毛冬青皂苷Ilexsaponin A1在制备抗肿瘤药物中的用途
【专利摘要】本发明公开了从海南冬青等植物中获得的单体成分毛冬青皂苷Ilexsaponin?A1在抗肿瘤方面的医药新用途，即毛冬青皂苷Ilexsaponin?A1在制备治疗和预防肿瘤的药物或保健食品中的用途。同时，也公开了以毛冬青皂苷Ilexsaponin?A1为原料制备成胶囊剂、片剂、滴丸剂、注射剂等药物剂型。体外实验表明，在一定浓度范围内，毛冬青皂苷Ilexsaponin?A1对多种肿瘤细胞株具有很强的抑制作用。因此，可以用于制备成抗肿瘤药物以及预防肿瘤发生的药物或保健食品。
【专利说明】毛冬青烏苷Mexsaponin Al在制备抗肿瘤药物中的用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】,尤其涉及毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的抗肿瘤活性以及毛冬青阜苷Ilexsaponin Al在制备抗肿瘤药物中的新用途。
【背景技术】
[0002]毛冬青为冬青科冬青属植物毛冬青的根或叶,毛冬青阜苷Ilexsaponin Al是从毛冬青中提取的一种五环三萜皂苷(熊友香，等.中药材，2002，25 (5):371-374 ;昌艳艳，等.现代中西医结合杂志，2002，11 (21):2198-2199)。过去报道其具有一定的心血管药理作用，小鼠耳廓微循环实验表明毛冬青皂苷Ilexsaponin Al能显著延长小鼠出血以及凝血时间，大鼠FeCl3诱导血栓实验表明Ilexsaponin Al可减少大鼠腹主动脉血栓生成质量(周园，等.中药材，2011，34 (5):765-767)。我们研究发现毛冬青皂苷Ilexsaponin Al具有良好的抗肿瘤作用，特别是对人肝癌及胃癌等，在一定浓度范围内，对肿瘤细胞具有杀伤作用而不影响正常T细胞的活力及功能。此外，尚未见有文献报道将毛冬青皂苷IlexsaponinAl制备成抗肿瘤药物。
【发明内容】
[0003]本发明目的之一提供了毛冬青皂苷Ilexsaponin Al的抗肿瘤新用途；本发明目的之二提供了毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的药物剂型。
[0004]本发明提供了毛冬青阜苷Ilexsaponin Al在制备治疗和预防肿瘤的药物或保健食品中的用途。
[0005]本发明所指的肿瘤肝癌、胃癌等多种肿瘤。毛冬青皂苷Ilexsaponin Al可剂量依赖性地抑制肝癌、胃癌细胞活性但不影响正常T细胞分化，因此毛冬青皂苷IlexsaponinAl具有闻效抗肿瘤且低毒等特点。
[0006]本发明的药物制剂含有1%~99%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和99%~1%的药用赋形剂(包括其他可组方的药物)，优选含30%~80%的毛冬青阜苷IlexsaponinAl和70%~20%的药用赋形剂(包括其他可组方的药物)，最好含有60%~70%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和40%~30%的药用赋形剂(包括其他可组方的药物)。
[0007]按药剂学方法,可以将本发明的毛冬青阜苷Ilexsaponin Al制备成多个临床药物剂型用于抗肿瘤，包括口服制剂和非肠道给药的剂型。所指的口服制剂选自于胶囊剂、片剂、滴丸剂、口服液体制剂中的任意一种，所指的非肠道给药剂型为注射剂。
[0008]本发明的抗肿瘤药物中的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。本发明抗肿瘤药物中的其他配伍用的药物，指的是有效剂量的毛冬青阜苷Ilexsaponin Al为一定的药物原料,再配伍其他已允许合用的中药或化学药品。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1是毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的化学结构式[0010]图2是毛冬青阜苷Ilexsaponin Al作用于人肝癌细胞株HepG2 (A)以及SMMC77210~72h (B)的抑制率图。[0011]图3是毛冬青皂苷Ilexsaponin Al作用于人胃癌细胞株SGC79010~72h的抑制率图。
[0012]图4是毛冬青阜苷Ilexsaponin Al对小鼠正常T细胞分化的影响。
【具体实施方式】
[0013]下面通过具体实施例来对本发明作进一步的说明，但这些实施例只是为了说明，而不是对本发明的限制。
[0014]毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的分子式C36H56O11,化学结构如图1。
[0015](本发明用的毛冬青阜苷IlexsaponinAl为中国药科大学生药教研室王强教授提供；对照品四川标准物质中心可以购买)
[0016]实施例一:采用MTT比色法检测毛冬青阜苷Ilexsaponin Al对人肝癌细胞株HepG2的活力影响:取对数生长期的肝癌细胞株H印G2，0.25%胰蛋白酶消化，收集消化状态下的细胞，计数细胞，用DMEM培养基稀释成IO3-1O4个/100 μ I浓度的单细胞悬液，每孔ΙΟΟμ 1，接种到96孔板上，置37°C，5%C02，饱和湿度的细胞培养箱中，培养12h后。空白对照组加入缓冲液PBS，阴性对照组用等体积DMEM培养液，阳性对照组加入不同浓度的顺钼溶液，实验组加入不同浓度的毛冬青阜苷Ilexsaponin Al (20、40、80、160 μ g/ml),每个浓度设6个复孔，每孔20 μ I。96孔板置37°C、5%C02、饱和湿度的细胞培养箱中，培养4h后，加入5mg/mlMTT，每孔10 μ 1，培养4h，每孔加入150 μ I DMSO,摇床振荡IOmin,酶标仪上测定其吸光度(A值)，吸收波长为570nm。分别测定24、48、72h的OD值，并计算相对抑制率，公式如下:抑制率(%) = (1-A实验组/A对照组)X 100%ο结果见图2A。
