一种利用硅胶色谱技术制备玉葡萄根活性部位的方法
【专利摘要】本发明涉及中药活性部位应用领域，具体涉及一种利用硅胶色谱技术制备玉葡萄根活性部位的方法。该活性部位的制备方法，包括如下步骤：(1)将玉葡萄根用醇提取，得玉葡萄根醇提取物；(2)将得到的玉葡萄根醇提取物上硅胶柱，然后用洗脱剂A进行除杂；(3)再用洗脱机B进行洗脱，收集洗脱部位，浓缩、干燥得玉葡萄根活性部位。本发明制备得到的玉葡萄根活性部位具有很好的解酒效果，不仅寻找到了玉葡萄根的新用途，而且还利用中药现代化手段从玉葡萄根中寻找到了解酒活性部位，可用于生产新的解酒药物。另外，该玉葡萄根活性部位的制备方法简单，适合工业化生产。
【专利说明】一种利用硅胶色谱技术制备玉葡萄根活性部位的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药提取物【技术领域】，具体涉及一种利用硅胶色谱技术制备玉葡萄根活性部位的方法。
【背景技术】
[0002]酒文化在我国具有数千年的历史，现在的大多数社交活动及日常生活中离不开饮酒。但饮酒过量会引起头痛眩晕、恶心呕吐、记忆力减退、甚至不清等现象。饮酒过过量也会给家庭和社会带来不良影响，如酒后破坏公物、扰乱社会治安、酒后驾驶导致严重交通事故等。另外经常醉酒还会引发脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化等疾病。因此，开发一种解酒药品或食品具有十分重要的意义。
[0003]解酒又称“醒酒”，是指使人从醉酒的状态中醒过来，恢复意识或回复自制力。通常不是自然清醒，而是采用某种方式快速解酒，起到节约时间的目的、减小乙醇对人体危害的目的。中药解酒是一种很好的方法，中国古籍中记载了葛花、枳犋子、紫葛花、人参、桑葚等植物具有很好的解酒效果。现有的解酒中药多以中药组合物形式存在，需要多种中药混合在一起，虽然很多组合物具有很好的解酒效果，但是使用的还是中国传统的中药用药方法。没有将中药使用现代化手段进行开发，即很少有以某种中药为基础开发其中的解酒有效部位的研究。由于中国拥有成千上万种中药材，目前医药古籍里记载的具有解酒效果的中药材是屈指可数的 ，因此，另外寻找到一种具有解酒作用的中药材不是件容易的事。又由于每种中药材中又含有成千上万种化学成分，即使医药古籍中记载了某药材具有解酒作用，要进一步对其进行中药现代化开发寻找其中的有效部位也需要进行大量的工作。
[0004]玉葡萄根为葡萄科蛇葡萄属三裂蛇葡萄(Ampelopsis de lavayana Planch.)的根，本品为云南较常用的中草药。别名金刚散。玉葡萄根为云南地区民间使用的草药，能了解到的使用历史约一百余年。本品具有祛风除湿，舒筋活络，消肿镇痛之功，用于跌打损伤等。是“金品”痛舒胶囊、肿痛气雾剂等系列药品使用的药材之一。曾收载于《中国药典》(1977年版)、《云南省药品标准》(1996年版)。到目前为止，并未有报道称玉葡萄根中含有解酒或护肝作用的有效部位，医药古籍中也为提到玉葡萄根具有解酒作用。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中中药来源的具有解酒作用的活性部位的开发不足，提供一种利用硅胶色谱技术制备玉葡萄根活性部位的方法。
[0006]本发明所要解决的上述问题，通过以下技术方案予以实现:
一种从玉葡萄根中制备活性部位的方法，所述活性部位具有解酒或护肝作用的，包括如下步骤:
(1)将玉葡萄根用醇提取，得玉葡萄根醇提取物；
(2)将得到的玉葡萄根醇提取物上硅胶柱，然后用洗脱剂A进行除杂；
(3)再用洗脱剂B进行洗脱，收集洗脱部位，浓缩、干燥得玉葡萄根活性部位；步骤(2)所述的洗脱剂A为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为92~94:8~6;
步骤(3)所述的洗脱剂B为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为85~88:15~12 ；
步骤(1)中所述的醇为甲或乙醇。
[0007]作为一种优选方案，步骤(2)所述的洗脱剂A为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为93:7 ;步骤(3)所述的洗脱剂B为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为86:14。
