仙鹤草有效组分的制备方法与用途
【专利摘要】本发明涉及一种仙鹤草有效组分的制备方法与用途，属于中药有效组分提取领域。它的制备过程包括以下步骤：a、取仙鹤草，用8～12倍重量的质量浓度为75%～95%乙醇水溶液进行提取，得提取液；b、将所述提取液加入活性炭，加热回流脱色，过滤，浓缩至至少无醇味，得浓缩液；c、将所述浓缩液过筛，加水稀释，上大孔吸附树脂，先用水洗涤至流出液Ⅰ无色，然后用质量浓度为70%～90%的乙醇水溶液洗涤，至流出液Ⅱ的三氯化铁-铁氰化钾法多酚鉴别呈阴性，得洗脱液；d、将所述洗脱液浓缩至无醇味，干燥，即得。本发明的有益效果是：利用合理的提取、富集、分离方法，得到具有抗氧化作用，可用于制备抗氧化产品的仙鹤草有效组分。
【专利说明】仙鹤草有效组分的制备方法与用途
【技术领域】
[0001]本发明属于中药有效组分提取领域，具体涉及一种仙鹤草有效组分的制备方法与用途。
【背景技术】
[0002]仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb.)始载于《本草图经》,为蔷薇科多年生草本植物龙牙草的全草，又名脱力草、龙芽草、石打穿、狼牙草等。味苦、涩，性平，归肺、肝、脾经，常用于治疗肿瘤、美尼尔综合征、滴虫性阴道炎等疾病，具有抗肿瘤、止血、抗菌、杀虫等药理作用。其含有黄酮类、三萜类、酚类、酯类、鞣质类、挥发油和脂肪酸醇类等成分。
[0003]仙鹤草是一个具有开发潜力的药物，在食品、化妆品、保健品及药品等开发方面具有广阔前景。其中酚类物质为仙鹤草酚A~E，山萘酚、槲皮素及其苷类等是其抗氧化、抗炎、抗肿瘤的主要有效成分，同时也广泛应用于日化产品中。然而迄今为止，现有技术中少有仙鹤草多酚的制备方法及活性的报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种仙鹤草有效组分的制备方法与用途。
[0005]本发明的仙鹤草有效组分，其制备过程包括以下步骤:
[0006]a、取仙鹤草，用8~12倍重量的质量浓度为75%~95%乙醇水溶液进行提取，得提取液；
[0007]b、将所 述提取液加入活性炭，加热回流脱色，过滤，浓缩至至少无醇味，得浓缩液；
[0008]C、将所述浓缩液过筛，加水稀释，上大孔吸附树脂，先用水洗涤至流出液I无色，然后用质量浓度为70%~90%的乙醇水溶液洗涤，至流出液II的三氯化铁-铁氰化钾法多酚鉴别呈阴性，得洗脱液；
[0009]d、将所述洗脱液浓缩至无醇味，干燥，即得仙鹤草有效组分。
[0010]优选的，所述步骤a中提取的次数为I~3次，提取的时间为I~3小时。
[0011]优选的,所述步骤b中加入活性炭的重量为所述提取液重量的0.2%~0.8%。
[0012]优选的，所述步骤b中回流脱色的时间为10~30分钟，回流脱色的次数为I~3次。
[0013]优选的，所述步骤c中加水的重量为所述浓缩液重量的8~12倍。
[0014]优选的，所述步骤c中大孔吸附树脂的型号为HPD300。
[0015]优选的，所述步骤c中用质量浓度为70%~90%的乙醇水溶液洗涤时的流速为
1.5 ~3BV/h。
[0016]优选的，所述步骤d中干燥采用微波炉来进行；所述步骤d中干燥的时间为8~10小时，干燥的温度为75°C~80°C。
[0017]进一步地，所述的仙鹤草有效组分为活性成分制成的药用制剂，所述仙鹤草有效组分加入药用添加剂按照药剂学允许的制备方法制成的药用制剂。
