细辛总挥发油提取物及提取方法和在制备治疗慢性咳嗽药物中的用途

细辛总挥发油提取物及提取方法和在制备治疗慢性咳嗽药物中的用途
【专利摘要】细辛总挥发油提取物及提取方法和在制备治疗慢性咳嗽药物中的用途。本发明属于天然药物领域，公开了一种细辛总挥发油提取物及其提取方法和用途。该方法是将细辛粗粉置于超临界CO2萃取装置的萃取釜中，密封；加热，当萃取釜温度达到45～70℃时，打开萃取釜阀门，当萃取釜内压力同贮罐压力相等时打开排气阀排净空气，对系统进行加压，当萃取釜压力达到30～40Mpa、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ达到5～10Mpa时，分离温度达到30～50℃时，控制CO2流量为35～60L/h，开始循环萃取；萃取60～240min后，从分离釜出料口接收萃取的细辛总挥发油提取物。发明人通过大量的药效学试验证明细辛总挥发油提取物对于各型慢性咳嗽具有明显的治疗作用，可以用于制备治疗相应疾病的药物。
【专利说明】细辛总挥发油提取物及提取方法和在制备治疗慢性咳嗽药 物中的用途

【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物【技术领域】，更具体而言，涉及一种细辛总挥发油提取物及其 提取方法和在制备治疗慢性咳嗽药物中的用途。

【背景技术】
[0002] 咳嗽是呼吸系统常见和多发症，是呼吸科门诊的常见主诉。咳嗽本身是呼系统受 到刺激时产生的一种防御性反射活动，帮忙清除气道外来的刺激物及本身的分泌物，是一 种有益的动作，有时亦见于健康人群。一般情况下，对于轻度而不频繁的咳嗽无须应用止咳 药便可自然缓解，长期频繁或过于激烈的咳嗽则是一种病理性的反应，不仅会增加患者的 痛苦，影响休息和睡眠，增加体力消耗，严重时还会促进疾病的发展，产生其他并发症。
[0003] 根据病程的不同，咳嗽可分为急性、亚急性与慢性咳嗽。急性咳嗽〈3周，亚急性咳 嗽3-8周，慢性咳嗽> 8周。临床上通常将以咳嗽为唯一症状或主要症状、时间大于8周、 胸部X线检查无明显异常者称为不明原因慢性咳嗽，简称慢性咳嗽。常见病因为嗜酸粒细 胞性支气管炎（EB)、上气道咳嗽综合征（UACS，原称鼻后滴流综合征（PNDS))、胃食管反流 性咳嗽（GERC)、咳嗽变异性哮喘（CVA)等，这些病因明确的慢性咳嗽患者大部分能得到有 效的治疗。但有一部分患者经过全面检查后病因仍未能明确，既往称之为慢性特发性咳嗽 (chronic idiopathic cough)或者不明原因慢性咳嗽（unexplained chronic cough)。近 年来有专家学者提出咳嗽高敏感综合征（Cough Hypersensitivity Syndrome, CHS)的概念 来描述此类慢性咳嗽患者，这类患者临床上主要表现为慢性刺激性干咳，一种或者多种刺 激物如冷空气、灰尘、香烟、油烟等可诱发，咳嗽敏感性增高是此类患者的共同病理生理特 征。这部分患者是目前临床上真正的难治性慢性咳嗽患者，亦即中医所说的"久咳"、"顽咳" 的范畴。在专科门诊中，慢性咳嗽的比例高达10% -38%，欧美各国的问卷调查显示慢性咳 嗽发生率也高达9% -33%，广州呼吸疾病研究所2006年一项针对1087名大学生咳嗽的现 场调查显示，该群体咳嗽总发生率为10. 9%，其中慢性咳嗽总发生率为3. 3%，可以推测社 区人群的咳嗽发生率将更高。此外，针对不同地区的研究显示难治性咳嗽或特发性咳嗽占 慢性咳嗽病因的12-46%。这类患者的平均病程较长，有的甚至长达数十年。
