用于预防或治疗恶病质的组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于预防或治疗恶病质的组合物，更具体而言，涉及含有源自端粒酶的肽的用于预防或治疗恶病质的组合物。本发明的用于预防或治疗恶病质的组合物具有改善诸如体重减轻、贫血、浮肿和食欲不振等恶病质症状的优点，并且副作用很少。
【专利说明】用于预防或治疗恶病质的组合物
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于预防或治疗恶病质（cachexia)的组合物，更具体而言，涉及 含有源自端粒酶的肽的用于预防或治疗恶病质的组合物。
【背景技术】
[0002] 恶病质是一种可以被称为衰弱的综合征，是呈现多种慢性疾病的全身性疾病，最 常见的症状是重量逐渐减轻、贫血、浮肿、食欲丧失。
[0003] 恶病质的主要征兆是脂肪组织损失以及肌肉组织和骨组织的损失。相应地，非月旨 肪组织也称为"瘦体质"。此外，他们呈现出食欲丧失（厌食症）、虚弱（无力）和血红蛋白 水平下降（贫血）。
[0004] 恶病质是仅在这些患者中观察到的复杂的代谢综合征，但是其呈现出脂肪组织和 骨骼肌的渐进性重量减轻。
[0005] 恶病质的治疗不仅仅是吃得更多的问题。如果受试对象想吃，如果受试对象试着 去吃，甚至通过胃管或静脉内向受试对象施用营养物质，状态也不会恢复正常。
[0006] 最近对恶病质的研宄发现了身体针对疾病下的恶病质存在会产生响应（Laviano A等，2005) 〇
[0007] 恶病质发作由营养物质摄入减少和生物疾病的营养消耗增加所导致的吸收和排 泄的不平衡引起，或者被解释为从病变部位聚集的体液因子对身体代谢产生了影响。为了 针对以上问题改善恶病质，需要摄入营养补充剂、改善能量缺乏并施用增强免疫性的营养 物质，例如静脉高营养。
[0008] 在以上有关恶病质的背景下，需要开发用于改善或抑制恶病质进展的治疗剂。
[0009] 【现有技术文献】
[0010] 【专利文献】
[0011] KR2001-0012613A
[0012] 【非专利文献】
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【发明内容】
[0022] 【技术问题】
[0023] 本发明的发明人一直致力于开发出可有效治疗恶病质且没有有害副作用的组合 物，并且完成了本发明。
[0024] 本发明涉及提供一种可有效治疗恶病质（例如重量减轻、贫血、浮肿和食欲不振） 的肽，所述肽包括源自端粒酶的肽。
[0025] 本发明涉及提供一种可有效治疗恶病质的组合物，该组合物包含源自端粒酶的 肽。
[0026] 【技术方案】
[0027] 根据本发明的一个实施方式，提供了一种用于预防或治疗恶病质的组合物，所述 组合物包括：包含SEQIDN0:1的氨基酸序列的肽、包含与所述氨基酸序列具有80%以上 的序列同一性的氨基酸序列的肽、或者上述肽的肽片段。
[0028] 在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，所述肽片段包含三个以 上的氨基酸。
[0029] 在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，所述肽可以源自人端粒 酶。
[0030] 在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，所述组合物可以基本上 消除、预防或治疗与恶病质相关的症状。
[0031] 在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，其中，恶病质由选自由 以下疾病组成的组的一种或多种引起:AIDS，癌，髋骨骨折，慢性心力衰竭，包括COLD(慢性 阻塞性肺疾病）和COPD(慢性阻塞性肺病）的慢性肺疾病，肝硬化，肾衰竭，包括类风湿性 关节炎的自身免疫病，系统性红斑狼疮，败血症，结核病，囊性纤维化，克罗恩氏病，和重症 感染。
[0032] 在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，恶病质由衰老引起。
[0033] 在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，所述组合物可以以5nM/ Kg以下的溶液浓度提供。
[0034] 在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，所述组合物可以更优选 以0. 15nM/kg?5nM/kg的溶液浓度提供。
