一种中药组合物、其提取物及应用的制作方法
【专利摘要】本发明一种中药组合物、其提取物及应用，属于中医药【技术领域】。所述中药组合物由青龙衣和淫羊藿按重量比1:1组成。中药组合物的提取物是通过将重量比1:1的青龙衣与淫羊藿加水浸泡后回流提取2次，合并滤液后减压浓缩干燥即得浸膏粉末。本发明还公开了所述中药组合物及其提取物在制备治疗肝癌药物中的应用。本发明具有配制简单，疗效好，无副作用，安全性高，有利于患者及时减轻病状，并且优于青龙衣与刺五加药材组合对肝癌的治疗，具有良好的开发前景及社会和经济效益的优点。
【专利说明】一种中药组合物、其提取物及应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中医药【技术领域】，具体涉及一种中药组合物、其提取物及应用。
【背景技术】
[0002] 随着环境污染的日益严重，人们受病毒、化学因素（亚硝酸、黄曲霉素、农药）、物 理因素（电离辐射、紫外线）等的影响，癌症的发病率和死亡率都呈逐渐增加趋势。其中， 原发性肝癌（primary hepatic carcinoma, PHC)简称肝癌（hepatoma),是指原发于肝细胞 或肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤，是最常见的恶性肿瘤之一，被称为"肿瘤之王"。我国为原 发性肝癌高发区，起病隐匿，潜伏期长，恶性度高，生存期短，生存质量差，且治疗棘手。若不 能早期发现并彻底手术切除，肝癌患者的总体5年生存率不超过5%。目前，肝癌的治疗方 法有手术、放疗、化疗和介入治疗。这些治疗手段不仅价格昂贵，而且治疗过程常给患者带 来巨大的痛苦。因此，寻找高效、安全、经济的抗肿瘤药物也成为医药学者的重要课题。
[0003] 近年来，中医药在肝癌的治疗中发挥着不可替代的作用。大量药理实验证明，中 药复方如活血软坚解毒方、"晚癌康2号"、仙芦抗癌胶囊、蟾酥胶等，及单味中药如龙葵、三 棱、姜黄、莪术等，具有直接抗肝癌作用。同时，已有临床疗效观察研究表明，中医药治疗肝 癌的优势一方面在于能有效稳定病情，减轻毒副作用，改善临床症状，延长患者带瘤生存时 间，使部分患者肿瘤缩小；另一方面治疗费用相对低廉。因此，中医药治疗成为肝癌治疗中 不可或缺的重要组成部分。
【发明内容】
[0004] 青龙衣（Pericarpium Juglandis)为胡桃科胡桃属植物核桃楸（Juglans mandshurica Maxim.)和核桃（Juglans regia L.)未成熟的外果皮。该药始载于《开宝本 草》，称其为胡桃青龙，《救急方》中则称之为青胡桃皮，自《山东中草药手册》称之为"青龙 衣"后，现多延用此名称。主产于河北、山东、东北等地，为民间常用中药。古代诸家多以其 清热解毒、祛风疗癣、止痛止痢等功效入药。现代研究表明，青龙衣在临床应用广泛，可用于 治疗足部臭汗证、银屑病以及多种癌症等。
[0005] 淫羊藿又名仙灵脾、羊藿叶等，为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿 Epimedium sagittatum(Sieb. et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿 Epimedium pubescens. Maxim.或朝鲜淫羊藿 Epimedium koreanum Nakai 的干燥叶。李时 珍在《本草纲目》中称其"益精气、坚筋骨、补腰膝、强心力"之功效。现代药理实验研究表 明，淫羊藿能增加心脑血管血流量，促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有抗衰老、抗肿瘤 等功效。
[0006] 本发明的目的在于公开了一种中药组合物。
[0007] 本发明的第二个目的在于公开了上述中药组合物的提取物。
[0008] 本发明的第三个目的在于公开了上述中药组合物和提取物的应用。
[0009] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
[0010] 一种中药组合物，其中，所述中药组合物由青龙衣和淫羊藿组成，其中青龙衣与淫 羊藿的重量比为1:1。
[0011] 上述技术方案所述的中药组合物，其中，青龙衣为30g，淫羊藿为30g。
[0012] 上述技术方案所述的中药组合物，其中，所述中药组合物用于制备治疗肝癌的药 物。
[0013] 一种中药组合物的提取物，其中，所述提取物通过下述步骤制备所得：
[0014] (1)、按照重量比1:1称取青龙衣与淫羊藿药材；
[0015] ⑵、加水浸泡30min后回流提取2次，加水量分别为药材总重量的8倍、6倍，每次 提取1小时，趁热倾出上清液，滤过，合并滤液；
[0016] ⑶、减压浓缩干燥即得浸膏粉末。
