别针对补体抑制素(左)和补体抑制素类似物(右)所显示的氨基酸X4和X9的侧链。
[0026]图3展示具有比补体抑制素更高抑制补体抑制活性的补体抑制素类似物(补体抑制素 C;SEQ ID NO:28)的示意图。(Katragadda 等人，49 (15)第 4616-4622 页，2006)。
[0027]图4是展示未接受治疗或接受玻璃体内注射白蛋白、玻璃体内注射痘苗补体控制蛋白(VCP) (10或30 μ g)、或玻璃体内注射补体抑制素类似物(30yg)的小鼠中平均CNV面积(以ym2计)的比较的图。
【具体实施方式】[0028]定义
[0029]“血管生成”是指新血管的形成、生长和/或发育。
[0030]在本文中，术语“血管生成抑制剂”和“抗血管生成剂”可互换使用，其是指能抑制或减少一或多种血管生成相关过程(包括(但不限于)内皮细胞增生、内皮细胞迁移和毛细血管形成)的试剂。此外，所述试剂可抑制流体自血管渗出。
[0031]除非上下文中另有明确说明或其它证据(不包括不允许所述数字超过可能值100%的情况)，否则当提及一数字时，术语“大约”或“约”一般包括在任一方向上(大小或小于)位于所述数字5%范围内的数字。
[0032]“生物相容性”是指对体外细胞实质上无毒的材料，例如如果将其添加至培养物中的细胞可导致低于或等于20%细胞死亡。对于接受者来说，如果材料的使用量和使用位置对接受者细胞实质上无毒，并且对接受者身体也不会引发或导致有害或不愉快的效应(例如免疫或炎症反应、不可接受的瘢痕组织形成等)，那么可认为这种材料具有生物相容性。
[0033]“生物可降解”意指在受试者细胞内或体内材料能以物理方式和/或化学方式裂解，例如通过在生理条件下水解、通过自然生物过程(例如存在于细胞内或体内的酶的作用等)来形成较小化学物质，可将其代谢并且(视需要)再利用和/或排泄或弃去。优选地生物可降解化合物具有生物相容性。
[0034]“生物大分子”是由生物系统中所发现类型的较小亚单位构成的大分子。生物大分子的实例包括多肽、核酸和多糖。通常生物大分子含有至少3个亚单位(例如氨基酸、核苷、单糖等)。生物大分子可(但不必须)为天然存在的多肽、核酸或多糖。生物大分子可被修饰，例如其可与诸如合成聚合物等非生物分子偶合。
[0035]“脉络膜新生血管”(CNV)是指自脉络膜毛细血管层产生的血管的异常发育、增生和/或生长。血管通常经过布鲁赫氏膜、RPE层和/或视网膜下空间扩张。
`[0036]“补体组份”或“补体蛋白”是补体系统活化中所涉及的分子或参与一或多种补体介导活性的分子。经典补体路径的组份包括(例如)Clq、Clr、Cls、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C5b-9复合物(也称作膜攻击复合物(MAC))和任一上述组份的活性片段或酶断裂产物(例如C3a、C3b、C4a、C4b、C5a等)。旁路路径的组份包括(例如)因子B、D、H和I以及备解素。
[0037]本文所用关于两种或更多种药剂(例如治疗药剂)的“同时投与”是指实施投与所用的剂量和时间间隔使所投与药剂在不少于微量的时间间隔内可在体内或在体内作用位点(例如在眼内)共存。时间间隔可谓数分钟(至少I分钟、1-30分钟、30-60分钟)、数小时(例如至少I小时、1-2小时、2-6小时、6-12小时、12-24小时)、数天(例如至少I天、1-2天、2-4天、4-7天等)、周(例如至少1、2或3周等)。因此，药剂可(但不必须)作为单一组合物的部分一起投与。此外，药剂可(但不必须)同时投与(例如在不超过5分钟内、或在不超过I分钟内)，或彼此相隔短时间投与(例如相隔不超过I小时、不超过30分钟、不超过10分钟、约5分钟)。根据本发明不同实施例，在上述时间间隔内投与的药剂可视为实质上同时投与。在本发明某些实施例中，在时间间隔内同时投与的药剂以有效浓度在体内(例如在血液中和/或在诸如视网膜等作用位点)存在。当同时投与时，每种药剂引起特定生物学反应所需的有效浓度可低于单独投与时每种药剂的有效浓度，由此使得相对于作为单一药剂投与药剂时所需的剂量，可降低一或多种药剂的剂量。多药剂效应可(但不必须)为加成性或协同性。可多次投与药剂。药剂的微浓度可(例如)低于引起特定生物学反应(例如期望生物学反应)所需浓度的大约5%。
[0038]活性药剂的“有效量”是指足以引起期望生物学反应的活性药剂之量。熟习此项技术者应了解，具体药剂的绝对有效量可根据以下因素而变化:期望生物学终点、所递送药剂、靶组织等。熟悉此项技术者另外可了解，可以单独剂量投与“有效量”或可通过投与多次剂量来达成“有效量”。例如，有效量可为足以达成一或多种以下效应的量:(i)抑制或预防脉络膜疣形成；(ii)导致脉络膜疣数量和/或尺寸的减小(脉络膜疣消退)导致脂褐素沉积物减小或预防脂褐素沉积；(iv)抑制或预防视觉丧失或减缓视觉丧失速率；(V)抑制脉络膜新生血管或减缓脉络膜新生血管速率；(Vi)导致特征为脉络膜新生血管的损伤的尺寸和/或数量减小；(Vii)抑制脉络膜新生血管或减缓视网膜新生血管的速率；(Viii)导致特征为视网膜新生血管的损伤的尺寸和/或数量的降低；(ix)改善视敏度和/或对比敏感度；(X)抑制或预防光感受器或RPE细胞萎缩或凋亡，或降低光感受器或RPE细胞萎缩或凋亡的速率；(xi)抑制或预防非渗出性黄斑变性向渗出性黄斑变性的发展；(xii)减少一或多种炎症标记，例如眼中诸如白细胞(例如嗜中性粒细胞、巨噬细胞)等炎症相关细胞的存在、业内已知内源炎症介质的存在、诸如眼部疼痛、发红、光敏性、视力模糊和漂浮物等一或多种症状。
[0039]“表达控制序列”是指在多核苷酸中可调节与其可操纵连接的核苷酸序列的表达(转录和/或转译)的核苷酸序列。
[0040]如同业内一般理解的那些术语一般，本文所用“渗出性”黄斑变性与”湿”型黄斑变性是同义的，即，均是指黄斑变性相关病况，例如特征为新生血管的ARMD。
[0041]“纤维状胶原固体”意指纤维状胶原的干性胶原固体。纤维状胶原是不可溶性胶原材料，其中胶原分子交互作用形成微原纤维，其自身通过侧对侧和端对端关联而聚集以形成稳定胶原原纤维。
[0042]“融合蛋白”是指含有连接到一起形成单一多肽链的两个或更多个不同多肽或其部分的多肽。可通过以下方法来产生编码融合蛋白的重组多核苷酸:自编码第一多肽的多核苷酸和框内编码第二多肽的附加多核苷酸去除终止密码子，使得所得重组多核苷酸编码包含两个多肽的单一多肽。
[0043]“一致性”是指两个或更多个核酸或多肽序列相同的程度。在评估窗口内(例如在目标序列的长度内)目标序列与第二序列的百分比一致性可通过以下方法来计算:对齐所述序列，确定评估窗口内所对置的相同残基(核苷酸或氨基酸)的数目(允许引入缺口以使一致性最大化)，将其除以位于窗口内的目标序列或第二序列(较长者)的残基总数，并且乘以100。缺口意指未由残基占据的序列部分。例如，序列AKL-SIG (SEQ ID NO: I)含有三个残基的缺口。当计算达成特定百分比一致性所需相同残基数时，将分数化整为最接近的整数。可使用业内已知的各种计算机程序来计算百分比一致性。例如，诸如BLAST2、BLASTN、BLASTP、缺口型BLAST等计算机程序可产生目标序列与各种公共数据库中任一数据库内的序列间的对齐并提供百分比一致性。将在Karlin和Altschul，美国国家科学院院刊(Proc.Natl Acad.Sc1.USA)，90:5873-5877,1993 中修改的 Karlin 和 Altschul 算法(Karlin和Altschul，美国国家科学院院刊，87 =22264-2268,1990)并入Altschul等人(Altschul 等人，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.) 215:403-410,1990)的 NBLAST 和 XBLAST程序中。为获得用于比较目的的有缺口对齐，使用Altschul等人(Altschul等人，核酸研究(Nucleic Acids Res.), 25:3389-3402,1997)中所述的缺口型 BLAST。当使用 BLAST 和缺口型BLAST程序时，可使用程序各自的默认参数。可使用PAM250或BLOSUM62矩阵。这些程序可参见具有URL www.ncb1.nlm.nih.rov的网站。在具体实施例中，以默认参数使用BLAST2来计算目标序列与第二序列的百分比一致性。
[0044]术语“经分离的”是指:1)与至少某些在自然界中通常与其关联的组份分离；2)通过人工过程来制备或纯化；和/或3)不存在于自然界中。例如，自产生分子的细胞中将其移出就是“经分离的”。化学合成的分子是“经分离的”。
[0045]对于两个或更多个部分，所用术语“经连接”意指所述部分以物理方式彼此关联或连接以形成足够稳定的分子结构，使得在连接形成的条件下和优选地在使用新分子结构的条件(例如生理条件)下部分可保持关联。在本发明某些优选实施例中，连接为共价连接。在其它实施例中，连接为非共价连接。可直接或间接连接部分。当两部分直接连接时，其彼此共价键结或足够接近使得两部分间的分子间力可维持其关联。当两部分间接连接时，其各自与第三部分共价或非共价连接，以此可维持两部分间的关联。一般来说，当将两部分称为通过“连接体”或“连接部分”来连接时，两经连接部分间的连接是间接的，并且通常每个经连接部分与连接体共价键结。连接体可为任一适当部分，其在符合部分稳定性的条件下(可根据条件适当保护两部分)于合理时间段内以足量与两部分反应连接以获得合理产率。
[0046]“脂质体”是通过脂双层(或多层)封装水性隔室来形成的人工精细球形颗粒。脂质体可用于递送某些本发明组合物。
[0047]对于递送本发明组合物或药剂来说，“局部投与”或“局部递送”是指不依赖于组合物或药剂通过血管系统向其既定靶组织或部位运输的递送。可将组合物或药剂直接递送至其既定靶组织或位点，或递送至其附近，例如紧邻既定靶组织或位点递送。例如，可通过注射或植入组合物或药剂，或通过注射或植入含有组合物或药剂的装置来递送组合物。在靶组织或位点附近局部投与后，组合物或药剂或其一或多种组份可扩散至既定靶组织或位点。应了解在完成局部递送后，治疗药剂的部分(通常仅为小部分所投与剂量)可进入血管系统并被运输至另一位置，包括回到其既定靶组织或位点。
[0048]“黄斑变性相关病况”是指其中黄斑变性或丧失功能性活性的多种病症和病况中任一种。发生变性或功能性活性丧失的原因可为(例如)细胞死亡、细胞增殖减少、正常生物功能丧失、或上述原因的组合。黄斑变性可导致和/或表现为黄斑细胞和/或细胞外基质的结构完整性的改变、正常细胞和/或细胞外基质构造的改变、和/或黄斑细胞功能的丧失。细胞可为通常存在于黄斑内或黄斑附近的任一细胞类型，包括RPE细胞、光感受器、和/或毛细血管内皮细胞。ARMD是主要黄斑变性相关病况，但已知多种其它病况，包括(但不限于)百思特黄斑营养不良(Best macular dystrophy)、索尔斯比眼底营养不良(Sorsbyfundus dystrophy)、玛勒特亚莱文提尼斯和多依娜蜂巢状视网膜营养不良(MallatiaLeventinese and Doyne honeycomb retinal dystrophy)。
[0049]用于阐述本发明目的的“标记”可指表征、指示或鉴定特定患病或生理状态(例如细胞凋亡性、癌性、正常)或表征、指示、或鉴定一或多种细胞类型、组织类型、或胚胎起源的任一分子部分(例如蛋白质、肽、mRNA或其它RNA物质、DNA、脂类、碳水化合物)。某些标记的存在与否或某些标记的量可指示患者、器官、组织或细胞的特定生理或患病状态。细胞标记为在细胞内或细胞上发现的标记。细胞标记可(但不必须)具有细胞类型特异性。例如，细胞类型特异性标记一般是存在于特定细胞类型、或目标细胞类型之上或之中的蛋白质、肽、mRNA、脂类或碳水化合物，其浓度比在许多其它细胞类型之上或之中的浓度更高。在某些实例中，细胞类型特异性标记仅以可检测浓度存在于特定目标细胞类型之上或之中。然而，应了解有用标记对目标细胞类型不必具有绝对特异性。例如，某些CD分子存在于在多种不同白细胞类型的细胞上。一般来说，针对特定细胞类型的细胞类型特异性标记在所述细胞类型中的表达程度比在参照细胞群中高至少3倍，参照细胞群可包括(例如)来自复数种(例如5-10种或更多种)不同组织或器官的大致等量的细胞的混合物。更优选地，细胞类型特异性标记存在的浓度比其在参照群中的平均表达高至少4-5倍、介于5-10之间、或超过10倍以上。优选地，细胞类型特异性标记的检测或测量使得可将目标细胞类型或类型与多种、大多数或所有其它类型相区分。一般来说，大多数标记的存在和/或丰富可使用标准技术来确定，例如RNA印迹法(Northern blotting)、原位杂交、RT-PCR、测序、免疫学方法(例如免疫印迹、免疫检测、或在用荧光标记抗体染色后实施免疫检测)、寡核苷酸或cDNA微阵列或膜阵列、蛋白质微阵列分析、质谱分析等。
[0050]如同业内通常使用的那些术语一般，本文所用“非渗出性”黄斑变性与“干性”型黄斑变性是同义的，均是指黄斑变性相关病况，例如其中不存在使用标准方法(例如荧光素血管造影术)可检测到的新生血管的ARMD。
