使用gpr119受体鉴定可用于增加个体骨质量的化合物的方法

使用gpr119受体鉴定可用于增加个体骨质量的化合物的方法
【专利摘要】本发明涉及使用GPR119受体鉴定可用于增加个体骨质量的化合物的方法。GPR119受体的促效剂可用作用于治疗或预防特征为低骨质量的病状(诸如骨质疏松症)与用于增加个体骨质量的治疗剂。GPR119受体的促效剂促进个体骨形成。
【专利说明】使用GPR119受体鉴定可用于增加个体骨质量的化合物的方法
[0001]本申请是申请号为200780012714.2、申请日为2007年4月10日以及发明名称为“使用GPR119受体鉴定可用于增加个体骨质量的化合物的方法”的发明专利申请的分案申请。
【技术领域】
[0002]本发明涉及使用GPR119受体鉴定可用于增加个体骨质量(bone mass)的化合物的方法。GPR119受体的促效剂可用作用于治疗或预防特征为低骨质量的病状(诸如骨质疏松症)与用于增加个体骨质量的治疗剂。GPR119受体的促效剂促进个体骨形成。
【背景技术】
[0003]以下论述旨在有利于理解本发明，但其并不意欲或被认可为本发明的先前技术。
[0004]A.骨质疏松症[0005]骨质疏松症是特征为骨质量流失和骨架结构的微结构退化以致骨强度降低的致残疾病，其易使患者脆性骨折的风险增加。骨质疏松症在欧洲、日本和美国侵害超过75，000, 000人，且致使仅欧洲和美国就有超过2，300, 000例骨折。在美国，骨质疏松症侵害所有绝经后的白人女性中的至少25%，且在80岁以上的女性中比例升至70%。三分之一的50岁以上女性会患有骨质疏松性骨折，其在社会上造成相当大的社会和财政负担。所述疾病并不限于女性；年长男性也可能受到侵害。到2050年为止，预测男性髋部骨折的全球发生率增加310%，且女性增加240%。临床上呈现的髋部、前臂和脊椎骨折的组合寿命风险为约40%，相当于心血管疾病的风险。因此，骨质疏松性骨折引起相当大的死亡率、发病率和经济花费。除非研发有效预防策略，否则随着人口老龄化，骨质疏松性骨折的数量及其花费在下一个50年中将至少加倍。(参见例如阿替可(Atik)等人，临床矫形学及相关学科研究(Clin Orthop Relat Res) (2006)443:19-24 ;雷兹(Raisz)，临床检查杂志(J Clin Invest) (2005) 115:3318-3325 ;和世界卫生组织技术报告丛书(World HealthOrganization Technical Report Series) 921 (2003),预防和管理骨质疏松症(Preventionand Management of Osteoporosis)。)
[0006]B.葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)
[0007]葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP，也称作抑胃多肽)是在摄取膳食后自十二指肠内分泌K细胞释放的42个氨基酸的肠肽激素(peptide incretin hormone)。所释放的GIP的量主要视所消耗的葡萄糖的量而定。已显示GIP刺激胰腺β细胞中的葡萄糖依赖性胰岛素分泌。GIP经由特异性G蛋白偶合受体(即GIPR)介导其作用。
[0008]由于GIP在2位处含有丙氨酸，因此其为二肽基肽酶-4 (DPP-1V)(—种调节GIP降解的酶)的极佳底物。全长GIP(l-42)在自肠道K细胞分泌的数分钟内快速转化成生物非活性的GIP (3-42)。已显示抑制DPP-1V增强GIP生物活性。(参见例如德鲁克(Drucker)，细胞代谢(Cell Metab) (2006)3:153-165 ;麦金托虚(McIntosh)等人，正规肽(Regul Pept)(2005) 128:159-165 ;迪肯(Deacon)，正规肽(Regul Pept) (2005) 128:117-124 ;和阿伦斯(Ahren)等人，内分泌学(Endocrinology) (2005) 146:2055-2059。)分析例如血液中的全长生物活性GIP可使用N末端特异性检验来进行(参见例如迪肯(Deacon)等人，临床内分泌学与新陈代谢杂志(J Clin Endocrinol Metab) (2000)85:3575-3581)。
[0009]最近，已显示GIP会促进骨形成。已显示GIP活化成骨细胞受体，使得与骨形成均相关的I型胶原蛋白合成及碱性磷酸酶活性增加。已显示GIP在活体外会抑制破骨细胞活性和分化。已显示投与GIP会预防因卵巢切除所引起的骨质流失。GIP受体(GIPR)基因剔除小鼠证明尤其在骨形成中骨尺寸减小，骨质量降低，骨微结构和生物化学特性改变，和骨转换的参数改变。(参见例如钟(Zhong)等人，美国生理学会杂志:内分泌学与新陈代谢(Am J Physiol Endocrinol Metab) (2007)292:E543_E548 ;波拉格(Bollag)等人，内分泌学(Endocrinology) (2000) 141:1228-1235 ;波拉格(Bollag)等人，分子与细胞内分泌学(Mol Cell Endocrinol) f2001) 177:35-41 ;谢(Xie)等人，骨(Bone) (2005)37:759-769 ;和筑山(Tsukiyama)等人，分子内 分泌学(Mol Endocrinol) (2006) 20:1644-1651。)
[0010]GIP用于维持或增加骨密度或骨形成的效用已由美国商标与专利局(UnitedState Trademark and Patent Office)通过颁布美国专利第6，410，508号而认可，所述专利是通过投与GIP肽来治疗骨矿化减少。然而，当前GIP肽促效剂遭受口服生物可用性的不足，其负面影响了患者顺应性。具吸引力的替代方法为开发用于增加GIP活性的内源性水平的口服活性组合物。
[0011]C.GPRl 19
[0012]GPRl 19是G蛋白偶合受体(GPR119 ;例如GenBank?保存编号AAP72125的人类GPRl 19及其等位基因A^GenBankM呆存编号AY288423的小鼠GPRl 19及其等位基因)。如由促效剂活化GPRl 19使细胞内cAMP含量升高，其与GPRl 19与Gs偶合一致。在专利文献中，GPRl 19已被称作RUP3(例如W000/31258) ；GPR119也还被称作葡萄糖依赖性促胰岛素受体(⑶IR)。
[0013]D.G蛋白偶合受体
[0014]尽管许多受体种类存在于人类中，但到目前为止，由G蛋白偶合受体(GPCR)种类表示最丰富且与治疗相关的种类。据估计在人类基因组内存在大约30，000-40, 000个基因，且据估计在此等基因中约2%编码GPCR。
[0015]GPCR代表开发医药产品的重要领域。对GPCR有活性的药物在各种人类疾病中具有治疗效益，所述疾病如同疼痛、认知功能障碍、高血压、消化性溃疡、鼻炎和哮喘般多样化。在约500种临床上市药物中，30%以上为GPCR功能的调节剂。此等药物对约30种经充分鉴定的GPCR发挥其活性。(参见例如韦斯(Wise)等人，药理学与毒理学年评(Annu RevPharmacol Toxicol)(2004) 44:43_66。)
[0016]GPCR共用一共同结构基元，所述结构基元具有七个形成七个α螺旋的介于22个至24个疏水性氨基酸之间的序列，所述序列中的每一者皆跨膜(每一跨越由数字鉴定，即跨膜-10￥-1)、跨膜-2 0￥-2)等)。跨膜螺旋由细胞膜的外部或“细胞外”侧(此等分别被称作“细胞外”区域1、2和3(EC-l、EC-2和EC-3))的跨膜-2与跨膜_3、跨膜-4与跨膜-5和跨膜-6与跨膜-7之间的氨基酸股连接。跨膜螺旋也由细胞膜的内部或“细胞内”侧(此等分别被称作“细胞内”区域1、2和3(IC-1、IC-2和IC-3))的跨膜-1与跨膜-2、跨膜-3与跨膜-4和跨膜-5与跨膜-6之间的氨基酸股连接。受体的“羧基”(“C”)末端处于细胞内的细胞内空间中，且受体的“氨基”(“N”)末端处于细胞外的细胞外空间中。
[0017]一般来说，当配体与受体结合(通常称作受体的“活化”)时，在受体构形中存在有利于细胞内区域与细胞外“G蛋白”之间的偶合的变化。已报导GPCR对于G蛋白为“混杂的”，即GPCR可与一种以上G蛋白相互作用。参见肯内金(Kenakin),生命科学(Life Sciences)(1988)43:1095-1101。尽管存在其他G蛋白，但目前Gq、Gs、G1、Gz和Go为已经鉴定的G蛋白。与G蛋白偶合的经配体活化的GPCR引发信号级联过程(称作“信号转导”)。在正常条件下，信号转导最终导致细胞活化或细胞抑制。尽管并不希望受理论束缚，但应了解，IC-3环以及受体的羧基末端与G蛋白相互作用。
[0018]也存在表现为使若干种类的GPCR与磷脂酶C路径偶合的混杂G蛋白(诸如G15或G16)(奥弗曼斯(Offermanns)和西蒙(Simon),生物化学杂志(J Biol Chem) (1995)270:15175-80)，或经设计以使大量不同GPCR与同一路径(例如磷脂酶C)偶合的嵌合G蛋白(米利甘(Milligan)和利斯(Rees),药物科学进展(Trends in Pharmaceutical Sciences)(1999)20:118-24)。
[0019]在生理条件下，GPCR以如下两种不同构形之间的平衡状态存在于细胞膜中:“非活性”状态及“活性”状态。处于非活性状态的受体不能与细胞内信号转导路径连接以引发产生生物回应的信号转导。受体构形变成活性状态使得(经由G蛋白)与转导路径连接且产生生物回应。
[0020]处于活性状态的 受体可由配体或化合物(诸如药物)实现稳定。新近发现(包括(但不排外地限于)对受体的氨基酸序列的修饰)提供除配体或药物以外的方式以促进且稳定处于活性状态构形的受体。此等方式通过刺激与受体结合的配体的作用来有效稳定处于活性状态的受体。由所述配体非依赖性方式实现的稳定被称作“组成性受体活化”。

【发明内容】

[0021]本发明涉及申请者的意想不到的发现，所述发现是将GPR119促效剂投予个体(诸如通过经口投予)可对GPR119受体起作用以增加个体的GIP含量。本发明涉及与鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状(诸如骨质疏松症)的化合物及可用于增加个体骨质量的化合物的GPRl 19相关的方法。GPRl 19促效剂可用于促进(例如增加)个体骨形成。在某些实施例中，所述个体为人类。
[0022]编码人类GPR119多肽的核苷酸序列是以SEQ ID NO:1给出。所述经编码的人类GPRl 19多肽的氨基酸序列是以SEQ ID NO:2给出。
[0023]在第一方面，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0024](a)使测试化合物与包含G蛋白偶合受体的宿主细胞或与宿主细胞的膜接触，其中所述G蛋白偶合受体包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列:
[0025](i)SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0026](ii)SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0027](iii)SEQ ID NO:2的氨基酸2_335，其限制条件为G蛋白偶合受体不包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列；[0028](iv)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0029](V)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0030](vi)SEQ ID NO:2 的变异体；
[0031](vii)当选自由以下各氨基酸序列组成的群组时，(Vi)的氨基酸序列:
[0032](a')与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0033](b')包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0034](viii)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0035](ix) (i)至(viii)中的任一者的生物学活性片段；和
[0036](b)确定测试化合物刺激G蛋白偶合受体功能的能力；
[0037]其中测试化合物刺激G蛋白偶合受体功能的能力指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0038]在某些实施例中，G蛋白偶合受体包含与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列。
[0039]在某些实施例中，G蛋白偶合受体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
[0040]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的等位基因。
[0041]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的直系同源基因(ortholog)。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的哺乳动物直系同
源基因。[0042]在某些实施例中，G蛋白偶合受体为重组体。
[0043]在某些实施例中，方法为鉴定GIP促分泌素的方法。
[0044]在某些实施例中，方法包含鉴定受体的促效剂。
[0045]在某些实施例中，方法包含鉴定受体的部分促效剂。
[0046]在某些实施例中，方法为鉴定可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物的方法。
[0047]在某些实施例中，方法为鉴定可用于增加个体骨质量的化合物的方法。
[0048]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第一方面的步骤(a)和(b)，且进一步包含以下步骤:
[0049](C)视情况合成在步骤(b)中刺激受体功能的化合物；
[0050](d)使在步骤(b)中刺激受体功能的化合物活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或与能分泌GIP的细胞接触；和
[0051](e)确定化合物是否刺激自脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP ；
[0052]其中测试化合物刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP的能力指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0053]在某些实施例中，脊椎动物肠内分泌细胞为哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞为K细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的K细胞富集区域的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含十二指肠或空肠组织(参见例如松迪(Sondhi)等人，药物基因组学杂志(Pharmacogenomics J) (2006)6:131-140)。在某些实施例中，肠内分泌细胞为肠内分泌细胞株。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为经工程化为能分泌GIP的重组细胞。
