用于治疗和预防癌症的包含蒲公英植物根部提取物的药物及其制备方法

用于治疗和预防癌症的包含蒲公英植物根部提取物的药物及其制备方法
【专利摘要】本发明是有关于一种制备用于治疗或预防癌症的包括蒲公英属根部提取物的药物的改善方法。在一个方面，所述方法包括冷冻蒲公英属根部，以获得冷冻的根，所述冷冻步骤至少产生部分破坏一个或多个根部细胞的效果；干磨所述冷冻植物根，以获得磨碎的根部粉末，其中在所述干磨步骤中，冷冻的根的研磨温度维持在低于大约40℃；将该磨碎的根部粉末浸泡在溶剂中，获得含有液体溶液部分和固体部分的悬浮液；将所述液体溶液部分与所述固体部分进行分离，以提供使用在所述药剂中的分离的液体提取物。
【专利说明】用于治疗和预防癌症的包含蒲公英植物根部提取物的药物 及其制备方法
[0001] 相关申请 本申请享有35 U.S.C. 119(e)规定的、2012年2月10日申请的美国临时专利申请序列 号61/597453的权益。

【技术领域】
[0002] 本发明是有关于一种制备包含属于蒲公英属植物的根部提取物的药物的改进方 法，该药物可以用于治疗、改善或预防癌症。本发明尤其是有关于一种包括蒲公英植物根部 提取物的药物合成物的制备，用于治疗和/或预防癌症，且优选大肠癌、胰腺癌、例如黑色 素瘤的皮肤癌、以及血癌，例如慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性单核细胞 骨髓性白血病和霍奇金氏淋巴癌。

【背景技术】
[0003] 蒲公英（Taraxacum)属植物，通常也熟知为蒲公英（dandelion),是属于菊科。这 些植物通常在北半球的温带被发现，并且蒲公英的种类包括西洋蒲公英（T. officinale)、红 果蒲公英（T. erythrospermum)、朝鲜蒲公英（T. albidum)、日本蒲公英（T. japonicum)、平 滑蒲公英（T. laevigatum)、红果蒲公英和加利福尼亚蒲公英（T. californicum)。
[0004] 蒲公英是主根性二年生植物或是多年生草本植物，平均长度在15-30cm。它的叶 子大，颜色为浅绿至深绿色，在其根部聚集丛生。它的花柄是直立的，并且具有单生、顶生花 序。开花的直径范围在7-15mm，由140-400个黄色舌形小花组成。它的果实是圆锥形瘦果， 棕褐色，种子上有白色冠毛结成的绒球，随风飘散到远处。
[0005] 蒲公英属植物根部通常包含多种化合物，这些化合物包括倍半萜烯、类胡萝卜素、 香豆素、类黄酮、酚酸、多糖、桉叶内酯、三萜烯、固醇、类固醇等。这种化合物的具体例子包 括大根香叶内酯、桉叶内酯、愈创木内酯、蒲公英苦素、苯丙素、糖苷、蒲公英苷、莴苣苦素、 叶黄素、紫黄素、七叶苷、东莨菪亭、槲皮素、木犀草素、芸香苷、金圣草黄素、咖啡酸、香荚兰 酸、丁香酸、阿魏酸、绿原酸、菊苣酸、对羟基苯乙酸、对羟基苯甲酸、菊糖、葡聚糖、甘露聚 糖、野黑樱苷、11β,13_二氢山莴苣素、苦荬菜内酯D、ai nSli〇Side蒲公英酸、β-吡喃葡萄 糖基、蒲公英酸、葡萄糖基酯、11，13-二氢蒲公英酸、1' -葡萄糖苷、山莴苣苦素、山莴苣素、 菊苣苷、四氢日登内酯Β、蒲公英内酯-O-β-吡喃葡萄糖苷、野黑樱苷、二氢松柏苷、紫丁香 苷、二氢丁香苷、蒲公英留醇、Ψ-蒲公英留醇、高-蒲公英留醇、豆留醇、环状类固醇、伞形 酮、蒲公英蛋白酶、α-香树脂醇、β-香树脂醇、阿里二醇、款东二醇、羽扇豆醇、蒲公英醇、 蒲公英甾醇、 3 β -羟基_18_羽扇豆烯-21-酮、β -谷甾醇、菜油甾醇、莴苣素 Α、胆素、果胶 和蒲公英赛醇。
[0006] 蒲公英提取物在过去用于例如抗氧化剂、利尿剂、止痛剂、抗凝血剂和抗癌剂。 Sigstedt 在"Evaluation of aqueous extracts of Taraxacum officinale on growth and invasion of breast and prostate cancer cells^ (International Journal of Oncology, ：32 (2008) :1085-1090)中报道了关于从蒲公英种的西洋蒲公英的叶子（"DLE")、 花（"DFE"）或根部（"DRE"）制备的粗提取物的抗癌活性。在Sigstedt的蒲公英粗提取 物由下列步骤制备：1)在室温下将75g干的植物部分浸泡 24小时；2)过滤得到的混合物， 以除去微粒物质；以及3)冻干混合物，得到粉末。Sigstedt发现，DLE会减少MCF-1/AZ乳 腺癌细胞的生长，对LNCaP C4-2B前列腺癌细胞则不会；并且DFE和DRE在影响癌细胞生长 上都失败了。
[0007] Takasaki 在"Anti-carcinogenic Activity of Taraxacum Plant. I" (Biol· Pharm. Bull.，22. 6(1999) :602-605)报道了关于从日本蒲公英种的蒲公英中制备的根部提 取物。Takasaki描述，用礼甲醇溶液提取600g干的根部，提取3次，每次5个小时，然后蒸 发掉甲醇溶液，得到109g的甲醇提取物。Takasaki还描述了用0· 38L水提取60g的日本蒲 公英根部1个小时的水提取物，然后冻干得到的溶液。Takasaki描述到，甲醇提取物和水提 取物都能抑制两阶段的化学致癌的发生和生长。
[0008] 在 "Anti -carcinogenic Activity of Taraxacum Plant. II"（Biol.Pharm. Bull. ,22.6(1999):606-61000)报道了 Takasaki描述了另一种日本蒲公英的蒲公英根部 的制备方法，是用40L正己烷提取6. 7kg干的根部，提取3次，每次8个小时，得到120. 5g 的提取物。
[0009] 蒲公英植物的部分已被用于制备包括胶囊和药酒的不同形式的提取物。尤其蒲公 英的根部被收获用于制备"蒲公英咖啡"，将干的植物根部浸泡在沸水中而获得。已经意识 到的是，这种传统形式的蒲公英提取物通常与更低的抗癌活性有关系，当被引入到癌的或 肿瘤组织时会有10%的细胞死亡。


【发明内容】

[0010] 本发明的一个目的是提供一种用于治疗、改善和/或预防癌症的药剂或药物组合 物，该药剂或药物组合物包括蒲公英属植物根部提取物，优选地结合药学上可接受的载体、 稀释剂、粘合剂、辅助剂和/或其它抗癌剂。
[0011] 本发明的另一目的是提供一种适合于和/或有益于作为药物使用或人使用的蒲 公英属植物根部提取物。
[0012] 本发明的还一目的是提供一种包含蒲公英属植物根部提取物的药剂或药物组合 物的制备方法，该根部提取物包括至少一种化合物可用于治疗、改善和/或预防癌症。
[0013] 已经意识到的是，蒲公英属植物根部提取物可用在治疗和/或预防癌症，并且这 些癌症不受限制地包括胰腺癌、大肠癌、血癌和皮肤癌。皮肤癌可能是黑色素癌，血癌可能 是白血病，例如但不限于此，霍奇金氏淋巴癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白血病 和慢性单核细胞骨髓性白血病。