[0051 ] “可操纵连接”或“可操纵关联”是指两种核酸序列间的关系，其中一种核酸序列的表达受:另一种核酸序列的控制、调节、调控等，或指两种多妝间的关系，其中一种多妝的表达受另一种多肽的控制、调节、调控等。例如，核酸序列的转录是由可操纵连接的启动子序列引导；核酸序列的转录后处理是由可操纵连接的处理序列引导；核酸序列的转译是由可操纵连接的转译调节序列引导；核酸 或多肽的转运、稳定或定位是由可操纵连接的转运或定位序列引导；以及多肽的转译后处理是由可操纵连接的处理序列引导。优选地，可操纵连接于第二核酸序列的核酸序列，或可操纵连接于第二多肽上的多肽是以直接或间接方式共价连接于此一序列上，但可接受任何有效的三维关联。
[0052]“多个”意指不止一个。
[0053]“多核苷酸”或“寡核苷酸”是指核苷酸的聚合物。本文所用寡核苷酸的长度通常低于100个核苷酸。多核苷酸或寡核苷酸也可称作核酸。通常，多核苷酸包括至少三个核苷酸。核苷酸包含含氮碱基、糖分子和磷酸基。核苷包含与糖分子相连的含氮碱基。在多核苷酸或寡核苷酸中，磷酸基与相邻核苷共价连接形成聚合物。聚合物可包括在DNA或RNA中存在的天然核苷(例如腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、去氧腺苷、去氧胸苷、去氧鸟苷、和去氧胞苷)、其它核苷或核苷类似物、含有经化学修饰碱基和/或经生物修饰碱基(例如甲基化碱基)的核苷、经插入碱基、经修饰糖等。通常认为多核苷酸或寡核苷酸中的磷酸基形成聚合物的核苷间骨架。在天然存在的核酸(DNA或RNA)中，骨架是通过Y至Y磷酸二酯键来连接。然而，本发明中也可使用多核苷酸和寡核苷酸含有经修饰股价或非天然存在的核苷间连接。所述经修饰骨架包括包括骨架中具有磷原子的骨架和和骨架中不具有磷原子的其它骨架。经修饰连接的实例包括(但不限于)硫代磷酸酯和5' -N-亚磷酰胺连接。关于可用于本文所述多核苷酸或寡核苷酸中的各种核苷酸、核苷和骨架结构以及制造其的方法的其它论述可参见Kornberg和Baker,DNA复制(DNA Replication),第二版(弗里曼，圣弗兰西斯科(San Francisco), 1992)、夏伊(Scheit),核苷酸类似物(NucleotideAnalogs)(约翰威利公司，纽约，1980)、美国专利公开案第20040092470号和其中的参考文献。本发明多核苷酸通常为DNA或RNA。
[0054]多核苷酸和寡核苷酸不一定必须沿整个分子长度一致地修饰。例如，在多核苷酸或寡核苷酸中的不同位置可存在不同核苷酸修饰、不同骨架结构等。本文所述任一多核苷酸可采用这些修饰。
[0055]多核苷酸可为任一尺寸或序列并且可为单链或双链。如果是单链，那么多核苷酸可为编码(有义)链或非编码(反义)链。[0056]可通过业内已知的任一方式来提供多核苷酸。在某些实施例中，多核苷酸可使用重组技术来构建(关于这些技术的更具体描述请参见Ausubel等人，分子生物学的现行实验方案(约翰威利公司，纽约(New York), 1999);分子克隆:实验室指南，第二版，Sambrook、Fritsch和Maniatis编辑(冷泉港实验室出版社:1989)。多核苷酸也可自天然来源获得并且自通常存在于自然界的污染组份纯化。可使用酶技术在细胞内或在体外合成多核苷酸。也可在实验室中以化学方式合成多核苷酸，例如使用标准固相化学来合成。多核苷酸可通过化学和/或生物方式来修饰。在某些优选实施例中，这些修饰可使多核苷酸的稳定性增强。修饰包括甲基化、磷酸化、封端等。
[0057]本文所用术语“多核苷酸序列”或“核酸序列”可指核酸材料自身并且不受限于序列信息(即五个碱基字母A、G、C、T或U中所选字母的顺序)，其在生化上表征具体核酸，例如DNA或RNA分子。除非另外说明，以5'至3'的方向表现核酸序列。
[0058]本文所用“多肽”是指氨基酸聚合物，视需要包括一或多种氨基酸类似物。蛋白质是由一或多种多肽组成的分子。肽是相对短的多肽，其长度通常为约2至60个氨基酸。术语“蛋白质”、“多肽”和“肽”可互换使用。本文所用多肽可含有氨基酸，例如在蛋白质中天然存在的氨基酸、在蛋白质中并非天然存在的氨基酸和/或非氨基酸的氨基酸类似物。本文所用氨基酸“类似物”可为结构上类似氨基酸的不同氨基酸、或除结构上类似氨基酸的氨基酸以外的化合物。蛋白质中普遍存在的20种氨基酸(“标准”氨基酸)的大量业内认可的类似物是已知的。可对多肽中的一或多个氨基酸加以修饰，例如，通过添加化学实体(例如碳水化合物基团、磷酸基、法呢基、异法呢基、脂肪酸基团、共轭连接体)、官能化或其它修饰等来达成。某些非限制性适宜类似物和修饰阐述于WO 2004026328中。多肽可(例如)在N末端乙酰化和/或(例如)在C末端酰胺化。
[0059]天然或其它化学修饰(例如上述修饰)可存在于多肽中的任一位置，包括肽骨架、氨基酸侧链和氨基或羧基末端。给定多肽可含有多种修饰类型。例如，由于遍在蛋白化，多肽可具支链，并且其可为具有或不具有分支的环。可使多肽与聚合物或聚合基质、树枝状聚合物、纳米颗粒、微粒、脂质体或类似物偶合、用其封装多肽、或将多肽包埋其中。
[0060]例如，多肽可自天然来源纯化，在体外或在体内于适宜表达系统中使用重组DNA技术制造(例如通过重组宿主细胞或在转基因动物或植物中)、通过化学方式合成(例如习用固相肽合成和/或涉及经合成肽的化学连接的方法(参见例如Kent，S.，肽科学杂志(JPept Sci), 9 (9):574-93，2003))、或上述方法的任一组合。这些方法是熟知的，并且熟习此项技术者能选择并实施适宜方法以合成本文所述的肽和多肽。多肽可包含一或多个化学连接位点，如(例如)美国专利公开案第20040115774号所述。在某些实施例中，以聚合物使用一或多种其中所述或所引用的方法来修饰本发明多肽。
[0061 ] 本文所用术语“多肽序列”或“氨基酸序列”可指多肽材料自身并且不受限于序列信息(即用作氨基酸名称缩写的字母和密码中所选字母或三字母密码的顺序)，其在生化上表征多肽。除非另有说明，本文所表现的多肽序列是以N末端至C末端的方向来表现。
[0062]“眼后段”是指晶状体后的眼睛部分，包括玻璃体、脉络膜和视网膜(包括黄斑)。
[0063]本文所用“经纯化”意指实体或物质与纯化前与其共存的一或多种其它实体或物质分离。实体或物质可部分经纯化、基本经纯化或纯净的。当将诸如核酸或多肽等物质或实体自除溶剂和溶剂中所含任一离子外的实质上所有其它化合物或实体移出时，可将其视为纯净，即其构成组合物干重的至少约90%、更优选地至少约91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或99%以上。部分或基本经纯化的化合物或实体(例如核酸或多肽)可与以重量计至少50%、至少60%、至少70%、或至少80%的天然与其共存的材料分离，例如诸如细胞蛋白质和/或核酸等细胞材料。在某些实施例中，组合物中的经纯化核酸或多肽以干重计分别构成总核酸或多肽的至少10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80%、90%、95%、99%或甚至更高。评价纯度的方法是业内已知并且包括色谱法、免疫学方法、电泳法等。可纯化本文所述任一多核苷酸或多肽。
[0064]本文所用“反应性官能团”是指包括(但不限于)以下的基团:烯烃、乙炔、醇、苯酚、醚、氧化物、卤化物、醛、酮、羧酸、酯、酰胺、氰酸盐、异氰酸盐、硫氰酸盐、异硫氰酸盐、胺、肼、腙、酰肼、重氮、重氮基、硝基、腈、硫醇、硫化物、二硫化物、硫氧化物、砜、磺酸、硫酸、缩醛、缩酮、酐、硫酸盐、次磺酸、异腈、脒、酰亚胺、酰亚胺酯、硝酮、羟胺、肟、异羟肟酸、硫异羟肟酸、丙二烯、原酸酯、亚硫酸盐、烯胺、炔胺、脲、假脲、氨基脲、碳化二亚胺、氨基甲酸酯、亚胺、叠氮化物、偶氮化合物、氧化偶氮化合物和亚硝基化合物。反应性官能团也包括经常用于制备生物结合物的基团，例如N-羟基琥珀酰亚胺酯、马来酰亚胺、巯基和类似物(参见例如 Hermanson, G.,生物结合技术(Bioconjugate Techniques),学术出版社(Academicpress),圣地亚哥(San Diego), 1996)。制备每种这些官能团的方法是业内熟知的，并且熟习此项技术者能将其应用于特定目的或针对特定目的对其进行修饰(参见例如Sandler和Karo编辑，有机官能团制剂(ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATIONS)，学术出版社，圣地亚哥，1989)。
[0065]“重组宿主细胞”、“宿主细胞”和其它此类术语表示原核或真核细胞或细胞系，其可用作外源核酸(通常为DNA)(例如编码目标多肽的核酸部分插入其中的表达载体)的接受者。这些术语包括将载体或其它核酸引入其中的原始细胞的后代。适宜单细胞宿主细胞包括常规上用于表达多核苷酸(例如真核、哺乳动物和/或病毒多核苷酸)的细胞中的任一种，包括(例如)原核生物，例如E.coli ;和真核生物，包括(例如)真菌，例如酵母(例如甲醇酵母(Pichia pastoris));昆虫细胞(例如Sf 9)、植物细胞和动物细胞，例如哺乳动物细胞，例如CH0、R1.1、B_W、L_M、非洲绿猴肾细胞(African Green Monkey Kidneycells)(例如C0S-1、C0S-7、BSC-U BSC-40和BMT-10)以及经培养人类细胞。诸如“宿主细胞”等术语也可用于表示在引入外源核酸前可用作其接受者的细胞或细胞系。“重组多核苷酸”是含有据发现在自然界未结合在一起的核酸部分的多核苷酸。“重组多肽”是通过重组宿主细胞转录和转译外源核酸所产生的多肽，通常在将含有编码重组多肽的部分的表达载体引入宿主细胞后进行。
[0066]“视网膜新生血管”是指视网膜上或视网膜中(例如在视网膜表面上)血管的异常发育、增生和/或生长。
[0067]两种或更多种药剂的“依序投与”是指向受试者投与两种或更多种药剂，投与方式不会使所述药剂在受试者体内或在体内相关活性位点以大于微浓度的浓度共存。可(但不必须)交替投与药剂。每种药剂可多次投与。
[0068]“特异性结合”一般是指靶多肽(或更一般来说靶分子)与诸如抗体或配体等结合分子间的物理关联。关联通常取决于靶中是否存在可被结合分子识别的特定结构特性，例如，抗原决定簇、表位、结合袋或裂口。例如，如果抗体对表位A具有特异性，则在同时含有自由经标记A和与其结合的结合分子的反应中，含表位A的多肽的存在或自由未经标记A的存在可降低与结合分子结合的经标记A的量。应了解，特异性并非是绝对的，但一般是指其中发生结合的情况。例如，业内熟知除了靶分子中存在的表位之外，多种抗体还可与其它表位发生交叉发应。此交叉反应性是否可接受需视应用抗体的场合而定。熟习此项技术者能够选择出具有足够特异性程度而可在任何给定应用(例如，用于检测靶分子，用于治疗目的等)中适当发挥作用的抗体。同样应了解，可结合其它因素评估特异性，例如结合分子与靶的亲和性对结合分子与诸如竞争者等其它靶的亲和性。如果结合分子表现对期望检测的靶分子具有高亲和性并对非靶分子具有低亲和性，则抗体可能为可接受试剂。在一或多种情况下确认结合分子的特异性后，可将其用于其它情况(优选为相似情况)中并且无需重新评估其特异性。如果在测试条件下(例如在生理条件下)亲和性(如通过平衡解离常数Kd来测量)为10_3M或更低，优选为10_4M或更低，更优选为10_5M或更低，例如10_6M或更低、IO-7M或更低、IO-8M或更低、或IO-9M或更低，则可认为两种或更多种分子的结合是特异性的。
[0069]用于氨基酸序列的“显著序列同源性”意指相对于参照序列，序列表现至少约20%相同或保守替代的氨基酸、优选地至少约30 %、至少约40 %、至少约50 %、至少约60 %相同或保守替代的氨基酸、期望地至少约70%相同或保守替代的氨基酸、更期望地至少约80%相同或保守替代的氨基酸、以及最期望地至少约90%相同或保守替代的氨基酸。当比较两种或更多种序列时，可将其中任一种视为参照序列。可使用FASTA或BLASTP算法以默认参数来计算百分比一致性。可使用PAM250或BL0SUM62矩阵。出于计算相同或保守替代的氨基酸的％的目的，认为保守替代残基与其所替代的残基相同。可根据Stryer，L，生物化学(Biochemistry),第三版，1988来界定保守替代,根据此文献,对于诸如电荷、疏水性、芳香性等侧链性质，以下群组中的氨基酸具有相似特性:(I)脂肪族侧链:G、A、V、L、I ;(2)芳香族侧链:F、Y、W ； (3)含硫侧链:C、M ； (4)脂肪族羟基侧链:S、T ； (5)碱性侧链:K、R、H ； (6)酸性氨基酸:D、E、N、Q;(7)环状脂肪族侧链:P，可认为其属于群组(I)。
[0070]本文所用“受试者”是指(例如)出于实验、诊断和/或治疗目的向其递送药剂的个体。优选受试者为哺乳动物，具体来说为家养哺乳动物(例如狗、猫等)、非人灵长类或人。