[0035] 在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，所述组合物可以是外用 皮肤组合物。
[0036] 在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，所述组合物可以是药物 组合物。
[0037]在本发明实施方式的用于预防或治疗恶病质的组合物中，所述组合物可以是食品 组合物。
[0038] 根据本发明的实施方式，提供了一种预防和治疗恶病质的方法，所述方法包括向 有需要的受试对象施用有效量的所述用于预防和治疗恶病质的组合物的步骤。
[0039] 在本发明实施方式的预防或治疗恶病质的方法中，所述组合物可以以5nM/Kg以 下的溶液浓度提供。
[0040] 在本发明实施方式的预防或治疗恶病质的方法中，所述组合物可以更优选以 0. 15nM/kg?5nM/kg的溶液浓度提供。
[0041] 根据本发明的一个实施方式，提供了所述组合物在预防和治疗恶病质中的应用。
[0042] 在一个实施方式中，提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括：包含SEQIDNO: 1的氨 基酸序列的肽、包含与上述氨基酸序列具有80%以上的序列同一性的氨基酸序列的肽、或 者上述肽的肽片段；以及包括所述肽或组合物的施用剂量、施用途径、施用频率和适应证中 的至少一种的使用说明书。
[0043] 【有益效果】
[0044] 本发明的用于预防或治疗恶病质的组合物具有改善恶病质症状（例如体重减轻、 贫血、浮肿和食欲不振）的优点，并且副作用很小。
【专利附图】
【附图说明】
[0045] 图1是显示利用源自PBMC的单核细胞的培养物进行TNF- a ELISA的结果的图。将 单核细胞用LPS(10ng/ml)刺激2小时，然后与各肽FITC、FITC-TAT、PEP I-FITC和FITC-肽 反应2小时。（#P〈0. 01，与阴性对照（FITC和FITC-TAT)相比）。
[0046] 图2?图4显示了通过实时qPCR确认的PEP1对恶病质标志物瘦素（1印tin)、 IL-10、IL-6 的影响。
[0047] 图5和图6分别显示了使用CIA动物模型诱导类风湿性关节炎并用肽进行处理的 第一和第二实验的按时间的计划方案。
[0048] 图7显示对照组和治疗组的体重变化，其中Y轴的值表示体重变化（单位为克）。 X轴的值表示治疗经历的时间。
[0049] 图8显示了第二实验的结果，其呈现了对照组和0. 2nM、lnM、2nM和5nM治疗组的 重量变化，其中Y轴的值表示体重变化（单位为克），X轴的值表示治疗经历的时间。
[0050] 图9是图示了以低浓度（0. 2nM，InM)肽处理的结果，其看上去是比图8更有效的 结果，其中Y轴的值表示体重变化（单位为克），X轴的值表示治疗经历的时间。
[0051] 图10显示HeLa细胞中P印1的毒性测试的结果。
【具体实施方式】
[0052] 由于本发明可适应各种转化形式及实际应用实例，以下是对本发明的更详细描 述。然而，这不意味着对实际应用形式的限制；应理解的是，本发明的意图在于包括所有转 化形式、等价形式及替代形式中的技术概念及外延。在描述本发明时，若有关现有技术的任 何详细描述被认为会破坏本发明的基本原理，则将略去该描述。
[0053] 已知端粒为染色体末端的遗传物质重复序列，其防止染色体受损或与其它染色体 融合。端粒的长度会在每次细胞分裂时缩短，在细胞分裂一定次数后，端粒的长度会缩得非 常短以使细胞停止分裂并死亡。另一方面，已知端粒的延长可延长细胞的寿命。举例而言， 癌细胞分泌一种称为端粒酶的酶，其防止端粒缩短，因而导致癌细胞增殖。
[0054] 最近，肿瘤坏死因子（TNF)、单核细胞因子（monocytokine)和源自巨噬细胞的细 胞因子可能引起恶病质。如上所述，由于产生与炎症相关的细胞因子，TNF可能是恶病质的 最常见的成因。因此，其在癌患者和由重度感染引起重量减轻的患者中直接观察到。所以， 已进行了科学研宄来探宄TNF的各种机制。
[0055] 因此，据报道，被称为恶病质素（cachectin)的肿瘤坏死因子（TNF)在癌性恶病质 中起主要作用。恶病质素的机理活性也与诸如白介素（IL)、IL-6、LIF和IFN等细胞因子相 同（KR2001-0012613A)。