[0018]具体的，本发明药用制剂中，仙鹤草有效组分和药用添加剂的二者比例是可以根据需要在较大范围内变化，这是本领域技术人员公知的，作为较好的实施方案，二者的重量t匕(仙鹤草有效组分:药用添加剂)可以为1:99~99:1。
[0019]进一步地，本发明提供一种上述仙鹤草有效组分在制备抗氧化药物中的应用。
[0020]本发明中，BV表示树脂柱的柱床体积。
[0021]本发明的有益效果在于:以仙鹤草的全草为原料，研究出一种制备仙鹤草有效组分的制备方法。该方法提高了产品的纯度，降低了生产成本，且生产设备简单，效率高，适合大规模生产。该有效组分中主要含有多酚等活性组分，具有抗炎、抗衰老、保护皮肤、延缓皮肤衰老等活性，可以用于食品、保健品、化妆品和药品的添加剂或作为原料。
【专利附图】
【附图说明】
[0022]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0023]图1为仙鹤草有效组分还原能力测试图；
[0024]图2为仙鹤草有效组分对DPPH自由基清除作用的测试图；
[0025]图3为仙鹤草有效组分对超氧阴离子的清除作用的测试图；
[0026]图4为仙鹤草有效组分对铜离子螯合能力的测试图。
【具体实施方式】
[0027]为使本领域技术人员详细了解本发明的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本发明的应用和技术效果。
[0028]实施例一:
[0029]取仙鹤草100kg，用10倍重量质量浓度为95%乙醇水溶液进行提取，其提取的次数为3次，每次提取的时间为2小时，得提取液；向所述提取液加入活性炭，其加入活性炭的重量为提取液重量的0.5%，加热回流脱色2次，每次回流脱色的时间为20分钟，过滤，浓缩至无醇味，得浓缩液；
[0030]将所述浓缩液过300目筛，加水稀释，其加水的重量为浓缩液重量的10倍，上型号为HPD300的大孔吸附树脂，先用水洗涤至流出液I无色，然后以2BV/h的流速用质量浓度为75%的乙醇水溶液洗涤，至流出液II的三氯化铁-铁氰化钾法多酚鉴别呈阴性，得洗脱液；
[0031]将所述洗脱液浓缩至无醇味，用微波炉进行干燥，干燥的时间为8小时，干燥的温度为75°C，即得仙鹤草有效组分。
[0032]实施例二:
[0033]取仙鹤草100kg，用8倍重量质量浓度为75%乙醇水溶液进行提取，其提取的次数为I次，提取的时间为I小时，得提取液；向所述提取液加入活性炭，其加入活性炭的重量为提取液重量的0.2%，加热回流脱色3次，每次回流脱色的时间为10分钟，过滤，浓缩至无醇味，得浓缩液；
[0034]将所述浓缩液过300目筛，加水稀释，其加水的重量为浓缩液重量的8倍，上型号为HPD300的大孔吸附树脂，先用水洗涤至流出液I无色，然后以3BV/h的流速用质量浓度为70%的乙醇水溶液洗涤，至流出液II的三氯化铁-铁氰化钾法多酚鉴别呈阴性，得洗脱液；
[0035]将所述洗脱液浓缩至无醇味，用微波炉进行干燥，干燥的时间为10小时，干燥的温度为80°C，即得仙鹤草有效组分。
[0036]实施例三:[0037]取仙鹤草100kg，用12倍重量质量浓度为95%乙醇水溶液进行提取，其提取的次数为2次，提取的时间为3小时，得提取液；向所述提取液加入活性炭，其加入活性炭的重量为提取液重量的0.8%，加热回流脱色I次，回流脱色的时间为30分钟，过滤，浓缩至无醇味，得浓缩液；
[0038]将所述浓缩液过200目筛，加水稀释，其加水的重量为浓缩液重量的12倍，上型号为HPD300的大孔吸附树脂，先用水洗涤至流出液I无色，然后以1.5BV/h的流速用质量浓度为90%的乙醇水溶液洗涤，至流出液II的三氯化铁-铁氰化钾法多酚鉴别呈阴性，得洗脱液；