[0054]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第一方面的步骤(a)和(b)，且进一步包含以下步骤:
[0055](c)视情况合成在步骤(b)中刺激受体功能的化合物；
[0056](d)将在步骤(b)中刺激受体功能的化合物投予给脊椎动物；和
[0057](e)确定化合物是否增加脊椎动物的GIP含量；
[0058]其中测试化合物增加脊椎动物的GIP含量的能力指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0059]在某些实施例中，GIP含量为总GIP的血液或血浆浓度。在某些实施例中，GIP含量为生物活性GIP的血液或 血浆浓度。
[0060]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0061]另外，本发明涉及一种鉴定可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第一方面的步骤(a)和(b)，且进一步包含以下步骤:
[0062](c)视情况合成在步骤(b)中刺激受体功能的化合物；
[0063](d)将在步骤(b)中刺激受体功能的化合物投予给脊椎动物；和
[0064](e)确定化合物是否增加脊椎动物的骨质量水平；
[0065]其中测试化合物增加脊椎动物的骨质量水平的能力指示测试化合物为可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0066]在某些实施例中，所述确定包含测量脊椎动物的骨质量水平。在某些实施例中，所述测量骨质量水平包含使用双能X射线吸收测定法(DXA)测量骨质量水平。在某些实施例中，所述使用DXA测量骨质量水平包含使用DXA测量(T-score)。在某些实施例中，所述使用DXA测量T分数包含使用DXA在髋部测量T分数。应明确预期，所述测量骨质量水平可包含使用除DXA以外的技术(诸如单X射线吸收测定法(SXA))测量骨质量水平(参见例如世界卫生组织技术报告丛书(World Health Organization TechnicalReport Series) 921 (2003),预防和管理骨质疏松症(Prevention and Management ofOsteoporosis))。在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物或哺乳动物为卵巢切除的大鼠或卵巢切除的小鼠。
[0067]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第一方面的步骤(a)和(b)，且进一步包含以下步骤:
[0068](C)视情况合成在步骤(b)中刺激受体功能的化合物；
[0069](d)视情况提供在步骤(b)中刺激受体功能的化合物；
[0070](e)使在步骤(b)中刺激受体功能的化合物活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或与能分泌GIP的细胞接触；和
[0071 ] (f)确定化合物是否刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP ；
[0072]其中测试化合物刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP的能力指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。在某些实施例中，脊椎动物肠内分泌细胞为哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞为K细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的K细胞富集区域的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含十二指肠或空肠组织(参见例如松迪(Sondhi)等人，药物基因组学杂志(Pharmacogenomics J) (2006)6 =131-140) 0在某些实施例中，肠内分泌细胞为肠内分泌细胞株。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为经工程化为能分泌GIP的重组细胞。
[0073]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第一方面的步骤(a)和(b)，且进一步包含以下步骤:
[0074](C)视情况合成在步骤(b)中刺激受体功能的化合物；
[0075](d)视情况提供在步骤(b)中刺激受体功能的化合物；
[0076](e)将在步骤(b)中刺激受体功能的化合物投予给脊椎动物；和
[0077](f)确定化合物是否增加脊椎动物的GIP含量；
[0078]其中测试化合物增加脊椎动物的GIP含量的能力指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0079]在某些实施例中，GIP含量为总GIP的血液或血浆浓度。在某些实施例中，GIP含量为生物活性GIP的血液或血浆浓度。
[0080]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0081]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第一方面的步骤(a)和(b)，且进一步包含以下步骤:
[0082](C)视情况合成在步骤(b)中刺激受体功能的化合物；
[0083](d)视情况提供在步骤(b)中刺激受体功能的化合物；[0084](e)将在步骤(b)中刺激受体功能的化合物投予给脊椎动物；和
[0085](f)确定化合物是否增加脊椎动物的骨质量水平；
[0086]其中测试化合物增加脊椎动物的骨质量水平的能力指示测试化合物为可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0087]在某些实施例中，所述确定包含测量个体骨质量水平。在某些实施例中，所述测量骨质量水平包含使用DXA测量骨质量水平。在某些实施例中，所述使用DXA测量骨质量水平包含使用DXA测量T分数。在某些实施例中，所述使用DXA测量T分数包含使用DXA在髋部测量T分数。应明确预期所述测量骨质量水平可包含使用除DXA以外的技术(诸如单X射线吸收测定法(SXA))测量骨质量水平(参见例如世界卫生组织技术报告丛书(World HealthOrganization Technical Report Series) 921 (2003),预防和管理骨质疏松症(Preventionand Management of Osteoporosis))。 [0088]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物或哺乳动物为卵巢切除的大鼠或卵巢切除的小鼠。
[0089]在某些实施例中，经鉴定的GIP促分泌素或可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的经鉴定的化合物或可用于增加个体骨质量的经鉴定的化合物为受体的促效剂。在一些实施例中，所述促效剂为部分促效剂。
[0090]在某些实施例中，G蛋白偶合受体与G蛋白偶合。在某些实施例中，活化G蛋白偶合受体增加细胞内cAMP的含量。在某些实施例中，G蛋白为Gs。
[0091]在某些实施例中，人类DNA样品为人类基因组DNA。
[0092]在一些实施例中，聚合酶链反应为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)。RT-PCR技术为所属领域的技术人员所熟知。在某些实施例中，人类DNA样品为人类cDNA。在某些实施例中，cDNA来自表达GPRl 19的人类组织。在一些实施例中，表达GPRl 19的人类组织为胰腺或胰岛。在某些实施例中，cDNA来自表达GPRl 19的人类细胞类型。在一些实施例中，cDNA来自胰腺β细胞。在一些实施例中，cDNA来自胰腺细胞株。
[0093]在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为SEQ ID NO:2或其等位基因。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为SEQ ID NO:2的等位基因。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)_哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺为促效剂的受体。在一些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0094]在某些实施例中，严格杂交条件包含在42°C下在包含50%甲酰胺、5X SSC(I X SSC=150mM NaCl、15mM 柠檬酸三钠)、50mM 磷酸钠(pH7.6)、5XDenhardt 氏溶液、10% 硫酸葡聚糖和20 μ g/ml经变性剪切的鲑鱼精子DNA的溶液中杂交，接着在65 °C下在包含0.1XSSC的溶液中洗涤。杂交技术为所属领域的技术人员所熟知。
[0095]在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQ ID NO:2或其等位基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQ ID NO:2的等位基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1 -基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺为促效剂的受体。在一些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID N0:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加 细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0096]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为GPCR。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基_[1，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)_{6-[4-(3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺为促效剂的受体。在一些实施例中，SEQ ID N0:2的变异体显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0097]在一些实施例中，G蛋白偶合受体为包含G蛋白的融合蛋白的部分。用于制造GP C R: G融合构筑体的技术为所属领域的技术人员所熟知(参见例如国际申请案WO02/42461)。
[0098]在某些实施例中，宿主细胞包含表达载体，所述表达载体包含编码G蛋白偶合受体的聚核苷酸。在一些实施例中，表达载体为PCMV。根据国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约(Budapest Treaty for the International Recognition of the Depositof Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure)的条款，此载体在 1998 年10月13日保存于美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection, ATCC)(10801University Blvd., Manassas, VA 20110-2209 USA)。由 ATCC 测试 DNA 且确定其具有活力。ATCC已向pCMV指定以下保存编号:ATCC#203351。其他合适的表达载体对所属领域的技术人员显而易见，且多种表达载体可购得(例如，来自Clontech, Palo Alto, CA;Stratagene, La Jolla, CA ;和 Invitrogen, Carlsbad, CA)。
[0099]在一些实施例中，宿主细胞为脊椎动物细胞。在一些实施例中，宿主细胞为哺乳动物细胞。在一些实施例中，哺乳动物宿主细胞是选自由293细胞、293T细胞、CHO细胞、MCB3901细胞和C0S-7细胞组成的群组。在一些实施例中，宿主细胞为酵母细胞。在一些实施例中，宿主细胞为黑色素细胞。其他合适的宿主细胞对所属领域的技术人员显而易见，且多种细胞株可购自美国典型培养物保藏中心(10801University Boulevard, Manassas,VA20110-2209)。[0100]在某些实施例中，所述确定与G蛋白偶合受体为Gs偶合受体一致。
[0101]在一些实施例中，所述确定与G蛋白偶合受体经由混杂G蛋白(诸如Ga 15或Ga 16)与磷脂酶C路径偶合一致。混杂G蛋白为所属领域的技术人员所熟知(参见例如奥弗曼斯(Offermanns)等人，生物化学杂志(J Biol Chem) (1995)270:15175-15180)。在一些实施例中，所述确定与G蛋白偶合受体经由嵌合G蛋白(例如)与磷脂酶C路径偶合一致。嵌合G蛋白为所属领域的技术人员所熟知(参见例如米利甘(Milligan)等人，药物科学进展(Trends in Pharmaceutical Sciences Sciences) (1999) 20:118-124 ;和W002/42461)。
[0102]在一些实施例中，所述确定是经由测量第二信使的含量来进行。
[0103]在一些实施例中，所述确定是经由测量第二信使的含量来进行，所述第二信使是选自由环状AMP (cAMP)、环状GMP (cGMP) ,1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)、二酰基甘油(DAG)、MAP激酶活性、MAPK/ERK激酶激酶-1 (MEKKl)活性和Ca2+组成的群组。在一些优选实施例中，第二信使为cAMP。在某些实施例中，细胞内cAMP的含量增加。
[0104]在某些实施例中，所述确定是使用包含G蛋白偶合受体的膜来进行。
[0105]在某些实施例中，所述确定是经由使用黑色素细胞检验来进行。在某些实施例中，色素分散的程度增加。
[0106]在一些实施例中，所述确定是经由报道基因检验来进行。在一些实施例中，所述报道基因检验为CRE-Luc报道基因检验。
[0107]在一些实施例中，所述确定是经由测量通过增加细胞内cAMP含量所调节的活性来进行。
[0108]在一些实施例中，所述确定是经由CRE-Luc报道基因检验来进行。在某些实施例中，萤光素酶活性程度增加。
[0109]在一些实施例中，所述确定是经由测量与包含G蛋白偶合受体的膜结合的GTP Y S来进行。在某些实施例中，以[35S]标记所述GTP Y S。在某些实施例中，所述与包含GPCR的膜结合的GTP Y S增加。
