铁筷子提取物及其中有效成分的分离方法和所得化合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了铁筷子提取物及其中有效成分的分离方法和所得化合物，所述铁筷子提取物是将铁筷子药材分别用6-8倍量95%乙醇、50%乙醇各提取2-4次，合并所有提取液，浓缩干燥，然后加水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥而得。本发明经实验研究发现，铁筷子药材乙醇提取浸膏中乙酸乙酯萃取部位有较好的镇痛和抗炎作用，可将其用于制备抗炎镇痛的药物；并从该乙酸乙酯萃取部位分离得到17个化合物，其中有2个新化合物，12个化合物为铁筷子中首次分离得到，为铁筷子药材以及含有铁筷子的成药制剂建立含量测定项目奠定了基础，有利于提升铁筷子药材的质量标准及质量可控性，从而为铁筷子的进一步开发利用奠定了基础。
【专利说明】铁筷子提取物及其中有效成分的分离方法和所得化合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及铁筷子提取物及其中有效成分的分离方法和所得化合物，属于中药有效成分的提取分离【技术领域】。
【背景技术】
[0002]铁篌子为腊梅科腊梅属植物腊梅Chimonanthus praecox(L.) link.及山腊梅Chimonanthus nitens oliv.的干燥细根,为贵州省苗药,收载于2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》，又名岩马桑，臭蜡梅，野蜡梅等，具清热解毒、活血散癖、消肿止痛之功效，主治哮喘，劳伤咳嗽，胃痛，膀肮炎、尿道炎、疮疖肿毒及跌打损伤等症。记载始于《救荒本草》，谓:“多生南方，今北土亦有之。其树枝条颇似季，其叶似桃叶而宽大，纹微粗，开淡黄花。”《纲目》始载入药，曰:“解暑，生津。”对其描述为:“蜡梅小树，丛枝尖叶。……腊月开小花而香淡。”可见铁筷子用药历史悠久。贵州省少数民族多用于治疗风湿骨痛，跌打损伤等。目前已有贵州药企已将铁筷子运用到骨伤类疾病和风寒感冒的治疗当中，例如贵州民族药厂生产的风寒感冒胶囊、贵阳新天药业股份有限公司生产的生龙驱风药酒、贵州恒霸药业有限责任公司生产的伤科灵喷雾剂等都已在市场上销售。
[0003]由于《贵州省中药材、民族药材质量标准》中铁筷子仅有显微鉴别和薄层鉴别两项，未建立含量测定项，质量可控性较差。为了促进民族药相关科研基础工作及利用开发，本课题对铁筷子化学成分进行了系统研究，通过药理实验筛选铁筷子有效部位并分离其中化学成分，选取分离得到 的有效成分作为对照品，可建立含量测定方法，为含有铁筷子的成药制剂或正在研制的成药制剂的质量控制提供科学依据，这对药材质量标准的提升和进一步研究以及推广使用有重要的意义。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于，提供一种铁筷子提取物及其制备方法，以及该提取物中有效成分的分离方法和所得化合物。本发明通过实验筛选出苗药铁筷子抗炎镇痛活性最佳有效部位，并从该最佳有效部位分离得到17个化合物，为铁筷子药材以及含有铁筷子的成药制剂建立含量测定项目奠定了基础，有利于提升铁筷子药材的质量标准及质量可控性。
[0005]本发明的技术方案:一种铁筷子提取物，是将铁筷子药材分别用6-8倍量95%乙醇、50%乙醇各提取2-4次，合并所有提取液，浓缩干燥，然后加水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥而得。
[0006]上述铁筷子提取物的制备方法:取铁筷子药材，粉碎成粗粉，用6-8倍量95%乙醇提取2-4次，每次l-3h，得95%乙醇提取液，备用；药渣再用6-8倍量50%乙醇提取2_4次，每次l_3h，得50%乙醇提取液；合并所有提取液，减压浓缩，回收溶剂，干燥，然后加入适量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3~5次，减压浓缩乙酸乙酯萃取液，得乙酸乙酯层
浸膏，干燥即得。
[0007]优选的制备方法为:取铁筷子药材，粉碎成粗粉，分别用8倍量、6倍量、6倍量95%乙醇提取3次，每次2h，得95%乙醇提取液，备用；药渣再分别用8倍量、6倍量、6倍量50%乙醇提取3次，每次2h，得50%乙醇提取液；合并所有提取液，减压浓缩，回收溶剂，70°C低温真空干燥，然后加入适量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3~5次，减压浓缩乙酸乙酯萃取液，得乙酸乙酯层浸膏，干燥即得。
[0008]如上所述铁筷子提取物在制备抗炎镇痛药物中的应用。