[0014] 在一个可能的方法中，治疗或预防癌症的药物通过下述步骤制备：冷冻蒲公英属 植物根部，获得冷冻的根，选择所述冷冻步骤是用于实现至少部分破坏一个或多个根部细 胞；干磨上述冷冻的根，得到磨碎的根部粉末，其中在所述干磨步骤中，冷冻的根维持在低 于大约40°C的研磨温度；将磨碎的根部粉末浸泡在溶剂中，得到具有液体提取部分和固体 颗粒部分的悬浮液；将液体提取物部分与固体颗粒部分分离，以提供用于药物的分离的液 体提取物。
[0015]然而无意于受理论约束，实验表明，包含在蒲公英属植物根部中的抗癌化合物如 果在干燥环境中提高温度的情况下可能会减少它们的活性，虽然这种影响在潮湿环境下是 不明显的或不存在的。 申请人:已经意识到，在提取制备过程中，蒲公英属植物根部不可以暴 露在干热环境中，以免导致减少甚至可能消除抗癌活性。蒲公英属植物根部和它的抗癌活 性最容易受到在研磨步骤中的影响以使其活性消除，在所述研磨步骤中，植物根部、根部细 胞和细胞内容物可能在与例如研磨刀片的研磨机的转动元件接触时被加热。许多实验显 示，在高于40°C时会发生活性损失，暴露在高于70°c时可能会带来抗癌活性的完全丧失。 [0016] 在一较佳实施例中，研磨温度保持在低于大约〇°C，更优选地在低于大约-25Γ， 最优选地在低于大约-40 °C。
[0017] 更进一步地，已经意识到的是，含有蒲公英属植物根部提取物的药物，如果所述由 干磨而非湿磨得到的植物根制备，其抗癌活性可能获得改善。干磨是被认为是能够提供改 善的和/或可控的对根部细胞的破坏，这样更多含量的细胞内抗癌内容物或化合物提供给 接下来的提取步骤。更佳地，所述冷冻的根干磨至平均粒径在小于大约100 μ m,更优选地， 小于大约50 μ m，最优选地，在大约1 μ m至大约30 μ m。
[0018] 在一个较佳的方面，蒲公英属植物根部提取物尤其用于包含在治疗、改善或预防 癌症的药物中，如果蒲公英根部从植物在春季开花或发芽前、或较佳地前90天、更佳地前 30天内采摘处于暂停活动的蒲公英属植物收获，或在冬季蓓蕾停止生长进入冬眠期之前收 获。
[0019] 然而无意于受理论约束，相信蒲公英属植物根部在开花期或休眠期制备会有物理 变化。特别地，从在三个不同时间点（春天、夏天和初秋）获得的蒲公英根（"DRE"）制备 的提取物得到的实验数据表明，从在早春和初秋时期收获的根制备的提取物对诱导癌细胞 的细胞死亡更有效。尤其，在加拿大安大略省在三月、九月和十月收获的蒲公英根对诱导癌 细胞的细胞死亡非常有效。相信根部提取物的抗癌化合物是被合成用于准备休眠期（在寒 冷的气候），其可能会诱导准备过冬的植物中的细胞死亡并消除老化细胞。
[0020] 在一个较佳实施例中，蒲公英属植物根部在冷冻步骤前，干燥至相对湿度在大约 5 %至10 %。较佳地，将植物根部切成片状根部切片，平均尺寸在大约0. 2cm至1. 0cm。
[0021] 蒲公英属植物根部最好从下列蒲公英种类、但不限于这些种的植物中获得：西洋 蒲公英、红果蒲公英、朝鲜蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、红果蒲公英和加利福尼亚蒲公 英。较佳地，植物根部从开放的草地采摘的西洋蒲公英或平滑蒲公英中获得。
[0022] 在冷冻步骤中，较佳地，植物根部接触或沉浸在液氮中，或者可选地，在低于0°C的 冷冻温度中、或者更佳地在大约-210°C至大约-30°C之间实施，持续大约5分钟至24小时， 或直到完全冰冻。
[0023]干磨步骤可以通过研磨机来实现，包括但不限于研钵及研杵、粉粹机、冲击式研磨 机、微粉磨粉机，以对根部细胞产生实质性破坏。为了减少暴露在干燥环境中超过40°C升高 的温度中，最好冷却研磨机，利用例如液氮，以阻止热量接触到冰冻的根或得到的磨碎的根 部粉末。最好将研磨机冷却到低于-25°C，更佳地，低于-5(TC。
[0024]为了更好实现位于根部细胞的有治疗活性的化合物的释放，所述研磨步骤较佳地 破坏或破开细胞，以释放它们的内部物质。
[0025] 将磨碎的根部粉末浸泡在液体或溶剂中，较佳地在极性溶剂中，例如在浸泡温度 在大约5°C至大约l〇〇°C的水中，或者更佳地在大约25°C的水中。其它合适的溶剂包括但 不限于正戊烷、环戊烷、环己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己环、三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷、四氢呋 喃、乙酸乙酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亚砜、碳酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、异丙醇、 正丙醇、乙醇、甲醇和醋酸。磨碎的根部粉末在液体中较佳地浸泡大约5分钟至大约24小 时，或者更佳地在大约10分钟至大约30分钟，有或没有搅拌。最佳地，磨碎的根部粉末以 l〇g研磨的根部/50ml水的浓度浸泡在水中，并煮沸10分钟至30分钟。
[0026] 所述悬浮液中的液体提取物部分，优选地通过过滤和/或离心分离，与固体颗粒 部分进行分离。如果离心分离被操作施，较佳地，在5000Xg至8000Xg范围内实施，以除 去任何多余的纤维。过滤优选为使用吸滤和滤纸张过滤器来操作，所述滤纸过滤器优选为 具有的孔尺寸为小于或等于大约0. 45 μ m，并最优选为小于或等于大约0. 22 μ m。在一个最 优选实施例中，所述过滤步骤使用降低的孔尺寸的滤纸过滤器逐步过滤。用于所述过滤步 骤的一个或多个过滤器或滤纸可以是设置为可以除菌的。
[0027] 较佳地，从悬浮液中获得的分离的液体提取物冷冻干燥至提取物粉末。更佳地，该 冷冻干燥步骤的操作温度在大约-80?至-40°C。
[0028] 所述提取物粉末可以和药学上可接受的载体、稀释剂、粘结剂、辅助剂和/或额外 的抗癌剂一起包括在所述药物中。所述抗癌剂包括二甲双胍、羟基脲、环磷酰胺和/或依托 泊苷。
[0029] 所述药物较佳地包括包含大约5mg/kg体重/天至大约1000mg/kg体重/天的范 围内的所述提取物粉末的剂量，更佳地在大约10mg/kg体重/天至大约70mg/kg体重/天。 或者，较佳地在大约0. 5g至大约70g，更佳地在大约1至4g的所述提取物粉末包括在所述 药物中制成每日剂量。