[0110]在一些实施例中，测试化合物为小分子。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为脂质。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽或脂质。在一些实施例中，测试化合物为多肽。在一些实施例中，测试化合物为多肽，其限制条件为所述多肽不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，测试化合物为脂质。在一些实施例中，测试化合物不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，测试化合物为抗体或其抗原结合片段。
[0111]在一些实施例中，方法进一步包含视情况确定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的结构的步骤。
[0112]在一些实施例中，方法进一步包含视情况提供GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的名称或结构的步骤。
[0113]在一些实施例中，所述方法进一步包含视情况产生或合成GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的步骤。[0114]在一些实施例中，所述方法进一步包含将GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物调配成医药组合物的步骤。
[0115]在第二方面，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0116](a)使化合物活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或与能分泌GIP的细胞接触，所述化合物已由第一方面的方法鉴定；和
[0117](b)确定化合物是否刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP ；
[0118]其中测试化合物刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP的能力进一步指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。[0119]在某些实施例中，脊椎动物肠内分泌细胞为哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞为K细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的K细胞富集区域的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含十二指肠或空肠组织(参见例如松迪(Sondhi)等人，药物基因组学杂志(Pharmacogenomics J) (2006)6:131-140)。在某些实施例中，肠内分泌细胞为肠内分泌细胞株。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为经工程化为能分泌GIP的重组细胞。
[0120]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0121](a)将化合物投予给脊椎动物，所述化合物已由第一方面的方法鉴定；和
[0122](b)确定化合物是否增加脊椎动物的GIP含量；
[0123]其中测试化合物增加脊椎动物的GIP含量的能力进一步指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0124]在某些实施例中，GIP含量为总GIP的血液或血浆浓度。在某些实施例中，GIP含量为生物活性GIP的血液或血浆浓度。
[0125]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0126]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0127](a)将化合物投予给脊椎动物，所述化合物已由第一方面的方法鉴定；和
[0128](b)确定化合物是否增加脊椎动物的骨质量水平；
[0129]其中测试化合物增加脊椎动物的骨质量水平的能力进一步指示测试化合物为可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0130]在某些实施例中，GIP含量为总GIP的血液或血浆浓度。在某些实施例中，GIP含量为生物活性GIP的血液或血浆浓度。
[0131 ] 在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。[0132]在某些实施例中，所述确定包含测量脊椎动物的骨质量水平。在某些实施例中，所述测量骨质量水平包含使用双能X射线吸收测定法(DXA)测量骨质量水平。在某些实施例中，所述使用DXA测量骨质量水平包含使用DXA测量T分数。在某些实施例中，所述使用DXA测量T分数包含使用DXA在髋部测量T分数。应明确预期，所述测量骨质量水平可包含使用除DXA以外的技术(诸如单X射线吸收测定法(SXA))测量骨质量水平(参见例如世界卫生组织技术报告丛书(World HealthOrganization Technical Report Series) 921 (2003),预防和管理骨质疏松症(Prevention and Management of Osteoporosis))。在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物或哺乳动物为卵巢切除的大鼠或卵巢切除的小鼠。
[0133]在一些实施例中，测试化合物为小分子。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为脂质。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽或脂质。在一些实施例中，测试化合物为多肽。在一些实施例中，测试化合物为多肽，其限制条件为所述多肽不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，测试化合物为脂质。在一些实施例中，测试化合物不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，测试化合物为抗体或其抗原结合片段。
[0134]在第三方面，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0135](a)使GPRl 19促效剂活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或与能分泌GIP的细胞接触；和
[0136](b)确定GPRl 19促效剂是否刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP ；
[0137]其中GPR119促效剂刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP的能力指示GPR119促效剂为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0138]在某些实施例中，脊椎动物肠内分泌细胞为哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞为K细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的K细胞富集区域的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含十二指肠或空肠组织(参见例如松迪(Sondhi)等人，药物基因组学杂志(Pharmacogenomics J) (2006)6:131-140)。在某些实施例中，肠内分泌细胞为肠内分泌细胞株。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为经工程化为能分泌GIP的重组细胞。
[0139]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0140](a)将GPRl 19促效剂投予给脊椎动物；和
[0141](b)确定GPRl 19促效剂是否增加脊椎动物的GIP含量；
[0142]其中GPR119促效剂增加脊椎动物的GIP含量的能力指示GPR119促效剂为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0143]在某些实施例中，GIP含量为总GIP的血液或血浆浓度。在某些实施例中，GIP含量为生物活性GIP的血液或血浆浓度。
[0144]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0145] 另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0146](a)将GPRl 19促效剂投予给脊椎动物；和
[0147](b)确定GPRl 19促效剂是否增加脊椎动物的骨质量水平；
[0148]其中GPR119促效剂增加脊椎动物的骨质量水平的能力指示GPR119促效剂为可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0149]在某些实施例中，GIP含量为总GIP的血液或血浆浓度。在某些实施例中，GIP含量为生物活性GIP的血液或血浆浓度。
[0150]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0151]在某些实施例中，所述确定包含测量脊椎动物的骨质量水平。在某些实施例中，所述测量骨质量水平包含使用双能X射线吸收测定法(DXA)测量骨质量水平。在某些实施例中，所述使用DXA测量骨质量水平包含使用DXA测量T分数。在某些实施例中，所述使用DXA测量T分数包含使用DXA在髋部测量T分数。应明确预期，所述测量骨质量水平可包含使用除DXA以外的技术(诸如单X射线吸收测定法(SXA))测量骨质量水平(参见例如世界卫生组织技术报告丛书(World Health Organization Technical Report Series) 921 (2003),预防和管理骨质疏松症(Prevention and Management of Osteoporosis))。在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物或哺乳动物为卵巢切除的大鼠或卵巢切除的小鼠。
[0152]在某些实施例中，GPRl 19促效剂为内源性GPR119的促效剂。
[0153]在某些实施例中，GPRl 19促效剂为人类GPRl 19的促效剂。
[0154]在某些实施例中，GPRl 19促效剂为GPRl 19部分促效剂。
[0155]在某些实施例中，GPRl 19促效剂为选择性GPRl 19促效剂。
[0156]在某些实施例中，GPR119促效剂为小分子。在一些实施例中，小分子不为多肽。在一些实施例中，小分子不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，小分子不为脂质。在一些实施例中，小分子不为多肽或脂质。
[0157]在某些实施例中，GPRl 19促效剂可口服使用。
[0158]在某些实施例中，GPR119促效剂具有以下EC5tl值:小于约10 μ M、小于约I μ M、小于约ΙΟΟηΜ、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM或小于约InM。在某些实施例中，GPRl 19促效剂对具有SEQ ID NO:2的人类GPR119具有以下EC5tl值:小于约10 μ M、小于约I μ Μ、小于约ΙΟΟηΜ、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约ΙΟηΜ、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM或小于约InM。在某些实施例中，在腺苷酸环化酶检验中(例示性腺苷酸环化酶检验提供于下文实例7和实例8中)，GPRl 19促效剂对具有SEQ ID NO:2的人类GPRl 19具有以下EC5tl值:小于约10 μ M、小于约I μ M、小于约ΙΟΟηΜ、小于约75ηΜ、小于约50ηΜ、小于约25ηΜ、小于约15ηΜ、小于约ΙΟηΜ、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM或小于约InM。在某些实施例中，在黑色素细胞检验中(例示性黑色素细胞检验提供于下文实例9中)，GPRl 19促效剂对具有SEQ ID NO:2的人类GPRl 19具有以下EC5tl值:小于约10 μ M、小于约I μ Μ、小于约ΙΟΟηΜ、小于约75ηΜ、小于约50ηΜ、小于约25ηΜ、小于约15ηΜ、小于约ΙΟηΜ、小于约5ηΜ、小于约4ηΜ、小于约3ηΜ、小于约2ηΜ或小于约InM。
[0159]例示性GPRl 19促效剂揭示于以下文献中:例如国际申请案第PCT/US2004/001267号(以 TO04/065380 公开)；国际申请案第 PCT/US2004/005555 号(以 TO04/076413 公开)；国际申请案第PCT/US2004/022327号(以TO05/007647公开)；国际申请案第PCT/US2004/022417 号(以 W005/007658 公开)；国际申请案第 PCT/US2005/019318 号(以W02005/121121 公开)；国际申请案第 PCT/GB2004/050046 号(以 TO2005/061489 公开)；国际申请案第PCT/US06/00567号(以W02006/083491公开)；国际申请案第PCT/GB2005/050264 号(以 W02006/067531 公开);国际申请案第 PCT/GB2005/050265 号(以冊2006/067532 公开)；国际申请案第 PCT/GB2005/050266 号(以 W02006/070208 公开)；国际申请案第PCT/JP02/09350号(以W003/026661公开)；国际申请案第PCT/JP2005/018412号(以 W006/040966 公开);国际申请案第 PCT/JP2005/019000 号(以 W02006/043490 公开)；国际申请案第PCT/GB2006/050176号(以W02007/003960公开)；国际申请案第PCT/GB2006/050177 号(以 W02007/003961 公开);国际申请案第 PCT/GB2006/050178 号(以W02007/003962 公开);国际申请案第 PCT/GB2006/050182 号(以 W02007/003964 公开);和国际申请案第PCT/JP02/09350号(以W003/026661公开)。
[0160]在某些实施例中， 方法包含提供GPRl 19促效剂。
[0161]在某些实施例中，GPRl 19促效剂可由第一方面的方法鉴定。
[0162]在某些实施例中，方法包含进行第一方面的方法以鉴定GPRl 19促效剂。
[0163]在某些实施例中，方法包含由第一方面的方法鉴定GPRl 19促效剂。
[0164]在第四方面，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0165](a)在测试化合物存在或不存在的情况下，使G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体接触，其中所述G蛋白偶合受体包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列:
[0166](i)SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0167](ii)SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0168](iii)SEQ ID NO:2的氨基酸2-335，其限制条件为受体不包含SEQ ID NO:2的氨
基酸序列；
[0169](iv)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0170](V)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0171](vi)SEQ ID NO:2 的变异体；
[0172](vii)当选自由以下各氨基酸序列组成的群组时，(Vi)的氨基酸序列:
[0173](a')与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0174](b')包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0175](viii)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0176](ix)⑴至(viii)中的任一者的生物学活性片段；和
[0177](b)侦测所述已知配体与所述受体之间的复合物；和
[0178](C)确定在测试化合物存在的情况下是否比在测试化合物不存在的情况下形成较少所述复合物；
[0179]其中所述确定指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0180]在某些实施例中，G蛋白偶合受体包含与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列。
[0181]在某些实施例中，受体包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列。
[0182]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的等位基因。
[0183]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的哺乳动物直系同源基因。
[0184]在某些实施例中，G蛋白偶合受体为重组体。
[0185]在某些实施例中，方法为鉴定GIP促分泌素的方法。
[0186]在某些实施例中，方法为鉴定可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物的方法。
[0187]在某些实施例中，方法为鉴定可用于增加个体骨质量的化合物的方法。
[0188]在某些实施例中，已知配体为内源性脊椎动物、哺乳动物或人类GPRl 19受体的配体或促效剂。在某些实施例中，已知配体为内源性脊椎动物、哺乳动物或人类GPR119受体的已知促效剂。在某些实施例中，已知配体为内源性人类GPR119受体的配体或促效剂。在某些实施例中，已知配体与以下文献中所揭示的化合物相同:例如国际申请案第PCT/US2004/001267 号(以 W004/065380 公开)；国际申请案第 PCT/US2004/005555 号(以W004/076413公开)；国际申请案第PCT/US2004/022327号(以TO05/007647公开)；国际申请案第 PCT/US2004/022417 号(以 TO05/007658 公开)；国际申请案第 PCT/US2005/019318号(以 W02005/121121 公开) ;国际申请案第 PCT/GB2004/050046 号(以 W02005/061489公开)；国际申请案第PCT/US06/00567号(以W02006/083491公开)；国际申请案第PCT/GB2005/050264 号(以 W02006/067531 公开);国际申请案第 PCT/GB2005/050265 号(以冊2006/067532公开)；国际申请案第PCT/GB2005/050266号(以冊2006/070208公开)；国际申请案第PCT/JP02/09350号(以W003/026661公开)；国际申请案第PCT/JP2005/018412号(以 W006/040966 公开);国际申请案第 PCT/JP2005/019000 号(以 W02006/043490 公开)；国际申请案第PCT/GB2006/050176号(以W02007/003960公开)；国际申请案第PCT/GB2006/050177 号(以 TO2OOVOO396I 公开)；国际申请案第 PCT/GB2006/050178 号(以W02007/003962 公开);国际申请案第 PCT/GB2006/050182 号(以 W02007/003964 公开);或国际申请案第PCT/JP02/09350号(以W003/026661公开)。在某些实施例中，已知配体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基_[1，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，已知配体为内源性脊椎动物、哺乳动物或人类GPRl 19受体的内源性配体。
[0189]在某些实施例中，视情况经标记的已知配体为经标记的已知配体。在某些实施例中，经标记的已知配体为经放射性标记的已知配体。用于放射性标记化合物，诸如用于标记本发明的G蛋白偶合受体的已知配体的技术为所属领域的技术人员所熟知。参见例如国际申请案W004/065380。亦参见例如下文实例11。 [0190]用于侦测G蛋白偶合受体与已知为所述G蛋白偶合受体的配体的化合物之间的复合物的技术为所属领域的技术人员所熟知。参见例如国际申请案W004/065380。亦参见例如下文实例12。
[0191]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第四方面的步骤(a)至(C)，且进一步包含以下步骤:
[0192](d)视情况合成在化合物存在下在步骤(C)中形成较少所述复合物的化合物；
[0193](e)使在其存在下在步骤(C)中形成较少所述复合物的化合物活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或与能分泌GIP的细胞接触；和
[0194](f)确定化合物是否刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP ；
[0195]其中测试化合物刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP的能力指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。在某些实施例中，脊椎动物肠内分泌细胞为哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞为K细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的K细胞富集区域的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含十二指肠或空肠组织(参见例如松迪(Sondhi)等人，药物基因组学杂志(Pharmacogenomics J) (2006)6 =131-140) 0在某些实施例中，肠内分泌细胞为肠内分泌细胞株。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为经工程化为能分泌GIP的重组细胞。
[0196]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第四方面的步骤(a)至(C)，且进一步包含以下步骤:
[0197](d)视情况合成在化合物存在下在步骤(C)中形成较少所述复合物的化合物；
[0198](e)将在化合物存在下在步骤(C)中形成较少所述复合物的化合物投予给脊椎动物；和
[0199](f)确定化合物是否增加脊椎动物的GIP含量；
[0200]其中测试化合物增加脊椎动物的GIP含量的能力指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0201]另外，本发明涉及一种鉴定可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第四方面的步骤(a)至(C)，且进一步包含以下步骤:
[0202](d)视情况合成在化合物存在下在步骤(C)中形成较少所述复合物的化合物；
[0203](e)将在化合物存在下在步骤(C)中形成较少所述复合物的化合物投予给脊椎动物；和
[0204](f)确定化合物是否增加脊椎动物的骨质量水平；
[0205]其中测试化合物增加脊椎动物的骨质量水平的能力指示测试化合物为可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0206]在某些实施例中，所述确定包含测量个体骨质量水平。在某些实施例中，所述测量骨质量水平包含使用DXA测量骨质量水平。在某些实施例中，所述使用DXA测量骨质量水平包含使用DXA测量T分数。在某些实施例中，所述使用DXA测量T分数包含使用DXA在髋部测量T分数。应明确预期，所述测量骨质量水平可包含使用除DXA以外的技术(诸如单X射线吸收测定法(SXA))测量骨质量水平(参见例如世界卫生组织技术报告丛书(World Health Organization Technical Report Series) 921 (2003),预防和管理骨质疏松症(Prevention and Management of Osteoporosis))。在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物或哺乳动物为卵巢切除的大鼠或卵 巢切除的小鼠。
[0207]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第四方面的步骤(a)至(C)，且进一步包含以下步骤:
[0208](d)视情况合成在化合物存在下根据步骤(C)形成较少所述复合物的化合物；
[0209](e)视情况提供在化合物存在下根据步骤(C)形成较少所述复合物的化合物；
[0210](f)使在其存在下根据步骤(C)形成较少所述复合物的化合物活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或与能分泌GIP的细胞接触；和
[0211 ] (g)确定化合物是否刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP ；
[0212]其中测试化合物刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP的能力指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。在某些实施例中，脊椎动物肠内分泌细胞为哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞为K细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的K细胞富集区域的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含十二指肠或空肠组织(参见例如松迪(Sondhi)等人，药物基因组学杂志(Pharmacogenomics J) (2006)6:131-140)。在某些实施例中，肠内分泌细胞为肠内分泌细胞株。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为经工程化为能分泌GIP的重组细胞。
[0213]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第四方面的步骤(a)至(C)，且进一步包含以下步骤:
[0214](d)视情况合成在化合物存在下根据步骤(C)形成较少所述复合物的化合物；
[0215](e)视情况提供在化合物存在下根据步骤(C)形成较少所述复合物的化合物；
[0216](f)将在化合物存在下在步骤(C)中形成较少所述复合物的化合物投予给脊椎动物；和
[0217](g)确定化合物 是否增加脊椎动物的GIP含量；
[0218]其中测试化合物增加脊椎动物的GIP含量的能力指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0219]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含此第四方面的步骤(a)至(C)，且进一步包含以下步骤:
[0220](d)视情况合成在化合物存在下根据步骤(C)形成较少所述复合物的化合物；
[0221](e)视情况提供在化合物存在下根据步骤(C)形成较少所述复合物的化合物；
[0222](f)将在化合物存在下在步骤(C)中形成较少所述复合物的化合物投予给脊椎动物；和
[0223](g)确定化合物是否增加脊椎动物的骨质量水平；
[0224]其中测试化合物增加脊椎动物的骨质量水平的能力指示测试化合物为可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0225]在某些实施例中，所述确定包含测量个体骨质量水平。在某些实施例中，所述测量骨质量水平包含使用DXA测量骨质量水平。在某些实施例中，所述使用DXA测量骨质量水平包含使用DXA测量T分数。在某些实施例中，所述使用DXA测量T分数包含使用DXA在髋部测量T分数。应明确预期，所述测量骨质量水平可包含使用除DXA以外的技术(诸如单X射线吸收测定法(SXA))测量骨质量水平(参见例如世界卫生组织技术报告丛书(World Health Organization Technical Report Series) 921 (2003),预防和管理骨质疏松症(Prevention and Management of Osteoporosis))。在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物或哺乳动物为卵巢切除的大鼠或卵巢切除的小鼠。
[0226]在某些实施例中，人类DNA样品为人类基因组DNA。
[0227]在一些实施例中，聚合酶链反应为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)。RT-PCR技术为所属领域的技术人员所熟知。在某些实施例中，人类DNA样品为人类cDNA。在某些实施例中，cDNA来自表达GPRl 19的人类组织。在一些实施例中，表达GPRl 19的人类组织为胰腺或胰岛。在某些实施例中，cDNA来自表达GPRl 19的人类细胞类型。在一些实施例中，cDNA来自胰腺β细胞。在某些实施例中，cDNA来自胰腺细胞株。