[0039]将所述洗脱液浓缩至无醇味，用微波炉进行干燥，干燥的时间为9小时，干燥的温度为78°C，即得仙鹤草有效组分。
[0040]为证明本发明所得仙鹤草有效组分的技术效果，特作以下试验:
[0041]1、仙鹤草有效组分的还原能力测试
[0042]实验原理:还原力是物质潜在抗氧化能力的指标之一，试样将赤血盐还原成黄血盐，黄血盐与Fe3+作用生成普鲁士蓝，在700nm处测定吸光值以检测普鲁士蓝的生成量，通过普鲁士蓝的生成量衡量样品的还原能力。
[0043]实验方法:分别取待测仙鹤草有效组分溶液0.lmL、0.2mL、0.5mL、lmL，用蒸馏水将体积补足到ImL;取阳性对照样品(浓度为280微克/毫升的Vc溶液)0.lmL、0.2mL、
0.5mL、lmL,用蒸懼水补足到lmL。在各组样品中加入ImL磷酸盐缓冲液和ImL铁氰化钾溶液，混匀，50°C水浴20min,取出，加入ImL三氯乙酸溶液,混匀。取2mL的混合液于5mL离心管中，加入2mL蒸馏水和0.4mL的三氯化铁溶液，迅速混匀。测定溶液在700nm处的吸光值。
[0044]实验结果:见图1 ;仙鹤草表现出良好的还原能力，且还原能力随浓度变化不大，在低浓度表现出很好的效果，且在低浓度时效果优于维生素C。
[0045]2、仙鹤草有效组分对DPPH自由基清除作用的测试
[0046]实验原理:DPPH甲醇溶液为紫罗兰色，在517nm下有强的吸光值，若与样品结合，会降低吸光值，由此借以判断样品清除自由基的能力。
[0047]实验方法
[0048]实验组:分别取0.1mL, 0.2mL,0.5mL, ImL仙鹤草有效组分溶液于试管中，用蒸馏水补足到lmL，加入4mLDPPH甲醇溶液，混匀，暗处放置30min，不断震荡，测定517nm处的吸光值。
[0049]空白组:在各个试管中分别取同实验组同等体积的样品溶液，用蒸馏水补足到ImL,加入4mL的甲醇溶液。混匀后暗处放置30min,测定517nm处吸光值。
[0050]对照组:lmL蒸懼水加入4mLDPPH甲醇溶液。混匀后暗处放置30min,测定517nm处的吸光值。
[0051]实验结果:DPPH抑制率(％) = (A0-A1+A2) /A0*100%
[0052]其中AO为对照组的吸光值，Al为实验组的吸光值，A2为对应空白组的吸光值。
[0053]结果见图2 ;实验组可以有效清除DPPH自由基，且在测试范围内清除率受浓度影响不大。
[0054]3、仙鹤草有效组分对超氧阴离子的清除作用测试 [0055]实验原理:邻苯三酚在弱碱性环境中自身氧化分解产生超氧阴离子，随着反应的进行，超氧阴离子在体系中不断积累，导致反应液在420nm处的吸光度在反应开始一段时间内会随着时间的变化而线性增大，因此测定在该段时间内被测物反应液的吸光度随时间的变化率，并与空白液比较便可得出被测物抑制超氧阴离子的能力。
[0056]实验方法
[0057]实验组:取5.6mLTris HCl缓冲液,分别加入0.lmL、0.2mL、0.3mL、0.4mL的仙鹤草有效组分溶液，用蒸馏水补足到6mL，放入25°C水浴锅中水浴lOmin，然后加入25°C预温的邻苯三酚(如果室温高于25°C可以在室温下操作)，充分混匀，从加入邻苯三酚后开始准确计时3min，而后加入5%抗坏血酸(Vc) 0.05mL终止反应。IOmin钟后在420nm处测定其吸
光度值。
