一种红豆杉提取物的制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种红豆杉提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)准备红豆杉原料；(2)超声破壁处理，将红豆杉原料在浸泡剂中搅拌浸泡，得到浸泡液，对所述浸泡液进行超声破壁处理，得到料液；(3)酶解，将所述的料液转至反应容器中，向所述反应容器中加入占红豆杉原料重量0.3％～1.0％的中性蛋白酶，得到混合液，调节混合液的pH至6.8～7.0，酶解使得糖蛋白和聚糖中的游离蛋白质水解，灭酶，得到浆液；(4)对所述浆液进行回流提取处理，得到提取液，过滤、浓缩，得到浓缩液，浓缩液过滤，得到滤液；(5)喷雾干燥，获得红豆杉提取物。本制备方法提高了溶出率，加快了提取速度。
【专利说明】一种红豆杉提取物的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种红豆杉提取物的制备方法，本发明还涉及该红豆杉提取物的应用，属于药用植物开发领域。
【背景技术】
[0002]红豆杉是红豆杉科红豆杉属植物的总称。红豆杉的药用价值早在《本草纲目》中就有记载，主要用于治疗霍乱、伤寒及用于排毒。《现代中医大辞典》、《本草推陈》中都有记载，其性味苦、平、有小毒，归心经，功效消肿散结，主治肿瘤、肾病、风湿等。现代中医亦将其用于治疗糖尿病、肾病及妇科疾病等。目前已从红豆杉植物中分离出400多种化合物，主要成分为紫杉烷类和非紫杉烷类两种。紫杉烷类为紫杉烷二萜类化合物，非紫杉烷类化合物主要为三萜、留体、高萜、黄酮、苯丙素类和酚类等。我国传统医学中，中药的主要临床应用方式多为水煎服，充分利用各水溶性功能成分的协同作用，以期达到更好的治疗效果。
[0003]但是中医传统所采用的红豆杉提取物的提取方法，溶出率有待提高。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的第一个技术问题是针对技术现状提供一种溶出率有效提高的红豆杉提取物的制备方法。
[0005]本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种红豆杉提取物的应用。
[0006]本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为:一种红豆杉提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0007](1)准备红豆杉原料；
[0008](2)超声破壁处理，将红豆杉原料在浸泡剂中搅拌浸泡，得到浸泡液，对所述浸泡液进行超声破壁处理，得到料液；
[0009](3)酶解，将所述的料液转至反应容器中，向所述反应容器中加入占红豆杉原料重量0.3%?1.0% (例如0.5%、0.7%、0.8% )的中性蛋白酶，得到混合液，调节混合液的pH至6.8?7.0，酶解使得糖蛋白和聚糖中的游离蛋白质水解，灭酶，得到浆液；
[0010](4)对所述浆液进行回流提取处理，得到提取液，过滤、浓缩，得到浓缩液，浓缩液过滤，得到滤液；
[0011](5)喷雾干燥，获得红豆杉提取物。
[0012]其中，步骤⑴的操作过程为，红豆杉枝和/或叶烘干、粉碎，过60?80目筛，筛下物即为红豆杉原料。其中，红豆杉优选为人工栽培南方红豆杉。
[0013]其中，步骤(2)中，搅拌浸泡的操作过程为，将红豆杉原料投入超声破壁浸提罐中，加入红豆杉原料重量10?20倍的浸泡剂，于45°C?55°C (例如48°C、50°C、52°C )下搅拌浸泡 lh ?1.5h (例如 1.2h、1.3h、1.4h)；
[0014]优选浸泡剂为水。
[0015]其中，步骤(2)中，采用超声波发生器进行超声破壁处理，所述超声发生器的功率为 15 ?30KW，例如 18KW、20KW、25KW、28KW，频率为 20 ?25KHz，例如 22 千赫兹、23KHz、24KHz，声强为2?5W/cm2，超声破壁处理的时间为20?60min，例如30min、40min、50min。
[0016]其中，步骤(3)中，所述反应容器为搅拌提取罐；