[0071]“超分子复合物”是指包含至少两种以物理方式彼此关联的实体的集合体，其中一或多种实体并非与另一实体共价连接，而是改为通过一或多种非共价交互作用(例如离子交互作用、氢键、疏水性交互作用、η堆积作用、配价键等)与所述实体相连。例如，可将一或多种实体诱陷、包埋、包装、或封装入另一实体内，或使其与另一实体缠结，或使其溶于另一实体中，或用另一实体将其浸溃，或使其吸收至另一实体中，或使其与另一实体结合，以维持实体间的物理关联。实体可为天然存在或合成的。例如，其可为多肽、非多肽聚合物、核酸、脂类、小分子、碳水化合物等。一或多种实体可为刚性或柔性聚合物支架、诸如微粒、纳米颗粒、脂质体、树枝状聚合物等三维结构。超分子复合物可含有任何数量的分子和/或其它实体或其组合。
[0072]本文所用“治疗”是指提供治疗，即向受试者提供任一类型的内科或外科治疗。提供治疗的目的可为逆转、减轻或抑制疾病、病症或病况的发展、预防或降低其发生的可能性，或逆转、减轻、抑制或预防疾病、病症或病况的一或多种症状或现象、预防或降低其发生的可能性。“预防”是指在至少某些个体中于至少一段时间内使疾病、病症、病况或其症状或现象不发生。治疗可包括在指示病况(例如黄斑变性或糖尿病性视网膜病)的一或多种症状或现象发生后向受试者投与药剂，其目的为(例如)逆`转、减轻、降低病况的严重度和/或抑制或预防病况的发展，和/或逆转、减轻、降低病况的一或多种症状或表现的严重度和/或抑制病况的一或多种症状或现象。可将本发明组合物投与受试者，其已发生眼部疾病(例如渗出性或非渗出性ARMD或糖尿病性视网膜病)，或相对于一般人群的成员其发生此一病症的风险增加。可预防性投与本发明组合物，即在病况的任何症状或现象发生前投与。通常在这种情况下，受试者具有发生病况的风险。
[0073]本文所用“载体”是指能介导核酸分子进入(例如转移、运输等)细胞的核酸或病毒或其部分(例如病毒壳体)。如果载体是核酸，则一般使待转移核酸分子与载体核酸分子连接(例如插入)。核酸载体可包括引导自主复制的序列(例如复制起点)或可包括足以使部分或全部核酸可整合至宿主细胞DNA中的序列。可用核酸载体包括(例如)DNA或RNA质粒、粘粒、和天然存在或经修饰病毒基因组或其部分、或可包装至病毒壳体中的核酸(DNA或RNA)。质粒载体通常包括复制起点和一或多种可选标记。质粒可包括部分或全部病毒基因组(例如病毒启动子、增强子、加工或包装信号等)。可用于将核酸分子引入细胞中的病毒或其部分(例如病毒壳体)称为病毒载体。可用病毒载体包括腺病毒、逆转录病毒、慢病毒、痘苗病毒和其它痘病毒、单纯疱疹病毒和其它病毒。当将病毒载体引入宿主细胞中时，其可含有或不含有产生感染性病毒的充足病毒遗传信息，即病毒载体可具有复制缺陷，并且这种复制缺陷病毒载体可优选用于治疗性应用。如果缺少充足信息，其可(但不必须)由宿主细胞或由引入细胞中的另一载体来供应。可将待转移核酸纳入天然存在或经修饰病毒基因组或其部分中，或其可作为分开核酸分子存在于病毒或病毒壳体内。应了解包括部分或全部病毒基因组的某些质粒载体通常包括足以引导可包装至病毒壳体中的核酸转录的病毒遗传信息，和/或足以产生可整合至宿主细胞基因组中的核酸和/或产生感染性病毒的病毒遗传信息，有时亦可将其称作病毒载体。如果缺少充足信息，其可(但不必须)由宿主细胞或由引入细胞中的另一载体来供应。
[0074]表达载体为包括调节序列的载体，例如，足以引导可操纵连接核酸转录的表达控制序列(例如启动子)。表达载体包括用于表达的充足顺式作用元件；用于表达的其它元件可由宿主细胞或体外表达系统来供应。所述载体通常包括限制性内切酶的一或多个适宜定位位点，以帮助将待表达核酸引入载体中。
[0075]特定多肽或多核苷酸的“变体”具有关于多肽或核酸(可称作“原始多肽或多核苷酸”)的一或多种改变(例如加成、取代和/或缺失，其可统称为“突变”)。因此变体可比原始多肽或多核苷酸短或长。术语“变体”涵盖“片段”。“片段”是多肽的连续部分，其比原始多肽短。在本发明某些实施例中，在变体的连续部分内变体多肽与原始多肽具有显著序列同源性，所述连续部分包含变体长度或多肽长度(较短者)的至少50%、优选地至少60%、至少70 %、至少80 %、至少90 %、至少95 %或更高。在本发明某些实施例中，在变体的连续部分内变体多肽具有与原始多肽多肽实质上同源的序列，所述连续部分包含变体长度或多肽长度(较短者)的至少50%、优选地至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或更高。在非限制性实施例中，在包含变体的90%至100%的变体连续部分内变体与原始序列具有至少80%的一致性，例如在100%的变体长度或多肽长度内(较短者)。在另一非限制性实施例中，在包含变体的90%至100%的变体连续部分内变体与原始序列具有至少80%的一致性，例如在100%的变体长度或多肽长度上(较短者)。在具体实例中，变体多肽序列相对于原始序列具有N氨基酸差异，其中N为I至10之间的任一整数。在其它具体实施例中，变体多肽序列相对于原始序列具有N氨基酸差异，其中N为I至20之间的任一整数。氨基酸“差异”是指氨基酸的取代、插入或缺失。[0076]在本发明某些实施例中，片段或变体与原始多肽具有足够结构相似性，使得当使其三维结构(实际结构或预测结构)重叠在原始多肽的结构上时，重叠体积为原始多肽结构总体积的至少70%、优选地至少80%、更优选地至少90%。可通过使蛋白质结晶来测定片段或变体的部分或全部三维结构，其可使用标准方法来实施。或者，也可使用标准方法生成NMR解析结构。可使用诸如MODELER (Sal i，A.和Blundel I，TL，分子生物学杂志，234，779-815,1993)等建模程序或任何其它建模程序来生成预期结构。如果可获得相关多肽的结构或预期结构，模型可以所述结构为基础。可使用程序的PR0SPECT-PSPP套件(Guo，JT等人，核酸研究，32，(万维网服务器版(Web Server issue)):W522_5，2004年7月I日)。
[0077]优选地，变体或片段的一种、一种以上、或所有生物学功能或活性均与原始分子的对应生物学功能或活性实质上相似。例如，如果变体或片段的活性为原始分子活性的至少20%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%，为原始分子活性的至多约100%、约125%、或约150%，则可认为变体或片段的活性与原始分子的活性实质上相似。在其它非限制性实施例中，如果产生效应所需变体的量或浓度为产生所述效应所需原始分子的量或浓度的.5至5倍，则可认为变体或片段的活性与原始分子的活性实质上相似。
[0078]本文所用“烷基”是指饱和直链、具支链或环状烃，其具有约I至约22个碳原子(以及其中碳原子数的范围和具体数值的所有组合和次组合)，其中在本发明某些实施例中优选地具有约I至约12、或约I至约7个碳原子。烷基包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、环戊基、异戊基、新戊基、正己基、异己基、环己基、环辛基、金刚烷基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基和2，3-二甲基丁基。
[0079]本文所用“卤素”是指F、Cl、Br或I。
[0080]本文所用“芳基”是指视需要经取代的单环或二环芳香族环系统，其具有约5至约14个碳原子(以及其中碳原子数的范围和具体数值的所有组合和次组合)，其中优选地具有约6至约10个碳原子。非限制性实例包括(例如)苯基和萘基。
[0081]本文所用“芳烷基”是指具有芳基取代基的烷基，且其具有约6至约22个碳原子(以及其中碳原子数的范围和具体数值的所有组合和次组合)，其中在某些实施例中优选地具有约6至约12个碳原子。芳烷基可视需要经取代。非限制性实例包括(例如)苄基、
萘基甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、苯基乙基和二苯基乙基。
[0082]本文所用术语“烷氧基”是指视需要经取代的烷基-O-基，其中烷基如先前所定义。实例性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和庚氧基。
[0083]本文所用“羧基”是指-C ( = O) OH基团。
[0084]本文所用“烷氧基羰基”是指-C ( = O) O-烷基，其中烷基如先前所定义。
[0085]本文所用“芳酰基”是指_C( = O)-芳基，其中芳基如先前所定义。实例性芳酰基包括苯甲酰基和萘甲酰基。
[0086]通常经取代化学部分包括一或多个替代氢的取代基。实例性取代基包括(例如)卤素、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、巯基、羟基(-0H)、烷氧基、氰基(-CN)、羧基(-C00H)、-C ( = O) O-烷基、氨基羰基(-C ( = O) NH2)、-N-取代氨基羰基(-C ( = O) NHR")、CF3、CF2CF3和类似物。对于上述取代基，每个部分R"可独立为(例如)H、烷基、环烷基、芳基或芳烷基中任一种。
[0087]本文所用“L-氨基酸”是指通常存在于蛋白质中的天然存在的左旋α -氨基酸或那些α-氨基酸的烷基酯。术语“D-氨基酸”是指右旋α-氨基酸。除非另外说明，本文所涉及的所有氨基酸均为L-氨基酸。
[0088]本文所用“芳香族氨基酸”是包含至少一个芳香族环的氨基酸，例如其包含芳基。
[0089]本文所用“芳香族氨基酸类似物”是包含至少一个芳香族环的氨基酸类似物，例如其包含芳基。
[0090]【具体实施方式】
[0091]概述
[0092]本发明提供治疗特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、眼部炎症或上述特征的任一组合的眼部病症的组合物和方法。词组“特征为”意欲表示黄斑变性、CNV、RNV和/或眼部炎症是病症的特征性(即典型)特性。黄斑变性、CNV、RNV和/或眼部炎症可为病症的限定性和/或诊断性特性。特征为一或多种这些特性并且可用本发明组合物和方法来治疗的实例性病症包括(但不限于)黄斑变性相关病况、糖尿病性视网膜病、早产儿视网膜病、增生性玻璃体视网膜病变、眼葡萄膜炎、角膜炎和巩膜炎。如上文所提及，黄斑变性是指特征为由于黄斑恶化导致中央视觉丧失的各种变性病况。这些病况中最常见的是年龄相关性黄斑变性(ARMD)，其存在“干性”和“湿性”两种形式。
[0093]眼部炎症可影响大量眼部结构，包括结膜、角膜、巩膜外层、巩膜、葡萄膜、视网膜、血管系统、视神经和眼眶。眼葡萄膜炎是眼葡萄膜中炎症的一般形式，例如葡萄膜任一结构中的炎症，包括虹膜、睫状体或脉络膜。眼葡萄膜炎的具体类型包括虹膜炎、虹膜睫状体炎、睫状体炎、扁平部睫状体炎和脉络膜炎。眼葡萄膜炎可由多种病因引发并与多种疾病相关，包括(但不限于)风湿性疾病(例如风湿病(例如强直性脊柱炎和青少年类风湿性关节炎))、某些传染病(例如结核病和梅毒)、其它病况(例如结节病、全身性红斑狼疮、化学性损伤、外伤、外科手术等。在一实施例中，眼葡萄膜炎的类型为前葡萄膜炎。在另一实施例中，眼葡萄膜炎的类型为后葡萄膜炎。角膜炎是指角膜的炎症。角膜炎具有多种病因，包括细菌、病毒或真菌感染、外伤和过敏反应。角膜的阿米巴(Amoebic)感染(例如由棘阿米巴属(Acanthamoeba)引发)是接触镜配戴者的特别问题。巩膜炎是指巩膜的炎症。眼葡萄膜炎、角膜炎和巩膜炎以及其诊断方法是业内所熟知的。各种影响眼的炎症性病况的症状可包括(但不限于)眼部疼痛、发红、光敏性、流泪、视力模糊、漂浮物。人们熟知各种类型眼部炎症的发生与各种局部或全身性疾病相关，某些疾病是上文所述的。在某些实例中病因可能仍然未知。
[0094]本发明提供治疗眼部病症的方法，所述眼部病症的特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症或其任一组合，所述方法包括(i)提供需要治疗眼部病症的受试者；和(ii)向所述受试者投与包含补体抑制素或其补体抑制类似物的组合物。本发明另外提供在患有或易患眼部病症的受试者眼中抑制CNV、RNV或抑制二者的方法，所述眼部病症的特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼或其任一组合，所述方法包括以下步骤:向受试者眼后段或紧邻受试者眼后段投与包含补体抑制素或其补体抑制类似物的组合物。本发明另外提供在患有或易患特征为眼部炎症的眼部病症的受试者眼中抑制CNV、RNV或抑制二者的方法，其包括以下步骤:向受试者眼后段或紧邻受试者眼后段投与包含补体抑制素或其补体抑制类似物的组合物。