[0030] 在另一方面，本发明还提供一种用于治疗或预防癌症的、包括蒲公英属植物根部 提取物的药物的制备方法，该方法包括下列步骤：（1)冷冻蒲公英属植物根部，以获得冷冻 的植物根，所述冷冻步骤至少产生部分破坏一个或多个根部细胞的效果，其中所述蒲公英 植物根部包括在植物发芽或开花之前或在芽生长停止后收获的处于休眠状态的蒲公英属 植物根部；(2)千磨所述冷冻的植物根，以获得平均粒径小于大约100 μ m、较佳地小于大约 5〇 μ m的磨碎的植物根部粉末，其中在所述干磨步骤中，冷冻的根的研磨温度维持在低于大 约40°C; (3)将该磨碎的植物根部粉末浸泡在包括乙醇和水的其中一种或两种的溶剂中，生 成含有液体溶液部分和固体部分的混合物；(4)将所述液体溶液部分与所述固体部分进行 分离；以及（ 5)冷冻干燥所述液体溶液部分，获得作为干燥的提取物粉末的蒲公英属植物 根部提取物，并可选地，将该干燥的提取物部分与药学可接受的载体、稀释剂、粘合剂、辅助 剂和抗癌剂中的一种或多种混合。
[0031] 处于休眠状态的植物根部在第一次季节性植物开花或发芽之前的90天、较佳地 30天内收获。该植物根部可来自属于西洋蒲公英、红果蒲公英、朝鲜蒲公英、日本蒲公英、平 滑蒲公英、红果蒲公英和加利福尼亚蒲公英的种中的植物。
[0032]该植物根部较佳地在冷冻前干燥至小于大约10%的相对湿度。在接下来的所述 冷冻步骤中，根植物根部较佳地接触或浸没在液氮中，至平均冷冻温度在大约-210Γ至大 约-30°C。
[0033] 在所述千磨步骤中，所述冷冻的根研磨，较佳地，至平均粒径小于大约 50 μ m、更佳 地在大约1 μ m至大约30 μ m之间。所述千磨步骤可以通过研磨机实现，包括但不限于研钵 及研杵、粉粹机、冲击式研磨机、微粉磨粉机，以对一个或多个根部细胞产生实质性破坏。为 了减少暴露在干燥环境中升高的温度中，最好冷却研磨机，利用例如液氮，最好将研磨机冷 却到低于大约-25°C,更佳地低于大约_50°C。
[0034] 在所述浸泡步骤中所用的溶剂可以额外地包括正戊烷、环戊烷、环己烷、苯、甲苯、 1,4-二氧己环、三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙醋、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、 二甲基亚砜、碳酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、异丙醇、正丙醇、甲醇或醋酸中的一种或多种。所述 浸泡步骤的浸泡温度较佳地在大约5°C至大约100°C，较佳地浸泡大约5分钟至大约24小 时，有或没有搅拌。
[0035]从混合物中的所述固体部分分离出所述液体溶液部分可以利用不同的分离技 术。这种技术包括、但不限于离心分离和过滤。如果采用离心分离，较佳地在5000Xg至 8000Xg之间进行。如果使用过滤，较佳地使用至少两种不同孔径的过滤器进行至少两次， 例如大约〇· 45 μ m和大约0. 22 μ m。为了提高人体服用的安全性，用于过滤步骤的一种或多 种过滤器或滤纸可以设置成可以除菌的。
[0036] 在一个较佳实施例中，研磨温度低于大约0°C、较佳地低于大约-25?、更佳地低 于大约-40°C。
[0037] 所述药物较佳地包括一种包含大约5mg/kg体重/天至大约1000mg/kg体重/天、 更佳地在大约10mg/kg体重/天至大约70mg/kg体重/天范围内的所述蒲公英属植物提取 物的剂量。或者，较佳地在大约〇· 5g至大约70g，更佳地在大约l-4g的所述蒲公英属植物 提取物包括在每日剂量形式的所述药物中。
[0038] 在方面（1)中，本发明还提供一种用于治疗或预防癌症的药物的制备方法，该方 法包括：冷冻蒲公英属植物根部，以获得冷冻的植物根，所述冷冻步骤至少产生部分破坏一 个或多个根部细胞的效果；干磨所述冷冻植物根，以获得磨碎的植物根部粉末，其中在所述 千磨步骤中，冷冻的根的研磨温度维持在低于大约40°C ;将该磨碎的植物根部粉末浸泡在 溶剂中，获得含有液体溶液部分和固体部分的悬浮液；将所述液体溶液部分与所述固体部 分进行分离，以提供使用在所述药物中的分离的液体提取物。
[0039] 在方面（2)中，本发明提供一种根据方面（1)所述的方法，其中所述癌症是大肠 癌、胰腺癌、血癌或皮肤癌。
[0040] 在方面（3)中，本发明提供一种根据方面（1)和/或（2)所述的方法，其中所述癌 症包括所述血癌或所述皮肤癌，并且选自由慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性 单核细胞骨髓性白血病、霍奇金氏淋巴癌和黑色素瘤组成的组。
[0041] 在方面（4)中，本发明提供一种根据方面（1)至（3)中任意一个或多个任意组合 的方法，其中在所述冷冻步骤之前，该方法还包括干燥所述植物根部至相对湿度在大约5% 至大约10 %之间。
[0042]在方面（5)中，本发明提供一种根据方面（D至（4)中的任意一个或多个任意组 合的方法，其中所述蒲公英属植物根部包括在植物开花或发芽之前或在芽生长停止之后收 获的处于休眠状态的蒲公英属植物根部。
[0043] 在方面（6)中，本发明提供一种根据方面（1)至（5)中的任意一个或多个任意组 合的方法，其中所述处于休眠状态的蒲公英属植物根部在所述的植物开花或发芽之前大约 90天、较佳地大约30天内收获。
[0044] 在方面（7)中，本发明提供一种根据方面（1)至（6)中的任意一个或多个任意组 合的方法，其中所述蒲公英属植物根部是来自属于选自包括西洋蒲公英、红果蒲公英、朝鲜 蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、红果蒲公英和加利福尼亚蒲公英的组的种的植物中的一 种或几种。
[0045] 在方面（8)中，本发明提供一种根据方面（1)至（7)中的任意一个或多个任意会且 合的方法，其中所述冷冻步骤包括将所述植物根部接触或浸没在液氮中，或者将所述植物 根部冷冻至平均冷冻温度在大约-21(TC至大约-30°C之间。
[0046] 在方面（9)中，本发明提供一种根据方面（1)至（8)中的任意一个或多个任意组 合的方法，其中所述干磨步骤包括干燥研磨所述冷冻的根至平均粒径小于大约100 μ m、较 佳地小于大约50 μ m。
[0047] 在方面（10)中，本发明提供一种根据方面（1)至（9)中的任意一个或多个任意组 合的方法，其中所述干磨步骤包括用选自由粉粹机、冲击式研磨机和微粉磨粉机组成的组 的研磨机干燥研磨冷冻的根，其中将研磨机或它的部件冷却至低于大约-25?，更佳地低于 大约-50?，以阻止热量接触到冰冻的根或磨碎的根部粉末。
[0048] 在方面（11)中，本发明提供一种根据方面（1)至（10)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述所述溶剂包括水、正戊烷、环戊烷、环己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己环、 三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亚砜、碳 酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、异丙醇、正丙醇、乙醇、甲醇和醋酸中的一种或多种。