[0017]优选的，酶解时间为80min ?lOOmin,例如 85min、90min、95min ；
[0018]优选的，灭酶温度为85?95°C，例如88°C、90°C、92°C，灭酶时间为lOmin?15min,例如 12min、13min、14min。
[0019]其中，步骤(4)中，所述回流提取处理的操作过程为，将所述浆液转至回流提取罐中，于85?95°C (例如88°C、90°C、92°C )下回流提取3?5h ;
[0020]优选的，步骤(4)中，所述过滤的操作过程为，所述提取液通过板框过滤或微孔过滤，过滤目数为120?200目(例如150目、170目、190目)，过滤压力为0.3?0.6MPa，例如 0.4MPa、0.5MPa ；
[0021]优选的，步骤(4)中，所述浓缩的操作过程为，所述提取液过滤后获得的上清液泵入减压浓缩罐中，减压浓缩至浓度为10%?20%，例如12%、15%、17%。
[0022]其中，在步骤(4)之后步骤(5)之前还包括步骤(4a)，所述浓缩液过滤后，用稀释剂将滤液调至浓度为12%?18%，例如13%、15%、17%。
[0023]其中，所述稀释剂为水。
[0024]本发明解决上述第二个技术问题所采用的技术方案为:依照上述制备方法制备出的红豆杉提取物在制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、治疗风湿、预防冠心病药物中的应用。
[0025]其中，所述药物的形式为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
[0026]与现有技术相比，本发明的优点在于:本红豆杉提取物的制备方法采用超声破壁、生物酶降解与回流提取相结合的方法，保留了有效成分、降解生物大分子，提高了溶出率，减少工艺环节，可降低能耗，加快提取速度。采用本制备方法可提供一种接近我国传统中医临床用药药剂成分的制品，即红豆杉提取物，该制品可直接应用，亦可作为进一步提取单体的红豆杉原料。本发明对人工种植红豆杉资源的进一步开发具有积极意义。
【专利附图】
【附图说明】
[0027]图1为本发明实施例4的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0028]以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0029]实施例1
[0030]本实施例的红豆杉提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0031](1)准备红豆杉原料，红豆杉枝和叶烘干、粉碎，过80目筛，筛下物即为红豆杉原料，备用。
[0032](2)超声破壁处理，取筛下物，即红豆杉原料10kg，投入超声破壁浸提罐中，加入红豆杉原料重量15倍的浸泡剂——7K，于50°C下搅拌浸泡lh ;采用超声波发生器进行超声破壁处理，超声发生器的功率为15?30KW，例如20KW，频率为20?25KHz，例如23KHz，声强为2W/cm2，超声破壁处理30min，得到料液。
[0033](3)酶解，将料液转至反应容器——即搅拌提取罐中，加入占红豆杉原料重量0.3%的中性蛋白酶，得到混合液，调节混合液的pH至6.8?7.0，例如6.8，酶解90分钟，使得糖蛋白和聚糖中的游离蛋白质水解，升温至90°C，灭酶10分钟，得到浆液；
[0034](4)将浆液转入回流提取罐中，于90°C下回流提取3小时，获得的提取液通过板框过滤(也可以采用微孔过滤)，过滤目数为150目，过滤压力为0.3?0.6MPa，例如
0.5MPa，过滤得到的滤渣另作它用，而过滤得到的上清液泵入减压浓缩罐中，减压浓缩至浓度18%?20%，例如18%，得到浓缩液，浓缩液过滤，得到滤液；
[0035](5)步骤(4)获得的浓缩液过滤后，滤液直接喷雾干燥，获得红豆杉提取物
1.42kg。
[0036]本实施例也可以在步骤(4)之后步骤(5)之前增加步骤(4a)，即浓缩液过滤后，用稀释剂——水将滤液调至浓度为12%?18%，例如13%，得到流浸膏，然后再喷雾干燥，也能获得红?杉提取物。