[0008]作为一种进一步优选方案，步骤(2)中洗脱剂A的用量为柱体积的31倍；步骤
(3)所述的洗脱剂B的用量为柱体积的31倍。
[0009]作为一种优选方案，，步骤(2)中硅胶柱中使用的硅胶为200-300目的硅胶，用量为玉葡萄根醇提取物质量的10-50倍。
[0010]作为一种优选方案，所述制备方法，包括如下步骤:
(1)将玉葡萄根用95%乙醇提取，将提取液浓缩干燥、得玉葡萄根醇提取物；
(2)将得到的玉葡萄根醇提取物上装有200-300目硅胶的硅胶柱，然后用洗脱剂A进行除杂；
(3)再用洗脱剂B进行洗脱，收集洗脱部位，浓缩、干燥得玉葡萄根活性部位；
步骤(2)中所述的硅胶，其用量为玉葡萄根醇提取物质量的20-30倍；
步骤(2)所述的洗脱剂A为由环己`烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为92~94:8~6;
步骤(2)中洗脱剂A的用量为柱体积的31倍；
步骤(3)所述的洗脱剂B为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为85~88:15~12 ；
步骤(3)所述的洗脱剂B的用量为柱体积的31倍。
[0011]作为一种最优选方案，所述制备方法，，包括如下步骤:
(1)将玉葡萄根用95%乙醇提取，将提取液浓缩干燥、得玉葡萄根醇提取物；
(2)将得到的玉葡萄根醇提取物上装有200-300目硅胶的硅胶柱，然后用洗脱剂A进行除杂；
(3)再用洗脱剂B进行洗脱，收集洗脱部位，浓缩、干燥得玉葡萄根活性部位；
步骤(2)中所述的硅胶，其用量为玉葡萄根醇提取物质量的20倍；
步骤(2)所述的洗脱剂A为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为93:7;
步骤(2)中洗脱剂A的用量为柱体积的5倍；
步骤(3)所述的洗脱剂B为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为86:14;
步骤(3)所述的洗脱剂B的用量为柱体积的5倍。
[0012]上述柱体积等于硅胶柱中填料硅胶所占的体积。
[0013]作为一种优选方案，步骤(1)中的提取方法为:甲醇或乙醇用量与玉葡萄根的用量比为0.5~1.0L: 100g，加热回流提取，提取次数为I~3次，时间为0.5~2h，提取温度为80~95°C，提取后将提取液浓缩干燥，得玉葡萄根提取物。
[0014]作为一种优选方案，所述玉葡萄根为葡萄科蛇葡萄属三裂蛇葡萄(Ampelopsisde lavayana Planch.)的根。一种由上述制备方法制备得到的玉葡萄根活性部位。
[0015]上述玉葡萄根活性部位在制备具有解酒或护肝作用的药物或食品中的应用。
[0016]上述玉葡萄根活性部位在制备增强乙醇脱氢酶活性或降低血液中丙二醛含量的药物中的应用。
[0017]作为一种优选方案，所述的药物含有治疗有效量的玉葡萄根提取物和药学上可接受的载体。
[0018]作为一种优选方案，所述的食品为保健品食品或饮料。
[0019]所 述的解酒药物制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、乳膏剂、口服液、针剂或粉针剂。
[0020]本发明制备得到的玉葡萄根活性部位具有很好的解酒效果，不仅寻找到了玉葡萄根的新用途，而且还利用中药现代化手段从玉葡萄根中寻找到了解酒活性部位，仅需很少的用量即可达到很好的解酒效果，可用于生产新的解酒药物。进一步研究表明，本发明制备得到的玉葡萄根活性部位能够显著的增强ADH (乙醇脱氢酶)的活性和降低血液中MDA (丙二醛)含量作用，具有很好的解酒护肝效果。另外，该玉葡萄根活性部位的制备方法简单，适合工业化生产。
【具体实施方式】
[0021]以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
[0022]实施例1玉葡萄根活性部位的制备
(1)将IKg干燥的玉葡萄根用12L体积分数为95%的乙醇加热回流提取2次，每次lh，将提取液合并浓缩干燥，得玉葡萄根乙醇提取物50g ；
(2)将得到的玉葡萄根醇提取物，上装有200-300目1000g硅胶的硅胶柱，柱体积(硅胶填料所占的体积)约2.5升；