[0049] 在方面（12)中，本发明提供一种根据方面（1)至（11)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述浸泡步骤包括将所述磨碎的根部粉末以浸泡温度在大约2°C至大约 150?、较佳地大约5°C至大约100?条件下浸泡在水中，较佳地浸泡大约5分钟至大约料 小时，有或没有搅拌。
[0050] 在方面（I3)中，本发明提供一种根据方面⑴至（12)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述分离步骤包括过滤和离心分离中的至少一种，其中所述过滤可以是 实施一次，或者使用多个相同或不同孔径的过滤器实施多次，所述离心分离是在 5〇〇〇Xg 至8000Xg之间进行。
[0051] 在方面（14)中，本发明提供一种根据方面（1)至（13)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述分离步骤包括用具有第一孔径为大约〇. 45 μ m的第一过滤器和具有 第二孔径为大约0· 22 μ m的第二过滤器过滤所述悬浮液至少两次，其中所述第二过滤器是 用于除菌。
[0052] 在方面（I5)中，本发明提供一种根据方面（1)至（H)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中在所述干磨步骤之前，该方法还包括将所述植物根部切片，形成多个根部 切片。
[0053]在方面（I6)中，本发明提供一种根据方面（1)至（15)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述研磨温度低于大约o°c。
[0054]在方面（Π )中，本发明提供一种根据方面⑴至（16)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述研磨温度低于大约-25。(：，较佳地低于大约-4(TC。
[0055] 在方面（I8)中，本发明提供一种根据方面（1)至（17)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述方法还包括冷冻干燥分离后的液体提取物，以获得提取物粉末，以 及，可选地，将所述提取物粉末与药学上可接受的载体、稀释剂、粘结剂、辅助剂和抗癌剂中 的一种或多种混合。
[0056] 在方面（19)中，本发明提供一种根据方面⑴至（18)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述抗癌剂是二甲双胍、羟基脲、环磷酰胺和依托泊苷中的一种或多种。
[0057] 在方面（20)中，本发明提供一种根据方面⑴至（19)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述药物包括一个具有大约5mg/kg体重/天至大约1000mg/kg体重/天 的范围内的所述提取物粉末的剂量，更佳地在大约l〇mg/kg体重/天至大约70mg/kg体重 /天。
[0058] 在方面（21)中，本发明提供一种根据方面（1)至（20)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述药物包括一个日剂量,该日剂量是具有大约0. 5g至大约70g，更佳地 在大约1至4g的所述提取物粉末。
[0059] 在方面（22)中，本发明提供一种用于治疗或预防癌症的、包括蒲公英属植物根部 提取物的药物的制备方法，该方法包括下列步骤：（1)冷冻蒲公英属植物根部，以获得冷冻 的植物根，所述冷冻步骤至少产生部分破坏一个或多个根部细胞的效果，其中所述蒲公英 植物根部包括在植物发芽或开花之前或在芽生长停止后收获的处于休眠状态的蒲公英属 植物根部；(2)干磨所述冷冻植物根，以获得平均粒径在小于大约100 μ m、较佳地小于大约 50 μ m的磨碎的植物根部粉末，其中在所述干磨步骤中，冷冻的根的研磨温度维持在低于大 约40?; (3)将该磨碎的植物根部粉末浸泡在包括乙醇和水的其中一种或两种溶剂中，生成 含有液体溶液部分和固体部分的混合物；(4)将所述液体溶液部分与所述固体部分进行分 离；以及（5)冷冻千燥所述液体溶液部分，获得作为干燥的提取物粉末的蒲公英属植物根 部提取物，并可选地，将该干燥的提取物部分与药学可接受的载体、稀释剂、粘合剂、辅助剂 和抗癌剂中的一种或多种混合。
[0060] 在方面（23)中，本发明提供一种根据方面（22)所述的方法，其中所述癌症是大肠 癌、胰腺癌、血癌或皮肤癌。
[0061] 在方面（24)中，本发明提供一种根据方面（22)和/或（23)所述的方法，其中所 述癌症是慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性单核细胞骨髓性白血病、霍奇金氏 淋巴癌或黑色素瘤。
[0062] 在方面（25)中，本发明提供一种根据方面（22)至（24)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述处于休眠状态的蒲公英属植物根部在第一季节性植物开花或发芽之 前大约90天、较佳地大约30天内收获。
[0063]在方面（26)中，本发明提供一种根据方面（22)至（25)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述蒲公英属植物根部是来自属于选自包括西洋蒲公英、红果蒲公英、朝 鲜蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、红果蒲公英和加利福尼亚蒲公英的组的种的植物中的 一种或多种。
[0064] 在方面（27)中，本发明提供一种根据方面（22)至（26)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中在所述冷冻步骤之前，该方法还包括干燥所述植物根部至相对湿度低于 大约10%。
[0065]在方面（28)中，本发明提供一种根据方面（22)至（27)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述冷冻步骤包括将所述植物根部接触或浸没在液氮中，冷冻至平均冷 冻温度在大约-210°C至大约-30?之间。
[0066] 在方面（29)中，本发明提供一种根据方面（22)至（28)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述干磨步骤包括用研磨机干燥研磨所述冷冻的根至平均粒径小于大约 5〇 μ m,并且产生对一个或多个根部细胞有实质性破坏的效果，所述研磨机选自由粉粹机、 冲击式研磨机和微粉磨粉机组成的组，其中所述干磨步骤还包括将所述研磨机冷却至低于 大约-25°C。