[0228]在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为SEQ ID NO:2或其等位基因。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为SEQ ID NO:2的等位基因。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基_[1，2，4]恶二唑-5-基)_哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺为促效剂的受体。在一些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0229]在某些实施例中，严格杂交条件(例如高度严格条件)包含在42°C下在包含50 % 甲酰胺、5XSSC(1XSSC = 150mM NaCl、15mM 柠檬酸三钠)、50mM 磷酸钠(pH7.6)、5XDenhardt氏溶液、10%硫酸葡聚糖和20 μ g/ml经变性剪切的鲑鱼精子DNA的溶液中杂交，接着在65°C下在包含0 .1XSSC的溶液中洗涤。杂交技术为所属领域的技术人员所熟知。
[0230]在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQ ID NO:2或其等位基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQ ID NO:2的等位基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)_ {6-[4-(3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1 -基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺为促效剂的受体。在一些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID N0:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0231]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为GPCR。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基_[1，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)_{6-[4-(3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺为促效剂的受体。在一些实施例中，SEQ ID N0:2的变异体显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0232]在一些实施例中，G蛋白偶合受体为包含G蛋白的融合蛋白的部分。用于制造GPCR=G融合构筑体的技术为所属领域的技术人员所熟知(参见例如国际申请案W002/42461)。
[0233]在某些实施例中，所述确定是使用包含G蛋白偶合受体的宿主细胞来进行。在某些实施例中，宿主细胞包含表达载体，所述表达载体包含编码GPCR的聚核苷酸。在一些实施例中，表达载体为pCMV。根据国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约的条款，此载体在1998年10月13日保存于美国典型培养物保藏中心(ATCC) (10801UniversityBlvd.,Manassas, VA20110-2209USA)。由 ATCC 测试 DNA 且确定其具有活力。ATCC 已向 pCMV指定以下保存编号:ATCC#203351。其他合适的表达载体对所属领域的技术人员显而易见，且多种表达载体可购得(例如，来自 Clontech, Palo Alto, CA ；Stratagene, La Jolla, CA ；和 Invitrogen, Carlsbad, CA)。
[0234]在一些实施例中，宿主细胞为脊椎动物细胞。在一些实施例中，宿主细胞为哺乳动物细胞。在一些实施例中，哺乳动物宿主细胞是选自由293细胞、293T细胞、CHO细胞、MCB3901细胞和C0S-7细胞组成的群组。在一些实施例中，宿主细胞为酵母细胞。在一些实施例中，宿主细胞为黑色素细胞。其他合适的宿主细胞对所属领域的技术人员显而易见，且多种细胞株可购自美国典型培养物保藏中心(10801University Boulevard, Manassas,VA20110-2209)。
[0235]在某些实施例中，所述确定是使用包含G蛋白偶合受体的膜来进行。
[0236]在一些实施例中，测试化合物为小分子。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为脂质。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽或脂质。在一些实施例中，测试化合物为多肽。在一些实施例中，测试化合物为多肽，其限制条件为所述多肽不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，测试化合物为脂质。在一些实施例中，测试化合物不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，测试化合物为抗体或其抗原结合片段。
[0237]在一些实施例中，方法进一步包含视情况确定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的结构的步骤。
[0238]在一些实施例中，方法进一步包含视情况提供GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的名称或结构的步骤。
[0239]在一些实施例中，所述方法进一步包含视情况产生或合成GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的步骤。
[0240]在一些实施例中，所述方法进一步包含将GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物调配成医药组合物的步骤。
[0241]在第五方面，本发明涉及一种筛选测试化合物以鉴定GIP促分泌素、用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法的特征在于使用包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列的G蛋白偶合受体:
[0242](a) SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0243](b) SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0244](c) SEQ ID NO:2的氨基酸2-335，其中GPCR不包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；
[0245](d)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0246](e)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0247](f)SEQ ID NO:2 的变异体；[0248](g)当选自由以下各氨基酸序列组成的群组时，(f)的氨基酸序列:
[0249](i)与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0250](ii)包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0251](h)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0252](i) (a)至(h)中的任一者的生物学活性片段。
[0253]在某些实施例中，G蛋白偶合受体包含与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列。
[0254]在某些实施例中，受体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
[0255]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的等位基因。
[0256]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的哺乳动物直系同源基因。
[0257]在某些实施例中，G蛋白偶合受体为重组体。
[0258]在某些实施例中，方法包含鉴定受体的促效剂。
[0259]在某些实施例中，方法包含鉴定受体的部分促效剂。
[0260]在一些实施例中，所述方法进一步包含将GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物调配成医药组合物的步骤。
[0261]在第六方面，本发明涉及一种方法，其包含根据第一方面、第二方面、第三方面、第四方面或第五方面鉴定GIP促分泌素、用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或用于增加个体骨质量的化合物，将所述GIP促分泌素、所述用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或所述用于增加个体骨质量的化合物调配成医药组合物。
[0262]在第七方面，本发明涉及G蛋白偶合受体筛选作为GIP促分泌素、用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或用于增加个体骨质量的化合物的测试化合物的用途，其中所述G蛋白偶合受体包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列:
[0263](a) SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0264](b) SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0265](c) SEQ ID NO:2的氨基酸2-335，其中GPCR不包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；
[0266](d)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0267](e)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0268](f) SEQ ID NO:2 的变异体；
[0269](g)当选自由以下各氨基酸序列组成的群组时，(f)的氨基酸序列:
[0270](i)与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0271](ii)包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0272](h)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0273](i) (a)至(h)中的任一者的生物学活性片段。
[0274]在某些实施例中，G蛋白偶合受体包含与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列。
[0275]在某些实施例中，受体包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列。
[0276]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的等位基因。
[0277]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的哺乳动物直系同源基因。
[0278]在某些实施例中，受体为重组体。
[0279]在某些实施例中，测试化合物为小分子。
[0280]在某些实施例中，测试化合物为GPRl 19促效剂。
[0281]在某些实施例中，GPRl 19促效剂为内源性GPR119的促效剂。
[0282]在某些实施例中，GPRl 19促效剂为人类GPRl 19的促效剂。
[0283]在某些实施例中，GPRl 19促效剂为GPRl 19部分促效剂。
[0284]在某些实施例中，GPRl 19促效剂为选择性GPRl 19促效剂。
[0285]在某些实施例中，GPRl 19促效剂为小分子。
[0286]在某些实施例中，GPRl 19促效剂可口服使用。
[0287]在某些实施例中， GPR119促效剂具有以下EC5tl值:小于约10 μ M、小于约I μ M、小于约ΙΟΟηΜ、小于约75ηΜ、小于约50ηΜ、小于约25ηΜ、小于约15ηΜ、小于约ΙΟηΜ、小于约5ηΜ、小于约4ηΜ、小于约3ηΜ、小于约2ηΜ或小于约InM。在某些实施例中，GPRl 19促效剂对具有SEQ ID NO:2的人类GPR119具有以下EC5tl值:小于约10 μ M、小于约I μ Μ、小于约ΙΟΟηΜ、小于约75ηΜ、小于约50ηΜ、小于约25ηΜ、小于约15ηΜ、小于约ΙΟηΜ、小于约5ηΜ、小于约4ηΜ、小于约3ηΜ、小于约2ηΜ或小于约InM。在某些实施例中，在腺苷酸环化酶检验中(例示性腺苷酸环化酶检验提供于下文实例7和实例8中)，GPRl 19促效剂对具有SEQ ID NO:2的人类GPRl 19具有以下EC5tl值:小于约10 μ Μ、小于约I μ Μ、小于约ΙΟΟηΜ、小于约75ηΜ、小于约50ηΜ、小于约25ηΜ、小于约15ηΜ、小于约ΙΟηΜ、小于约5ηΜ、小于约4ηΜ、小于约3ηΜ、小于约2ηΜ或小于约InM。在某些实施例中，在黑色素细胞检验中(例示性黑色素细胞检验提供于下文实例9中)，GPRl 19促效剂对具有SEQ ID NO:2的人类GPRl 19具有以下EC5tl值:小于约10 μ M、小于约I μ Μ、小于约ΙΟΟηΜ、小于约75ηΜ、小于约50ηΜ、小于约25ηΜ、小于约15ηΜ、小于约ΙΟηΜ、小于约5ηΜ、小于约4ηΜ、小于约3ηΜ、小于约2ηΜ或小于约InM。
[0288]例示性GPRl 19促效剂揭示于以下文献中:例如国际申请案第PCT/US2004/001267号(以 TO04/065380 公开)；国际申请案第 PCT/US2004/005555 号(以 TO04/076413 公开)；国际申请案第PCT/US2004/022327号(以TO05/007647公开)；国际申请案第PCT/US2004/022417 号(以 W005/007658 公开)；国际申请案第 PCT/US2005/019318 号(以W02005/121121 公开)；国际申请案第 PCT/GB2004/050046 号(以 TO2005/061489 公开)；国际申请案第PCT/US06/00567号(以W02006/083491公开)；国际申请案第PCT/GB2005/050264 号(以 W02006/067531 公开);国际申请案第 PCT/GB2005/050265 号(以冊2006/067532公开)；国际申请案第PCT/GB2005/050266号(以冊2006/070208公开)；国际申请案第PCT/JP02/09350号(以W003/026661公开)；国际申请案第PCT/JP2005/018412号(以 W006/040966 公开);国际申请案第 PCT/JP2005/019000 号(以 WO2OO6AMiM9O 公开)；国际申请案第PCT/GB2006/050176号(以W02007/003960公开)；国际申请案第PCT/GB2006/050177 号(以 W02007/003961 公开);国际申请案第 PCT/GB2006/050178 号(以W02007/003962 公开)；国际申请案第 PCT/GB2006/050182 号(以 W02007/003964 公开)；和国际申请案第PCT/JP02/09350号(以W003/026661公开)。