[0095]本发明另外提供治疗与补体活化相关或至少部分由补体活化引发的眼部病症的方法，所述方法包括以下步骤:向患有或易患所述眼部病症的受试者投与补体抑制素类似物。在一实施例中，病症为ARMD。在一实施例中，病症为糖尿病性视网膜病。在一实施例中，病症为眼葡萄膜炎。在一实施例中，病症为青光眼。本发明另外包括治疗眼部病症的方法，所述眼部病症的特征在于编码补体组份的基因的多态性或所述多态性与所述基因的连锁不平衡使罹患所述病症的风险增加，所述方法包括以下步骤:向患有或易患所述眼部病症的受试者投与补体抑制素类似物。多态性可为能增加补体活性的多态性。受试者的多态性可为纯合或杂合的，或者可不表现多态性。受试者可具有发生病症的一或多种其它风险因素。本发明另外包括治疗眼部病症的方法，所述眼部病症的特征在于编码补体组份的基因的多态性或所述多态性与所述基因的连锁 不平衡使罹患所述病症的风险降低，所述方法包括以下步骤:向患有或易患所述眼部病症的受试者投与补体抑制素类似物。多态性可为能降低补体活性的多态性。受试者的多态性可为纯合或杂合的，或者可不表现多态性。受试者可具有发生病症的一或多种风险因素。在本发明某些实施例中，病症为ARMD。
[0096]可参照图1各图来理解ARMD中发生的事件。图1A和IB显示存在于眼前段和后段中的结构，包括视网膜，其含有黄斑。图1C-1E绘示正常眼(1C)、患有干性ARMD的眼(ID)、和患有渗出性(湿性)ARMD的眼(IE)的外层。外核层(ONL)含有视杆细胞和视锥细胞光感受器的细胞核。每个光感受器含有内节(IS)和外节(OS)，后者含有色素视紫红质，其在暴露于光中后起始光转导级联。视网膜色素上皮层(RPE)位于光感受器下方和布鲁赫氏膜上方，布鲁赫氏膜是分离RPE与毛细血管网(脉络膜毛细血管层(CC))的细胞外基质层。
[0097]干性ARMD的特征在于存在称为脉络膜疣的沉积物以及RPE与BM的分离，其经常伴随RPE萎缩和细胞凋亡以及底部脉络膜毛细血管层和上层光感受器的损失，在某些实例中其可导致一定面积的地图状萎缩，其可最终融合形成大型斑。在渗出性ARMD中，新血管自脉络膜毛细血管层穿过布鲁赫氏膜生长并且可扩张至RPE和光感受器细胞层中(脉络膜新生血管)。这些血管可流血和渗漏流体，其由于诸如RPE和/或视网膜剥离等事件经常导致突然视觉丧失。最终可形成纤维血管疤，其导致不可逆的视觉丧失。在某些新生血管性ARMD形式中，血管瘤性增生起源于视网膜并随后扩张至视网膜下空间中，在某些病例中最终与新脉络膜血管相通。这种新生血管性ARMD形式称作视网膜血管瘤性增生(RAP)，其可特别严重。已表明视网膜内的血管瘤性增生是这种新生血管性ARMD形式中血管源性过程的的第一个现象。在血管瘤性增生周围，扩张的视网膜血管和视网膜前、视网膜内和视网膜下出血以及渗出物随着过程的延续进展至视网膜深处和视网膜下空间中。
[0098]本发明提供抑制在ARMD中发生的一或多种事件或过程的组合物和方法。本发明部分基于以下发现:某些补体抑制剂尤其适合用作治疗药剂用于黄斑变性和相关病况、糖尿病性视网膜病、和/或与这些病症中任一种相关的脉络膜新生血管、或其它病症。如实例I所述，环肽补体抑制素的类似物显示可在动物模型中有效地显著抑制CNV的发生，即补体抑制素类似物可有效预防至少某些原本已发生的CNV。实例I也展示显示补体活化的另一抑制剂的数据，在动物模型中痘苗病毒补体控制蛋白(VCP)也可显著抑制CNV的发生，SPVCP可有效预防至少某些原本已发生的CNV。就
【发明者】所知，此成果首次证实投与补体活化抑制剂可有效抑制并至少部分预防CNV的形成，并首次证实这些药剂可有效治疗眼部病症(例如本文所论述的眼部病症)。
[0099]为有助于理解本发明，首先简要概述补体系统。其它信息可参见本文所引用的参考文献。之后的段落阐述补体抑制素和其类似物、含有补体抑制素和/或其类似物的组合物、使用方法等。
[0100]补体路径
[0101]补体系统在多种生理过程中具有关键作用，包括对损伤的反应和对诸如传染源等外来实体的防御。同样已知补体系统在多种疾病中发挥作用(Makrides, SC, Pharm Rev.,50(1):59-87)。补体系统包含30种以上在名为经典路径和旁路路径的两种主要路径中涉及的血清和细胞蛋白(库柏免疫学，2000)。
[0102]经典路径通常通过抗原和IgM或IgG抗体的复合物与Cl的结合来触发(但某些其它活化剂也可起始此路径)。经活化Cl可断裂C4和C2以产生C4a和C4b以及C2a和C2b。C4b和C2a组合形成C3转化酶，其可断裂C3以形成C3a和C3b。C3b与C3转化酶的结合产生C5转化酶，其可将C5断裂为C5a和C5b。C3a、C4a和C5a是过敏毒素并在急性炎症反应中介导多个反应。C3a和C5a也是趋化性因子，其吸引诸如嗜中性粒细胞等免疫系统细胞。C3和C5转化酶活性受补体活化调节剂(RCA)家族(也称为补体控制蛋白(CCP)家族)的多个内源性成员的控制，其包括I型补体受体(CRl ;C3b:C4b受体)、2型补体受体(CR2)、膜辅蛋白(MCP ；CD46)、促衰变因子(DAF)、因子H(fH)、和C4b结合蛋白(C4bp)。Makrides, 1998和其中的参考文献阐述补体系统和其组份。RCA蛋白同样阐述于美国专利% 6,897, 290 号中。
[0103]旁路路径是由微生物表面和各种复合多糖体来起始。在此路径中，通过以低程度自发进行的C3断裂获得的C3b (例如)在细胞表面上与靶结合，并与因子B形成复合物，之后由因子D将其断裂，获得C3转化酶。C3的断裂和C3b的另一分子与C3转化酶的结合产生C5转化酶。这种路径的C3和C5转化 酶受0?1、0八?、1?^和册调节。这些蛋白质的作用模式涉及促衰变活性(即分裂转化酶的能力)、在由因子I降解C3b或C4b中用作辅因子的能力，或同时涉及二者。
[0104]在两种路径中产生的C5转化酶均可将C5断裂产生C5a和C5b。然后C5b与C6、C7和C8结合形成C5b-8，其催化C9的聚合以形成C5b-9膜攻击复合物(MAC)。MAC将其自身插入靶细胞膜中并导致细胞溶解。细胞膜上的少量MAC可产生除细胞死亡外的各种后果。
[0105]第三种补体路径，凝集素补体路径是通过甘露糖结合凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)与碳水化合物的结合起始的。在人凝集素路径中，在C4、C2和C3的蛋白酶解中涉及MASP-1和MASP-2，其产生上述C3转化酶。
[0106]如上文所提及，补体活性是由称作补体控制蛋白(CCP)的各种哺乳动物蛋白来调节。这些蛋白质在配体特异性和补体抑制机制上各不相同(Lisczewski, MK和Atkinson,JP，健康和疾病状态下的人类补体系统(The Human Complement System in Health andDisease), Volanakis, JE 和 Frank, MM 编辑，戴克(Dekker),纽约，第 149-66 页，1998)。其可促进转化酶的正常衰变和/或用作因子I的辅因子来以酶方式将C3b和/或C4b断裂为较小片段。CCP的特征在于存在多种(通常4-56种)名为短同源重复序列(SCR)的同源基序、补体控制蛋白(CCP)模块、或SUSHI结构域(Reid，KBM和Day，AJ，今日免疫学(ImmunolToday)，10:177-80,1989)。这些结构域包括约50-70个氨基酸，通常约60个氨基酸，其特征为保守基序，所述基序包括4个以二硫键键结的半胱氨酸(两个二硫键)、脯氨酸、色氨酸和许多疏水残基。[0107]补体抑制素、补体抑制素类似物、和其使用方法
[0108]补体抑制素是与补体组份C3结合并抑制补体活化的环肽。补体抑制素抑制由转化酶将C3断裂为C3a和C3b。由于C3是所有三种补体活化路径的中心组份，故补体抑制素和其类似物能抑制对汇聚所有三种路径的蛋白的活化。不期望受任何理论的束缚，补体抑制素和其类似物抑制补体活化的旁路路径的能力可显著促进其在某些本文所述眼部病况中的效能。
[0109]
【发明者】提出在延长时间段(例如3-6个月、6-12个月、1-2年)内以持续方式递送治疗药剂可提供抑制诸如ARMD等慢性眼部疾病的进程的机会，并且容许在显著视力丧失发生前的疾病过程早期进行干涉。本发明涵盖对补体抑制剂和(尤其)补体抑制素类似物的识别，与(例如)诸如血管生成抑制剂和抗炎类固醇等现存或建议疗法相比，其在此方面和其它方面具有独特和意外的优点。
[0110]本发明另外涵盖对补体抑制素和其类似物的识别，与其它补体抑制剂相比，其具有独特和意外的优点。补体抑制素类似物相对低的分子量(约1.6kD)和各种其它特性有利于将其纳入适合向眼组织提供治疗浓度的持续递送调配物和装置中。此外，
【发明者】确定与补体抑制素的降解速率和/或自体内血流中清除的速率(半衰期< 15min)相比，玻璃体中补体抑制素类似物(补体抑制素C)的体外半衰期较长(约6.9小时)。
【发明者】的计算首次确认了通过玻璃体内持续递送低至5 μ g/天的治疗药剂量以等于或高于患有湿性ARMD的受试者玻璃体中存在的预期浓度的浓度基本抑制C3活化的可行性，根据本发明，所述量可在经延长时间段内通过玻璃体内植入技术递送(如下文进一步阐述)。
【发明者】的计算同样首次确认了通过持续玻璃体内递送低至2 口 g/天的治疗药剂量以等于或高于患有干性ARMD的受试者玻璃体中存在的预期浓度的浓度基本抑制C3活化的可行性，根据本发明，所述量可在经延长时间段内通过玻璃体内植入技术递送。
[0111]本发明提供在受试者眼中抑制补体活化的方法，其包括在至少3个月(例如3-6个月、6-12个月、12-24个月、24-36个月等)的时间段内以可在所述受试者的玻璃体、视网膜或二者中可检测地抑制补体活化的有效量向受试者投与补体抑制素类似物。在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物是通过一或多种玻璃体内注射来投与。在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物是通过自眼部嵌入剂或诸如微粒或纳米颗粒等其它持续释放调配物释放来投与。补体抑制素类似物可通过自调配物扩散来释放或可在调配物侵蚀时释放。可将治疗重复多次。在某些实施例中，以平均每6-12个月或每12-24个月的间隔实施投与。在某些实施例中，眼部嵌入剂或其它持续释放调配物是生物可降解的。在某些实施例中，受试者患有眼部病症。在某些实施例中，有效浓度介于患有眼部病症的眼玻璃体中C3平均浓度的10%与250%之间。在某些实施例中，受试者具有发生眼部病症的风险。在某些实施例中，受试者具有一或多种遗传多态性，其与增加罹患眼部病症(例如ARMD)的风险相关。遗传多态性可存在于编码诸如补体因子H(CFH)或B(CFB)等补体组份的基因中。遗传多态性可存在于LOC387715或PLEKHA1中。在任一上述实施例中，眼部病症可为湿性或干性ARMD。增加罹患ARMD的风险的实例性多态性位于编码CFH的基因(例如Y402H-参见Donoso，L等人，眼科学调查，第51卷，第2册，137-152，2006，以及其中以引用方式并入本文的参考文献)中、toll样受体4(TLR4)(例如D299G-参见Zai^parsi等人，人类分子遗传学(Human Molecular Genetics),第 14 卷，第 11 册，第 1449-1455 页，2005)中、或L0C387715或PLEKHA1 (上述Donoso)中。Li，M等人，国家遗传学杂志(NatGenet.),38(9): 1049-1054，2006 和 Mailer，J.等人，国家遗传学杂志，38 (9):1055_1059，2006 阐述在CFH基因的编码和非编码部分中与增加罹患ARMD的风险相关的其它多态性。应了解某些多态性与降低罹患ARMD的风险相关。参见例如Hughes等人，国家遗传学杂志，38 (10):1173-7，2006，其阐述缺失与降低罹患ARMD的风险相关的CFHRl和CFHR3的单倍型。这些多态性可预防ARMD。另外应了解，与任一上述多态性连锁不平衡的多态性也可有益于达成确定受试者罹患ARMD的风险是否升高和/或定量确定风险的目的。在某些实施例中，旁路路径受抑制。在某些实施例中，经典路径受抑制。在某些实施例中，凝集素路径受抑制。在某些实施例中，旁路、经典和凝集素路径中至少两种路径受抑制。补体抑制素阐述于美国专利第6，319，897号中，其以引用方式并入本文中。如其中所述，补体抑制素具有序列Ile-[Cys-Val-Val-Gln-Asp-Trp-Gly-His-His-Arg-Cys]-Thr(SEQ ID NO:8),其中两个半胱氨酸之间的二硫键用括号来表示。补体抑制素是同样显示补体抑制活性的大型肽(SEQ ID NO:1，美国专利第6，319，897号)的N末端环形区。此外，补体抑制素的多种片段和变体可抑制补体，其中某些具有比补体抑制素自身更高的抑制活性。这些肽的任一种都可用于本发明组合物和方法中。例如，由美国专利第6，319，897号中的SEQ ID NO: 13、15、20、21和22标注的肽显示补体抑制活性并且可用。在本发明某些实施例中，使用具有比补体抑制素更高的补体抑制活性的肽，例如活性至少高5倍、活性至少高10倍等。
[0112]已合成各种具有比补体抑制素更高的补体抑制活性的补体抑制素类似物。其中某些阐述于以下文献中:W02004/026328(PCT/US2003/029653) ；Morikis, D.等人，生物化学学会学报(Biochem Soc Trans)，32 (Pt I):28-32,2004 ；Mallik, B.等人，药物化学杂志(J.Med.Chem.)，274-286、2005 ;和 / 或 Katragadda，M.等人，药物化学杂志，49:4616-4622，2006，所有这些文献都是以引用方式并入本文中。其中所述任一补体抑制肽和拟肽都可用于本发明中。例如，W02004/026328中阐述的SEQ ID NO:4_13可用于本发明中。