[0056] 此外，J. Walsmith等，2002报道，重量减轻并不仅由厌食症引起，而慢性炎症也是 重量减轻的重要媒介。后续的研宄已表明，大鼠佐剂性关节炎除了重量减轻之外还可以引 起骨骼肌重量减轻和纤维区损失。此外，这些研宄已经证明大鼠佐剂性关节炎可以诱导骨 骼肌的TNF-a(肿瘤坏死因子a)和IL-10(白介素10)基因表达。重要的是，骨骼肌的 TNF-a和IL-I 0基因表达都与骨骼肌纤维区负相关。
[0057] 因此，在现有技术中显示出，在预防由佐剂性关节炎引起的体重减轻和骨骼肌重 量减轻方面，同时阻断肿瘤坏死因子a和白介素10比仅阻断TNF-a更有效。这表明 TNF-a和IL-10的组合在大鼠佐剂性关节炎中发挥了有力的肌肉消耗效果，并且强化了 TNF-a和IL-I0协同作用引起恶病质这一观点。通过同时阻断TNF-a和IL-I而不是仅 阻断TNF-a，在小鼠的佐剂诱导型关节炎中可更有效地预防骨骼肌质量减轻。TNF-a和 IL-I0的组合导致肌肉消耗。因此，不仅TNF-a影响恶病质，还有证据表明IL-I0也引起 恶病质。
[0058] 恶病质出现在由脂肪组织的渐进性损失和食欲丧失引起的慢性疾病中，其是一种 独特的疾病。该模式的特征在于能量消耗的减少和脂肪损失时去脂质（leanmass)的保 留。另外，已经在包括癌、CHF、CHF、COPD、CKD和衰老等多种病况中观察到了厌食性恶病质 进程。这可以与诸如TNF-a、IL-6、IL-2和IL-I0等炎性细胞因子关联起来。这些炎性标 志物能够调节下丘脑的反馈机制，其促进恶病质的进展。
[0059] 另外，瘦素是由脂肪组织分泌的激素，其通过作用于下丘脑而减少食品消耗、刺激 能量消耗从而导致重量减轻。由CKD(慢性肾疾病）和CHF(充血性心力衰竭）引起的恶病 质表现出了高水平的瘦素（DianaR.Engineer等，2012)。
[0060] 在R.Roubenoff等，1997中表明，出现于诸如类风湿性关节炎（RA)等疾病中的慢 性炎症与体细胞质量损失有关。将该病况称为炎性恶病质，在类风湿性关节炎中的炎性恶 病质以无吸收障碍状态与代谢亢进一同显现，并且随着蛋白分解加速此病况。换言之，该实 验证明重量减轻出现在佐剂性关节炎中，并且出现在关节肿胀发作之前。该研宄中观察到 的重量减轻包括体细胞质量的大幅减少，其超过了重量减轻的比例。结果，这种重量减轻与 食物摄入减少以及脾细胞的TNF-a和IL-I产量增加有关（R.Roubenoff等，1997)。
[0061] Michael J. Tisdale, 2009的研宄结果证明，通常出现在恶病质中的肌肉萎缩在过 表达IL-6的IL-6转基因小鼠中被IL-6受体抗体完全阻断。根据该研宄，具有高循环IL-6 水平的小鼠具有严重的恶病质症状和尚息肉量，而ApcMin+/IL6-/_小鼠不显不损失并具 有较低的息肉量，在过表达IL-6的小鼠中，虽然引起了骨骼肌损失和息肉形成，但没有肿 瘤的小鼠中并没有引起骨骼肌损失。并且，对大鼠施用IL-6急剧地激活了肌肉中的总蛋白 降解和肌纤维蛋白降解。这表明IL-6通过激活非溶酶体（例如蛋白酶体）和溶酶体（组 织蛋白酶）蛋白水解途径（MichaelJ.Tisdale, 2009)而增加肌肉中的蛋白降解。
[0062] 恶病质是一种虚弱综合征，能够涉及多种疾病，例如AIDS、癌、髋骨骨折、慢性心力 衰竭、慢性阻塞性肺疾病（包括COLD(慢性阻塞性肺疾病）和COPD(慢性阻塞性肺病））、肝 硬化、肾衰竭、自身免疫病（包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮）、败血症、结核病、囊性 纤维化、克罗恩氏病和重症感染，以及在衰老中观察到的虚弱。
[0063] 在本发明的示例性实施方式中，SEQ ID NO: 1的肽、作为SEQ ID NO: 1的肽的片段 的肽、或与所述肽具有80%以上的序列同一性的肽包括源自端粒酶、特别是源自人（智人 (Homo sapiens))端粒酶的肽。
[0064] 本发明公开的肽可以包括：包含与SEQIDNO: 1的肽具有至少80%、至少85%、至 少90 %、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 %、至少99 %的序列同源性的氨基酸序列 的肽，或其片段。另外，本发明公开的肽可以包括与SEQIDN0:1或其片段有差别的肽，所 述差别在于至少1个氨基酸、至少2个氨基酸、至少3个氨基酸、至少4个氨基酸、至少5个 经转变（transformed)的氨基酸、至少6各经转变的个氨基酸、或至少7个氨基酸的肽。