[0289]在第八方面，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0290](a)使刺激G蛋白偶合受体功能的化合物活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或与能分泌GIP的细胞接触，其中所述G蛋白偶合受体包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列:
[0291](i)SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0292](ii)SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0293](iii)SEQ ID NO:2的氨基酸2_335，其限制条件为 G蛋白偶合受体不包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列；
[0294](iv)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0295](V)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0296](vi)SEQ ID NO:2 的变异体；
[0297](vii)当选自由以下各氨基酸序列组成的群组时，(Vi)的氨基酸序列:
[0298](a')与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0299](b')包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0300](viii)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0301](ix)⑴至(viii)中的任一者的生物学活性片段；
[0302]所述化合物已由第一方面的方法确定或鉴定；和
[0303](b)确定化合物是否刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP ；
[0304]其中测试化合物刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP的能力进一步指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0305]在某些实施例中，G蛋白偶合受体包含与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列。
[0306]在某些实施例中，受体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
[0307]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的等位基因。
[0308]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的哺乳动物直系同源基因。
[0309]在某些实施例中，G蛋白偶合受体为重组体。
[0310]在某些实施例中，脊椎动物肠内分泌细胞为哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞为K细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的K细胞富集区域的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含十二指肠或空肠组织(参见例如松迪(Sondhi)等人，药物基因组学杂志(Pharmacogenomics J) (2006) 6:131-140)。在某些实施例中，肠内分泌细胞为肠内分泌细胞株。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为胰腺细胞。参见例如谢(Xie)等人，骨(Bone) 2007,与 GIP 的膜腺表达相关(as relates to pancreatic expression of GIP)。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为经工程化为能分泌GIP的重组细胞。
[0311]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0312](a)将刺激G蛋白偶合受体功能的化合物投予给脊椎动物，其中所述G蛋白偶合受体包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列:
[0313](i)SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0314](ii) SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0315](iii)SEQ ID NO:2的氨基酸2_335，其限制条件为G蛋白偶合受体不包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列；[0316](iv)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0317](viii)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0318](ix) SEQ ID NO:2 的变异体；
[0319](x)当选自由以下各氨基酸序列组成的群组时，(Vi)的氨基酸序列:
[0320](a')与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0321](b')包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0322](viii)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0323](ix) (i)至(viii)中的任一者的生物学活性片段；
[0324]所述化合物已由第一方面的方法确定或鉴定；和
[0325](b)确定化合物是否增加脊椎动物的GIP含量；
[0326]其中测试化合物增加脊椎动物的GIP含量的能力进一步指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0327]在某些实施例中，G蛋白偶合受体包含与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列。
[0328]在某些实施例中，受体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
[0329]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的等位基因。
[0330]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的哺乳动物直系同源基因。
[0331]在某些实施例中，G蛋白偶合受体为重组体。
[0332]在某些实施例中，GIP含量为总GIP的血液或血浆或血清浓度。在某些实施例中，GIP含量为生物活性GIP的血液或血浆或血清浓度。
[0333]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0334]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0335](a)将刺激G蛋白偶合受体功能的化合物投予给脊椎动物，其中所述G蛋白偶合受体包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列:
[0336](i)SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0337](ii)SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0338](iii)SEQ ID NO:2的氨基酸2_335，其限制条件为G蛋白偶合受体不包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列； [0339](iv)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0340](xi)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0341](xii)SEQ ID NO:2 的变异体；
[0342](xiii)当选自由以下各氨基酸序列组成的群组时，(Vi)的氨基酸序列:
[0343](a')与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0344](b')包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0345](viii)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0346](ix) (i)至(viii)中的任一者的生物学活性片段；
[0347]所述化合物已由第一方面的方法确定或鉴定；和
[0348](b)确定化合物是否增加脊椎动物的骨质量水平；
[0349]其中测试化合物增加脊椎动物的骨质量水平的能力进一步指示测试化合物为可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0350]在某些实施例中，G蛋白偶合受体包含与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列。
[0351 ] 在某些实施例中，受体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
[0352]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的等位基因。
[0353]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的哺乳动物直系同源基因。
[0354]在某些实施例中，G蛋白偶合受体为重组体。
[0355]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物或哺乳动物为卵巢切除的大鼠或卵巢切除的小鼠。
[0356]在某些实施例中，所述确定包含测量脊椎动物的骨质量水平。在某些实施例中，所述测量骨质量水平包含使用双能X射线吸收测定法(DXA)测量骨质量水平。在某些实施例中，所述使用DXA测量骨质量水平包含使用DXA测量T分数。在某些实施例中，所述使用DXA测量T分数包含使用DXA在髋部测量T分数。应明确预期，所述测量骨质量水平可包含使用除DXA以外的技术(诸如单X射线吸收测定法(SXA))测量骨质量水平(参见例如世界卫生组织技术报告丛书(World Health Organization Technical Report Series) 921 (2003),预防和管理骨质疏松症(Prevention and Management of Osteoporosis))。
[0357]在某些实施例中，人类DNA样品为人类基因组DNA。
[0358]在一些实施例中，聚合酶链反应为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)。RT-PCR技术为所属领域的技术人员所熟知。在某些实施例中，人类DNA样品为人类cDNA。在某些实施例中，cDNA来自表达GPRl 19的人类组织。在一些实施例中，表达GPRl 19的人类组织为胰腺或胰岛。在某些实施例中，cDNA来自表达GPRl 19的人类细胞类型。在一些实施例中，cDNA来自胰腺β细胞。在某些实施例中，cDNA来自胰腺细胞株。
[0359] 在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为SEQ ID NO:2或其等位基因。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为SEQ ID NO:2的等位基因。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基_[1，2，4]恶二唑-5-基)_哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺为促效剂的受体。在一些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0360]在某些实施例中，严格杂交条件(例如高度严格条件)包含在42°C下在包含50 % 甲酰胺、5XSSC(1XSSC = 150mM NaCl、15mM 柠檬酸三钠)、50mM 磷酸钠(pH7.6)、5XDenhardt氏溶液、10%硫酸葡聚糖和20 μ g/ml经变性剪切的鲑鱼精子DNA的溶液中杂交，接着在65°C下在包含0.1XSSC的溶液中洗涤。杂交技术为所属领域的技术人员所熟知。
[0361]在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQ ID NO:2或其等位基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQ ID NO:2的等位基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1 -基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺为促效剂的受体。在一些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID N0:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。[0362]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为GPCR。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基_[1，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)_{6-[4-(3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺为促效剂的受体。在一些实施例中，SEQ ID N0:2的变异体显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0363]在一些实施例中，G蛋白偶合受体为包含G蛋白的融合蛋白的部分。用于制造GPCR=G融合构筑体的技术为所属领域的技术人员所熟知(参见例如国际申请案W002/42461)。 [0364]在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物为小分子。在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽。在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为脂质。在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽或脂质。在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物为多肽。在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物为多肽，其限制条件为所述多肽不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物为脂质。在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，刺激G蛋白偶合受体功能的化合物为抗体或其抗原结合片段。