[0017] 上述技术方案所述的中药组合物，其中，青龙衣为30g，淫羊藿为30g。
[0018] 上述技术方案所述的提取物，其中，所述提取物用于制备治疗肝癌的药物。
[0019] 上述技术方案所述的中药组合物或上述技术方案所述的提取物在制备治疗肝癌 药物中的应用。
[0020] 上述技术方案所述的应用，其中，中药组合物或提取物具有下调Bcl-2的表达和 上调Bax的表达的作用。
[0021] 上述技术方案所述的应用，其中，中药组合物或提取物的剂型为医学上可接受的 剂型。
[0022] 上述技术方案所述的应用，其中，中药组合物或提取物的剂型为粉剂、注射液、胶 囊、片剂或口服液中的一种。
[0023] 本发明具有以下有益效果：
[0024] 1、本发明中药组合物及其提取物不仅配制简单，疗效好，无副作用，安全性高，有 利于患者及时减轻病状，并且优于青龙衣与刺五加药材组合对肝癌的治疗，具有良好的开 发前景及社会和经济效益。
[0025] 2、本发明中药组合物及其提取物对人肝癌细胞株Η印G2和鼠肝癌细胞株H22的抑 瘤效果明显强于青龙衣与刺五加组合、单独使用青龙衣和单独使用淫羊藿。
[0026] 3、本发明中药组合物及其提取物对人肝癌细胞株Η印G2移植性肿瘤生长和鼠肝 癌细胞株Η 22移植性肿瘤生长的抑瘤效果明显强于青龙衣与刺五加组合、单独使用青龙衣 和单独使用淫羊藿。
【专利附图】
【附图说明】：
[0027] 1、图1是各给药组对HepG2肝癌细胞生长抑制率的影响；
[0028] 2、图2是各给药组对H22肝癌细胞生长抑制率的影响；
[0029] 3、图3是各给药组对小鼠 HepG2移植性肿瘤平均瘤重的影响；
[0030] 4、图4是各给药组对小鼠 H22移植性肿瘤平均瘤重的影响；
[0031] 5、图5是各组Η印G2细胞中Bcl-2的表达；
[0032] 6、图6是各组！fepG2细胞中Bax的表达。
【具体实施方式】：
[0033] 为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体实施例对本发明中药组合物及其 提取物作进一步的说明。
[0034] 实施例1 : 一种中药纟目合物:
[0035] -种中药组合物，由重量比1:1的青龙衣与淫羊藿组成。
[0036] 实施例2 :-种中药纟目合物:
[0037] -种中药组合物，由30g的青龙衣和30g淫羊藿组成。
[0038] 实施例3 :中药纟目合物提取物的制各:
[0039] (1)、按照重量比1:1称取青龙衣与淫羊藿药材；
[0040] (2)、加水浸泡30min后回流提取2次，加水量分别为药材总重量的8倍、6倍，每次 提取1小时，趁热倾出上清液，滤过，合并滤液，即得中药组合物提取物。
[0041] 实施例4 :中药纟目合物提取物的制各：
[0042] 本实施例与实施例3相同，区别在于：步骤（1)中青龙衣为30g，淫羊藿为30g。
[0043] 实施例5 :中药组合物提取物浸膏粉末的制备:
[0044] 将实施例3或4得到的中药组合物提取物减压浓缩干燥即得中药组合物提取物浸 膏粉末。
[0045] 以下结合具体实验例对本发明中药组合物（青龙衣与淫羊藿组合物）及其提取物 在肝癌治疗中的有益效果作进一步说明。
[0046] 一、实验材料：
[0047] 1、药物及试剂：
[0048] 青龙衣、淫羊藿、刺五加均购自河北省安国中药材市场，生产批号为20130322。环 磷酰胺片由天津金世制药有限公司提供，生产批号20130613。生理盐水、MTT(四甲基偶氮 唑盐）、苦味酸均由国药集团化学试剂北京有限公司提供，生产批号为20131012。胎牛血清 购置于四季青公司，生产批号20130623。DMS0购置于Sigma公司，生产批号20130215。Bax 及Bcl-2鼠抗人单抗、内参一抗（β-actin)购置Santa Cruz公司，生产批号20130808。
[0049] 2、细胞及动物：
[0050] (1)细胞株：HepG2细胞系，H22肝癌瘤株，RH-35细胞系，BRL细胞系，均由军事医 学科学院提供。
[0051] ⑵动物：BALB/c小鼠，清洁级，雄性，6-8周龄，体重（20±2)g，购自军事医学科学 院，动物合格证号SCXK-(军）2007-004。
[0052] 3、材料及仪器：
[0053] Costar96孔细胞培养板（美国Corning公司）；一次性0· 22 μ m针筒式微孔滤膜 (上海兴亚净化材料厂）；RAK-2001耐高温塑料染色架（福州迈新）；Forma恒温C02培养 箱（Thermo Electron Shanghai Instruments Co. , Ltd.) ;BioTek 多功會泛酶标仪（Thermo Electron Shanghai Instruments Co·, Ltd.) ;ABI7500 突光定量 PCR 仪（美国 CY-TECH); FA2004分析天平（上海天平仪器厂）；ALC4239低温高速离心机（美国Sigma公司产品）； 725型超低温冰箱（美国Forma公司）；SW-CJ-2FD超净工作台（苏州安泰空气技术有限公 司）。