[0037]本实施例制备的红豆杉提取物含有黄酮、多糖、低聚糖、小分子蛋白、肽、氨基酸等多种具有生物功能的水溶性成分，用该红豆杉提取物可以用来制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、治疗风湿、预防冠心病的药物，如药品或保健品，药物的形式为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
[0038]实施例2
[0039]本实施例的红豆杉提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0040](1)准备红豆杉原料，红豆杉枝和叶烘干、粉碎，过80目筛，筛下物即为红豆杉原料，备用。
[0041](2)超声破壁处理，取筛下物，即红豆杉原料10kg，投入超声破壁浸提罐中，加入红豆杉原料重量15倍的浸泡剂——7K，于50°C下搅拌浸泡lh ;采用超声波发生器进行超声破壁处理，超声发生器的功率为15?30KW，例如15KW，频率为20?25KHz，例如20KHz，声强为2W/cm2，超声破壁处理40min，得到料液。
[0042](3)酶解，将料液转至反应容器——即搅拌提取罐中，加入占红豆杉原料重量0.5%的中性蛋白酶，得到混合液，调节混合液的pH至6.8?7.0，例如6.9 ;酶解90分钟，使得糖蛋白和聚糖中的游离蛋白质水解，升温至90°C，灭酶10分钟，得到浆液；
[0043](4)将浆液转入回流提取罐中，于90°C下回流提取4小时，获得的提取液通过板框过滤(也可以采用微孔过滤)，过滤目数为150目，过滤压力为0.3?0.6MPa，例如
0.4MPa，过滤得到的滤渣另作它用，而过滤得到的上清液泵入减压浓缩罐中，减压浓缩至浓度18%?20%，例如19%，得到浓缩液，浓缩液过滤；
[0044](5)步骤(4)获得的浓缩液过滤后，滤液直接喷雾干燥，获得红豆杉提取物
1.32kg。
[0045]本实施例也可以在步骤(4)之后步骤(5)之前增加步骤(4a)，即浓缩液过滤后，用稀释剂——水将滤液调至浓度为12%?18%，例如16%，得到流浸膏，然后再喷雾干燥，也能获得红?杉提取物。
[0046]本实施例制备的红豆杉提取物含有黄酮、多糖、低聚糖、小分子蛋白、肽、氨基酸等多种具有生物功能的水溶性成分，用该红豆杉提取物可以用来制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、治疗风湿、预防冠心病的药物，如药品或保健品，药物的形式为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
[0047]实施例3
[0048]本实施例的红豆杉提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0049](1)准备红豆杉原料，红豆杉枝和叶烘干、粉碎，过80目筛，筛下物即为红豆杉原料，备用。
[0050](2)超声破壁处理，取筛下物，即红豆杉原料10kg，投入超声破壁浸提罐中，加入红豆杉原料重量15倍的浸泡剂——7K，于50°C下搅拌浸泡lh ;采用超声波发生器进行超声破壁处理，超声发生器的功率为15?30KW，例如30KW，频率为20?25KHz，例如25KHz，声强为3W/cm2，超声破壁处理30min，得到料液。
[0051](3)酶解，将料液转至反应容器——即搅拌提取罐中，加入占红豆杉原料重量0.8%的中性蛋白酶，得到混合液，调节混合液的pH至6.8?7.0，例如7.0，酶解90分钟，使得糖蛋白和聚糖中的游离蛋白质水解，升温至90°C，灭酶10分钟，得到浆液；
[0052](4)将浆液转入回流提取罐中，于90°C下回流提取5小时，获得的提取液通过板框过滤(也可以采用微孔过滤)，过滤目数为150目，过滤压力为0.3?0.6MPa，例如
0.5MPa，过滤得到的滤渣另作它用，而过滤得到的上清液泵入减压浓缩罐中，减压浓缩至浓度18%?20%，例如20%，得到浓缩液，浓缩液过滤；
[0053](5)步骤(4)获得的浓缩液过滤后，滤液直接喷雾干燥，获得红豆杉提取物
1.45kg。
