使用芦荟液制备芦荟注射液针剂的方法
【专利摘要】本发明公开了一种使用芦荟液制备芦荟注射液针剂的方法，包括下述步骤：首先取芦荟液100重量份加蒸馏水2000重量份进行稀释，将稀释液搅拌均匀后进行分离、过滤澄清；加盐酸调节pH值至6.3-6.5，加热到115℃后高温灭菌30分钟，自然冷却；用盐酸将冷却液的pH调至4.2-4.5，经超滤膜超滤，截留获得分子量不大于10000Da的含药溶液；然后药液分装入瓶，115℃-118℃灭菌30分钟即可。本发明的优点在于突破了传统的将芦荟当做排毒养颜通便产品的使用范围，运用现代医药学手段，将芦荟制成芦荟注射液，使其药用领域拓宽到了对肿瘤等疾病的防治方面，试验证明，本发明制备的芦荟注射液治疗效果突出且无毒副作用。
【专利说明】使用芦荟液制备芦荟注射液针剂的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及芦荟产品，尤其是涉及一种使用芦荟液制备芦荟注射液针剂的方法。【背景技术】
[0002]芦荟(Aloe)是一种多年生百合科肉质的草本植物，是一种具有食用、美容、保健、医药以及观赏等功能的植物。芦荟化学成分复杂，已发现的成分超过160多种，主要有多糖、蒽醌类化合物、有机酸、氨基酸、酶和多肽、维生素、留族化合物、矿物质、微量元素等有效活性成分。不同品种芦荟的活性成分含量有明显差别，即使是同一品种，不同产地、不同生长期，不同采收季节，不同的加工方法，芦荟的活性成分含量也有明显差异。为了便于终端产品加工、使用、运输和销售，通常将芦荟鲜叶进行全叶榨汁或去皮榨汁，芦荟液是芦荟行业最常见的原料之一。
[0003]目前芦荟行业只有芦荟罐头(芦荟丁)、芦荟粉剂、芦荟液等基础原料，可以制造成芦荟胶、芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟口服液等芦荟产品。口服芦荟制品具有排毒养颜，润通肠胃，增强免疫功能等作用，但实际效果主要集中在通便功能上，对其他人体疾病没有明显改善和治疗作用。该发明(使用芦荟液制备芦荟注射液针剂的方法)可以使芦荟的应用扩大到医学领域，对肿瘤的抑制有很好的作用。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种使用芦荟液制备芦荟注射液针剂的方法，该芦荟注射液针剂对多种肿瘤疾病具有较好的治疗作用。
[0005]为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案:
本发明所述的使用芦荟液 制备芦荟注射液针剂的方法，包括下述步骤:
第一步，取芦荟液100重量份加蒸馏水2000重量份进行稀释，得稀释液；
第二步，将稀释液搅拌均匀后静置过夜进行分离；
第三步，将第二步分离后的上清液过滤澄清；
第四步，将第三步得到的滤液加盐酸调节PH值至6.3-6.5，加热到115°C后高温灭菌30分钟，然后自然冷却；
第五步，用盐酸将第四步得到的冷却液的PH调至4.2-4.5，经超滤膜超滤，截留获得分子量不大于IOOOODa的含药溶液；
第六步，将第五步得到的药液分装入瓶，115°C _118°C灭菌30分钟即可。
[0006]所述芦荟液的制备方法为:
第一步，将新鲜芦荟叶浸泡30-60分钟，清洗干净后粉碎成芦荟浆汁；
第二步，将芦荟浆汁倒入加热反应罐中导入蒸汽加热至15_20°C，同时按芦荟浆汁总重量的0.125%加入果胶酶或蛋白酶，50-60分钟后，将温度升至75-80°C，并保温3_5小时进行灭活处理；
第三步，将第二步灭活处理后的汁液过滤，制成芦荟液成品。[0007]本发明的优点在于突破了传统的将芦荟当做排毒养颜通便产品的使用范围，运用现代医药学手段，将芦荟制成芦荟注射液，使其药用领域拓宽到了对肿瘤等疾病的防治方面，试验证明，本发明制备的芦荟注射液治疗效果突出且无毒副作用。
【具体实施方式】
[0008]本发明所述的使用芦荟液制备芦荟注射液针剂的方法，包括下述步骤:
第一步，将新鲜芦荟叶浸泡30-60分钟，清洗干净后去皮或连皮用食用不锈钢破碎机粉碎成芦荟浆汁；
第二步，将芦荟浆汁倒入加热反应罐中导入蒸汽加热至15-20°C，时间不超过60分钟，同时按芦荟浆汁总重量的0.125%加入果胶酶或蛋白酶，以促进芦荟的降解，60分钟后，将温度升至75-80°C，并保温3-5个小时，进行灭活处理；
第三步，将第二步灭活处理后的汁液过滤，制成芦荟液成品；
第四步，取上述芦荟液100重量份加蒸馏水2000重量份进行稀释，得稀释液；
第五步，将稀释液搅拌均匀(或超声均质15分钟)后静置过夜进行分离；
第六步，将分离后的上清液过滤澄清；
第七步，将滤液用37%的盐酸调节pH值至6.3-6.5，加热到115°C后灭菌30分钟，然后自然冷却；