[0113]可使补体抑制素和其任一类似物在(例如)N末端和/或C末端乙酰化或酰胺化。例如，可使补体抑制素和其任一类似物在N末端乙酰化并在C末端酰胺化。与业内的应用一致，本文所用“补体抑制素”，以及相对于补体抑制素活性的本文所述补体抑制素类似物的活性是指在C末端酰胺化的补体抑制素(上述Mal I ik，2005)。
[0114]补体抑制素或其补体抑制类似物的串联体或多聚体也可用于本发明中。
[0115]包含补体抑制素和/或其一或多种补体抑制类似物的超分子复合物也是本发明的一方面并且可用于本发明方法中。
[0116]本文所用术语“补体抑制素类似物”包括补体抑制素和其任一补体抑制类似物。术语“补体抑制素类似物”涵盖补体抑制素和经设计或经鉴定以补体抑制素为基础并且经测量其补体抑制活性为补体抑制素活性的至少50%大的其它化合物，例如使用业内所接受的任一补体活化分析或实质上类似或等效的分析来测量。某些补体抑制素类似物和适宜分析阐述于以下文献中:美国专利第6，319，897号、W02004/026328、上述Morikis、上述Mallik和/或上述Katragadda 2006。分析可(例如)测量旁路路径介导的红细胞溶解或为ELISA分析(参见实例 4 和 5)。W02004/026328、上述 Morikis、上述 Mallik 和上述 Katragadda2006尤其阐述活性高于补体抑制素的补体抑制素类似物和测定其抑制补体活化的能力的方法。其它补体抑制素类似物是本发明的一方面。本发明包括实施例，其中任一或多种本文所述补体抑制素类似物或组合物用于本文所述任一治疗方法中。
[0117]补体抑制素类似物的活性可根据其IC5tl(抑制50%补体活化的化合物浓度)来表现，其中如业内所公认，较低IC5tl表示较高活性。用于本发明的优选补体抑制素类似物的活性至少与补体抑制素的活性一样大。应了解某些已知修饰可降低或消除补体抑制活性，并且可将其自本发明 任一实施例中排除。使用旁路路径介导的红细胞溶解分析(W02004/026328)测量出补体抑制素的IC5tl为12 μ M。在一实施例中，补体抑制素类似物的IC5tl不超过补体抑制素的IC5(1。在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物的活性为补体抑制素活性的2至99倍(即类似物的IC5tl低于补体抑制素的IC5tl达2至99倍)。例如，活性可为补体抑制素活性的10至50倍大，或为补体抑制素活性的50至99倍大。在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物的活性为补体抑制素活性的99至264倍。例如，活性可为补体抑制素活性的 100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、或264倍大。在某些实施例中，活性为补体抑制素活性的264至300倍、300至350倍、350至400倍、或400至500倍大。本发明另外涵盖活性为补体抑制素活性的500至1000倍的补体抑制素类似物。
[0118]使用等温滴定量热法测量补体抑制素与C3结合的Kd为1.3 □ M(Katragadda等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，279 (53)，54987-54995，2004)。各种补体抑制素类似物对C3的结合亲和性与其活性相关，其中如业内所公认，较低Kd表示较高结合亲和性。某些所测试类似物表现结合亲和性和活性的线性相关(上述Katragadda, 2004 ;上述Katragadda 2006)。在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物以如下Kd与C3结合:介于
0.1 μ M与1.0 μ M之间、介于0.05 μ mM与0.1 OM之间、介于0.025 μ M与0.05 μ M之间、介于 0.015 μ M 与 0.025 μ M之间、介于 0.01 μ M与 0.015 μ M之间、或介于 0.001 μ M 与 0.01 μ M之间。在某些实施例中，补体抑制素类似物的IC5tl介于约0.2μ M与约0.5μ M之间。在某些实施例中，补体抑制素类似物的IC5tl介于约0.1 μ M与约0.2 μ M之间。在某些实施例中，补体抑制素类似物的IC5tl介于约0.05 μ M与约0.1 μ M之间。在某些实施例中，补体抑制素类似物的IC5tl介于约0.0Ol μ M与约0.05 μ M之间。
[0119]“经设计或经鉴定以补体抑制素为基础”的化合物包括(但不限于)包含氨基酸链的化合物，其序列是通过以下方式来获得:(i)修饰补体抑制素的序列(例如用不同氨基酸或氨基酸类似物替代补体抑制素序列中一或多个氨基酸、向补体抑制素序列中插入一或多个氨基酸或氨基酸类似物、或自补体抑制素序列中删除一或多个氨基酸)；(ii)自其中补体抑制素的一或多个氨基酸经随机化的噬菌体展示肽文库选择，并视需要根据方法(i)进一步修饰；或(iii)通过筛选与通过方法(i)或(ii)获得的补体抑制素或其任一类似物竞争结合C3或其片段的化合物来鉴定。许多有用补体抑制素类似物包含疏水簇、D转角和二硫键。
[0120]在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物的序列包含通过以下方法获得的序列或主要由其组成:在补体抑制素序列中形成1、2、3或4个取代基，即由不同标准氨基酸或由非标准氨基酸替代补体抑制素序列中的1、2、3或4个氨基酸。在本发明某些实施例中，位置4的氨基酸改变。在本发明某些实施例中，位置9的氨基酸改变。在本发明某些实施例中，位置4和9的氨基酸改变。在本发明某些实施例中，仅位置4和9的氨基酸改变。在本发明某些实施例中，位置4或9的氨基酸改变，或在某些实施例中，位置4和9的氨基酸均改变，并且此外位于选自1、7、10、11和13的位置的最多2个氨基酸改变。在本发明某些实施例中，位置4、7和9的氨基酸改变。在本发明某些实施例中，位置2、12或两个位置的氨基酸改变，只是所述改变要保留化合物环化的能力。除位置1、4、7、9、10、11和/或13处的改变外，还可存在位置2和/或12处的所述改变。视需要，任一补体抑制素类似物(其序列是通过替代补体抑制素序列的一或多个氨基酸来获得)的序列在C末端另外包括最多1、2或3个额外氨基酸。在一实施例中，额外氨基酸是Gly。视需要，任一补体抑制素类似物(其序列是通过替代补体抑制素序列的一或多个氨基酸来获得)的序列在C末端另外包括最多5个或最多10个额外氨基酸。应了解除非另有说明或上下文明确表明，否则补体抑制素类似物可具有本文所述各实施例的任何一或多种特征或特性，并且任一实施例的特征或特性可另外表征本文所述任何其它实施例。在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物的序列包含图2上面部分中展示的 序列或主要由其组成，其中X4和X9代表可修饰侧链。
[0121]补体抑制素和某些补体抑制素类似物具有比补体抑制素稍高的活性，其仅含有标准氨基酸(“标准氨基酸”是甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和组氨酸)。某些具有改良活性的补体抑制素类似物纳入一或多个非标准氨基酸。可用非标准氨基酸包括单或多卤代(例如氟代)氨基酸、D氨基酸、高氨基酸、N-烷基氨基酸、脱氢氨基酸、芳香族氨基酸(除苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸外)、邻_、间-或对-氨基苯甲酸、磷酸氨基酸、甲氧基化氨基酸、和α，α-二取代氨基酸。在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物是通过用对应D氨基酸替代本文其它部分所述补体抑制素类似物的一或多个L氨基酸来设计的。所述化合物和其使用方法是本发明一方面。可用实例性非标准氨基酸包括2-萘丙氨酸(2-NaI)、1-萘丙氨酸(1-NaI)、2_茚满基甘氨酸甲酸(2Igl)、二氢色氨酸(Dht)、4_苯甲酰基-L-苯丙氨酸(Bpa)、2_ □-氨基丁酸(2_Abu)、3-α-氨基丁酸(3-Abu)、4_a-氨基丁酸(4_Abu)、环己基丙氨酸(Cha)、高环己基丙氨酸(hCha)、4_氟-L-色氨酸(4fW)、5_氟-L-色氨酸(5fW)、6_氟-L-色氨酸(6fW)、4_轻基-L-色氨酸(40H-W)、5_羟基-L-色氨酸(50H-W)、6-羟基-L-色氨酸^OH-W)、1-甲基-L-色氨酸(IMeW)、4_甲基-L-色氨酸(4MeW)、5_甲基-L-色氨酸(5MeW)、7-氮杂-L-色氨酸(7aW)、□-甲基-L-色氨酸(□ MeW)、β -甲基-L-色氨酸(β Meff)、N-甲基-L-色氨酸(匪eW)、鸟氨酸(orn)、瓜氨酸、正亮氨酸、Y-谷氨酸等。
[0122]在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物包含一或多个Trp类似物(例如在相对于补体抑制素序列的位置4和/或7)。实例性Trp类似物为上文所提及。也可参见Beene等人，生物化学，41 =10262-10269, 2002 (尤其阐述单和多卤代Trp类似物)；Babitzke和Yanofsky，生物化学杂志，270:12452-12456，1995 (尤其阐述甲基化和卤代Trp和其它Trp和吲哚类似物)；以及美国专利第6，214，790号、第6，169,057号、第5，776，970号、第4，870，097号、第4，576，750号和第4，299，838号。其它Trp类似物包括在□或口碳和(视需要)同样在吲哚环的一或多个位置上经取代(例如由甲基取代)的变体。令人感兴趣地，包含两个或更多个芳香族环的氨基酸，包括其经取代、未经取代、或经选择性取代的变体，可作为Trp类似物。
[0123]在某些实施例中，相对Trp，Trp类似物具有更强疏水特性。例如，可由一或多种烷基基团(例如甲基)来取代吲哚环。在某些实施例中，Trp类似物参与与C3的疏水性交互作用。此一 Trp类似物可位于(例如)相对于补体抑制素序列的位置4。在某些实施例中，Trp类似物包含经取代或未经取代二环芳香族环组份，或两个或更多个经取代或未经取代单环芳香族环组份。
[0124]在某些实施例中，相对Trp，Trp类似物与C3形成氢键的倾向增强，但相对Trp其不具有增强的疏水特性。相对Trp，Trp类似物可具有增强的极性和/或增强的参与与C3上的氢键供体发生静电作用的能力。某些具有增强的氢键形成特征的实例性Trp类似物在吲哚环上包含电负性取代基。此一 Trp类似物可位于(例如)相对于补体抑制素序列的位 置7。
[0125]在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物包含一或多个Ala类似物(例如在相对于补体抑制素序列的位置9)，例如与Ala相同但其在侧链中包括一或多个CH2基团的Ala类似物。在某些实施例中，Ala类似物是无支链单甲基氨基酸，例如2-Abu。在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物包含一或多个Trp类似物(例如在相对于补体抑制素序列的位置4和/或7)和Ala类似物(例如在相对于补体抑制素序列的位置9)。
[0126]在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物是包含具有以下序列的肽的化合物:(X' aa)n-Gln-Asp-Xaa-Gly-(X" aa)m(SEQ ID NO:2)，其中每个 X' aa 和每个 X" aa 是独立选择的氨基酸或氨基酸类似物，其中Xaa是Trp或Trp类似物，并且其中η > 1、m >