[0058]对照组:取5.6mL的Tris HCl缓冲液，分别加入同实验组相同体积的仙鹤草有效组分溶液，用蒸馏水补足到6mL，加入12mmol/L的HCl溶液，充分混匀，从加入HCl溶液开始准确计时3min，加入5%抗坏血酸终止反应。IOmin钟后在420nm处测定其吸光度值。
[0059]空白组:取5.6mL50mmol/L Tris-HCl缓冲液,加入0.4mL蒸懼水,此后操作同实验组。
[0060]实验结果:E=[(A0-A1+A2)/A0]*100%
[0061]AO为空白吸光度值，Al为实验组吸光度值，A2为对照组吸光度值。
[0062]结果见图3 ;仙鹤草有效组分表现出较好的清除超氧阴离子的能力，且清除率在测试范围内受浓度影响不大。
[0063]4、铜离子螯合能力测试
[0064]实验原理:金属离子如铁离子、铜离子在脂质氧化、细胞氧化以及黑色素的生成过程中起到催化剂的作用，具有金属螯合作用的物质也可以间接起到抗氧化以及抑制黑色素生成的作用，采用TMM螯合法测定铜离子螯合能力以评估试样螯合金属能力。
[0065]实验方法
[0066]标准曲线:分别取OmL, 0.2mL, 0.4mL, 0.6mL, 0.8mL, ImL的0.2mM无水硫酸铜溶液，用pH为5的Hex缓冲液定补足到lmL。加入4mL的Hex缓冲液和0.2mL浓度为0.1mol的TMM指示剂，混匀静置lOmin，以Hex缓冲液作为空白进行紫外调零，测定460nm处和530nm处的吸光值。以A460/A530为纵坐标，铜离子浓度为横坐标绘制标准曲线。
[0067]实验组:分别取0.1mL,0.2mL，0.3mL，0.4mL仙鹤草有效组分溶液于离心管中，用蒸懼水补足到0.5mL,加入1.5mLHex缓冲液和0.5mL浓度为2mmol的CuSO4溶液(所述CuSO4溶液由CuSO4溶于Hex缓冲液制成)，室温下放置lh，无样品空白做同样的处理。另取一系列相同体积的仙鹤草有效组分溶液于离心管中，用蒸馏水补足到0.5mL，加入ImLHex缓冲液，室温下放置Ih。[0068]分别取上述放置后的实验组的反应液0.2mL，加入4.8mLHex缓冲液和0.2mLTMM指示剂，混匀静置lOmin，以Hex缓冲液做空白调零，测定460nm和530nm处的吸光值。
[0069]实验结果:E%=[(A0-A1+A2)/A0]*100%
[0070]AO为无样品空白A460/A530在标准曲线上对应的x值，Al为实验组样品A460/A530在标准曲线上对应的X值，A2为不含CuSO4溶液对照A460/A530在标准曲线上对应的X值。
[0071]结果见图4，图中仙鹤草有效组分为2%、4%、6%和8%时，其铜离子螯合率分别为
0.351460693,0.411258553,0.363428318,0.520847028，仙鹤草有效组分表现出稳定的铜
离子螯合能力。
[0072]上述各测试实验中，仙鹤草有效组分溶液的浓度均为2.6mg/ml。
[0073]另将实施例一中所得提取液、浓缩液、流出液I收集浓缩干燥后，与本发明所得仙鹤草有效组分进行对比研究发现。流出液I无抗氧化作用，提取液、浓缩液抗氧化作用较弱，分别仅有本发明仙鹤草有效组分抗氧化能力的1/20和1/16。说明，利用本发明制备方法能很好地去除仙鹤草中非抗氧化的成分。
[0074]实施例四:
[0075]仙鹤草有效组分的含片制备
[0076]称取实施例一所得的仙鹤草有效组分50g、蔗糖670g和糊精280g，制粒，压片，即得。规格为:0.2g/片 。
[0077]实施例五:
