一种治疗脑缺血、脑梗塞的锦灯笼蓿萼总皂苷提取物的制作方法
【专利摘要】本发明属于药物领域，涉及一种治疗脑缺血、脑梗塞的锦灯笼蓿萼总皂苷提取物的用途，具体涉及一种由锦灯笼蓿萼总皂苷为原料制成片剂、胶囊剂、丸剂等临床常见药物制剂和控释制剂。经动物实验，锦灯笼蓿萼总皂苷可明显改善大鼠脑缺血损伤引起的行为症状、减少脑梗赛体积、降低脑缺血损伤的大鼠脑水肿。本发明扩展了锦灯笼蓿萼总皂苷的新的用途，也为防治脑缺血、脑梗赛提供了新的药用资源。
【专利说明】一种治疗脑缺血、脑梗塞的锦灯笼蓿萼总皂苷提取物
【技术领域】
[0001]本发明属于药物领域，涉及锦灯笼蓿萼总皂苷提取物作为防治脑缺血、脑梗塞的用途。
【背景技术】
[0002]脑缺血、脑梗塞是危险人类健康的重大疾病之一，轻者致残，重者致死，尤其以老年人为多发人群。随着我国老龄化社会的到来，将严重影响我国老年人的健康，甚者是生命，直接或间接地造成巨大的经济损失和重大的社会影响。所以，无论在中国乃至全世界，脑缺血、脑梗塞的防治都成为重点攻克的研究对象。现已发现具有一些预防和治疗脑缺血、脑梗塞的药物，但预防效果较好而治疗效果不佳，所以急待开发治疗效果明显，毒副小的天然来源的药物。目前，银杏叶提取物及其相关产品在临床应用中发挥十分确切的效果，并得到广泛的应用。鉴于我国药用植物资源丰富，物质多样性的特点，是否能够找到作用效果明显、副作用小的其它药用资源，来缓解银杏叶资源紧张的局势，从而降低脑缺血、脑梗塞的临床治疗费用。在治疗脑缺血、脑梗塞的活性成分筛选过程中，发现锦灯笼蓿萼总皂苷具有预防和治疗脑缺血的作用，首次发现锦灯笼蓿萼总皂苷具有保护脑缺血引起的神经损伤。
[0003]锦灯笼为爺科植物酸衆Physalis alkekengi L.var.franchetii ( Mast.)Makino的干燥蓿萼或带果实的蓿萼，始载于《神农本草经》，名酸酱，列为中品。主产东北三省及内蒙地区。蓿萼味苦，功效为利咽化痰、清热解毒、利尿等作用。主要华学成为甾醇类、黄酮类、生物碱类、皂苷类、氨基酸类、挥发油类和脂肪酸类等。药理作用主要集中在抗炎、抗菌、抗病毒、强心、降糖、镇痛、抗氧化、兴奋子宫、调节免疫等几个方面。
[0004]本发明之前，尚未见有锦灯笼蓿萼总皂苷防治脑缺血、脑梗塞的药理活性的报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一`种治疗脑缺血、脑梗塞的锦灯笼蓿萼总皂苷提取物；
本发明的另一目的是提供该药物的制备方法:
本发明的目的是通过以下方式实现的:
一种治疗脑缺血、脑梗塞的锦灯笼蓿萼总皂苷提取物，采用药学中常规的制药方法制备成片剂、丸剂、硬胶囊剂、口服液等等；
其中，优选的制备方法如下:
(1)取粉径锦灯笼蓿萼总皂苷提取物与崩解剂一起混合，加含聚乙烯吡咯烷酮和十六烷基硫代琥珀酸钠的乙醇水溶液，制成软材，过筛制粒，干燥，加硬脂酸镁，混合，压片，制成分散片；
(2)用水将明胶、甘露醇、黄原胶、酒石酸制成糊状物，加入锦灯笼蓿萼总皂苷提取物混匀，加入水制成均匀的混悬液，加入矫味剂和着香剂混匀，分装于圆槽中，冷冻干燥，制成冻干片;
(3)取锦灯笼蓿萼总皂苷提取物、乳糖、甘露醇、羟甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、硬脂酸镁，将上述原辅料粉碎，过6号筛，混合，粉末直接压片，制成胃内漂浮控释片。
[0006]本发明所述锦灯笼蓿萼总皂苷提取物是采用如下方法制备:
(I)锦灯笼粗皂苷的提取将干燥的成熟锦灯笼蓿萼粉碎，取600 g加入70%乙醇溶液中，60°C水浴回流提取2 h，过滤，取上清，共提取3次；将3次的滤液合并，3 500 r/min离心10 min，取上清；将上清液水浴旋转蒸发并回收乙醇。将上述上清液与配制好的水饱和正丁醇在分液漏斗上反复充分震荡混合，过夜；然后将下层水层放入烧杯中，正丁醇层保留，将水层重复上述萃取步骤两次；合并上层正丁醇层，旋转蒸发回收正丁醇至黏稠状；用少量甲醇溶解沉淀，加入5倍乙醚洗漆,3 000 r/min离心15 min,洗漆数次至上清无色；沉淀物在真空干燥箱中干燥过夜得粗皂苷。