[0004] 临床上用于镇咳的药物种类繁多，但很多慢性咳嗽患者用这些药物治疗后并不能 获得有效的缓解。目前国内外各大制药公司已针对慢性咳嗽不同发病机制研发相应的药 物，如针对咳嗽受体TRPV1的选择性拮抗剂BCTC与JNJ17203212等以及针对TRPA1的选择 性拮抗剂HC-030031与AP-18等均表现出显著的体内、外镇咳活性，但这些拮抗剂在临床研 究过程中发现都存在过高热与嗅觉失敏等副作用，限制了其临床应用。此外，美国Pfizer制 药公司及法国Sanofi制药公司分别开发了特异性非肽类NK1受体拮抗剂CP96345、CP99994 及SR140333等，也是由于其体内不稳定性或副作用等问题，至今尚无研制成功的药物用于 临床，目前还没有很好的针对慢性咳嗽治疗的药物。
[0005] 在止咳活性筛选实验模型方面，绝大多数都是采用小鼠氨水引咳模型评价药物止 咳活性，小鼠咳嗽特征不明显，且咳嗽次数记数具有一定的主观因素，此外，这些小鼠模型 本身也不能反映慢性咳嗽患者的病理生理状态，因此筛选获得的止咳药物对慢性咳嗽患者 则没有很好的针对性。本课题组（广州呼吸疾病研究所，呼吸疾病国家重点实验室，咳嗽课 题组）采用自行建立的慢性咳嗽高敏豚鼠模型，是一种气道非特异性炎症病理性慢性咳嗽 模型，以中性粒细胞浸润为主，表现为咳嗽敏感性增高，与临床上的慢性难治性咳嗽患者有 许多共同的病理生理特征，为慢性咳嗽特别是难治性慢性咳嗽的研究提供了有力的工具。 同时，我们引进美国BUXCO动物无创肺功能检测系统，由仪器检测动物的咳嗽次数、咳嗽潜 伏期等指标，可以排除人为主观因素，活性筛选结果更加科学、可靠。
[0006] 中医药学是中华民族几千来防病治病丰富实践经验的结晶，中医能辨西医不明之 症，中药能治西药难治和不治之症，中医中药对咳嗽的治疗有着悠久的历史与丰富的经验， 可以与西医西药互为补充。因此，利用现有技术从中药中寻找治疗顽固性慢性咳嗽的安全 有效的新药，在满足巨大市场需求的同时，创造出较好的社会效益和经济效益。
[0007] 中药细辛，始载于《神农本草经》，列为上品。2010版《中国药典》规定细辛来源为 马兜铃科植物北细辛 Asarum Heterotropoides Fr. Schmidt var.mandshuricum (Maxim.) Kitag?、汉城细辛 Asarum sieboldii Miq. var. seoulense Nakai 或华细辛 Asarum sieboldii Miq.的干燥根与根茎。性温，味辛，归心、肺、肾经。具有解表散寒、祛风止痛、 通窍、温肺化饮的功效，用于痰饮咳喘、风寒感冒、头痛、牙痛、鼻塞流涕、鼻鼽、鼻渊、风湿痹 痛的治疗。主要药效成分为挥发油（张会宗.药理效应法筛选中药细辛活性组群的试验研 究.实用中医内科杂志，2009, 23(8) :29-30;张彦.北细辛汉城细辛华细辛不同药用部位 的镇痛作用研究.中华中医药学刊，2009, 27(5) : 1096-1099 ;程孟春.三种细辛属植物挥 发油的镇痛消炎作用研究.中华中医药杂志，2006, 21 (5) : 307-308)，并且认为甲基丁香酚 为其止咳药效成分（周慧秋.甲基丁香酚药理作用研究.中医药学报.2000,（2) :79-80)。
[0008] 针对细辛挥发油的提取方法，常规的有水蒸气蒸馈法（Steam distillation) 和索氏提取法（Soxhlet extractor method)，是目前公认的挥发性成分提取方法。现 在出现了挥发性成分新的提取方法，如超临界流体萃取法（Supercritical fluid extraction)、微波辅助萃取法（Microwave assisted extraction)、顶空固相微萃取法 (Headspace solid phase microextraction)、顶空液相微萃取法（Headspace liquid phase microextraction)、气流顶空液相微萃取法（Gas flow headspace liquid phase microextraction)和气流吹扫微注射器萃取法（Gas purgemicrosyringe extraction)等， 这些方法提高了挥发性成分的提取效率。