[0078]取实施例四所得含片，随机抽取100例患有咽炎的病患进行研究，其中男性为52例，女性为48例。食用方法及食用量:每日3次，每次2片。含服。
[0079]食用一个月后，95例口干、有异物感等咽炎症状有明显改善，其有47例治愈，5例无效。
[0080]由此可知，本发明所得仙鹤草有效组分具有良好的抗炎作用。
[0081]实施例六:
[0082]仙鹤草有效组分的洗液制备
[0083]称取实施例一所得的仙鹤草有效组分50g和水lOOOg，混匀，过滤，即得。
[0084]实施例七:
[0085]取实施例六所得洗液，随机抽取100例患有外部炎症的病患进行研究，其中男性为38例，女性为62例。外用方法:每日在患处涂抹3次，每次150ml。
[0086]七天后，93例的症状有明显改善，其有43例治愈，7例无效。其中，经涂抹后的外部皮肤相比未涂抹部分的皮肤，变得白皙、光滑，富有光泽。
[0087]由此可知，本发明所得仙鹤草有效组分具有良好的消炎作用和改善皮肤的效果。
[0088]最后应说明的是，以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
【权利要求】
1.一种仙鹤草有效组分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: a、取仙鹤草，用8~12倍重量的质量浓度为75%~95%乙醇水溶液进行提取，得提取液； b、将所述提取液加入活性炭，加热回流脱色，过滤，浓缩至至少无醇味，得浓缩液； C、将所述浓缩液过筛，加水稀释，上大孔吸附树脂，先用水洗涤至流出液I无色，然后用质量浓度为70%~90%的乙醇水溶液洗涤，至流出液II的三氯化铁-铁氰化钾法多酚鉴别呈阴性，得洗脱液； d、将所述洗脱液浓缩至无醇味，干燥，即得仙鹤草有效组分。
2.根据权利要求1所述的仙鹤草有效组分的制备方法，其特征在于:所述步骤a中提取的次数为I~3次，提取的时间为I~3小时。
3.根据权利要求1所述的仙鹤草有效组分的制备方法，其特征在于:所述步骤b中加入活性炭的重量为所述提取液重量的0.2%~0.8%。
4.根据权利要求1所述的仙鹤草有效组分的制备方法，其特征在于:所述步骤b中回流脱色的时间为10~30分钟，回流脱色的次数为I~3次。
5.根据权利要求1所述的仙鹤草有效组分的制备方法，其特征在于:所述步骤c中加水的重量为所述浓缩液重量的8~12倍。
6.根据权利要求1所述的仙鹤草有效组分的制备方法，其特征在于:所述步骤c中大孔吸附树脂的型号为HPD300。
7.根据权利要求1所述的仙鹤草有效组分的制备方法，其特征在于:所述步骤c中用质量浓度为70%~90%的乙醇水溶液洗涤时的流速为1.5~3BV/h。
8.根据权利要求1所述的仙鹤草有效组分的制备方法，其特征在于:所述步骤d中干燥采用微波炉来进行；所述步骤d中干燥的时间为8~10小时，干燥的温度为75°C~80°C。
9.一种利用权利要求1-8中任意一项所述的仙鹤草有效组分为活性成分制成的药用制剂，其特征在于:所述仙鹤草有效组分加入药用添加剂按照药剂学允许的制备方法制成的药用制剂。
10.一种利用权利要求1-8中任意一项所述的仙鹤草有效组分在制备抗氧化药物中的应用。
【文档编号】A61P29/00GK103735659SQ201410011427
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2014年1月9日 优先权日:2014年1月9日
【发明者】黄灿, 许刚, 杨立新, 赵都宁 申请人:广东幸美化妆品股份有限公司