四数九里香及其提取物在制备药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于中药【技术领域】，具体涉及一种天然植物药材和/或其提取物在治疗心脏病药物中的新用途。本发明涉及四数九里香和/或其提取物在制备治疗心脏病的药物中的应用。所述的四数九里香是四数九里香的叶、枝、根、花、果实中任意一种或其组合，粉碎入药；所述提取物为四数九里香粉碎后在室温浸提、加热回流、超临界萃取中所获得的提取物，提取所使用的溶剂为水与乙醇以任何比例相混溶的液体；或者是丙酮、乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯以任何比例相混溶的液体；或者是液态CO2。本发明主要用于对冠心病、风湿性心脏病、高血压性心脏、肺源性心脏、心肌病、心脏肿瘤、血管病变的综合治疗。本发明所制成的药物制剂经动物试验及临床试验表明无明显不良反应及毒副作用，能为患者提供安全、高效的治疗心脏病的天然植物药物。
【专利说明】四数九里香及其提取物在制备药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于中药【技术领域】，具体涉及一种天然植物药材和/或其提取物在治疗心脏病药物中的新用途。
技术背景
[0002]当今，人们普遍关注“夺命没商量”的癌症；却不知动脉硬化才是人类寿命的“第一终结者”。根据世卫组织的统计数字，心血管疾病是世界头号杀手，每年大约有1750万人因心脏病和中风死亡。目前心脏病多以手术及西药进行治疗，然而由于西药治疗心脏病需长期服用，导致对患者的肝、肾、肠、胃等器官伤害很大，因而国内外的医生、专家和患者都在寻找低毒高效的绿色药品，而中医药在这方面正是自己的优势，中医药治疗心脏病不但对患者的心脏有一定的独到之处，而且对患者的其它脏腑也有调理，保健作用。
[0003]四数九里香Murraya tetramera C.C.Huang为芸香科九里香属植物,是一种落叶乔木，生长于石灰岩山顶阳光充足的地方。四数九里香入药，辛、微苦，性微温，具有祛风解表、行气止痛、活血散瘀、抗炎、镇痛、解热之功效。
[0004]历代本草及各少数民族将四数九里香用于治疗感冒发热、咳嗽气踹、胃痛、风湿麻痹、跌打淤肿、皮肤瘙痒、湿疹等症，与之相关的专利及文献也比比皆是，但将四数九里香作为治疗心脏病的药物尚无文献报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种四数九里香和/或其提取物在制药领域中的新应用。
[0006]本发明涉及四数九里香和/或其提取物在制备治疗心脏病的药物中的应用。
[0007]本发明涉及四数九里香和/或其提取物在制备治疗冠心病的药物中的应用。
[0008]本发明涉及四数九里香和/或其提取物在制备治疗风湿性心脏病的药物中的应用。
[0009]本发明涉及四数九里香和/或其提取物在制备治疗高血压性心脏的药物中的应用。
[0010]本发明涉及四数九里香和/或其提取物在制备治疗肺源性心脏病的药物中的应用。
[0011]本发明涉及四数九里香和/或其提取物在制备治疗心肌病的药物中的应用。
[0012]本发明涉及四数九里香和/或其提取物在制备治疗心脏肿瘤的药物中的应用。
[0013]本发明涉及四数九里香和/或其提取物在制备治疗血管病变的药物中的应用。
[0014]本发明所述的四数九里香是四数九里香的叶、枝、根、花、果实中任意一种或其组合，粉碎入药；所述提取物为四数九里香粉碎后在室温浸提、加热回流、超临界萃取中所获得的提取物，提取所使用的溶剂为水与乙醇以任何比例相混溶的液体；或者是丙酮、乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯以任何比例相混溶的液体；或者是液态co2。
[0015]本发明所述的四数九里香和/或其提取物可以单独作为主要活性成分制成药物制剂，也可以与其它成分共同作为主要活性成分制成药物制剂。
[0016]本发明所述的药物剂型包括各种口服、注射、腔道、经皮等不同给药途径的药物制齐U。可以是本发明所述原料与相应的药用辅料经常规工艺制成的胶囊、片剂、颗粒剂、丸剂、外用搽剂、喷剂、注射剂等，也可以是本发明所述原料与其它中药材组成的复方制剂。
