一种海马断尾采血方法
【专利摘要】本发明涉及一种海马断尾采血方法，包括：(1)配制鱼类血液抗凝剂；(2)取步骤(1)中所述的鱼类血液抗凝剂置于离心管；(3)取鲜活海马，纱布吸干体表水分，解剖剪剪去一段尾柄；(4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步骤(2)中所述的离心管的液面以下；(5)一手持尾柄，另一手持离心管，采集血液1-2min；(6)采血结束后，海马用消毒药浸泡，之后放回海水继续养殖。本发明无需注射器或毛细管，而是直接将血液引流到了含抗凝剂的离心管中，有效地解决了血液易凝固的难点，采血量大幅度提升；除了有效克服常规断尾采血法的缺点外，也很好地保留了其优点，同样具有操作简单、稳定性强、断尾海马可存活等特点。
【专利说明】一种海马断尾采血方法
【技术领域】
[0001]本发明属于采集鱼类血液领域，特别涉及一种海马断尾采血方法。
【背景技术】
[0002]血液是动物体内一种极其重要的组织，具有运输养分、参与体液调节、维持内环境稳态和抵御有害物质的作用。正常血液指标值能反映动物的正常生理状态。鱼类血液与机体的代谢、营养、免疫状况有着密切的关系，当鱼体受到外界因子的刺激而发生生理变化时，必定会在血液指标中反映出来。因而，血液指标被广泛地用来评价鱼类的健康状况、营养状况及对环境的适应状况，是重要的生理学指标。
[0003]海马(Hippocampus)隶属于鱼纲，海龙目，是一种近陆浅海小型鱼类，具很高的药用和观赏价值，又具很高的繁殖进化研宄价值，深受广大医药、科研和水产工作者的青睐。目前关于海马的研宄多数集中于保护生物学、养殖生态学、基础行为学和临床药理学等方面，而关于生理学的研宄，特别是受水中污染物、病原微生物及人为干扰源的影响时生殖生理、免疫生理、内分泌生理，甚至遗传生理的响应，相对甚少。宄其原因，主要是由于海马血液不易米集。
[0004]由于尾动脉注射器采血法普遍适用于尾动脉较为粗大的中大型鱼类，不适合海马等小型鱼类，因此，目前海马采血的方法主要是心脏采血法和断尾采血法，但这两者仍存在很大的弊端。海马的心脏较小，且位于头颈部，即鳃盖后缘，躯干上端最细窄处，加之海马经常处于头部向下的姿势，给围心腔的解剖带来了很大的难度。即使经验丰富的解剖者也经常容易误伤到心脏，导致血液散流至体腔中。海马心脏采血不稳定，一尾海马成功采集血液，另一尾则没有的情况时有发生，给实验数据的分析带来了困扰。此外，心脏采血后的海马已经死亡，无法做到对同一海马的长期实时监测。而断尾采血，虽然操作简单，并且能确保被采血的海马继续存活，但是断尾瞬间血液渗出量有限，大概30-40 μ 1，之后血液会凝固在断尾横截面处，无法再被注射器或毛细管吸取；再往上断尾一次，又能渗出20-30 μ I ;这样连续断尾2-3次后，基本就没血了。断尾法采集的血量有限，并且连续断尾增加了海马死亡的危险，并给海马带来了连续的应激，可能使得第一次断尾和第二次断尾的血液成分发生了变化，不利于研宄的进展。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种海马断尾采血方法，该方法解决了血液易凝固，采血量少，连续断尾刺激的问题。
[0006]本发明的一种海马断尾采血方法，包括:
[0007](I)配制鱼类血液抗凝剂；
[0008](2)取步骤⑴中所述的鱼类血液抗凝剂置于离心管；
[0009](3)取鲜活海马，纱布吸干体表水分，解剖剪剪去一段尾柄；
[0010](4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步骤(2)中所述的离心管的液面以下；
[0011](5) 一手持尾柄，另一手持离心管，采集血液l_2min ；
[0012](6)采血结束后，海马用消毒药浸泡，之后放回海水继续养殖。
[0013]所述步骤(I)中的鱼类血液抗凝剂的组成为:柠檬酸0.48g，柠檬酸钠1.32g，葡萄糖1.47g，蒸饱水10mlo
[0014]所述步骤(2)中的鱼类血液抗凝剂的体积为0.5ml，离心管的体积为1.5ml。
[0015]所述步骤(3)中的解剖剪经75%医用酒精浸泡5min。
[0016]所述步骤(3)中剪去尾柄的长度占尾柄全长的30-40%。
[0017]所述步骤(6)中的消毒药为1%的医用碘伏。
[0018]所述步骤(6)中的浸泡时间为30min。
[0019]有益效果
[0020](I)本发明无需注射器或毛细管，而是直接将血液引流到了含抗凝剂的离心管中，有效地解决了血液易凝固的难点，采血量大幅度提升；
[0021 ] (2)断尾的尾柄一插入到抗凝剂中，尾动脉中的血液直流而下，短时间内就能采集足量的血液，并且血液纯净无其他组织液掺杂；以一条成年的海马(体高1cm)为例，仅需断尾I次，l-2min内就能采集200-300 μ I的血量，是常规连续断尾采血量的3倍以上；