[0054]本实施例制备的红豆杉提取物含有黄酮、多糖、低聚糖、小分子蛋白、肽、氨基酸等多种具有生物功能的水溶性成分，用该红豆杉提取物可以用来制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、治疗风湿、预防冠心病的药物，如药品或保健品，药物的形式为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
[0055]实施例4
[0056]本实施例与实施例3不同之处在于:
[0057]在步骤(4)之后步骤(5)之前还包括步骤(4a)，浓缩液过滤后，用稀释剂——水将滤液调至浓度为12%?18%，例如15%，得到流浸膏，然后再喷雾干燥，也能获得红豆杉提取物。
[0058]其他制备过程如同实施例3，其具体的工艺流程图见图1。
[0059]以上内容仅为本发明的较佳实施例，对于本领域的普通技术人员，依据本发明的思想，在【具体实施方式】及应用范围上均会有改变之处，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
【权利要求】
1.一种红豆杉提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)准备红豆杉原料； (2)超声破壁处理，将红豆杉原料在浸泡剂中搅拌浸泡，得到浸泡液，对所述浸泡液进行超声破壁处理，得到料液； (3)酶解，将所述的料液转至反应容器中，向所述反应容器中加入占红豆杉原料重量0.3%?1.0%的中性蛋白酶，得到混合液，调节混合液的pH至6.8?7.0,酶解使得糖蛋白和聚糖中的游离蛋白质水解，灭酶，得到浆液； (4)对所述浆液进行回流提取处理，得到提取液，过滤、浓缩，得到浓缩液，浓缩液过滤，得到滤液； (5)喷雾干燥，获得红豆杉提取物。
2.根据权利要求1所述的红豆杉提取物的制备方法，其特征在于:步骤(I)的操作过程为，红豆杉枝和/或叶烘干、粉碎，过60?80目筛，筛下物即为红豆杉原料。
3.根据权利要求1所述的红豆杉提取物的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，搅拌浸泡的操作过程为，将红豆杉原料投入超声破壁浸提罐中，加入红豆杉原料重量10?20倍的浸泡剂，于45°C?55°C下搅拌浸泡Ih?1.5h ; 优选浸泡剂为水。
4.根据权利要求1所述的红豆杉提取物的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，采用超声波发生器进行超声破壁处理，所述超声发生器的功率为15?30KW，频率为20?25KHz，声强为2?5W/cm2，超声破壁处理的时间为20?60min。
5.根据权利要求1所述的红豆杉提取物的制备方法，其特征在于:步骤(3)中，所述反应容器为搅拌提取罐； 优选的，酶解时间为80min?10min ； 优选的，灭酶温度为85?95°C,灭酶时间为1min?15min。
6.根据权利要求1所述的红豆杉提取物的制备方法，其特征在于:步骤(4)中，所述回流提取处理的操作过程为，将所述浆液转至回流提取罐中，于85?95°C下回流提取3?5h ； 优选的，步骤(4)中，所述过滤的操作过程为，所述提取液通过板框过滤或微孔过滤，过滤目数为120?200目，过滤压力为0.3?0.6MPa; 优选的，步骤(4)中，所述浓缩的操作过程为，所述提取液过滤后获得的上清液泵入减压浓缩罐中，减压浓缩至浓度为10%?20%。
7.根据权利要求1所述的红豆杉提取物的制备方法，其特征在于:在步骤(4)之后步骤(5)之前还包括步骤(4a)，所述浓缩液过滤后，用稀释剂将滤液调至浓度为12%?18%。
8.根据权利要求7所述的红豆杉提取物的制备方法，其特征在于:所述稀释剂为水。
9.根据权利要求1至8任一项权利要求所述的制备方法制备出的红豆杉提取物在制备抗肿瘤、糖尿病、提高免疫力、调节血脂水平、降压、治疗风湿、预防冠心病药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的红豆杉提取物的应用，其特征在于:所述药物的形式为片齐U、胶囊剂或颗粒剂。
【文档编号】A61P29/00GK104248649SQ201410495235
【公开日】2014年12月31日 申请日期:2014年9月24日 优先权日:2014年9月24日
【发明者】田连忠, 刘雷, 葛月兰 申请人:江苏红豆杉药业有限公司