[0017]本发明提供了四数九里香和/或其提取物的新应用，为心脏病治疗提供了新的天然药物植物。本发明主要用于对冠心病、风湿性心脏病、高血压性心脏、肺源性心脏、心肌病、心脏肿瘤、血管病变的综合治疗。本发明所制成的药物制剂经动物试验及临床试验表明无明显不良反应及毒副作用，能为患者提供安全、高效的治疗心脏病的天然植物药物。
[0018]本发明药物安全性试验
[0019]一、急性毒性试验
[0020]I材料与方法
[0021]1.1动物:健康合格清洁级昆明种小鼠50只，体重18?22g，雌雄各半，由昆明医科大学实验动物中心提供。
[0022]1.2受试药物及其配制:四数九里香胶囊(制法见实施例1，下同)由云南名扬药业有限公司提供，规格0.5g/粒。取40粒四数九里香胶囊除去胶囊外壳，倾出药粉，于研钵中研磨5min后逐渐加入2 %的羧甲基纤维素钠，配为糊状混悬液，粘稠，终末浓度为23.4 %，为四数九里香胶囊的最高浓度。
[0023]1.3实验方法
[0024]1.3.1预实验取禁食12h以上(不禁水)的小鼠10只，雌雄各半，用四数九里香胶囊的最大浓度(23.4%)及最大容积(0.3ml/10g)灌胃，每日2次给药，观察7天，结果无动物死亡，无法按常规测定LD5tl，故改为测定四数九里香胶囊的最大耐受量。
[0025]1.3.2四数九里香胶囊最大耐受量(MTD)的测定另取小鼠40只，随机分为两组，每组20只，雌雄各半，四数九里香胶囊组用小鼠能耐受的最大浓度和最大容积，一日内灌胃3次，测定其最大给药量，生理盐水组给予同体积生理盐水，两组小鼠连续观察7天，每天称体重并记录。观察动物的活动、皮毛饮食、粪便有无异常改变，并观察有无中毒症状及死亡(若有死亡，则进行解剖并进行病理学检验)，连续观察I周，I周后复称体重，处死并解剖动物，观察心、肝、脾、肺、肾、脑等主要脏器有无异常变化。
[0026]2实验结果
[0027]2.1 —般情况第一次给药后5min后，小鼠表现明显好动，2h内动物极少进食，4h后动物的活动、饮食等逐渐恢复正常。未见其它异常或不良反应，也无动物死亡。二次给药后，状态同前一样，未见明显异常。处死解剖动物后，其主要脏器均未见明显的异常病变。一般情况见表I所示。
[0028]表I小鼠灌服四数九里香胶囊后结果(X±S)
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[0031]2.2四数九里香胶囊最大耐受量(MTD)小鼠灌胃给药的日累计剂量为21.06g/kg，此剂量相当于拟临床人用量的281倍(临床成人体重按60kg计算，每日用药量按0.075g/kg计算)。
[0032]3 结论
[0033]四数九里香胶囊给小鼠灌胃给药日累积剂量为21.06g/kg，相当于拟临床人体用量的281倍，除给药后因剂量过大小鼠有短时间的不适外，未见明显的毒性反应。
[0034]本发明药效学试验:
[0035]二、四数九里香胶囊抗实验性动脉粥样硬化作用
[0036]I材料与方法
[0037]1.1试剂与药物胆固醇、胆盐购于天津市永大化学试剂公司；猪油自制；蛋黄粉与全脂奶粉市场购买；基础饲料由昆明医科大学实验动物中心提供。丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒:南京聚力生物医学工程研究所。兔抗鼠细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)抗体、过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔IgG、即用型SABC(过氧化物酶)免疫组化试剂盒及DAB显色液(武汉博士德生物工程有限公司)。四数九里香胶囊由云南名扬药业有限公司研制。
[0038]1.2仪器5804R低温超速离心机(德国印pendorf公司)；UV_2401分光光度仪(日本岛津)；AMS-18A全自动生化分析仪(张家口奥普森科技发展有限公司)；奥林帕斯CH30光学显微镜。
[0039]1.3分组及取材健康SD大鼠30只，?，体重(205±20) g，购自昆明医科大学实验动物中心。将大鼠随机分为组3组:对照组、模型组和中药组，每组10只。对照组喂食以标准饲料，模型组和四数九里香胶囊组喂以高脂饲料(1%胆固醇、0.1%胆盐、10%猪油、5%蛋黄粉、5%全脂奶粉、78.9%基础饲料)，四数九里香胶囊组在喂以高脂饲料的同时给以四数九里香胶囊1.2g/kg。各组均自由饮水，连续喂养8周后急性处死，腹腔静脉取血，离心取血清，_20°C冰箱放置，大鼠迅速开胸取出主动脉胸腹段血管，清除周围组织，_70°C冰箱保持，备用。