水蒸气蒸馏法和索氏提取法是非常常用的提取方 法，但这两种方法存在费时、费溶剂、提取挥发性成分损失大、加热成分不稳定等缺点。其他 部分方法较新，但是存在技术设备不成熟、成本高等，目前还没有得到有效的推广，不适合 工业化大生产。超临界co 2萃取法是采用无毒、不易燃易爆、价廉的co2作为萃取剂，具有提 取设备简单、萃取时间短、操作温度低、化学成分不易被破坏、提取率高、含杂质少、无溶剂 残留等优点，是目前较为理想的萃取方法。


【发明内容】

[0009] 针对以上现有技术的不足，本发明的首要目的在于提供一种细辛总挥发油提取物 的提取方法。
[0010] 本发明的又一目的是提供上述方法提取得到的细辛总挥发油提取物。本发明通过 优化超临界C0 2萃取条件获得了细辛挥发油，HPLC分析结果表明所含成分与目前报道的挥 发油成分明显不同，除了具有相当量的常规挥发油的现有止咳成分（甲基丁香酚）外，还具 有细辛脂素等非挥发性成分。
[0011] 本发明的再一目的是提供上述细辛总挥发油提取物在制备治疗慢性咳嗽药物中 的用途。本发明的药效结果表明，细辛常规挥发油对于急性咳嗽动物模型止咳效果较好，但 对于慢性咳嗽动物模型，本发明方法制备的细辛挥发油止咳效果显著优于常规方法制备的 挥发油。
[0012] 本发明通过优化超临界co2萃取条件获得的细辛挥发油与传统的水蒸汽蒸馏法及 现有报道的超临界co 2萃取法所获得的细辛挥发油化学成分明显不同，且对于慢性咳嗽具 有更好的镇咳活性，目前还没有相关的文献报道。
[0013] 本发明目的通过以下技术方案实现：
[0014] 一种细辛总挥发油提取物的提取方法，按照以下操作步骤：将细辛的根与/或根 茎洗净、晾干、粉碎，得细辛粗粉；将细辛粗粉置于超临界co 2萃取装置的萃取釜中，密封； 对萃取釜、分离釜分别进行加热，当萃取釜温度达到45?70°C时，打开萃取釜阀门，当萃取 釜内压力同贮罐压力相等时打开排气阀排净空气，通过高压泵对系统进行加压，当萃取釜 压力达到30?40Mpa、分离釜I和分离釜II压力达到5?lOMpa，分离温度达到30?50°C 时，控制C0 2流量为35?60L/h，开始循环萃取；萃取60?240min后，从分离釜出料口接收 萃取的细辛总挥发油提取物。
[0015] 所述萃取釜温度设定在50°C ;所述萃取釜压力达到35Mpa ;所述分离釜I和分离 釜II压力达到5Mpa，温度达到40°C;所述C02流量控制在40L/h ;所述萃取的时间为180min。
[0016] 所述细辛为北细辛、汉城细辛或华细辛，更加优选为北细辛。
[0017] 一种由上述提取方法得到的细辛总挥发油提取物，所述细辛总挥发油提取物中 甲基丁香酚（methyleugenol)绝对含量为30.9wt%，细辛脂素（asarinin)的绝对含量为 10. 5wt%，芝麻脂素（sesamin)的绝对含量为7. 8wt%。
[0018] 上述的细辛总挥发油提取物在制备治疗慢性咳嗽药物中的用途，所述细辛总挥发 油提取物单独或与其他药物组合制备治疗慢性咳嗽药物。
[0019] 所述细辛总挥发油提取物与可用药物载体制成各种剂型。
[0020] 所述剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、滴丸剂、泡腾片、软膏剂、糖浆 齐U、注射剂、口服液、合剂、酊剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂。