[0067] 在方面（30)中，本发明提供一种根据方面（22)至（29)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述溶剂还包括正戊烷、环戊烷、环己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己环、三氯甲 烷、乙醚、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亚砜、碳酸丙烯 酯、甲酸、正丁醇、异丙醇、正丙醇、甲醇或醋酸。
[0068] 在方面（31)中，本发明提供一种根据方面（22)至（30)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述浸泡步骤包括将所述磨碎的植物根部粉末以浸泡温度在大约5°C至 大约100°C条件下浸泡在溶剂中，较佳地浸泡大约5分钟至大约24小时，有或没有搅拌。 [0069] 在方面（32)中，本发明提供一种根据方面（22)至（31)中的任意一个或多个任 意组合的方法，其中所述分离步骤包括过滤和离心分离中的至少一种，其中所述过滤是进 行一次或者使用多个相同或不同孔径的过滤器进行多次，所述离心分离是在5000Xg至 8000 Xg之间进行。
[0070] 在方面（33)中，本发明提供一种根据方面（22)至（32)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述分离步骤包括用具有第一孔径为大约0. 45 μ m的第一过滤器和具有 第二孔径为大约〇· 22 μ m的第二过滤器过滤所述混合物至少两次，其中所述第一和/或第 二过滤器是用于除菌。
[0071] 在方面（34)中，本发明提供一种根据方面（22)至（33)中的任意一个或多个任 意组合的方法，其中所述抗癌剂包括二甲双胍、羟基脲、环磷酰胺和依托泊苷中的一种或多 种。
[0072]在方面（35)中，本发明提供一种根据方面（22)至（34)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中在所述干磨步骤之前，该方法还包括将所述蒲公英属植物根部切片，形成 数片平均尺寸在大约〇. 2cm至1. 5cm的根部切片。
[0073] 在方面（36)中，本发明提供一种根据方面（22)至（35)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述研磨温度低于大约〇°C。
[0074] 在方面（37)中，本发明提供一种根据方面（22)至（36)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述研磨温度低于大约-25°C，较佳地低于大约-40°C。
[0075] 在方面（38)中，本发明提供一种根据方面（22)至（37)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述药物包括一种具有大约5mg/kg体重/天至大约lOOOrag/kg体重/天 的范围内的所述蒲公英属植物根部提取物的剂量，更佳地在大约10mg/kg体重/天至大约 70mg/kg体重/天。
[0076] 在方面（39)中，本发明提供一种根据方面（22)至（38)中的任意一个或多个任意 组合的方法，其中所述药物包括一种日剂量，该日剂量是具有大约0. 5g至大约7〇g，更佳地 在大约l-4g的所述蒲公英属植物根部提取物。

【专利附图】

【附图说明】 ~
[0077] 图丨是显示基于用不同含量的DRE(x轴）治疗的人急性T-细胞白血病（Jurkat) 细胞诱发细胞凋亡的百分数（y轴）的柱状图。 、
[0078] 图2是显示不同浓度DRE(x轴）的Jurkat细胞的存活百分率（y轴）的柱状图。
[0079] 图3是显示用不同浓度的DRE(x轴）治疗24、48或72小时后 A375人体黑色素瘤 细胞的存活百分率（y轴）的线图。 、
[0080]图4是一组用浓度为lmg/ml、2_ 5mg/ml、5mg/ml和l〇mg/ml的DRE、并且包括对照 组治疗48小时后，用Hoechst 33?2荧光染料着色的A375人体黑色素瘤细胞的荧光显微 镜照片。 >
[0081] 图 5 是一组用浓度为 〇· 6mg/ml、1. 〇mg/ml、2. 5mg/ml 和 5. Omg/ml 的 DRE、并且包括 对照组治疗48小时后，用Hoechst荧光染料着色或Annexin-V染色剂着色（分别在顶部行 和底部行）的MV-4-11细胞的400倍放大的图像。
[0082] 图 6 是一组用浓度为 〇· 6mg/ml、1· 〇mg/ml、2. 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包括 对照组治疗48小时后用Hoechst荧光染料着色或Annexin-V染色剂着色（分别在顶部行 和底部行）的U-937细胞的400倍放大的图像。
[0083] 图 7 是一组用浓度为 〇· 6mg/ml、1. 〇mg/ml、2· 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包括 对照组治疗48小时后用Hoechst荧光染料着色或Annexin-V染色剂着色（分别在顶部行 和底部行）的HL-60细胞的400倍放大的图像。
[0084] 图 8 是用浓度为 0· 6mg/ml、1. 0mg/ml、2. 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包括对照 组治疗48小时后，MV-4-11细胞被诱导凋亡的百分数（y轴）的柱状图。
[0085] 图 9 是显示用浓度为 〇· 6mg/ml、l· 〇mg/ml、2· 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包括 对照组治疗48小时后，HL-60细胞被诱导凋亡的百分数（y轴）的柱状图。
[0086] 图 10 是显示用浓度为 0· 6mg/ml、l. 〇mg/ml、2. 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包 括对照组治疗48小时后，U-937细胞被诱导凋亡的百分数（y轴）的柱状图。
[0087] 图11是显示用0. 6mg/ml的DRE、并且包括对照组治疗5分钟、15分钟、30分钟和 60分钟后，MV-4-11细胞中的Caspase-8的活力或活性（y轴）的柱状图。
[0088] 图12是显示用0. 6mg/nil的DRE、并且包括对照组治疗5分钟、15分钟、30分钟和 60分钟后，MV-4-11细胞中的Caspase-3的活力或活性（y轴）的柱状图。
[0089] 图13是一组用浓度为2. 5mg/ml、5mg/ml和7. 5mg/ml的DRE、包括对照组（行）治 疗24小时、48小时、72小时和96小时（列）的用Hoechst荧光染料着色的PANC-1细胞图 像。
[0090] 图14是显示用浓度为2. 5mg/ml、5mg/ml和7. 5mg/ml的DRE、包括对照组治疗24 小时、48小时、72小时和96小时（X轴）的PANC-1细胞的细胞凋亡的平均百分数（y轴） 的柱状图。