[0007](2)锦灯笼蓿萼皂苷的纯化上样:将锦灯笼蓿萼粗皂苷配制成10 mg/mL的水溶液，充分溶解、离心后，将上清液上样于AB-8大孔树脂层析柱(4 cmX40 cm)，静止2 h后进行洗脱。洗脱:首先用蒸馏水洗脱，将洗脱液进行薄层层析(TLC)检测，直至硅胶G薄层层析检验没有显色反应为止(薄层层析方法:用正丁醇-甲酸-水(4:6:1，体积比)为展开剂，5%硫酸乙醇溶液为显色剂，100°C条件下2 min即可显色)，洗脱至无寡糖存在；然后以20%的乙醇溶液进行洗脱，约5个柱体积，然后以65%的乙醇溶液进行洗脱，将洗脱液进行三氯醋酸显色，直至无颜色反应。
[0008]将洗脱液旋转蒸发浓缩至一定体积，水浴蒸发去除存留的少量乙醇后，将浓缩液冰冻干燥，即得分离纯化后的锦灯笼蓿萼皂苷。
[0009](3)锦灯笼蓿萼皂苷鉴定及含量测定采用三氯醋酸、氯仿-浓硫酸、醋酐-浓硫酸显色反应鉴定锦灯笼皂苷。以麦角留体皂苷标准样品，采用香草醛-冰醋酸方法制作皂苷的标准曲线，并检测总皂苷提取物中皂苷的含量。
[0010]以下实验用以证明本发明的技术效果:
药理实验:锦灯笼蓿萼总皂苷分散片对MCAO大鼠脑梗塞范围的影响
1.药物与试剂:
受试药锦灯笼蓿萼总皂苷分散片:按实施例1制得，大鼠口服，用量80、40、20mg/kg/曰。
[0011]对照药-银杏叶分散片:武汉健民集团随州药业有限公司，人用量为240-360mg/人/日，大鼠用量40 mg/kg/日。
[0012]2.动物:
SD大鼠，雌雄兼用，体重220-250 g，由中国药科大学实验动物中心提供，合格证号:SCXK 10-12-0036 。
[0013]3.仪器:
MP2001-1型电子天平:由上海第二天平仪器厂生产。FA1004N型电子天平:由上海精密科学仪器公司生产；台式低速大容量离心机:TDL-5型，江苏省金坛市医疗仪器厂生产；UV-2201紫外可见分光光度计:由日本岛津公司生产。
[0014]4.方法与结果:
4.1锦灯笼蓿萼总皂苷分散片对大脑中动脉血栓模型大鼠神经症状的影响 4.1.1分组及给药:取健康大鼠，按性别体重随机分为6组:锦灯笼猜萼总阜苷分散片(80、40、20 mg/kg,即)剂量组和银杏叶分散片阳性对照、模型对照组(以上各组ri=27，早13 ^ 14或早14 ^ 13只)以及假手术对照组(n=10)，雌雄各半。各组分别于造模前和造模后给药，每天给药一次，造模前连续7天，造模后2h后给药一次。模型对照组和假手术对照组给予等容量的生理盐水。
[0015]模型制造
第七次给药后，用1%戊巴比妥钠(约35mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，仰卧固定，常规消毒皮肤，颈部正中切开，钝性分离左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)。用动脉夹夹闭颈总动脉，于颈内动脉上近颈总动脉分叉处剪一“ V ”字形切口，将一鱼线(直径
0.30 mm)沿颈内动脉缓慢插入至大脑中动脉(MCA) 口，略感阻力时停止(插入过程中无阻力感)，插入长度约(18.5±0.5) mm,结扎固定鱼线。假手术组也同样插线，但Imin后立即拔出，除不阻断大脑中动脉外，其余操作同手术组。锦灯笼蓿萼总皂苷分散片的不同剂量组、银杏叶分散片在缺血即刻和MCAO后2 h分别给予相应剂量的锦灯笼蓿萼总皂苷分散片、银杏叶分散片，假手术对照组和模型对照组在同一时间点仅给予等容积生理盐水。术后回笼饲养(3只/笼)，注意保暖。造模后每组选取20只动物继续试验。