[0021] 药学上可接受的载体如：填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂或润湿剂。填充剂包括乳 糖、蔗糖、玉米淀粉、山梨醇；粘合剂包括糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、羟丙基甲基纤维素 或聚乙烯吡咯烷酮；润滑剂包括硬脂酸镁；崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚维酮、 微晶纤维素；润湿剂如十二烷基硫酸钠。
[0022]所述的甲基丁香酚（methyleugenol)，即结构式为CnH1402，化学式为 4-allyl-l, 2-dimethoxybenzene 的化合物。
[0023] 所述的细辛脂素（asarinin)，即结构式为C2QH 1806，化学式为5, 5' -[(1R, 3aR, 4S, 6 aR)-tetrahydr0-lH, 3H-furo[3, 4-c]furan_l，4-diyl]bis_l，3-Benzod ioxole 的化合物。
[0024] 所述的芝麻脂素（sesamin)，即结构式为C2QH 1806，化学式为5, 5' _[(1S，3aR，4S，6a R)-tetrahydr0-lH, 3H-furo[3, 4-c]furan_l，4-diyl]bis_l，3-Benzodi oxole 的化合物。
[0025] 本发明可采用气相色谱法或气相色谱-质谱联用法或高效液相色谱法，分别或同 时测定细辛总挥发油中甲基丁香酚、细辛脂素、芝麻脂素的含量。
[0026] 所述气相色谱条件为DB-5MS石英毛细管柱（30mX0.25mmX0.25iim，i.d.);分 流比100:1，进样量：1 y L ;载气：高纯氦气；流速：lmL ? mirT1 ;溶剂延迟时间：3min，程序升 温：柱温 70°C (6min),以 10°C ? mirT1 升至 100°C (35min)，然后以 10°C ? mirT1 的速度升至 230°C (20min)，进样 口温度 250°C。
[0027] 所述质谱条件为El电子源，载气He ;电子能量70eV，离子源温度230°C，传输线温 度250°C，扫描范围40?450m/z，NIST 2. 0版谱库。
[0028]所述液相色谱条件为 Agilent Zorbax SB-C18 色谱柱（4. 6_X 250_，5 u m);流 动相A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱，洗脱程序为：0?30min，45%?60% B，30?40min， 60%?100% B ;运行时间：40min，平衡时间：10min ;体积流量：1. OmL ? mirT1 ;检测波长： 285nm ;柱温：30°C ;进样量：10y L。
[0029] 本发明具有止咳活性的细辛总挥发油提取物的有效剂量按照人的体重60kg来计 算，为0? 6?2. 3g/人?天。
[0030] 本发明的原理是：
[0031] 药理实验证明，本发明制备的细辛总挥发油提取物具有良好的治疗慢性咳嗽的活 性，可用于预防或治疗各型难治性慢性咳嗽，如咳嗽高敏综合征等。
[0032] 药效学试验结果表明，对于豚鼠急性咳嗽模型，柠檬酸激发后本发明制备的细辛 总挥发油提取物低、中、高剂量组与空白对照组相比可延长动物的咳嗽潜伏期，降低豚鼠的 咳嗽次数；与常规制备（水蒸气蒸馏或其他条件下的超临界C0 2萃取）的细辛挥发油相比 急性镇咳活性相对较弱；而对于慢性咳嗽敏感性增高并伴有气道炎症的豚鼠模型（香烟烟 雾暴露14天），柠檬酸激发后本发明制备的细辛总挥发油低、中、高剂量组与模型组相比可 明显延长动物的咳嗽潜伏期，降低豚鼠的咳嗽次数，同时可以降低豚鼠BALF中的炎症细胞 总数及中性粒细胞的比例，抑制气道炎症，达到或接近可待因的效果；与常规制备的细辛总 挥发油相比，其中中、高剂量组镇咳率均具有显著性差异，显示本发明制备工艺制备的细辛 总挥发油提取物对长期香烟烟雾暴露下的咳嗽高敏豚鼠模型具有更好的镇咳活性。