[0091] 图15是一组用普通过滤水或包含5. Omg/ml的DRE的水治疗一个月（分别在左列 和右列）后40倍或63倍放大（分别在顶部行和底部行）的伊红染色的balb/c小鼠的肝 脏组织图像。
[0092] 图16是显示用浓度为2. 5mg/ml或5. 0mg/ml的DRE、包括对照组治疗不同天数（x 轴）的balb/c小鼠体重（y轴）的线图。
[0093] 图17是一组用浓度为0· 4mg/ml、0. 6mg/ml和2. 5mg/ml的DRE、包括对照组治疗96 小时后，用Hoechst 33342荧光染色剂着色（上行）或在相衬照明（底行）上看到的DnFADD 细胞400倍放大的显微镜图像。
[0094] 图18是显示用浓度为0. 4mg/ml、0. 6mg/ml和2. 5mg/ml (X轴）、包括对照组的DRE 治疗的外周血单个核细胞的细胞死亡平均百分数（y轴）的柱状图。
[0095] 图19是显示用浓度为0. 4mg/ml和0. 6mg/ml的DRE (X轴）、包括对照组治疗的外 周血单个核细胞的浓度（y轴）的柱状图。
[0096] 图20是显示用通过使用台盼蓝拒染试验获得的浓度为0. 6mg/ml和2. 5mg/ml的 DRE (X轴）、包括对照组治疗的DnFADD细胞的浓度（y轴）图。
[0097] 图21是显示用DRE、包括对照组治疗15分钟、30分钟、60分钟、180分钟和1440 分钟的DnFADD细胞中Caspase-8的平均显示的活力或活性（y轴）的柱状图。
[0098] 图22是一组用浓度为1. Omg/ml、2. 5mg/ml和5. Omg/ml的DRE、包括对照组治疗 后，从最新诊断的白血病病人中分、离并用Hoescht或Annexin-V染色剂（分别在顶部行和 底部行）着色的外周血单个核细胞的图像。
[0099] 图23是显示用浓度为1. Omg/ml、2. 5mg/ml和5. Omg/ml的DRE、包括对照组治疗 24小时或48小时后，从最新诊断的白血病病人中分离并被诱导细胞凋亡的外周血单个核 细胞的百分数（y轴）的柱状图。
[01 00]图 24 是显示用浓度为 0. 5mg/ml、1. Omg/ml、1. 5mg/ml、2. 0mg/ml、2. 5mg/ml、 3. 0mg/ml、3_ 5mg/ml、4. 0mg/ml、4. 5mg/ml、5· 0mg/ml、5. 5mg/ml 和 6. Omg/ml 的 DRE、包括对 照组治疗24、4S、72和96个小时后HT-29人体大肠癌细胞的存活率百分数（y轴）的柱状 图。
[0101] 图25是一组用普通过滤水（上行）或用DRE治疗一个月（底行）后，经伊红染色 的balb/c小鼠心脏、肾脏和肝脏组织的图像。
[0102] 图26是显示用DRE、包括对照组治疗不同天数（X轴）的balb/c小鼠的重量（y 轴）的线图。
[0103] 图27是显示从经DRE、包括对照组治疗的balb/c小鼠收集到的尿样中发现的蛋白 质的含量（y轴）的柱状图。
[0104] 图28是显不不同天数（X轴）对照组CD-I nu/rm小鼠的体重（y轴）的线图。
[0105] 图29是显不用浓度为2. 5mg/ml的DRE治疗不同天数（X轴）的CD-1 nu/nu小鼠 的体重（y轴）的线图。
[0106] 图3〇是CD-1 nu/nu小鼠移植HT-29细胞、并用过滤的普通过滤水治疗三个星期 后的照片。
[0107] 图31是CD-1 nu/nu小鼠移植HT-29细胞、并用浓度为2. 5mg/ml的DRE治疗三个 星期后的照片。
[0108] 图32是显示用浓度为2_5mg/ml的DRE、包括对照组治疗不同天数（X轴）的 CD-Inu/nu小鼠的肿瘤体积（y轴）的柱状图。
[0109]图33是一组用普通过滤水治疗一个月后，用1〇倍或63倍放大（分别为顶部行和 底部两行）的经伊红染色的CD-I nu/nu小鼠心脏、肾脏、肝脏和异种器官移植的肿瘤组织 图像。
[0110] 图34是一组用浓度为2. 5mg/ml的DRE治疗一个月后，用10倍或63倍放大（分 别为顶部行和底部两行）的经伊红染色的CD-1 nu/nu小鼠心脏、肾脏、肝脏和异种器官移 植的肿瘤组织图像。

【具体实施方式】
[0111] 根据本发明的较佳实施例，用于治疗和/或预防肿瘤的蒲公英属植物根部提取物 被制备。为制备出较佳的蒲公英属植物根部提取物，在加拿大安大略省，在春季开花之前的 大约30天、以及正好在秋季的开始的时候，西洋蒲公英种的蒲公英被采集。采集到的植物 在水中清洗，然后切下茎的基部以获得根部。然后将收获到的根部切成大约在长度方向上 1/4"长的切片。
[0112] 将切成的根部切片浸没在液氮中大约5-10分钟，直到完全冷冻。冷冻的切片在冲 击式研磨机中研磨至平均粒径大约小于45 μ m。将磨碎的根部浸泡在沸腾过的蒸馏水中浸 泡1个小时，以溶解活性化合物。
[0113] 在提取/溶解步骤之后，包含有活性化合物的蒸馏水用孔径大约为0.45μπι的 滤纸真空过滤，以移除其它植物物质（plant matter)和过量的纤维。然后将得到的滤液 在-80°C下冷冻千燥，以获得粉末的根部提取物。经千燥的提取物放在水中重构，给出最终 浓度为l〇〇mg/ml的存货样本。该根部提取物的存货样本进一步用孔径大约为0. 22 μ m的 细菌过滤纸真空过滤，以杀菌、制备提取物备用。为了给药，将大约lg的粉末根部提取物重 新溶解在大约10ml的沸腾过的水中，并过滤。然后滤液可以对诊断有癌症的病人给药。较 佳地，用于给药的粉末根部提取物与水的比例应该每100ml大约在0. lg至50g之间的量。
[0114] 将本发明的植物根部提取物的几份分离、并准备为生物活性试验做测试。基于DRE 诱到细胞凋亡的机制，多种化合物能够单独地或与一个或多个不同目标结合地产生活性。 而且，本发明的DRE在包括那些对白血病、大肠癌、胰腺癌和黑色素瘤中实施的体外研究显 示，在人体癌细胞系中可选择性地诱发程序化的细胞死亡类型I和类型II，同时保持非肿 瘤细胞对细胞凋亡和自噬诱导不敏感。尤其，发明人发现，DRE可通过靶向于癌细胞上的死 亡受体，例如Fas或TNF死亡受体家族，或者激活死亡诱导信号复合物，来快速激活外在细 胞死亡通路，从而诱导细胞死亡，通过治疗后Caspase-8的快速激活和随后的Caspase-3的 激活可以证实这一点。
[0115] 而且，在DRE中的化合物显示出可直接靶向于癌细胞的线粒体，意味着DRE的成分 可直接与线粒体互相作用，引起它的不稳定，来释放促凋亡因子并产生活性氧。DRE被认为 是包含了多种可能具有多重靶标的化合物，并可以是以水溶性盐、配位体衍生物或其它相 互作用/结合的蛋白的形式存在。