(3)用12.5升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为93:7)进行洗脱除杂；
(4)用12.5升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为86:14)进行洗脱，收集洗脱液、浓缩干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0023]实施例2玉葡萄根活性部位的制备
(1)将IKg干燥的玉葡萄根用12L体积分数为95%的乙醇加热回流提取2次，每次lh，将提取液合并浓缩干燥，得玉葡萄根乙醇提取物47g ；
(2)将得到的玉葡萄根醇提取物，上装有200-300目1000g硅胶的硅胶柱，柱体积(硅胶填料所占的体积)约2.5升；
(3)用12.5升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为92:8)进行洗脱除杂；
(4)用12.5升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为88:12)进行洗脱，收集洗脱液、浓缩干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0024]实施例3玉葡萄根活性部位的制备
(I)将IKg干燥的玉葡萄根用12L体积分数为95%的乙醇加热回流提取2次，每次lh，将提取液合并浓缩干燥，得玉葡萄根乙醇提取物55g ；(2)将得到的玉葡萄根醇提取物，上装有200-300目1000g硅胶的硅胶柱，柱体积(硅胶填料所占的体积)约2.5升；
(3)用12.5升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为94:6)进行洗脱除杂；
(4)用12.5升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为85:15)进行洗脱，收集洗脱液、浓缩干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0025]实施例4玉葡萄根活性部位的制备
(1)将IKg干燥的玉葡萄根用12L体积分数为95%的乙醇加热回流提取2次，每次lh，将提取液合并浓缩干燥，得玉葡萄根乙醇提取物50g ；
(2)将得到的玉葡萄根醇提取物，上装有200-300目2500g硅胶的硅胶柱，柱体积(硅胶填料所占的体积)约6升；
(3)用50升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为93:7)进行洗脱除杂；
(4)用20升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为86:14)进行洗脱，收集洗脱液、浓缩干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0026]实施例5玉葡萄根活性部位的制备
(1)将IKg干燥的玉葡萄根用12L体积分数为95%的乙醇加热回流提取2次，每次lh，将提取液合并浓缩干燥，得玉葡萄根乙醇提取物43g ；
(2)将得到的玉葡萄根醇提取物，上装有200-300目500g硅胶的硅胶柱，柱体积(硅胶填料所占的体积)约1.2升；
(3)用4升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为93:7)进行洗脱除杂；
(4)用10升的环己烷/乙酸乙酯(体积比为86:14)进行洗脱，收集洗脱液、浓缩干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0027]实施例6小鼠醉酒实验
取昆明种小白鼠120只，雌雄兼用，体重18~20g，随机分为6组，每组20只，设给予实施例I~5玉葡萄根活性部位的给药组5组(取实施例1~5制备得到的玉葡萄根活性部位分别用水溶解备用)和不给药的对照组I组。各组每天灌胃给酒(53度白酒)0.4ml/只，对照组每天给酒前30min，灌胃给水0.4ml，各给药组每天给酒前30min，灌胃给药0.4ml，连续进行30天。并分别在第2、5、10、15、20天时对小鼠进行翻正反射实验，观察给酒精后Ih内小鼠出现翻正反射消失的只数，翻正反射消失可认为动物醉酒，进行每次翻正反射实验时每只小鼠实验5次，观测结果，计算其醉倒率。