[0033] 本发明的有益效果是：
[0034] (1)本发明提供了一种治疗慢性咳嗽的药物，拓展了止咳药物的选择领域，也为该

【技术领域】的发展做出了贡献。
[0035] (2)本发明制备的细辛总挥发油提取物与现有的文献报道工艺条件明显不同，挥 发油的组成成分也有较大差异，本发明制备的细辛总挥发油提取物除了具有相当量的常规 挥发油的现有止咳成分（甲基丁香酚等）外，还具有细辛脂素等非挥发性成分。
[0036] (3)在慢性咳嗽应用方面，与细辛常规方法制备的挥发油相比，本发明制备的细辛 总挥发油提取物具有更好的止咳活性。
[0037] (4)本发明提供的提取物制备方法具有萃取速度快、无污染、工艺简单、避免氧化 和热解、产品品质好、无溶剂残留等优点，特别是可以将不同沸点、不同挥发性的油同时萃 取出来，有效成分更完整。
[0038] (5)本发明制备的细辛总挥发油提取物质量控制可以通过气相色谱法、气相色 谱-质谱联用法和高效液相色谱法进行定性定量分析，该方法简单易行可控。

【专利附图】

【附图说明】
[0039] 图1为细辛不同挥发油的HPLC色谱图，其中A:细辛常规挥发油（水蒸气蒸馏所 得）；B :细辛总挥发油（本发明制备所得；1 :甲基丁香酚（methyleugenol)对照品；2 :芝麻 脂素（sesamin)对照品；3 :细辛脂素（asarinin)对照品；4、5 :紫外光谱推测互为同系物）。
[0040] 图2为细辛总挥发油对柠檬酸所致豚鼠咳嗽次数的影响（F士 s , n = 8)，其中 A :空白组；B :溶剂组（5% Tween-80) ;C :磷酸可待因30mg/kg组；D、E、F :细辛总挥发油 50、100、200mg/kg组；G :细辛常规挥发油200mg/kg组；与空白组相比：*p〈0. 05, **p〈0. 01， ***p〈0. 001 ;与溶剂组相比 >p〈0. 05, ▲▲▲?〈0? 001。
[0041]图3为细辛总挥发油对香烟暴露咳嗽高敏豚鼠咳嗽次数的影响（f?土p，n = 8)，其中A :空白组；B :模型组；C :溶剂组（5% Tween-80) ;D :磷酸可待因30mg/kg组；E、 F、G :细辛总挥发油50、100、200mg/kg组；H :细辛常规挥发油200mg/kg组；与模型组相比： 、〈0.01，@p〈0.001 ;与溶剂组相比：AAAp〈0.001 ;与细辛常规挥发油组相比：##p〈0.01， ###p〈0. 001。
[0042] 图4为细辛总挥发油对香烟暴露咳嗽高敏豚鼠肺组织病理代表图，其中A :空白 组；B :模型组；C :溶剂组（5% Tween-80) ;D :磷酸可待因30mg/kg组；E、F、G :细辛总挥发油 50、100、200mg/kg组；H :细辛常规挥发油200mg/kg组。
[0043] 图5为细辛总挥发油对香烟暴露咳嗽高敏豚鼠气管组织病理代表图，其中A :空白 组；B :模型组；C :溶剂组（5% Tween-80) ;D :磷酸可待因30mg/kg组；E、F、G :细辛总挥发油 50、100、200mg/kg组；H :细辛常规挥发油200mg/kg组。

【具体实施方式】
[0044] 下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细描述，但不作为对本发明的限 定。
[0045] 实施例1
[0046] 细辛总挥发油提取物的制备及分析
[0047] 1. 1细辛总挥发油提取物的制备