[0365]在一些实施例中，方法进一步包含视情况确定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的结构的步骤。
[0366]在一些实施例中，方法进一步包含视情况提供GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的名称或结构的步骤。
[0367]在一些实施例中，所述方法进一步包含视情况产生或合成GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的步骤。
[0368]在一些实施例中，所述方法进一步包含将GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物调配成药物的步骤。
[0369]在一些实施例中，所述方法进一步包含将GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物调配成医药组合物的步骤。
[0370]在第九方面，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0371](a)使在化合物存在的情况下比在所述化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物的化合物活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或与能分泌GIP的细胞接触，其中所述G蛋白偶合受体包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列:
[0372](i)SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0373](ii)SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0374](iii)SEQ ID NO:2的氨基酸2-335，其限制条件为受体不包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；
[0375](iv)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0376](V)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0377](vi)SEQ ID NO:2 的变异体；
[0378](vii)当选自由以下各氨 基酸序列组成的群组时，(Vi)的氨基酸序列:
[0379](a')与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0380](b')包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0381](viii)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0382](ix) (i)至(viii)中的任一者的生物学活性片段；
[0383]所述化合物已由第四方面的方法确定或鉴定；和
[0384](b)确定化合物是否刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP ；
[0385]其中测试化合物刺激脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞分泌GIP的能力进一步指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0386]在某些实施例中，G蛋白偶合受体包含与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列。
[0387]在某些实施例中，受体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
[0388]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的等位基因。
[0389]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为SEQ ID NO:2的哺乳动物直系同源基因。
[0390]在某些实施例中，G蛋白偶合受体为重组体。
[0391]在某些实施例中，脊椎动物肠内分泌细胞为哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞为K细胞。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含来源于小肠的K细胞富集区域的组织。在某些实施例中，肠内分泌细胞包含十二指肠或空肠组织(参见例如松迪(Sondhi)等人，药物基因组学杂志(Pharmacogenomics J) (2006)6:131-140)。在某些实施例中，肠内分泌细胞为肠内分泌细胞株。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为胰腺细胞。参见例如谢(Xie)等人，骨(BoneBone) 2007,与 GIP 的膜腺表达相关(as relates to pancreatic expression of GIP)。在某些实施例中，能分泌GIP的细胞为经工程化为能分泌GIP的重组细胞。
[0392]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0393](a)将化合物投予给脊椎动物，其中在所述化合物存在的情况下比在所述化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物，其中所述G蛋白偶合受体包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列:[0394](i)SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0395](ii)SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0396](iii)SEQ ID NO:2的氨基酸2-335，其限制条件为受体不包含SEQ ID NO:2的氨
基酸序列；
[0397](iv)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0398](viii)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0399](ix) SEQ ID NO:2 的变异体；
[0400](X)当选自由以下各氨基酸序列组成的群组时，(Vi)的氨基酸序列:
[0401](a')与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0402](b')包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0403](viii)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0404](ix) (i)至(viii)中的任一者的生物学活性片段；
[0405]所述化合物已由第四方面的方法确定或鉴定；和
[0406](b)确定化合物是否增加脊椎动物的GIP含量；
[0407]其中测试化合物增加脊椎动物的GIP含量的能力进一步指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0408]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0409]另外，本发明涉及一种鉴定GIP促分泌素、可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的方法，所述方法包含以下步骤:
[0410](a)将化合物投予给脊椎动物，其中在所述化合物存在的情况下比在所述化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物，其中所述G蛋白偶合受体包含选自由以下各氨基酸序列组成的群组的氨基酸序列:
[0411](i)SEQ ID NO:2 的氨基酸 1-335 ；
[0412](ii)SEQ ID NO:2 的氨基酸 2-335 ；
[0413](iii)SEQ ID NO:2的氨基酸2-335，其限制条件为受体不包含SEQ ID NO:2的氨
基酸序列；
[0414](iv)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸可用人类DNA样品，使用特异性引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过聚合酶链反应(PCR)来扩增；
[0415](xi)由聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体的氨基酸序列，所述聚核苷酸在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交；
[0416](xii)SEQ ID NO:2 的变异体；[0417](xiii)当选自由以下各氨基酸序列组成的群组时，(Vi)的氨基酸序列:
[0418](a')与SEQ ID NO:2具有至少约80% —致性的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；和
[0419](b')包含SEQ ID NO:2的至少20个相邻氨基酸的G蛋白偶合受体的氨基酸序列；
[0420](viii)具有SEQ ID NO:2的G蛋白偶合受体的组成性活性型式的氨基酸序列；和
[0421](ix)⑴至(viii)中的任一者的生物学活性片段；
[0422]所述化合物已由第四方面的方法确定或鉴定；和
[0423](b)确定化合物是否增加脊椎动物的骨质量水平；
[0424]其中测试化合物增加脊椎动物的骨质量水平的能力进一步指示测试化合物为GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物。
[0425]在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物或哺乳动物为卵巢切除的大鼠或卵巢切除的小鼠。
[0426]在某些实施例中，所述确定包含测量脊椎动物的骨质量水平。在某些实施例中，所述测量骨质量水平包含使用DXA测量骨质量水平。在某些实施例中，所述使用DXA测量骨质量水平包含使用DXA测量T分数。在某些实施例中，所述使用DXA测量T分数包含使用DXA在髋部测量T分数。应明确预期，所述测量骨质量水平可包含使用除DXA以外的技术(诸如单X射线吸收测定法(SXA))测量骨质量水平(参见例如世界卫生组织技术报告丛书(World Health Organization Technical Report Series) 921 (2003),预防和管理骨质疏松症(Prevention and Management of Osteoporosis))。在某些实施例中，脊椎动物为哺乳动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类脊椎动物。在某些实施例中，脊椎动物为非人类哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物为非人类哺乳动物。
[0427]在某些实施例中，人类DNA样品为人类基因组DNA。
[0428]在一些实施例中，聚合酶链反应为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)。RT-PCR技术为所属领域的技术人员所熟知。在某些实施例中，人类DNA样品为人类cDNA。在某些实施例中，cDNA来自表达GPRl 19的人类组织。在一些实施例中，表达GPRl 19的人类组织为胰腺或胰岛。在某些实施例中，cDNA来自表达GPRl 19的人类细胞类型。在一些实施例中，cDNA来自胰腺β细胞。在某些实施例中，cDNA来自胰腺细胞株。
[0429]在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为SEQ ID NO:2或其等位基因。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为SEQ ID NO:2的等位基因。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基_[1，2，4]恶二唑-5-基)_哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺。在某些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺为促效剂的受体。在一些实施例中，由可由聚合酶链反应扩增的聚核苷酸编码的G蛋白偶合受体显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0430]在某些实施例中，严格杂交条件(例如高度严格条件)包含在42°C下在包含50 % 甲酰胺、5XSSC(1XSSC = 150mM NaCl、15mM 柠檬酸三钠)、50mM 磷酸钠(pH7.6)、5XDenhardt氏溶液、10%硫酸葡聚糖和20 μ g/ml经变性剪切的鲑鱼精子DNA的溶液中杂交，接着在65°C下在包含0.1XSSC的溶液中洗涤。杂交技术为所属领域的技术人员所熟知。[0431]在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQ ID NO:2或其等位基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQ ID NO:2的等位基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为SEQID NO:2的直系同源基因。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)_ {6-[4-(3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID NO:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1 -基]-5-硝基-嘧啶-4-基}_胺为促效剂的受体。在一些实施例中，由在高度严格条件下与SEQ ID N0:1的互补序列杂交的聚核苷酸编码的GPCR显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0432]在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为GPCR。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体特异性结合(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基_[1，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，SEQ ID NO:2的变异体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)_{6-[4-(3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺为促效剂的受体。在一些实施例中，SEQ ID N0:2的变异体显示可侦测水平的组成性活性。在一些实施例中，组成性活性是用于增加细胞内cAMP的含量。在一些实施例中，组成性活性是用于使黑色素细胞经受色素分散。