【权利要求】
1.一种利用硅胶色谱技术制备玉葡萄根活性部位的方法，其特征在于，所述活性部位具有解酒或护肝作用，包括如下步骤: (1)将玉葡萄根用醇提取，得玉葡萄根醇提取物； (2)将得到的玉葡萄根醇提取物上硅胶柱，然后用洗脱剂A进行除杂； (3)再用洗脱剂B进行洗脱，收集洗脱部位，浓缩、干燥得玉葡萄根活性部位； 步骤(2)所述的洗脱剂A为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为92~94:8~6; 步骤(3)所述的洗脱剂B为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为85~88:15~12 ； 步骤(1)中所述的醇为甲醇或乙醇。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的洗脱剂A为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为93:7 ;步骤(3)所述的洗脱剂B为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为86:14。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中洗脱剂A的用量为柱体积的31倍；步骤(3)所述的洗脱剂B的用量为柱体积的31倍。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中硅胶柱中使用的硅胶为200^300目的硅胶，用量为玉葡萄根醇提取物质量的10-50倍。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)将玉葡萄根用95%乙醇提取，将提取液浓缩干燥，得玉葡萄根醇提取物； (2)将得到的玉葡萄根醇提取物上装有200-300目硅胶的硅胶柱，然后用洗脱剂A进行除杂； (3)再用洗脱剂B进行洗脱，收集洗脱部位，浓缩、干燥得玉葡萄根活性部位； 步骤(2)中所述的硅胶，其用量为玉葡萄根醇提取物质量的20-30倍； 步骤(2)所述的洗脱剂A为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为92~94:8~6; 步骤(2)中洗脱剂A的用量为柱体积的31倍； 步骤(3)所述的洗脱剂B为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为85~88:15~12 ； 步骤(3)所述的洗脱剂B的用量为柱体积的31倍。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)将玉葡萄根用95%乙醇提取，将提取液浓缩干燥、得玉葡萄根醇提取物； (2)将得到的玉葡萄根醇提取物上装有200-300目硅胶的硅胶柱，然后用洗脱剂A进行除杂； (3)再用洗脱剂B进行洗脱，收集洗脱部位，浓缩、干燥得玉葡萄根活性部位； 步骤(2)中所述的硅胶，其用量为玉葡萄根醇提取物质量的20倍； 步骤(2)所述的洗脱剂A为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为93:7; 步骤(2)中洗脱剂A的用量为柱体积的5倍；步骤(3)所述的洗脱剂B为由环己烷和乙酸乙酯组成的混合洗脱剂，其中环己烷/乙酸乙酯的体积比为86:14; 步骤(3)所述的洗脱剂B的用量为柱体积的5倍。
7.根据权利要求1飞任一项制备方法，其特征在于，所述的玉葡萄根为葡萄科蛇葡萄属 三裂蛇葡萄(Ampelopsis delavayana Planch.)的根。
8.一种由权利要求广5任一项制备方法制备得到的玉葡萄根活性部位。
9.权利要求8所述的玉葡萄根活性部位在制备具有解酒或护肝作用的药物或食品中的应用。
10.权利要求8所述的玉葡萄根活性部位在制备增强乙醇脱氢酶活性或降低血液中丙二醛含量的药 物中的应用。
【文档编号】A61K125/00GK103610844SQ201310609657
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月27日 优先权日:2013年11月27日
【发明者】杨叶风, 唐大洲, 邓国邦, 李慕扬 申请人:广州派腾知识产权服务有限公司