第八步，用37%的盐酸将冷却液的pH调至4.2-4.5，经超滤膜超滤，截留获得分子量不大于IOOOODa的含药溶液；
第九步，将得到的药液分别装入250毫升的玻璃瓶中，充氮加热到115°C_118°C灭菌30分钟，即可得到注射液针剂成品。
[0009]本发明注射液的临床使用效果试验如下:
一、体外抗肿瘤作用
1.实验材料
1.1样品:本发明制备的注射液，呈淡棕色，澄清透明，规格:250ml瓶装，含芦荟有效成分8g。可按实验浓度直接加入培养体系。
[0010]1.2 试剂:RPM1-1640, DMEM (Gibco)，小牛血清(维森特，20130118)，
Trypsin (Amresco), MTT (Sigma) ,DMSO(Sigma)0
[0011]1.3细胞株:MDA-MB-231 (人乳腺癌细胞)，HPEG2 (人肝癌细胞)，B16F10 (黑色素瘤细胞)，A549 (人肺癌细胞)，MCF-7 (人乳腺癌细胞)，本实验室保存。
[0012]1.4仪器:GS_15R台式冷冻离心机(Beckman) ；BP310s电子天平 (sartorius) ;Microfuge微量离心机(Beckman) ;DK_8D电热恒温水浴槽(上海精宏实验设备有限公司)；MS1 Minishaker(IKA);层流架(苏净集团安泰公司)；C02培养箱(Formascientific) ；Pureplus纯水器(U.S.A) ;SW_CJ-1FD净化工作台(苏净集团安泰公司)；Biotek Synerge 2 酶标仪(Biotek) ; Zeiss AVIVO 型倒置显微镜(Zeiss);
2.实验方法
2.1接种细胞:用0.25%胰蛋白酶消化处于对数生长期的肿瘤细胞，用含10%
胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，以每孔2 X IO4个细胞接种于96孔板中，将培养板移入CO2孵箱中，在37°C、5%C02及饱和湿度条件下培养24小时后加药。[0013]2.2加药:终浓度每个浓度平行6孔，用培养基稀释后加入(空白对照孔:
不加细胞，只加培养液；阴性对照孔:除不加药物外，其余操作相同)，细胞继续培养24小时。
[0014]2.3呈色:弃上清，每孔加200μ1新鲜配制的含0.4mg ml-1 MTT的无血清培 养基，继续培养4h，然后弃上清加200μ1 DMSO溶解MTT甲簪沉淀，用微型振荡器振荡混匀。
[0015]2.4比色:酶标仪测定490nm处光密度值(以空白对照孔调零)，按下式计 算肿瘤细胞抑制率，
2.5细胞抑制率(%)=(对照组OD值一试验组OD值)/对照组OD值X 100%,
并计算预测IC50值(半数抑制浓度)。
[0016]3.实验结果
从结果可以看出，MDA-MB-231、HPEG2、MCF-7细胞对受试样品较为敏感，其IC50值分别% 70.6 μ g/ml,275.3 μ g/ml 和 224.6 μ g/ml ;而 B16F10 和 A549 细胞的敏感性则较低，其 IC50 值分别为 1857.2 μ g/ml 和 965.4 μ g/ml。
[0017]总得来看，在体外培养体系中对部分肿瘤细胞(如HPEG2、MCF-7)显示较强的抑制作用，而对B16F10和A549则表现的抑制作用较低。
[0018]
【权利要求】
1.一种使用芦荟液制备芦荟注射液针剂的方法，其特征在于:包括下述步骤: 第一步，取芦荟液100重量份加蒸馏水2000重量份进行稀释，得稀释液； 第二步，将稀释液搅拌均匀后静置过夜进行分离； 第三步，将第二步分离后的上清液过滤澄清； 第四步，将第三步得到的滤液加盐酸调节PH值至6.3-6.5，加热到115°C后高温灭菌30分钟，然后自然冷却； 第五步，用盐酸将第四步得到的冷却液的PH调至4.2-4.5，经超滤膜超滤，截留获得分子量不大于IOOOODa的含药溶液； 第六步，将第五步得到的药液分装入瓶，115°C _118°C灭菌30分钟即可。
2.根据权利要求1所述的使用芦荟液制备芦荟注射液针剂的方法，其特征在于:所述芦荟液的制备方法为: 第一步，将新鲜芦荟叶浸泡30-60分钟，清洗干净后粉碎成芦荟浆汁； 第二步，将芦荟浆汁倒入加热反应罐中导入蒸汽加热至15_20°C，同时按芦荟浆汁总重量的0.125%加入果胶酶或蛋白酶，50-60分钟后，将温度升至75-80°C，并保温3_5小时进行灭活处理； 第三步，将第二步灭活处理后的汁液过滤，制成芦荟液成品。
【文档编号】A61K9/08GK103463378SQ201310405920
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月9日 优先权日:2013年9月9日
【发明者】张冰, 陆大杰 申请人:开封九福来生物技术有限公司