[0048] 采用超临界C02萃取装置萃取细辛总挥发油提取物，将细辛的根与/或根茎洗净、 晾干、粉碎机粉碎，得细辛粗粉，将细辛粗粉加入萃取釜的装料瓶中，再装入萃取釜，密封； 加热，当萃取釜温度达到50°C时，打开萃取釜阀门，当萃取釜内压力同贮罐压力相等时打 开排气阀排净空气，对系统进行加压，当萃取釜压力达到35Mpa、分离釜I和分离釜II达到 5Mpa时，分离温度达到40°C时，控制C0 2流量为40L/h，开始循环萃取；萃取180min后，从分 离釜出料口接收萃取的细辛总挥发油提取物，得率为2. 5% (mL/g)。
[0049] 1.2细辛总挥发油的分析
[0050] 1. 2. 1液相色谱条件
[0051] Agilent 1260 高效液相色谱仪，Zorbax SB-C18 色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 u m);流 动相A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱，洗脱程序为：0?30min，45%?60% B，30?40min， 60%?100% B ;运行时间：40min，平衡时间：10min ;体积流量：1. OmL ? mirT1 ;检测波长： 285nm ;柱温：30°C ;进样量：10y L。
[0052] 1. 2. 2分析结果
[0053] 分析结果如图1所示，从色谱图不难看出，与常规制备的挥发油（水蒸汽蒸馏制备 所得，SD挥发油，图1 A)相比，本课题组通过优化SFE-C02的萃取条件所制得的细辛总挥发 油（图1 B)，不仅包含了 SD挥发油所有的挥发性成分，还包含了部分非挥发性成分（色谱 峰2为芝麻脂素，色谱峰3细辛脂素，色谱峰4和5通过紫外光谱推测互为同系物）。目前 大多数文献认为SD法与SFE-C0 2法所得挥发油经分析发现所含挥发性成分较相似，且目前 为止还没有见到制备的细辛总挥发油中含有细辛脂素等非挥发性成分的报道，表明本发明 所制备的细辛总挥发油在成分组成上与现有文献报道的挥发油明显不同。
[0054] 实施例2
[0055]细辛总挥发油提取物对柠檬酸所致豚鼠咳嗽的急性镇咳作用
[0056] 2. 1实验材料
[0057] 实验动物：普通级Hartley豚鼠，雌雄各半，体重250_350g，由广东省医学实验动 物中心提供，动物合格证号：SCXK (粤）2008-0002。
[0058]试剂与仪器：一水合朽1檬酸（广州化学试剂厂，批号：20121001_2)，用时配制成 0. 8M的生理盐水溶液；动物无创Buxco肺功能检测系统（美国Buxco公司）；Aeroneb Pro 雾化器（Aerogen(爱尔兰）有限公司）；灌胃针（广东省医学实验动物中心）。
[0059] 2. 2实验方法
[0060] 采用柠檬酸诱导豚鼠急性咳嗽模型进行药效评价。取112只Hartley豚鼠，将其 逐一置于动物无创Buxco肺功能检测系统6 L体描仪内，偏流仪空气流速2. 5L/min，使用 Aeroneb Pro雾化器通入雾化的0. 8M的柠檬酸超纯水溶液气溶胶lmin，雾化的粒子平均直 径2. 5iim，观察5min，监测6min内的咳嗽次数，咳嗽的声音由室内放置的麦克风记录和放 大，声波经Biosystem XA软件进行分析，再经电脑软件处理声音数据记录咳嗽次数，同时由 经过训练的观察者补充观察。挑选咳嗽次数大于10次的豚鼠为合格动物进行试验。
[0061] 取筛选合格的56只Hartley豚鼠，雌雄各半，随机分成7组，空白组给予lmL/100g 的生理盐水，溶剂组给予等体积的相应溶剂（体积百分比浓度5%的Tween-80水溶液），阳 性药组给予等体积的30mg/kg磷酸可待因，给药组给予等体积的细辛总挥发油提取物（实 施例 1 样品 50mg/kg、100mg/kg、