[0116] 本发明的药物，采用大量细胞系测试它的活性和/或安全性。除此之外，还用从十 个不同癌症病人中分离出来的细胞系做体外实验，这十个不同癌症病人患有慢性淋巴细胞 白血病、慢性髓细胞白血病或慢性单核细胞骨髓白血病。从这些病人中收集的血样用不同 剂量的蒲公英根部提取物处理48小时。与从健康的志愿者中分离出的血液细胞系相比，蒲 公英根部提取物显示出对慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病和慢性单核细胞骨髓白 血病的细胞系的诱导细胞死亡。
[0117] 下面还提供一个表格，这个表格综述了许多在其它细胞系上做的额外测试和从每 个测试的细胞系获得的实验数据：

【权利要求】
1. 一种制备用于治疗或预防癌症的药物的方法，该方法包括： 冷冻蒲公英属植物根部，以获得冷冻的植物根，所述冷冻步骤至少产生部分破坏一个 或多个根部细胞的效果； 干燥研磨所述冷冻植物根，以获得磨碎的根部粉末，其中在所述干燥研磨步骤中，冷冻 的根的研磨温度维持在低于大约4〇°C ; 将该磨碎的根部粉末浸泡在溶剂中，获得含有液体萃取部分和固体颗粒部分的悬浮 液；以及 将所述液体萃取部分与所述固体颗粒部分进行分离，以提供使用在所述药剂中的分离 的液体提取物。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述癌症是大肠癌、胰腺癌、血癌或皮肤 癌。
3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述癌症包括所述血癌或所述皮肤癌，并 且选自由慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性单核细胞骨髓性白血病、霍奇金氏 淋巴癌和黑色素瘤组成的组。
4. 根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，在所述冷冻步骤之前，该方 法还包括千燥所述植物根部至相对湿度在大约5%至大约10%之间。
5. 根据权利要求1-4中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述蒲公英属植物根部 包括在植物开花或发芽之前或在芽生长停止之后收获的处于休眠状态的蒲公英属植物根 部。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述处于休眠状态的蒲公英属植物根部 在所述的植物开花或发芽之前大约90天、较佳地大约30天内收获。
7. 根据权利要求1-6中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述蒲公英属植物根部 是来自于属于选自包括西洋蒲公英、红果蒲公英、朝鲜蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、红 果蒲公英和加利福尼亚蒲公英的组的种的植物。
8. 根据权利要求1-7中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述冷冻步骤包括将所 述植物根部接触或浸没在液氮中，或者将所述植物根部冷冻至平均冷冻温度在大约-21〇°C 至大约-30Γ之间。
9. 根据权利要求1-8中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述干燥研磨步骤包括 干燥研磨所述冷冻的根至平均粒径小于大约100 μ m、较佳地小于大约50 y m。
10. 根据权利要求1-9中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述干燥研磨步骤包括 用选自由粉粹机、冲击式研磨机和微粉磨粉机组成的组的研磨机干燥研磨所述冷冻的根， 其中将研磨机或它的部件冷却至低于大约-25°C，更佳地低于大约_ 5〇?，以阻止热量接触 到所述冷冻的根或磨碎的根部粉末。
11. 根据权利要求1-10中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述溶剂包括水、正戊 烷、环戊烷、环己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己环、三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙 酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亚砜、碳酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、异丙醇、正丙醇、乙 醇、甲醇和醋酸中的一种或多种。
12. 根据权利要求1-11中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述浸泡步骤包括将 所述磨碎的根部粉末浸泡在水中，浸泡温度在大约5°C至大约100°C浸泡在水中，较佳地浸 泡大约5分钟至大约24小时，有或没有搅拌。
13. 根据权利要求1-12中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述分离步骤包括过 滤和离心分离中的至少一种，其中所述过滤是进行一次或者使用多种相同或不同孔径的过 滤器进行多次，所述离心分离是在5000Xg至8000Xg之间进行。
14. 根据权利要求1-13中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述分离步骤包括用 具有第一孔径为大约〇· 45 μ m的第一过滤器和具有第二孔径为大约0· 22 μ m的第二过滤器 过滤所述悬浮液至少两次，其中所述第二过滤器是用于除菌。
15. 根据权利要求1-14中的任意一项所述的方法，其特征在于，在所述干燥研磨步骤 之前，该方法还包括将所述植物根部切片，形成多个根部切片。
16. 根据权利要求1-15中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述研磨温度低于大 约(TC。
17. 根据权利要求1-16中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述研磨温度低于大 约-25?，较佳地低于大约-40°C。
18. 根据权利要求1-17中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括冷冻 干燥分离后的液体提取物，以获得提取物粉末，以及，可选地，将所述提取物粉末与药学上 可接受的载体、稀释剂、粘结剂、辅助剂和抗癌剂中的一种或多种混合。
19. 根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述抗癌剂是二甲双胍、羟基脲、环磷 酰胺和依托泊苷中的一种或多种。
20. 根据权利要求18或19所述的方法，其特征在于，所述药剂包括一种具有大约5mg/ kg体重/天至大约l〇〇〇mg/kg体重/天的范围内的所述提取物粉末的剂量，更佳地在大约 10mg/kg体重/天至大约70mg/kg体重/天。