l、n+m介于5与21之间。肽具有以下序列:Gln-Asp-Xaa_Gly,其中Xaa是Trp或Trp类似物，例如相对于Trp具有增强的与H键供体形成氢键的倾向的Trp类似物，但在某些实施例中，其相对于Trp不具有增强的疏水特性。例如，类似物可为其中Trp的吲哚环由电负性部分(例如诸如氟等卤素)取代的类似物。在一实施例中，Xaa为5-氟色氨酸。虽然缺少关于相反论点的证据，但熟习此项技术者可认识到，如果任一非天然存在的肽的序列包含此核心序列且抑制补体活化和/或与C3结合，则所述肽可基于补体抑制素序列来设计。在替代实施例中，Xaa是除Trp类似物外的氨基酸或氨基酸类似物,其使Gln-Asp-Xaa-Gly肽可形成□-转角。[0127]在本发明某些实施例中，肽具有以下核心序列:X' aa-Gln-Asp-Xaa-Gly(SEQ IDN0:3)，其中X' aa和Xaa选自Trp和Trp类似物。在本发明某些实施例中，肽具有以下核心序列:X' aa-Gln-Asp-Xaa-Gly (SEQ ID NO:3),其中 X' aa 和 Xaa 选自 Trp、Trp 类似物和包含至少一个芳香族环的其它氨基酸或氨基酸类似物。在本发明某些实施例中，在肽背景下核心序列形成D转角。□转角可变形，此使肽可呈现两种或更多种构象，如(例如)使用核磁共振(NMR)所评价。在某些实施例中，aa是Trp类似物，其包含经取代或未经取代二环芳香族环组份或两个或更多个经取代或未经取代单环芳香族环组份。在本发明某些实施例中，aa选自由以下组成的群组:2_萘丙氨酸、1-萘丙氨酸、2-茚满基甘氨酸甲酸、二氢色氨酸和苯甲酰基苯丙氨酸。在本发明某些实施例中，aa是Trp类似物，其相对Trp具有增强的疏水特性。例如，V aa可为1-甲基色氨酸。在本发明某些实施例中，Xaa为Trp类似物，其相对Trp具有增强的形成氢键的倾向，但在某些实施例中，其相对Trp不具有增强的疏水特性。在本发明某些实施例中，相对Trp具有增强的形成氢键的倾向的Trp类似物在Trp的吲哚环上包含修饰，例如在位置5，例如在位置5由卤素原子取代H原子。例如，Xaa可为5-氟色氨酸。[0128]在本发明某些实施例中，肽具有以下核心序列-X aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X" aa(SEQID NO:4)，其中V aa和Xaa各自独立地选自Trp和Trp类似物，并且X" aa选自His、Ala、Ala类似物、Phe和Trp。在本发明某些实施例中，aa为Trp类似物，其相对Trp具有增强的疏水特性，例如1-甲基色氨酸或在吲哚环上(例如在位置1、4、5或6)具有烷基取代基的另一 Trp类似物。在某些实施例中，aa是Trp类似物，其包含经取代或未经取代二环芳香族环组份或两个或更多个经取代或未经取代单环芳香族环组份。在本发明某些实施例中，X' aa选自由以下组成的群组:2_萘丙氨酸、1-萘丙氨酸、2-茚满基甘氨酸甲酸、二氢色氨酸和苯甲酰基苯丙氨酸。在本发明某些实施例中，Xaa为Trp类似物，其相对Trp具有增强的与C3形成氢键的倾向，但在某些实施例中，其相对Trp不具有增强的疏水特性。在本发明某些实施例中，相对Trp具有增强的形成氢键的倾向的Trp类似物在Trp的吲哚环上包含修饰，例如在位置5，例如在位置5由卤素原子取代H原子。例如,Xaa可为5-氟色氨酸。在某些实施例中，X" aa是Ala或Ala类似物，例如Abu或另一无支链单甲基氨基酸。在本发明某些实施例中，肽具有以下核心序列:X' aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X " aa (SEQ ID NO:4)，其中 X' aa 和 Xaa 各自独立地选自 Trp、Trp类似物和包含至少一个芳香族侧链的氨基酸或氨基酸类似物，并且X" aa选自His、Ala、Ala类似物、Phe和Trp。在某些实施例中，V aa选自Trp类似物、芳香族氨基酸和芳香族氨基酸类似物。
[0129]在本发明某些优选实施例中，肽为环形。可通过任何两个氨基酸之间的键来使肽环化，其中一个是(X' aa)n而另一个位于(X" aa)mft。在某些实施例中，肽的环形部分的长度为9至15个氨基酸，例如长度为10-12个氨基酸。在某些实施例中，肽的环形部分的长度为11个氨基酸，其在位置2和12的氨基酸之间具有键(例如二硫键)。例如，肽的长度可为13个氨基酸，其在位置2和12的氨基酸之间具有键，此获得长度为11个氨基酸的环形部分。
[0130]在某些实施例中，肽包含以下序列或由其组成:X’aal_X' aa2_X' aa3_X' aa4_Gln-Asp-Xaa-Gly-X”aal_X" aa2_X" aa3_X" aa4_X" aa5 (SEQ ID NO:5)。在某些实施例中，V aa4 和 Xaa 选自 Trp 和 Trp 类似物，并且 X，aal、X' aa2、X' aa3、X，，aal、X" aa2、X" aa3、X" aa4和X" aa5独立地选自氨基酸和氨基酸类似物。在某些实施例中，X' aa4和Xaa选自芳香族氨基酸和芳香族氨基酸类似物。X’aal、X’aa2、X' aa3、X”aal、X" aa2、X" aa3、X" aa4和X" aa5的任何一或多个可与补体抑制素中对应位置上的氨基酸相同。在一实施例中，X”aal是Ala或单甲基无支链氨基酸。可通过(i)X’aal、X, aa2或X' aa3 ；与(ii)X〃 aa2、X" aa3、X" aa4或X" aa5之间的共价键来使肽环化。在一实施例中，通过X' aa2与X" aa4之间的共价键使肽环化。在一实施例中，经共价键结的氨基酸各自为Cys并且共价键为二硫键(S-S)。在另一实施例中，共价键为C-C、C-0、C-S或C-N键。在某些实施例中，经共价键结的残基之一为具有包含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸或氨基酸类似物，另一经共价键结的残基为具有包含羧酸基团的侧链的氨基酸或氨基酸类似物，并且共价键为酰胺键。具有包含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸或氨基酸类似物包括赖氨酸和具有一般结构NH2 (CH2)nCH(NH2) COOH的二氨基羧酸，例如2，3- 二氨基丙酸(dapa) ,2,4- 二氨基丁酸(daba)和鸟氨酸(orn)，其中η分别=I (dapa)、2(daba)和3 (orn)。具有包含羧酸基团的侧链的氨基酸的实例包括二羧氨基酸，例如谷氨酸和天冬氨酸。也可使用诸如羟基_L_谷氨酸等类似物。
[0131]在某些实施例中，补体抑制素类似物是包含具有以下序列的肽的化合物:
[0132]Xaal-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQ ID NO:6);其中:
[0133]Xaal 为 lie、Val、Leu、B' -1leJ1-VaUB1-Leu 或包含 Gly-1le 或 B1-Gly-1le 的二肽，并且B1代表第一阻断部分；
[0134]Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；
[0135]Xaa3 为 His、Ala 或 Ala 类似物、Phe、Trp 或 Trp 类似物；
[0136]Xaa4 为 L-Thr> D-Thr、lie、Val、Gly、选自 Thr-Ala 和 Thr-Asn 的二妝、或包含Thr-Ala-Asn 的三肽，其中 L-Thr、D_Thr、Ile、Val、Gly、Ala 或 Asn 中任一种的羧基末端-OH视需要由第二阻断部分B2替代；以及
[0137]两个Cys残基由二硫键连接。
[0138]在其它实施例中，缺少Xaal或其为任一氨基酸或氨基酸类似物，并且Xaa2、Xaa2'Xaa3和Xaa4如上文所定义。如果缺少Xaal，则N末端的Cys残基可具有与其连接的阻断部分B1。
[0139]在另一实施例中，Xaa4为任一氨基酸或氨基酸类似物并且Xaal、Xaa2、Xaa2*和Xaa3如上文所定义。在另一实施例中，Xaa4是选自由以下组成的群组中的二肽:Thr_Ala和Thr-Asn，其中羧基末端-OH或Ala或Asn视需要由第二阻断部分B2替代。
[0140]在SEQ ID NO:6的补体抑制素类似物的任一实施例中，Xaa2可为Trp。
[0141]在SEQ ID NO:6的补体抑制素类似物的任一实施例中，Xaa2可为Trp类似物，其包含经取代或未经取代二环芳香族环组份或两个或更多个经取代或未经取代单环芳香族环组份。例如，Trp类似物可选自2-萘丙氨酸(2-NaI)、l-萘丙氨酸(1-NaI)、2_茚满基甘氨酸甲酸(Igl)、二氢色氨酸(Dht)和4-苯甲酰基-L-苯丙氨酸。
[0142]在SEQ ID NO:6的补体抑制素类似物的任一实施例中，Xaa2可为Trp类似物，其相对Trp具有增强的疏水特性。例如，Trp类似物可选自1-甲基色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸和6-甲基色氨酸。在一实施例中，Trp类似物为1-甲基色氨酸。在一实施例中，Xaa2为1-甲基色氨酸，Xaa2*为Trp, Xaa3为Ala,并且其它氨基酸与补体抑制素中的那些相同。
[0143]在SEQ ID NO:6的补体抑制素类似物的任一实施例中，Xaa2*可为Trp类似物，例如相对Trp具有增强的与C3形成氢键的倾向的Trp类似物，在某些实施例中，其相对Trp不具有增强的疏水特性。在某些实施例中，Trp类似物在吲哚环上包含电负性取代基。例如，Trp类似物可选自5-氟色氨酸和6-氟色氨酸。
[0144]在本发明某些实施例中，Xaa2为Trp并且Xaa2*为Trp类似物，其相对Trp具有增强的与C3形成氢键的倾向，在某些实施例中，其相对Trp不具有增强的疏水特性。在在SEQ ID NO:6的补体抑制素类似物的某些实施例中，Xaa2为相对Trp具有增强的疏水特性的Trp类似物，例如选自1-甲基色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸和6-甲基色氨酸的Trp类似物，并且Xaa2*为相对Trp具有增强的与C3形成氢键的倾向的Trp类似物，在某些实施例中，其相对Trp不具有增强的疏水特性。例如，在一实施例中，Xaa2为甲基色氨酸并且Xaa〗*为5-氟色氨酸。
[0145]在某些上述实施例中，Xaa3为Ala。在某些上述实施例中，Xaa3为单甲基无支链氨基酸，例如Abu。
[0146]本发明另外提供如上所述的SEQ ID NO:6的补体抑制素类似物，其中Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp、Trp类似物和包含至少一个芳香族环的其它氨基酸或氨基酸类似物，并且Xaa3为His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp、Trp类似物或另一芳香族氨基酸或芳香族氨基酸类似物。
[0147]在本发明某些实施例中，存在于本文所述任一补体抑制素类似物的N-或C-末端的阻断部分为任何部分，其可抵抗在哺乳动物(例如人类或非人灵长类)血液或玻璃体中原本会发生的降解而使肽稳定。例如，阻断部分B1可为任一部分，其可改变肽N末端的结构以抑制肽的N末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键断裂。阻断部分B2可为任一部分，其可改变肽C末端的结构以抑制肽的 C末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键断裂。可使用业内已知的任何适宜阻断部分。在本发明某些实施例中，阻断部分B1包含酰基(即在去除-OH基团后剩余的羧酸部分)。酰基通常包含I至12个碳原子，例如I至6个碳原子。例如，在本发明某些实施例中，阻断部分B1选自由以下组成的群组:甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。在一实施例中，阻断部分B1为乙酰基，即Xaal为Ac-1le、Ac-Val、Ac-Leu 或 Ac-Gly-1le。
[0148]在本发明某些实施例中，阻断部分B2为伯胺或仲胺(-NH2或-NHRl，其中R为诸如烷基等有机部分)。
[0149]在本发明某些实施例中，阻断部分B1为任一部分，其可中和或减少在生理pH下原本可存在于N末端的负电荷。在本发明某些实施例中，阻断部分B2为任一部分，其可中和或减少在生理pH下原本可存在于C末端的负电荷。
[0150]在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物分别在N末端和/或C末端乙酰化或酰胺化。补体抑制素类似物可在N末端乙酰化、在C末端酰胺化、和/或在N末端乙酰化并在C末端酰胺化。在本发明某些实施例中，补体抑制素类似物在N末端包含烷基或芳基而
非乙酰基。
[0151]在某些实施例中，补体抑制素类似物是包含具有以下序列的肽的化合物:[0152]Xaal-Cys-Val-Xaa2-Gin-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQ ID NO:
7);其中:
[0153]Xaal 为 lie、Val、Leu、Ac-1le、Ac-Val、Ac-Leu 或包含 Gly-1le 或 Ac-Gly-1le 的二肽；
[0154]Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；
[0155]Xaa3 为 His、Ala 或 Ala 类似物、Phe、Trp 或 Trp 类似物；