[0065] 在本发明的一个实施方式中，氨基酸的改变包括对肽的物理和化学特性的修饰。 例如，可以进行氨基酸修饰以改善肽的热稳定性、改变底物特异性和改变最佳pH。
[0066] 本文中术语"氨基酸"不仅包括天然整合成肽的22种标准氨基酸，还包括D-异构 体和经修饰的氨基酸。因此，在本发明的特定实施方式中，本文的肽包括具有D-氨基酸的 肽。另一方面，肽可以包括非标准氨基酸，例如，具有翻译后修饰的那些。翻译后修饰的实例 包括磷酸化、糖基化、酰化（包括乙酰化、肉豆蔻酰化、棕榈酰化）、烷基化、羧基化、羟基化、 糖化、生物素化、泛素化、化学性质的修饰（例如、e-消除脱酰亚胺化和脱酰胺化）以及结 构修饰（例如形成二硫键）。另外，氨基酸的改变包括与用于形成肽缀合物的交联剂的结合 过程中的化学反应所导致的氨基酸的改变，例如氨基、羧基或侧链的改变。
[0067] 本文公开的肽可以是从天然来源鉴定和分离出的野生型肽。另一方面，当与SEQID NO: 1或其片段比较时，本文公开的肽可以是包含一个或多个替换、缺失和/或插入的氨基 酸的人工突变肽。不仅在人工突变肽中，在野生型肽中的氨基酸改变也包括不显著影响蛋 白质折叠和/或活性的保守性氨基酸替换。保守性替换的实例可以在下述组内：碱性氨基 酸（精氨酸、赖氨酸和组氨酸）、酸性氨基酸（谷氨酸和天冬氨酸）、极性氨基酸（谷氨酰胺 和天冬酰胺）、疏水性氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和甲硫氨酸）、芳香族氨基酸（苯 丙氨酸、色氨酸和酪氨酸）以及小氨基酸（甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸和苏氨酸）。通常不影响 特定活性的氨基酸替换是本领域已知的。最常发生的改变是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、 Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/ Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、Asp/Gly以及其相反的改变。保守性替换的其他实例示于 以下表1中。
[0068] 表 1
[0069]
【权利要求】
1. 一种用于预防或治疗恶病质的组合物，所述组合物包括下述肽作为活性成分：包含 SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有80%以上的序列同一性的肽、或者 作为这些肽的片段的肽。
2. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述片段由至少3个氨 基酸组成。
3. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述肽源自人端粒酶。
4. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述组合物用于消除 与恶病质有关的症状或者预防或治疗恶病质。
5. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述恶病质由选自由 以下疾病组成的组的一种或多种引起:AIDS，癌，髋骨骨折，慢性心力衰竭，包括COLD (慢性 阻塞性肺疾病）和C0PD (慢性阻塞性肺病）的慢性肺疾病，肝硬化，肾衰竭，包括类风湿性 关节炎的自身免疫病，系统性红斑狼疮，败血症，结核病，囊性纤维化，克罗恩氏病，和重症 感染。
6. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述恶病质由衰老引
7. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述肽以0. OOlng/ kg?lng/kg的单剂量施用。
8. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述肽以0.01ng/kg? 0. 4ng/kg的单剂量施用。
9. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述肽每1天?5天施 用1次。
10. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述肽每1. 5天? 2. 5天施用1次。
11. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述组合物包含 0. 05nM?5nM浓度的肽。