[0009]如上所述铁筷子提取物中有效成分的分离方法:将铁筷子提取物加入甲醇溶解分散，用40~80目硅胶拌样，采用200~300目硅胶柱层析分离样品，用氯仿-甲醇=100:0~0:100混合溶剂梯度洗脱，洗脱组分通过薄层层析展开，在紫外检测仪下观察，再通过5%磷钥酸溶液或5%浓硫酸-乙醇溶液浸润后高温烘烤显色观察，合并相似组分，根据洗脱溶剂氯仿-甲醇的极性将乙酸乙酯萃取部位共分成7个段(1-7段对应的洗脱溶剂分别为氯仿-甲醇=100:0、100:2、100:5、100:10、100:20、100:50、0:100)，第 6 段放置后析出晶体，得化合物5 (ZY-5);第3段经中压制备色谱，以石油醚-乙酸乙酯=100:0~0:100梯度洗脱，再经结晶和重结晶得化合物I (ZY-1)，合并此段其余组分(除化合物I之外的组分)后分为3个次组分，再通过硅胶柱层析以石油醚-乙酸乙酯=100:0~0:100反复洗脱，得化合物2 (ZY-2)、化合物3 (ZY-3)、化合物4 (ZY-4);第4段通过300~400目硅胶柱色谱，以不同比例石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮和氯仿-甲醇系统反复柱层析，得化合物7 (ZY-7)、化合物 8 (ZY-8)、化合物 9 (ZY-9)、化合物 10 (ZY-10)、化合物 11 (ZY-11)、化合物12 (ZY-12)、化合物13 (ZY-13)、化合物14 (ZY-14)、化合物16 (ZY-16)、化合物17(ZY-17)、化合物 18 (ZY-18)、化合物 19 (ZY-19)。
[0010]前述分离方法中，拌样所用40~80目硅胶为铁筷子提取物重量的1.75倍。
[0011 ] 前述分离方法中，采用200~300目硅胶柱层析分离时，装柱硅胶为铁筷子提取物重量的10倍。
[0012]采用前述分离方法从铁筷子提取物中分离得到的化合物9，其分子式为C19H3tlO6，结
构式为
【权利要求】
1.一种铁筷子提取物，其特征在于:它是将铁筷子药材分别用6-8倍量95%乙醇、50%乙醇各提取2-4次，合并所有提取液，浓缩干燥，然后加水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥而得。
2.如权利要求1所述铁筷子提取物的制备方法，其特征在于:取铁筷子药材，粉碎成粗粉，用6-8倍量95%乙醇提取2-4次，每次l-3h，得95%乙醇提取液，备用；药渣再用6_8倍量50%乙醇提取2-4次，每次l-3h，得50%乙醇提取液；合并所有提取液，减压浓缩，回收溶剂，干燥，然后加入适量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3~5次，减压浓缩乙酸乙酯萃取液，得乙酸乙酯层浸膏，干燥即得。
3.根据权利要求2所述铁筷子提取物的制备方法，其特征在于:取铁筷子药材，粉碎成粗粉，分别用8倍量、6倍量、6倍量95%乙醇提取3次，每次2h，得95%乙醇提取液，备用；药渣再分别用8倍量、6倍量、6倍量50%乙醇提取3次，每次2h，得50%乙醇提取液；合并所有提取液，减压浓缩，回收溶剂，70°C低温真空干燥，然后加入适量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3~5次，减压浓缩乙酸乙酯萃取液，得乙酸乙酯层浸膏，干燥即得。
4.权利要求1所述铁筷子提取物在制备抗炎镇痛药物中的应用。
5.权利要求1所述铁筷子提取物中有效成分的分离方法，其特征在于:将铁筷子提取物加入甲醇溶解分散，用40~80目硅胶拌样，采用200~300目硅胶柱层析分离样品，用氯仿-甲醇=100:0~0:100混合溶剂梯度洗脱，洗脱组分通过薄层层析展开，在紫外检测仪下观察，再通过5%磷钥酸溶液或5%浓硫酸-乙醇溶液浸润后高温烘烤显色观察，合并相似组分，根据洗脱溶剂氯仿-甲醇的极性将乙酸乙酯萃取部位共分成7个段，第6段放置后析出晶体，得化合物5 ;第3段经中压制备色谱，以石油醚-乙酸乙酯=100:0~0:100梯度洗脱，再经结晶和重结晶得化合物1，合并此段其余组分后分为3个次组分，再通过硅胶柱层析以石油醚-乙酸乙酯=100:0~0:100反复洗脱，得化合物2、化合物3、化合物4 ;第4段通过300~400目硅胶柱色谱，以不同比例石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮和氯仿-甲醇系统反复柱层析，得化合物7、化合物8、化合物9、化合物10、化合物11、化合物12、化合物13、化合物14、化合物16、化合物17、化合物18、化合物19。
6.根据权利要求5所述铁筷子提取物中有效成分的分离方法，其特征在于:拌样所用40~80目硅胶为铁筷子提取物重量的1.75倍。
7.根据权利要求5所述铁筷子提取物中有效成分的分离方法，其特征在于:采用200~300目硅胶柱层析分离时，装柱硅胶为铁筷子提取物重量的10倍。
8.采用权利要求5所述分离方法从铁筷子提取物中分离得到的化合物9，其分子式为C19H3tlO6，结构式为
9.采用权利要求5所述分离方法从铁筷子提取物中分离得到的化合物16，其分子式为C17H28O5，结构式为
【文档编号】A61K36/185GK103599145SQ201310519900
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年10月29日 优先权日:2013年10月29日
【发明者】靳凤云, 章誉, 潘卫东, 王祥培, 钱海兵, 高源
申请人:贵阳中医学院