[0040]1.4生化指标测定测定血清胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)。血清MDA水平和SOD活性测定按试剂盒说明书操作。
[0041]1.5光镜组织学检测在大鼠主动脉弓与胸主动脉交界处取材，10%中性甲醛固定，石蜡包埋，制备横切面石蜡切片，厚度约4微米，HE染色，光镜观察。
[0042]1.6主动脉管壁ICMA-1检测腹主动脉剪切0.6cm左右一段血管，10%中性甲醛固定，其余的血管用于提取蛋白，75 %乙醇脱水，石蜡包埋横切面切片，厚4微米，每隔4张取I张，每份血管标本5张片子。SABC免疫组织化学法检测ICMA-1:3% H2O2室温封闭min，以灭火内源性酶，沸水浴修复后，正常三羊血清室温封闭阻断非特异性结合，兔抗大鼠ICMA-1抗体(1:100)37°C Ih,生物素化三羊抗兔IgG37°C孵育20min，PBS洗后滴加试剂SABC。DAB显色，苏木素轻度复染，脱水，透明，封片、显微镜观察，以不加兔抗大鼠ICMA-1抗体的切片作为阴性对照，阳性细胞的细胞膜和细胞质染成黄褐色，提示有ICMA-1表达。选取细胞分布均匀的高倍视野作为观察区，将镜下阳性细胞数同总细胞数相比较，得到阳性细胞的表达率，每份血管标本取其4张片子的平均值，得出ICMA-1阳性细胞表达率
[0043]1.7主动脉血管壁ICMA-1蛋白表达量检测提取蛋白，将蛋白提取液进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后转膜，5%脱脂奶粉37°C封闭Ih，TBS洗膜后，先与兔抗大鼠ICMA-1抗体(1: 100) 4°C过夜反应，再与过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔IgG(l:200) 37°C反应lh，T-TBS洗膜，DAB显色，分析。
[0044]1.8统计学处理所有实验数据采用SPSSl1.5软件包统计分析。
[0045]2 结果
[0046]2.1血脂的比较与对照组比较，模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平明显升高，差异显著(P < 0.01);与模型组比较，四数九里香胶囊组TC、TG显著降低，HDL-C显著升高，差异有显著性(P < 0.01或P < 0.05)，而LDL-C影响不明显(见表2)。
[0047]表2 血清 TC、TG、LDL-C 及 HDL-C 水平(J 土 S)
[0048]
【权利要求】
1.四数九里香和/或其提取物在制备治疗心脏病的药物中的应用，所述的四数九里香是四数九里香的叶、枝、根、花、果实中任意一种或其组合，粉碎入药；所述提取物为四数九里香粉碎后在室温浸提、加热回流、超临界萃取中所获得的提取物，提取所使用的溶剂为水与乙醇以任何比例相混溶的液体；或者是丙酮、乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯以任何比例相混溶的液体；或者是液态co2。
2.权利要求1所述的四数九里香和/或其提取物在制备治疗冠心病的药物中的应用。
3.权利要求1所述的四数九里香和/或其提取物在制备治疗风湿性心脏病的药物中的应用。
4.权利要求1所述的四数九里香和/或其提取物在制备治疗高血压性心脏的药物中的应用。
5.权利要求1所述的四数九里香和/或其提取物在制备治疗肺源性心脏病的药物中的应用。
6.权利要求1所述的四数九里香和/或其提取物在制备治疗心肌病的药物中的应用。
7.权利要求1所述的四数九里香和/或其提取物在制备治疗心脏肿瘤的药物中的应用。
8.权利要求1所述的四数九里香和/或其提取物在制备治疗血管病变的药物中的应用。
【文档编号】A61P9/10GK104127545SQ201410379420
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2014年8月4日 优先权日:2014年8月4日
【发明者】温先敏 申请人:温先敏