12. 如权利要求1所述的用于预防或治疗恶病质的组合物，其中，所述组合物被配制成 用于注射。
13. 如权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物是用于预防或治疗恶病质的药物组 合物。
14. 如权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物是用于预防或治疗恶病质的食品组 合物。
15. -种预防或治疗恶病质的方法，所述方法包括：向有需要的受试对象施用包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有80%以上的序列同一性的肽、或者作为 这些肽的片段的肽。
16. 如权利要求15所述的预防或治疗恶病质的方法，其中，所述肽以0. 001ng/kg? lng/kg的单剂量施用。
17. 如权利要求15所述的预防或治疗恶病质的方法，其中，所述肽以0. 01ng/kg? 0. 4ng/kg的单剂量施用。
18. 如权利要求15所述的预防或治疗恶病质的方法，其中，所述肽每1天?5天施用1 次。
19. 如权利要求15所述的预防或治疗恶病质的方法，其中，所述肽每1. 5天?2. 5天施 用1次。
20. 肽在制造用于预防或治疗恶病质的组合物中的应用，所述肽包括：包含SEQID NO: 1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有80%以上的序列同一性的肽、或者作为这 些肽的片段的肽。
21. 如权利要求20所述的肽在预防或治疗恶病质中的应用，其中，所述肽以0. OOlng/ kg?lng/kg的单剂量施用。
22. 如权利要求20所述的肽在预防或治疗恶病质中的应用，其中，所述肽以0. Olng/ kg?0. 4ng/kg的单剂量施用。
23. 如权利要求20所述的肽在预防或治疗恶病质的应用，其中，所述肽每1天?5天施 用1次。
24. 如权利要求20所述的肽在预防或治疗恶病质的应用，其中，所述肽每1. 5天?2. 5 天施用1次。
25. -种用于预防或治疗恶病质的肽，所述肽包括：包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的 肽、与所述氨基酸序列具有80%以上的序列同一性的肽、或者作为这些肽的片段的肽。
26. 如权利要求25所述的用于预防或治疗恶病质的肽，其中，所述肽以0. 001ng/kg? lng/kg的单剂量施用。
27. 如权利要求25所述的用于预防或治疗恶病质的肽，其中，所述肽以0. 01ng/kg? 0. 4ng/kg的单剂量施用。
28. 如权利要求25所述的用于预防或治疗恶病质的肽，其中，所述肽每1天?5天施用 1次。
29. 如权利要求25所述的用于预防或治疗恶病质的肽，其中，所述肽每1. 5天?2. 5天 施用1次。
30. -种用于预防或治疗恶病质的试剂盒，所述试剂盒包含肽和使用说明书，其中，所 述肽包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列，所述肽与SEQ ID NO: 1具有高于80%的氨基酸序列 同源性，或者所述肽是上述肽的片段；所述使用说明书包括所述肽的施用剂量、施用途径、 施用频率和适应证中的至少一种。
31. 如权利要求30所述的用于预防或治疗恶病质的试剂盒，其中，所述肽以0. OOlng/ kg?lng/kg的单剂量施用。
32. 如权利要求30所述的用于预防或治疗恶病质的试剂盒，其中，所述肽以0. Olng/ kg?0. 4ng/kg的单剂量施用。
33. 如权利要求30所述的用于预防或治疗恶病质的试剂盒，其中，所述肽每1天?5天 施用1次。
34. 如权利要求30所述的用于预防或治疗恶病质的试剂盒，其中，所述肽每1. 5天? 2. 5天施用1次。
35. 如权利要求30所述的用于预防或治疗恶病质的试剂盒，其中，所述组合物包含 0. 05nM?5nM浓度的肽。
36. 如权利要求30所述的用于预防或治疗恶病质的试剂盒，其中，所述组合物被配制 成用于注射。
【文档编号】A61K38/17GK104487081SQ201380036936
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2013年5月10日 优先权日:2012年5月11日
【发明者】金商在 申请人:凯尔杰姆维克斯有限公司, 金商在