[0156]Xaa4 为 L-Thr、D-Thr、lie、Val、Gly、选自 Thr-Ala 和 Thr-Asn 的二妝、或包含Thr-Ala-Asn 的三肽，其中 L-Thr、D_Thr、Ile、Val、Gly、Ala 或 Asn 中任一种的羧基末端-OH由-NH2替代；以及
[0157]两个Cys残基由二硫键连接。
[0158]Xaal、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如同上文SEQ ID NO:6的各实施例中所述。例如，在某些实施例中，Xaa2*为Trp。在某些实施例中，Xaa2为相对Trp具有增强的疏水特性的Trp类似物，例如1-甲基色氨酸。在某些实施例中，Xaa3为Ala。在某些实施例中，Xaa3为单甲基无支链氨基酸。
[0159]在本发明某些实施例中，Xaal为Ile并且Xaa4为L_Thr。
[0160]在本发明某些实施例中，Xaal为lie，Xaa2*为Trp并且Xaa4为L_Thr。
[0161]本发明另外提供如上 文所述的SEQ ID NO:7的补体抑制素类似物，其中Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp、Trp类似物、其它氨基酸或芳香族氨基酸类似物，并且Xaa3为His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp、Trp类似物或另一芳香族氨基酸或芳香族氨基酸类似物。
[0162]表1提供可用于本发明的补体抑制素类似物的非限制性列表。通过显示与母肽一补体抑制素(在C末端酰胺化)相比在指定位置(1-13)所作的具体修饰将类似物以缩略形式列于左栏中。除非另外表明，肽是在C末端酰胺化。黑体字用于指示某些修饰。相对于补体抑制素的活性(在此情况下补体抑制素在C末端酰胺化)是基于文献(W02004/026326，Mallik, 2005 ；Katragadda, 2006)中所述的公开数据和分析方法。如果参考多个报导活性的出版物，使用较新公开的数值，并且应认识到如果分析方法间存在差异，可调整数值。同样应了解，当用于本发明治疗组合物和方法中时，表1中所列的肽是通过两个Cys残基间的二硫键来环化。
[0163]表1
[0164]
【权利要求】
1.一种治疗眼部病症的方法，所述眼部病症的特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症或其任一组合，所述方法包含以下步骤: 将包含有效量的补体抑制素类似物的组合物投与易患或患有所述眼部病症的受试者。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物抑制经典补体路径。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物抑制旁路补体路径。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物抑制经典和旁路路径。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物是包含环肽的化合物，所述环肽具有 X' aa-Gln-Asp-Xaa-Gly (SEQ ID NO:3)核心序列，其中 X' aa 和 Xaa 选自 Trp、Trp类似物。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物是包含环肽的化合物，所述环肽具有 X' aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X" aa (SEQ ID NO:4)核心序列，其中 X' aa 和 Xaa 各自独立地选自Trp和Trp类似物，并且X" aa选自His、Ala、单甲基无支链氨基酸、Phe、Trp和Trp类似物。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述肽具有X’aal-X'aa2-X' aa3-X' aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X;/ aa-X" aa2-X" aa3-X" aa4-X" aa5 (SEQ ID NO:5)序列，并且X，aal、X' aa2、Vaa3、X" aa2、X" aa3-X" aa4和X" aa5与补体抑制素中对应位置上的氨基酸相同。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物是包含环肽的化合物，所述环肽具有X，aal-X' aa2-X' aa3-X' aa4-Gln-Asp-Xaa-Gly-X”aal-X" aa2-X" aa3-X" aa4-X" aa5 (SEQ ID N0:5)序列，其中 X' aa4 和 Xaa 选自 Trp 和 Trp 类似物，其中 X’ aal、Vaa2、X' aa3、X”aal、X" aa2、X" aa3、X" aa4、和 X" aa5 独立地选自氨基酸和氨基酸类似物，并且所述肽通过X' aa2与X" aa4之间的键环化。
9.如权利要求8 所述的方法，其中 X’ aal、X’ aa2、X' aa3、X" aa2、X" aa3、X" aa4和X" aa5与补体抑制素中对应位置上的氨基酸相同，并且X”aal是Ala或单甲基无支链氨基酸。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物是包含具有以下序列的环肽的化合物:
Xaal-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQ ID NO:6);其中:
Xaal 为 lie、Val, Leu、B1-1le' B1-Val' B1-Leu 或包含 Gly-1le 或 B1-Gly-1le 的二肽，并且B1代表第一阻断部分； Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp或 Trp 类似物；Xaa4 是 L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、选自 Thr-Ala 和 Thr-Asn 的二肽、或包含Thr-Ala-Asn的三肽，其中所述L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Ala或Asn中任一者的羧基末端-OH视需要由第二阻断部分B2替代，并且所述两个Cys残基通过二硫键结合。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述肽在N末端乙酰化、在C末端酰胺化、或在N末端乙酰化并在C末端酰胺化。
12.如权利要求10所述的方法，其中
13.Xaal 为 lie、Val、Leu、Ac-1le、Ac-Val> Ac-Leu 或包含 Gly-1le 或 Ac-Gly-1le 的二肽；
14.Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；Xaa3为His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp或Trp类似物； Xaa4 为 L_Thr、D-Thr> lie、Val、Gly、选自 Thr-Ala 和 Thr-Asn 的二 妝、或包含Thr-Ala-Asn的三肽，其中所述L-Thr、D_Thr、lie、Val、Gly、Ala或Asn中任一者的羧基末端-OH视需要由-NH2替代。
15.如权利要求10所述的方法，其中Xaa2为Trp类似物，其相对于Trp具有增强的疏水特性。
16.如权利要求10所述的方法，其中Xaa2为Trp类似物，其包含经取代或未经取代的二环芳香族环组份或两个或更多个经取代或未经取代的单环芳香族环组份。
17.如权利要求10所述的方法，其中Xaa2*为Trp类似物，其在吲哚环上具有电负性取代基并且相对于Trp不具有增强的疏水特性。
18.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物具有选自由以下组成的群组的序列:SEQ ID NO:9-32。
19.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物具有选自由以下组成的群组的序列:SEQ ID NO:14、21、28、29 和 32。
20.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物具有选自由以下组成的群组的序列:SEQ ID NO:30和31。
21.如权利要求1所述的方法，其中所述补体抑制素类似物是包含环肽的化合物，所述环肽具有X，aal-X' aa2_X' aa3_X' aa4-Gln-Asp-Xaa-Gly-X”aal_X" aa2_X" aa3_X" aa4-X" aa5 (SEQ ID N0:5)序列，其中 X' aa4 和 Xaa 选自 Trp 和 Trp 类似物，其中 X’ aal、Vaa2、X' aa3、X”aal、X" aa2、X" aa3、X" aa4、和 X" aa5 独立地选自氨基酸和氨基酸类似物，X' aa2和X" aa4不是CyS，并且所述肽通过X' aa2与X" aa4之间的键环化。
22.如权利要求21所述的方法，其中X’aal、X' aa3、X" aa2、X" aa3和X" aa5与补体抑制素中对应位置上的氨基酸相同，并且X” aal为Ala或单甲基无支链氨基酸。
23.如权利要求21所述的方法，其中所述键为酰胺键，其中X'aa2和X" aa4中的一个是具有包含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸或氨基酸类似物，aa2和X" aa4中的另一个是具有包含羧酸基团的侧链的氨基酸或氨基酸类似物，并且所述键为酰胺键。
24.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物经静脉内投与。
25.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物经玻璃体内投与。
26.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物以眼部嵌入剂形式经玻璃体内投与。
27.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物是以100至500□ g的量以眼部嵌入剂形式经玻璃体内投与。
28.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物是以100至10，000μ g的量以持续释放调配物形式经玻璃体内投与。
29.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物是以持续释放调配物形式经玻璃体内投与，所述调配物包含多个微粒或纳米颗粒，其总共包含100至10，000 μ g所述补体抑制素类似物。
30.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物局部投与至眼中或眼附近。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述组合物是作为液体局部投与。
32.如权利要求30所述的方法，其中所述组合物是作为软膏或凝胶局部投与。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述凝胶是在投与前形成，并且在巩膜后投与。
34.如权利要求32所述的方法，其中所述凝胶是自含有可溶性胶原的组合物形成。
35.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物是以眼或眼周植入体或嵌入剂形式局部投与。
36.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物紧邻眼后段局部投与。
37.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物是作为在引入体内后形成凝胶的溶液局部投与。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述溶液包含可溶性胶原。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述溶液另外包含纤维状胶原固体。
40.如权利要求 37所述的方法，其中所述溶液是在巩膜后投与。
41.如权利要求37所述的方法，其中所述溶液是通过选自由以下组成的群组的方法来投与:眼球后注射、眼球周注射、特农囊(Tenon)下注射、和结膜下注射。
42.如权利要求1所述的方法,其中所述受试者易患或患有ARMD。
43.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者易患或患有RAP。