[0062]200mg/kg)、细辛常规挥发油（200mg/kg，水蒸汽蒸馈制备所得），每天1次，连续给 药3天。末次给药后2h在动物无创Buxco肺功能检测系统进行柠檬酸雾化激发试验（雾 化条件同前），雾化激发lmin，诱导豚鼠产生急性咳嗽，观察5min，计算6min内的咳嗽次数 (N)、咳嗽潜伏期，并用公式"镇咳率=(Ne自对照-N给雛）/N空自对照X 100% "计算各给药组的 镇咳率。
[0063] 数据用r±S表示，采用IBM SPSS Statistics 19. 0统计软件对各组参数进行单 因素方差分析。进行组间比较，P〈〇. 05为有显著性差异。
[0064] 2. 3实验结果
[0065] (1)细辛总挥发油提取物对急性咳嗽豚鼠模型咳嗽次数的影响
[0066] 各组动物经过柠檬酸雾化激发后6min内的咳嗽次数及咳嗽抑制率见表1及图2。 由表1及图2可知，与空白组相比，细辛总挥发油提取物低、中、高剂量组均可以降低豚鼠的 咳嗽次数，其中中、高剂量具有显著性差异（P〈〇. 05)，镇咳率分别达到42. 7%和51. 4%。细 辛常规挥发油对于豚鼠的急性镇咳活性比细辛总挥发油好（镇咳率53. 8% )，但二者之间 无显著性差异。
[0067] 以上结果表明，细辛总挥发油提取物具有良好的急性镇咳作用，并具量效关系。
[0068] 表1细辛总挥发油对柠檬酸所致豚鼠咳嗽次数的影响（I±S，n = 8)

【权利要求】
1. 一种细辛总挥发油提取物的提取方法，其特征在于按照以下操作步骤：将细辛的根 与/或根茎洗净、晾干、粉碎，得细辛粗粉；将细辛粗粉置于超临界co2萃取装置的萃取釜 中，密封；对萃取釜、分离釜分别进行加热，当萃取釜温度达到45?70°C时，打开萃取釜阀 门，当萃取釜内压力同贮罐压力相等时打开排气阀排净空气，通过高压泵对系统进行加压， 当萃取釜压力达到30?40 Mpa、分离釜I和分离釜II压力达到5?10 Mpa，分离温度达到 30?50°C时，控制C02流量为35?60L/h，开始循环萃取；萃取60?240min后，从分离釜 出料口接收萃取的细辛总挥发油提取物。
2. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述萃取釜温度设定在50°C ;所述 萃取釜压力达到35 Mpa ;所述分离釜I和分离釜II压力达到5Mpa，温度达到40°C;所述C02流量控制在40L/h ;所述萃取的时间为180min。
3. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述细辛为北细辛、汉城细辛或华细 辛。
4. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述细辛为北细辛。
5. -种由权利要求1?4任一项所述提取方法得到的细辛总挥发油提取物。
6. 根据权利要求5所述的细辛总挥发油提取物在制备治疗慢性咳嗽药物中的用途，其 特征在于：所述细辛总挥发油提取物单独或与其他药物组合制备治疗慢性咳嗽药物。
7. 根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述细辛总挥发油提取物与可用药物载 体制成各种剂型。
8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊 齐IJ、丸剂、滴丸剂、泡腾片、软膏剂、糖浆剂、注射剂、口服液、合剂、酊剂、缓释剂、控释剂或靶 向制剂。
【文档编号】A61K36/264GK104382973SQ201410606542
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月30日 优先权日:2014年10月30日
【发明者】赖克方, 刘晓东, 钟伯年, 钟山, 聂怡初, 黄楚琴 申请人:广州医科大学附属第一医院, 广州呼吸疾病研究所