[0433]在一些实施例中，G蛋白偶合受体为包含G蛋白的融合蛋白的部分。用于制造GPCR=G融合构筑体的技术为所属领域的技术人员所熟知(参见例如国际申请案W002/42461)。
[0434]在一些实施例中，在化合物存在的情况下比在化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物的化合物为小分子。在一些实施例中，在化合物存在的情况下比在化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物的化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽。在一些实施例中，在化合物存在的情况下比在化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物的化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，在化合物存在的情况下比在化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物的化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为脂质。在一些实施例中，测试化合物为小分子，其限制条件为所述小分子不为多肽或脂质。在一些实施例中，测试化合物为多肽。在一些实施例中，在化合物存在的情况下比在化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物的化合物为多肽，其限制条件为所述多肽不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，在化合物存在的情况下比在化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物的化合物为脂质。在一些实施例中，在化合物存在的情况下比在化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物的化合物不为抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，在化合物存在的情况下比在化合物不存在的情况下形成较少的G蛋白偶合受体与所述受体的视情况经标记的已知配体之间的复合物的化合物为抗体或其抗原结合片段。[0435]在某些实施例中，方法为鉴定GIP促分泌素的方法。
[0436]在某些实施例中，方法为鉴定可用于预防或治疗特征为低骨质量的病状的化合物的方法。
[0437]在某些实施例中，方法为鉴定可用于增加个体骨质量的化合物的方法。
[0438]在某些实施例中，已知配体为内源性脊椎动物、哺乳动物或人类GPRl 19受体的配体或促效剂。在某些实施例中，已知配体为内源性脊椎动物、哺乳动物或人类GPR119受体的已知促效剂。在某些实施例中，已知配体为内源性人类GPR119受体的配体或促效剂。在某些实施例中，已知配体与以下文献中所揭示的化合物相同:例如国际申请案第PCT/US2004/001267 号(以 W004/065380 公开)；国际申请案第 PCT/US2004/005555 号(以W004/076413公开)；国际申请案第PCT/US2004/022327号(以TO05/007647公开)；国际申请案第 PCT/US2004/022417 号(以 TO05/007658 公开)；国际申请案第 PCT/US2005/019318号(VX W02005/121121 公开);国际申请案第 PCT/GB2004/050046 号(VX W02005/061489公开)；国际申请案第PCT/US06/00567号(以W02006/083491公开)；国际申请案第PCT/GB2005/050264 号(以 W02006/067531 公开);国际申请案第 PCT/GB2005/050265 号(以冊2006/067532公开)；国际申请案第PCT/GB2005/050266号(以冊2006/070208公开)；国际申请案第PCT/JP02/09350号(以W003/026661公开)；国际申请案第PCT/JP2005/018412号(以 W006/040966 公开);国际申请案第 PCT/JP2005/019000 号(以 W02006/043490 公开)；国际申请案第PCT/GB2006/050176号(以W02007/003960公开)；国际申请案第PCT/GB2006/050177 号(以 TO2OOVOO396I 公开);国际申请案第 PCT/GB2006/050178 号(以W02007/003962 公开);国际申请案第 PCT/GB2006/050182 号(以 W02007/003964 公开);或国际申请案第PCT/JP02/09350号(以W003/026661公开)。在某些实施例中，已知配体为(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6-[4-(3_异丙基_[1，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施例中，已知配体为内源性脊椎动物、哺乳动物或人类GPRl 19受体的内源性配体。
[0439]在某些实施例中，视情况经标记的已知配体为经标记的已知配体。在某些实施例中，经标记的已知配体为经放射性标记的已知配体。用于放射性标记化合物，诸如用于标记本发明的G蛋白偶合受体的已知配体的技术为所属领域的技术人员所熟知。参见例如国际申请案W004/065380。亦参见例如下文实例11。[0440]用于侦测G蛋白偶合受体与已知为所述G蛋白偶合受体的配体的化合物之间的复合物的技术为所属领域的技术人员所熟知。参见例如国际申请案W004/065380。亦参见例如下文实例12。
[0441]在一些实施例中，方法进一步包含视情况确定GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的结构的步骤。
[0442]在一些实施例中，方法进一步包含视情况提供GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的名称或结构的步骤。
[0443]在一些实施例中，所述方法进一步包含视情况产生或合成GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物的步骤。
[0444]在一些实施例中，所述方法进一步包含将GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物调配成药物的步骤。 [0445]在一些实施例中，所述方法进一步包含将GIP促分泌素、可用于治疗或预防特征为低骨质量的病状的化合物或可用于增加个体骨质量的化合物调配成医药组合物的步骤。
【专利附图】

【附图说明】
[0446]结合随附图式说明本发明。图1展示投与GPR119促效剂对野生型小鼠的血液GIP含量的影响的药效分析。A.使用化合物I作为GPR119促效剂进行时程分析。B.使用化合物3作为GPRl 19促效剂进行时程分析。C.使用化合物3作为GPRl 19促效剂进行剂量滴定分析。
[0447]图2展示与野生型小鼠相比，投与GPR119促效剂对GPR119缺失(基因剔除)的小鼠的血液GIP含量的影响。A.使用化合物I作为GPRl 19促效剂进行比较。B.使用化合物2作为GPRl 19促效剂进行比较。
【具体实施方式】
[0448]本发明涉及使用GPR119受体鉴定可用于增加个体骨质量的化合物的方法。GPR119受体的促效剂可用作用于治疗或预防特征为低骨质量的病状(诸如骨质疏松症)及用于增加个体骨质量的治疗剂。本发明至少部分是基于申请者的意想不到的发现，所述发现是将GPRl 19促效剂投予个体(诸如通过经口投予)可对GPR119受体起作用以增加个体的GIP含量。
[0449]如本文中所使用，术语“配体”应意谓特异性结合多肽(诸如GPR119)的分子(例如测试化合物)。配体可为(例如)多肽、脂质、小分子、抗体。化合物I为GPR119受体多肽的例示性配体(参见表A，其陈述化合物I的化学结构和化学名称)。化合物I与国际专利申请案第PCT/US2004/001267号(以W02004/065380公开)所揭示的化合物相同。(2-氟-4-甲烷磺酰基-苯基)-{6- [4- (3-异丙基-[I，2，4]恶二唑-5-基)-哌啶-1 -基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺(参见表A)为GPRl 19受体多肽的例示性配体。化合物2为GPRl 19受体多肽的例示性配体。化合物2与国际专利申请案第PCT/US2004/022417号(以W02005/007658公开)所揭示的化合物相同。化合物3为GPR119受体多肽的例示性配体。化合物3与国际专利申请案第PCT/US2004/022327号(以W02005/007647公开)所揭示的化合物相同。内源性配体为作为原生多肽(诸如GPR119)的内源性、天然配体的配体。配体可为“拈抗剂”、“促效剂”、“部分促效剂”或“反向促效剂”，或其类似物。
[0450]表A
[0451]
【权利要求】
1.一种制备含有GPR119促效剂的医药组合物的方法，所述GPR119促效剂具有GIP促分泌素的作用，所述方法包含以下步骤: (a)使GPR119促效剂在活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞接触； (b)确定所述GPRl19促效剂刺激所述脊椎动物肠内分泌细胞或所述能分泌GIP的细胞分泌GIP ;及 (c)将所述GPR119促效剂与医药上可接受的载剂调配，形成医药组合物。
2.一种制备含有GPR119促效剂的医药组合物的方法，所述GPR119促效剂具有GIP促分泌素的作用，所述方法包含以下步骤:将具有GIP促分泌素的作用的所述GPR119促效剂与医药上可接受的载剂调配，形成医药组合物； 具有GIP促分泌素的作用的所述GPR119促效剂已经在活体外与脊椎动物肠内分泌细胞或能分泌GIP的细胞接触，并被确定刺激所述脊椎动物肠内分泌细胞或所述能分泌GIP的细胞分泌GIP。
3.一种制备含有GPR119促效剂的医药组合物的方法，所述GPR119促效剂具有GIP促分泌素的作用，所述方法包含以下步骤: (a)通过检测获自先前投予GPRl19促效剂的脊椎动物的样本的GIP水平，确定所述GPRl 19促效剂增加脊椎动物的GIP水平； (b)将所述GPR119促效剂与医药上可接受的载剂调配，形成医药组合物。
4.一种制备含有GPR119促效剂的医药组合物的方法，所述GPR119促效剂具有GIP促分泌素的作用，所述方法包含以下步骤:将具有GIP促分泌素的作用的所述GPR119促效剂与医药上可接受的载剂调配，形成医药组合物； 具有GIP促分泌素的作用的所述GPR119促效剂已经被投予脊椎动物并被确定增加获自脊椎动物的样本的GIP水平。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述肠内分泌细胞是哺乳动物肠内分泌细胞。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述肠内分泌细胞选自K细胞、来源于小肠的K细胞富集区域的细胞、来源于十二指肠组织的细胞和或来源于空肠组织的细胞。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述肠内分泌细胞是肠内分泌细胞株。
8.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述能分泌GIP的细胞为经工程化为能分泌GIP的重组细胞和胰细胞。
9.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述脊椎动物为非人类哺乳动物。
10.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述脊椎动物为鼠。
11.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述脊椎动物为人类。
12.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述方法包括确定所述脊椎动物的血液GIP增加至少10%。
13.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其中所述GPR119促效剂是人类GPR119的促效剂。
14.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其中所述GPR119促效剂是口服活性的。
15.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其中所述GPR119促效剂是选择性GPR119促效剂。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述GPR119促效剂针对GPR119受体的选择性高于对促肾上腺皮质激素释放因子-1受体的选择性。
17.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其中所述GPRl19促效剂具有小于10 μ M的EC50。
18.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其中所述GPRl19促效剂具有小于I μ M的EC50。
19.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其中所述GPRl19促效剂具有小于IOOnM的EC50。
20.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其中所述GPR119促效剂为小分子。
21.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其进一步包括在将所述GPR119促效剂与医药上可接受的载剂调配 之前，确定所述GPRl 19促效剂的结构和/或生产或合成所述GPRl 19促效剂。
【文档编号】A61K45/00GK103536924SQ201310495439
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2007年4月10日 优先权日:2006年4月11日
【发明者】褚志亮, 詹姆斯·N·伦纳德 申请人:艾尼纳制药公司