44.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者易患或患有脉络膜新生血管。
45.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者易患或患有视网膜新生血管。
46.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者易患或患有糖尿病。
47.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者已被鉴定为具有增加罹患ARMD风险的一或多种遗传多态性。
48.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物另外包含与存在于受试者眼中的组份结合的部分，所述受试者易患或患有所述眼部病症。
49.如权利要求48所述的方法，其中所述部分与存在于内皮细胞或视网膜色素上皮细胞的表面上或表面处的细胞标记结合。
50.如权利要求48所述的方法，其中所述部分与脉络膜疣成份结合。
51.如权利要求48所述的方法，其中所述部分与所述补体抑制素或其类似物连接。
52.如权利要求1所述的方法，其另外包含确定所述受试者是否具有增加罹患ARMD风险的遗传多态性。
53.如权利要求1所述的方法，其另外包含在投与所述补体抑制素类似物前最多4周时投与有效量的血管生成抑制剂。
54.一种眼部植入体、微粒、或纳米颗粒，其包含如权利要求5-19中任一项所述的补体抑制素类似物。
55.一种眼部植入体、微粒、或纳米颗粒，其包含如权利要求5所述的补体抑制素类似物。
56.一种眼部植入体、微粒、或纳米颗粒，其包含如权利要求10所述的补体抑制素类似物。
57.一种眼部植入体、微粒、或纳米颗粒，其包含如权利要求19所述的补体抑制素类似物。
58.一种眼部植入体、微粒、或纳米颗粒，其包含如权利要求20所述的补体抑制素类似物。
59.一种治疗与补体活化相关或至少部分由补体活化引发的眼部病症的方法，所述方法包含以下步骤:向患有或易患所述眼部病症的受试者投与有效量的补体抑制素类似物。
60.一种治疗眼部病症的方法，所述眼部病症的特征在于编码补体组份的基因的多态性或所述多态性与所述基因的连锁不平衡使罹患所述病症的风险增加，所述方法包含以下步骤:向患有或易患所述眼部病症的受试者投与有效量的补体抑制素类似物。
61.一种抑制患有或易患眼部病症的受试者眼中的新生血管的方法，所述眼部病症的特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症或其任一组合，所述方法包含以下步骤: 向所述受试者的眼后段或紧邻其眼后段投与包含有效量的补体抑制素类似物的组合物。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述补体抑制素类似物抑制所述经典补体路径。
63.如权利要求61所述的方法，其中所述其补体抑制素类似物抑制所述旁路补体路径。
64.如权利要求61所述的方法，其中所述其补体抑制素类似物抑制所述经典和旁路路径。
65.如权利要求61所述的方法，其中所述组合物是作为液体投与。
66.如权利要求61所述的方法，其中所述组合物是通过选自由以下组成的群组的方法投与:眼球后注射、眼球周注射、特农囊下注射、结膜下注射、和玻璃体内注射。
67.如权利要求61所述的方法，其中所述组合物是作为软膏或凝胶投与。
68.如权利要求61所述的方法，其中所述凝胶是在投与前形成，并且在巩膜后投与。
69.如权利要求61所述的方法，其中所述凝胶是自含有可溶性胶原的组合物形成。
70.如权利要求61所述的方法，其中所述组合物是以眼或眼周植入体或嵌入剂形式投与。
71.如权利要求61所述的方法，其中所述组合物是作为在引入体内后形成凝胶的溶液投与。
72.如权利要求71所述的方法，其中所述溶液包含可溶性胶原。
73.如权利要求72所述的方法，其中所述溶液另外包含纤维状胶原固体。
74.如权利要求71所述的方法，其中所述溶液是在巩膜后投与。
75.如权利要求71所述的方法，其中所述溶液是通过选自由以下组成的群组的方法来投与:眼球后注射、眼球周注射、特农囊下注射、玻璃体内注射、和结膜下注射。
76.如权利要求61所述的方法,其中所述受试者易患或患有ARMD。
77.如权利要求61所述的方法，其中所述受试者易患或患有CNV。
78.如权利要求61所述的方法，其中所述受试者易患或患有RAP。
79.如权利要求61所述的方法,其中所述受试者易患或患有RNV。
80.如权利要求61所述的方法，其中所述受试者易患或患有糖尿病。
81.如权利要求61所述的方法，其中所述受试者尚未形成可检测到的CNV，并且所述组合物可预防或延迟CNV的形成。
82.如权利要求61所述的方法，其中所述受试者已形成可检测到的CNV，并且所述组合物可减慢CNV的发展速度或使CNV消退。
83.如权利要求61所述的方法，其中所述受试者尚未形成可检测到的RNV，并且所述组合物可预防或延迟RNV的形成。
84.如权利要求61所述的方法，其中所述受试者已形成可检测到的RNV，并且所述组合物可减慢RNV的发展速度或使RNV消退。
85.如权利要求61所述的方法，其中将包含所述补体抑制素或其类似物的组合物多次投与所述受试者。
86.如权利要求61所述的方法，其中所述组合物另外包含与存在于受试者眼中的组份结合的部分，所述受试者易患或患有所述眼部病症。
87.如权利要求86所述的方法，其中所述部分与存在于内皮细胞或视网膜色素上皮细胞的表面上或表面处的细胞标记结合。
88.如权利要求86所述的方法，其中所述部分与脉络膜疣成份结合。
89.如权利要求86所述的方法，其中所述部分与所述补体抑制素或其类似物连接。
90.一种组合物，其包含补体抑制素类似物和可溶性凝胶形成材料。
91.如权利要求90所述的组合物，其中所述可溶性凝胶形成材料是可溶性胶原。
92.如权利要求90所述的组合物，其中所述可溶性凝胶形成材料是可溶性胶原，并且所述组合物另外包含纤维状`胶原固体。
93.如权利要求90所述的组合物，其另外包含可有效治疗眼部病症的第二药剂，所述眼部病症的特征为黄斑变性、CNV、RNV、眼部炎症或其任一组合。
94.一种多价化合物，其包含多个与聚合骨架或支架共价或非共价连接的补体抑制素类似物部分。
95.一种治疗眼部病症的方法，所述眼部病症的特征为黄斑变性、CNV、RNV、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症或其任一组合，所述方法包含以下步骤:将权利要求90所述的组合物投与患有或易患所述眼部病症的受试者。
96.如权利要求95所述的方法，其中所述组合物紧邻眼睛投与。
97.如权利要求95所述的方法，其中所述组合物是作为液体投与，并且在体内可形成凝胶。
98.如权利要求95所述的方法，其中所述组合物是作为预形成凝胶植入体投与。
99.一种眼部植入体，其包含治疗有效量的补体抑制素类似物。
100.如权利要求99所述的眼部植入体，其中所述治疗有效量介于100与10，000□ g之间。
101.一种组合物，其包含: (i)补体抑制素或其补体抑制类似物；和 (?)与存在于易患或患有眼部病症的受试者眼中的组份结合的部分，所述眼部病症的特征为黄斑变性、CNV、RNV、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症、或其任一组合。
102.如权利要求101所述的组合物，其中所述部分与存在于内皮细胞或视网膜色素上皮细胞的表面上或表面处的细胞标记结合。
103.如权利要求101所述的组合物，其中所述部分与脉络膜疣成份结合。
104.如权利要求101所述的组合物，其中所述部分与所述补体抑制素或其类似物连接。
105.一种组合物，其包含如权利要求101所述的组合物和医药上可接受的载剂。
106.如权利要求101所述的组合物，其另外包含额外活性药剂。
107.如权利要求106所述的组合物，其中所述额外活性药剂可有效治疗特征为黄斑变性、CNV、RNV、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症、或其任一组合的眼部病症。
108.如权利要求106所述的组合物，其中所述额外活性药剂选自由以下组成的群组:血管生成抑制剂、抗炎剂、抗血管生成类固醇、和生长因子。
109.如权利要求106所述的组合物，其中所述额外活性药剂是抗生素或抗血管生成剂。
110.如权利要求106所述的组合物，其中所述额外活性药剂是抗生素或抗炎剂。
111.一种眼或眼周植入体，其包含如权利要求101所述的组合物。
112.—种核酸，其包含: (i)编码补体抑制素或其补体抑制类似物的部分；和 (?)编码与存在于易患或患有眼部病症的受试者眼中的组份结合的部分的部分，所述眼部病症的特征为黄斑变性、CNV、RNV、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症、或其任一组合。
113.—种表达载体,其包含如权利要求112所述的核酸。
114.一种重组宿主细胞，其包含如权利要求113所述的表达载体。
115.一种融合蛋白，其包含: (i)包含补体抑制素或其补体抑制类似物的第一结构域；和 (?)包含与存在于受试者眼中的组份结合的部分的第二结构域，所述受试者易患或患有以下病况:黄斑变性相关病况、CNV、RNV、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、或眼部炎症。
116.—种核酸,其编码如权利要求115所述的融合蛋白。
117.—种载体,其包含如权利要求116所述的核酸。
118.—种重组宿主细胞，其包含如权利要求116所述的核酸。
119.一种制备治疗药剂的方法，其包含以下步骤: (i)在重组宿主细胞中表达如权利要求112所述的核酸，以通过所述宿主细胞产生包含与结合部分融合的补体抑制素或其类似物的多肽；和(?)纯化所述多肽。
120.一种测试用于治疗或预防眼部病症的候选药剂的方法，所述眼部病症的特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、眼部炎症或其任一组合，所述方法包含以下步骤: (i)提供补体抑制素或其补体抑制类似物； (?)向构成黄斑变性相关病况、脉络膜新生血管或视网膜新生血管模型的动物投与补体抑制素或其类似物；和 (iii)评价所述补体抑制素或其类似物治疗或预防黄斑变性、脉络膜新生血管或视网膜新生血管的一或多种特征的能力。
121.—种组合物，其包含:(i)补体抑制素类似物；和 (ii)与靶细胞或非细胞分子实体、存在于易患或患有眼部病症的受试者眼中的细胞或非细胞分子实体表面上或表面处的组份结合的部分，所述眼部病症的特征为黄斑变性、CNV、RNV、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症、或其任一组合。
122.—种核酸，其包含: (i)编码补体抑制素或其补体抑制类似物的部分；和 (?)编码与存在于易患或患有眼部病症的受试者眼中的细胞或非细胞分子实体表面上或表面处的组份结合的部分的部分，所述眼部病症的特征为黄斑变性、CNV、RNV、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症、或其任一组合。
123.—种表达载体,其包含如权利要求122所述的核酸。
124.—种重组宿主细胞，其包含如权利要求123所述的表达载体。
125.—种融合蛋白，其包含: (i)包含补体抑制素或其补体抑制类似物的第一结构域；和 (?)第二结构域，其包含与存在于细胞或非细胞分子实体的表面上或表面处的组份结合的部分。
126.—种治疗与补体活化相关或至少部分由补体活化引发的眼部病症的方法，所述方法包含以下步骤:向患有或易患所述眼部病症的受试者投与有效量的如权利要求5-21中任一项所述的补体抑制素类似物。
127.—种治疗眼部病症的方法，所述眼部病症的特征在于编码补体组份的基因的多态性或所述多态性与所述基因的连锁不平衡使罹患所述病症的风险增加，所述方法包含以下步骤:向患有或易患所述眼部病症的受试者投与有效量的如权利要求5-21中任一项所述的补体抑制素类似物。
128.—种抑制患有或易患眼部病症的受试者眼中的新生血管的方法，所述眼部病症的特征为黄斑变性、脉络膜新生血管、视网膜新生血管、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼部炎症或其任一组合，所述方法包含以下步骤: 向所述受试者的眼后段或紧邻其眼后段投与包含有效量的如权利要求5-21中任一项所述的补体抑制素类似物的组合物。
【文档编号】A61K38/12GK103505718SQ201310385036
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2006年10月6日 优先权日:2005年10月8日
【发明者】帕斯卡尔·德沙特莱, 保罗·奥尔森, 塞德里克·弗朗索瓦 申请人:博泰迪亚制药公司