21. 根据权利要求1-20中的任意一项所述的方法，所述药剂包括一日剂量，该日剂量 是具有大约〇. 5g至大约70g、更佳地在大约1至4g的所述提取物粉末。
22. -种制备用于治疗或预防癌症的包括蒲公英属植物根部提取物的药物的方法，其 特征在于，该方法包括下列步骤： (1) 冷冻蒲公英属植物根部，以获得冷冻的植物根，所述冷冻步骤至少产生部分破坏至 少一个根部细胞的效果，其中所述蒲公英植物根部包括在植物发芽或开花之前或在芽生长 停止后采摘的处于休眠状态的蒲公英属植物根部； (2) 干燥研磨所述冷冻植物根，以获得平均粒径在小于大约1〇〇 μ m、较佳地小于大约 50 μ m的磨碎的植物根部粉末，其中在所述干燥研磨步骤中，冷冻的根的研磨温度维持在低 于大约40? ; (3) 将该磨碎的植物根部粉末浸泡在包括乙醇和水的其中一种或两种溶剂中，生成含 有液体溶液部分和固体部分的混合物； (4) 将所述液体溶液部分与所述固体部分进行分离；以及 (5) 冷冻千燥所述液体溶液部分，获得作为干燥的提取物粉末的蒲公英属植物根部提 取物，并可选地，将该干燥的提取物部分与药学可接受的载体、稀释剂、粘合剂、辅助剂和抗 癌剂中的一种或多种混合。
23. 根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述癌症是大肠癌、胰腺癌、血癌或皮 肤癌。
24. 根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述癌症是慢性淋巴细胞白血病、慢性 髓细胞白血病、慢性单核细胞骨髓性白血病、霍奇金氏淋巴癌或黑色素瘤。
25. 根据权利要求22-24中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述处于休眠状态的 蒲公英属植物根部在第一季节性植物开花或发芽之前大约90天、较佳地大约30天内收获。
26. 根据权利要求22-25中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述蒲公英属植物根 部是来自于属于选自包括西洋蒲公英、红果蒲公英、朝鲜蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、 红果蒲公英和加利福尼亚蒲公英的组的种的植物。
27. 根据权利要求22-26中的任意一项所述的方法，其特征在于，在所述冷冻步骤之 前，该方法还包括干燥所述植物根部至相对湿度低于大约1〇%。
28. 根据权利要求22-27中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述冷冻步骤包括 将所述植物根部接触或浸没在液氮中，冷冻至平均冷冻温度在大约-210°C至大约-30?之 间。
29. 根据权利要求22-28中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述干燥研磨步骤包 括用研磨机干燥研磨所述冷冻的根至平均粒径小于大约50 μ m，并且产生对一个或多个根 部细胞有实质性破坏的效果，所述研磨机选自由粉粹机、冲击式研磨机和微粉磨粉机组成 的组，其中所述干燥研磨步骤还包括将所述研磨机冷却至低于大约_25°C。
30. 根据权利要求22-29中的任意一个所述的方法，其特征在于，所述溶剂还包括正戊 烷、环戊烷、环己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己环、三氯甲烷、乙_、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙 酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亚砜、碳酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、异丙醇、正丙醇、甲 醇或醋酸。
31. 根据权利要求22-30中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述浸泡步骤包括将 所述磨碎的植物根部粉末以浸泡温度在大约5°C至大约100°C浸泡在溶剂中，较佳地浸泡 大约5分钟至大约24小时，有或没有搅拌。
32. 根据权利要求22-31中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述分离步骤包括过 滤和离心分离中的至少一种，其中所述过滤是进行一次或者使用多种相同或不同孔径的过 滤器进行多次，所述离心分离是在5000 X g至8000 X g之间进行。
33. 根据权利要求22-32中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述分离步骤包括用 具有第一孔径为大约〇. 45 μ m的第一过滤器和具有第二孔径为大约0. 22 μ m的第二过滤器 过滤所述混合物至少两次，其中所述第一和/或第二过滤器是用于除菌。
34. 根据权利要求22-33中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述抗癌剂包括二甲 双胍、羟基脲、环磷酰胺和依托泊苷中的一种或多种。
35. 根据权利要求22-34中的任意一项所述的方法，其特征在于，在所述千燥研磨步 骤之前，该方法还包括将所述蒲公英属植物根部切片，形成多个平均尺寸在大约〇. 2cm至 1.5cm的根部切片。
36. 根据权利要求22-35中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述研磨温度低于大 约(TC。
37. 根据权利要求22-36中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述研磨温度低于大 约-25°C，较佳地低于大约-40°C。
38. 根据权利要求22-37中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述药剂包括一种具 有大约5mg/kg体重/天至大约lOOOmg/kg体重/天的范围内的所述蒲公英属植物根部提 取物的剂量，更佳地在大约l〇mg/kg体重/天至大约70mg/kg体重/天。
39.根据权利要求22-37中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述药剂包括一种日 剂量，该日剂量是具有大约〇. 5g至大约70g、更佳地在大约l-4g的所述蒲公英属植物根部 提取物。
【文档编号】A61K36/288GK104203260SQ201380007584
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2013年2月8日 优先权日:2012年2月10日
【发明者】希亚朗·潘迪, 卡罗琳·玛丽·哈姆, 帕梅拉·乌祖阿左·欧瓦杰 申请人:温莎大学