[0022](3)本发明除了有效克服常规断尾采血法的缺点外，也很好地保留了其优点，同样具有操作简单、稳定性强、断尾海马可存活等特点。
【专利附图】
【附图说明】
[0023]图1为本发明方法的示意图。
【具体实施方式】
[0024]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0025]实施例1
[0026](I)配制鱼类血液抗凝剂:取柠檬酸0.48g，柠檬酸钠1.32g，葡萄糖1.47g，蒸馏水100ml，充分溶解后置于4°C保存。
[0027](2)用移液器取0.5ml抗凝剂于1.5ml离心管中。
[0028](3)从养殖缸中取雌雄灰海马(Hippocampus erectus)各一尾，用纱布吸干体表水分，测量体高和湿重后，用75%医用酒精消毒过的解剖剪剪去一段尾柄，剪去尾柄的长度占尾柄全长的1/3。
[0029](4)剪尾后，立即将断尾的海马的剩余尾柄插入到含0.5ml抗凝剂的离心管中，尾柄位于抗凝剂液面以下。
[0030](5) 一手持离心管，另一手固定海马尾柄使其不脱离液面，采血持续2min。
[0031](6)采血结束后，断尾海马用1%的医用碘伏消毒30min，之后放回海水继续养殖。
[0032]离心管内液体的总体积减去0.5ml抗凝剂，即为海马采血量。采血结果显示:一尾体高为11.5cm，湿重为5.68g的雄性灰海马采血量为320 μ I，而一尾体高为10.5cm，湿重为5.23g的雌性灰海马采血量为280 μ 1，足够满足常规分子生物学、细胞生物学等研宄所需的血液量。
[0033]实施例2
[0034](I)配制鱼类血液抗凝剂:取柠檬酸0.48g，柠檬酸钠1.32g，葡萄糖1.47g，蒸馏水100ml，充分溶解后置于4°C保存。
[0035](2)用移液器取0.5ml抗凝剂于1.5ml离心管中。
[0036](3)从养殖缸中取2尾三斑海马(Hippocampus trimaculatus)，用纱布吸干体表水分，测量体高和湿重后，用75%医用酒精消毒过的解剖剪剪去一段尾柄，剪去尾柄的长度占尾柄全长的1/3。
[0037](4)剪尾后，立即将断尾的海马的剩余尾柄插入到含0.5ml抗凝剂的离心管中，尾柄位于抗凝剂液面以下。
[0038](5) 一手持离心管，另一手固定海马尾柄使其不脱离液面，采血持续2min。
[0039](6)采血结束后，断尾海马用I %的医用碘伏消毒30min，之后放回海水继续养殖。
[0040]离心管内液体的总体积减去0.5ml抗凝剂，即为海马采血量。采血结果显示:一尾体高为8.7cm，湿重为2.77g的三斑海马采血量为190 μ 1，而另一尾体高为8.4cm，湿重为2.40g的三斑海马采血量为170 μ 1，足够满足常规分子生物学、细胞生物学等研宄所需的血液量。
【权利要求】
1.一种海马断尾采血方法，包括: (1)配制鱼类血液抗凝剂； (2)取步骤(1)中所述的鱼类血液抗凝剂置于离心管； (3)取鲜活海马，纱布吸干体表水分，解剖剪剪去一段尾柄； (4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步骤(2)中所述的离心管的液面以下； (5)一手持尾柄，另一手持离心管，采集血液l_2min ； (6)采血结束后，海马用消毒药浸泡，之后放回海水继续养殖。
2.根据权利要求1所述的一种海马断尾采血方法，其特征在于:所述步骤(1)中的鱼类血液抗凝剂的组成为:柠檬酸0.48g，柠檬酸钠1.32g，葡萄糖1.47g，蒸馏水100ml。
3.根据权利要求1所述的一种海马断尾采血方法，其特征在于:所述步骤(2)中的鱼类血液抗凝剂的体积为0.5ml，离心管的体积为1.5ml。
4.根据权利要求1所述的一种海马断尾采血方法，其特征在于:所述步骤(3)中的解剖剪经75%医用酒精浸泡5min。
5.根据权利要求1所述的一种海马断尾采血方法，其特征在于:所述步骤(3)中剪去尾柄的长度占尾柄全长的30-40%。
6.根据权利要求1所述的一种海马断尾采血方法，其特征在于:所述步骤(6)中的消毒药为1%的医用碘伏。
7.根据权利要求1所述的一种海马断尾采血方法，其特征在于:所述步骤(6)中的浸泡时间为30min。
【文档编号】A61B5/153GK104434137SQ201410641836
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月14日 优先权日:2014年11月14日
【发明者】林听听, 张东, 席寅峰, 刘鑫 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所