[0017]结论:如图2A所示，毛冬青阜苷Ilexsaponin Al与HepG2细胞作用后，随这毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的增加，其抑制率上升，在20 μ g/ml>40 μ g/ml>80 μ g/ml和160 μ g/ml浓度时对HepG2细胞增殖有明显的抑制作用，与阴性对照组比较有显著性差异(Ρ〈0.05)，呈剂量依赖关系；同时，随着时间推移，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al对H印G2细胞抑制率逐步增加，呈时间依赖关系。
[0018]实施例二，采用MTT比色法检测毛冬青阜苷Ilexsaponin Al对人肝癌细胞株SMMC7721的活力影响:方法学部分参照实施例一，结果见图2Β。
[0019]结论:如图2Α所示，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al与SMMC7721细胞作用后，随这毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的增加，其抑制率上升，在20 μ g/ml>40 μ g/ml>80 μ g/ml和160 μ g/ml浓度时对SMMC7721细胞增殖有明显的抑制作用，与阴性对照组比较有显著性差异(Ρ〈0.05)，呈剂量依赖关系；同时，随着时间推移，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al对SMMC7721细胞抑制率逐步增加，呈时间依赖关系。
[0020]实施例三，采用采用MTT比色法检测毛冬青皂苷Ilexsaponin Al对胃癌细胞株SGC7901的活力影响:方法学部分参照实施例一，结果见图3。
[0021]结论:如图3所示，毛冬青阜苷Ilexsaponin Al与SGC7901细胞作用后，随这毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的增加，其抑制率上升，在20 μ g/ml>40 μ g/ml>80 μ g/ml和160 μ g/ml浓度时对SGC7901细胞增殖有明显的抑制作用，与阴性对照组比较有显著性差异(Ρ〈0.05)，呈剂量依赖关系；同时，随着时间推移，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al对SGC7901细胞抑制率逐步增加，呈时间依赖关系。
[0022]4.实施例四，体外毛冬青阜苷Ilexsaponin Al对T细胞分化的影响
[0023]按常规方法磁珠阴性选择法分离获得CD4+T细胞，分选的初始CD4+T细胞以109/L密度接种于96孔培养板中，每个培养条件设复孔，用含L-谷氨酰胺、胎牛血清的1640培养液培养，培养板预先用含10 μ g/ml⑶3单抗的PBS4°C包被过夜，再加入2.0 μ g/ml⑶28可溶性单抗培养使初始T细胞活化，加入TGF(5ng/ml)和不同浓度(O、10、30、100、300 μ g/ml)的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al，共同孵育72h，固定、穿膜，缓冲液处理，加PE-⑶25、Percp5.5-CD4 和 Foxp3_APC,进行 FACS 检测，结果见图 4。
[0024]结论:在O~300 μ g/ml浓度范围内，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al对正常T细胞分化没有影响。
[0025]实施例5.胶囊的制备毛冬青阜苷Ilexsaponin A1250g,淀粉2500g,将干燥好的淀粉与毛冬青皂苷Ilexsaponin Al充分混合，过120目筛，充分混匀后制备胶囊1000粒，每粒含毛冬青阜苷Ilexsaponin A1250mg。
[0026]实施例6.滴丸的制备600g聚乙二醇水浴溶化，加入毛冬青阜苷IlexsaponinA1200g，充分搅拌后置于保温管中，后采用液体石蜡包裹，吸干石蜡油后加入少量滑石粉混匀，制备滴丸1000丸
[0027]实施例7.片剂的制备毛冬青阜苷Ilexsaponin AllOOg,淀粉1000g,糖粉200g,适
量乙醇制粒后，经整粒机处理后，压片分装。
[0028]实施例7.注射 剂的制备毛冬青阜苷Ilexsaponin AllOg,丙二醇20ml,聚乙二醇40ml,注射用水200ml,混合后水浴加热0.5h,注射用水加至500ml,超声处理IOmin,水浴加热0.5h，调节PH5.5~6.5，过滤澄明，灌封灭菌即得。
【权利要求】
1.毛冬青皂苷IlexsaponinAl在制备治疗和预防肿瘤药物或保健食品中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述抗肿瘤肝癌和胃癌。
3.一种药物制剂，其特征在于含有有效治疗剂量的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和一种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或可与毛冬青阜苷Ilexsaponin Al组方的其他药物。
4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于含有1%~99%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和99%~1%的药用赋形剂或其他可组方的药物。
5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于含有30%~80%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和70%~20%的药用赋形剂或其他可组方的药物。
6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于含有60%~70%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和40%~30%的药用赋形剂或其他可组方的药物。
7.根据权利3所述的药物制剂，其特征在于所说的药物剂型选自于胶囊剂、片剂、滴丸剂、口服液体制剂、注射剂当中的任何一种。
【文档编号】A61P35/00GK103735557SQ201410007437
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2014年1月8日 优先权日:2014年1月8日
【发明者】孙云, 刘畅, 葛玲甜, 王娟 申请人:扬州大学