[0054] 二、实验项目
[0055] 所有处理数据均以S±s表示，使用SPSS19. 0统计软件中的单因素方差分析处理数 据，用LSD法进行组间比较；否则采用非参数秩和检验，P < 0. 05表示有差异，P < 0. 01表 示有显著性差异。
[0056] 实验例1 :以下实验例2?6中的各实验样品的提取制备：
[0057] (1)、本发明中药组合物（青龙衣与淫羊藿）的提取物浸膏粉末的制备：
[0058] 精密称取青龙衣与淫羊藿药材各30g置圆底烧瓶中，加水浸泡30min后回流提取 2次，加水量分别为药材总重量的8倍、6倍，每次提取1小时，趁热倾出上清液，滤过，合并 滤液，减压浓缩干燥即得浸膏粉末。
[0059] (2)、青龙衣与刺五加提取物浸膏粉末的制备：
[0060] 精密称取青龙衣与刺五加药材各30g置圆底烧瓶中，其余提取步骤同上。
[0061] (3)、青龙衣提取物浸膏粉末的制备：
[0062] 精密称取青龙衣药材30g置圆底烧瓶中，其余提取步骤同上。
[0063] (4)、淫羊藿提取物浸膏粉末的制备：
[0064] 精密称取青淫羊藿药材30g置圆底烧瓶中，其余提取步骤同上。
[0065] (5)、刺五加提取物浸膏粉末的制备：
[0066] 精密称取刺五加药材30g置圆底烧瓶中，其余提取步骤同上。
[0067] 实骀例2 :MTT法检测各给药组对人肝癌细胞株IfepG2的影响：
[0068] 将处于对数生长期的人肝癌细胞株Η印G2用0.25%胰酶消化后，用含10%胎牛血 清的RPMI1640培养液稀释成浓度为5 X 104个/mL的细胞悬液，接种于96孔培养板中，每 孔100 μ 1，在37°C、C02培养箱中培养。培养Η印G2细胞系至细胞生长到50-60%融合时， 对照组培养液中加入溶解化合物所用的DMS0 (二甲基亚砜）培养液，阳性组加入0. 005g/ mL环磷酰胺，青龙衣+淫羊藿组加入相当于原药材2g/mL本发明中药组合物提取物浸膏粉 末，青龙衣+刺五加组加入相当于原药材2g/mL青龙衣与刺五加提取物浸膏粉末，青龙衣组 加入相当于原药材2g/mL青龙衣提取物浸膏粉末，淫羊藿组加入相当于原药材2g/mL淫羊 藿提取物浸膏粉末，刺五加组加入相当于原药材2g/mL刺五加提取物浸膏粉末，各100μ 1， 每孔总液体量为200 μ 1。培养24h后，弃上清，加入0. 5mg/ml的ΜΤΤ检测细胞活性。方法 如下：去上清，磷酸盐缓冲液（PBS)洗2遍，MTT、37°C孵育4小时，PBS洗2遍，DMS0溶解结 晶，490nm测定吸光度。
[0069]
【权利要求】
1. 一种中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由青龙衣和淫羊藿组成，其中青龙 衣与淫羊藿的重量比为1:1。
2. 根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：青龙衣为30g，淫羊藿为30g。
3. 根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物用于制备治 疗肝癌的药物。
4. 一种中药组合物的提取物，其特征在于，所述提取物通过下述步骤制备所得： (1) 、按照重量比1:1称取青龙衣与淫羊藿药材； (2) 、加水浸泡30min后回流提取2次，加水量分别为药材总重量的8倍、6倍，每次提取 1小时，趁热倾出上清液，滤过，合并滤液； (3) 、减压浓缩干燥即得浸膏粉末。
5. 根据权利要求4所述的中药组合物，其特征在于：青龙衣为30g，淫羊藿为30g。
6. 根据权利要求4或5所述的提取物，其特征在于：所述提取物用于制备治疗肝癌的 药物。
7. 权利要求1?3所述的中药组合物或权利要求4?6所述的提取物在制备治疗肝癌 药物中的应用。
8. 权利要求7所述的应用，其特征在于：中药组合物或提取物具有下调Bcl-2的表达 和上调Bax的表达的作用。
9. 权利要求7或8所述的应用，其特征在于：中药组合物或提取物的剂型为医学上可 接受的剂型。
10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于：中药组合物或提取物的剂型为粉剂、注 射液、胶囊、片剂或口服液中的一种。
【文档编号】A61P35/00GK104116778SQ201410361010
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年7月25日 优先权日:2014年7月25日
【发明者】赵艳玲, 肖小河, 王伽伯, 陈哲, 郑全福 申请人:中国人民解放军第三0二医院