[0016]4.1.2行为检测:在术后24h )，按Bederson等的方法并加以改进，对动物进行行为评分。1.提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为O分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或既有腕肘的屈曲又有内旋者，记为I分。2.将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力记O分；如向手术对侧推动时阻力下降者，记为I分。3.将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌 张力对等且有力者为O分；手术对侧前肢肌张力下降记为I分。4.提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为I分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物的行为障碍越严重。对行为测试打分值进行组间比较，t检验。结果见表1
表-1锦灯笼蓿萼总皂苷分散片对MCAO大鼠行为评分的影响
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20123 23 * O 72
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注:与模型组比较，*p < 0.05，** P < 0.01
结果显示，假手术组未见行为异常改变，MCAO模型组、锦灯笼蓿萼总皂苷分散片的不同计量组在术后24 h均出现偏瘫样症状，主要表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢肌张力下降，肩抗力下降。锦灯笼蓿萼总皂苷分散片各剂量组的大鼠在术后24 h，其神经症状均有不同程度的改善，统计学处理，差异显著(P < 0.05)。
[0017]4.2脑栓塞范围和脑含水量的测定
造模后24h，每组取10只大鼠断头取血取脑，去除嗅球、小脑，生理盐水洗净，滤纸吸尽水分，-20°C冷藏IOmin后，将大脑沿冠状面切成厚约5mm脑片，置1%红四氮唑(TTC)磷酸盐缓冲液中37°C避光温孵15min，洗去染色液，再用10%中性甲醛溶液固定24 h，取出称重、染重，用数码相机拍照，之后用眼科镊分离苍白区(梗塞区)和非苍白区(正常区)，计算梗塞百分比如下:
梗死百分比(%) =苍白区重量/(苍白区重量+非苍白区重量)X 100% ；
将染色后的脑组织置于110°C烘箱烘干，对照大脑湿重求出脑含水量如下:
脑组织含水量(%) = (1-脑组织干重/脑组织湿重)X100%。
[0018]结果进行组间比较，t检验。结果见表2和表3。
表-2锦灯笼蓿萼总皂苷分散片对MCAO大鼠脑组织梗死面积的影响
【权利要求】
1.锦灯笼蓿萼总皂苷提取物，用于防治脑缺血、脑梗赛。
2.如权利要求1所述锦灯笼蓿萼总皂苷提取物，该提取物中皂苷含量在80%以上。
3.如权利要求1所述的药物，其特征在于，该提取物采用药学中常规的制药方法制备成颗粒剂、硬胶囊剂、片剂、丸剂、注射剂、口服液。
4.如权利要求3所述的片剂，其特征在于，该提取物采用如下方法制备:取粉径蓿萼总皂苷提取物与崩解剂一起混合，加含聚乙烯吡咯烷酮和十六烷基硫代琥珀酸钠的乙醇水溶液，制成软材，过筛制粒，干燥，加硬脂酸镁，混合，压片，制成分散片。
5.如权利要求3所述的片剂，其特征在于，该提取物采用如下方法制备:用水将明胶、甘露醇、黄原胶、酒石酸制成糊状物，加入锦灯笼蓿萼总皂苷提取物混匀，加入水制成均匀的混悬液，加入矫味剂和着香剂混匀，分装于圆槽中，冷冻干燥，制成冻干片。
6.如权利要求3所述的片剂，其特征在于，取锦灯笼蓿萼总皂苷提取物、乳糖、甘露醇、羟甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、硬脂酸镁，将上述原辅料粉碎，过6号筛，混合，粉末直接压片，制成胃内漂浮控释片。
【文档编号】A61P9/10GK103690676SQ201310680323
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月13日 优先权日:2013年12月13日
【发明者】马舒伟, 刘兴艳, 赵明, 梁军, 刘红霞 申请人:齐齐哈尔大学