技术领域本发明涉及包含锌螯合化合物的金属-β-内酰胺酶(MBL)抑制剂和它们在改善β-内酰胺抗生素抗生成MBL的耐细菌的有效性中的用途。抑制剂包含锌螯合剂，其共价地结合至对细菌生物中的结构具有亲和性的分子部分，该抑制剂还可与β-内酰胺抗生素组合使用，用于治疗宿主生物(hostorganism)的细菌感染。宿主生物可以是任何具有由靶生物不期望侵入或感染的活体。因此，宿主生物可以是任何活体，虽然优选地它会是包含真核细胞、更优选是温血动物(例如哺乳动物)的那种。靶生物可以是任何原核生物，优选是细菌。传染性疾病是全世界导致死亡的主要原因，并对每年多于1300万的死亡人数负有责任，其中所有儿童死亡数的近三分之二为小于5岁。人们严重关切缺乏有效治疗的新的和再发传染性疾病(世界卫生组织报告1999、2012和2014)。抗菌剂耐药性正在逐步上升，并影响非常大范围的人类疾病，包括结核病、霍乱、疟疾和AIDS。尤其关注的是对常规抗生素发展出多药耐药性的人类病原体的数目，据估计耐药性的负担将超越例如宫颈癌(deKrakerMEA等人，PLoSMed.2011；e1001104)的负担。引入现有抗生素的新的更强的衍生物仅提供临时的解决方案，因为现有耐药机制迅速适应容纳新衍生物(TheuretzbacherU.Curr.Opin.Pharmacol.2011:11:433-438)。虽然抗革兰氏阳性菌构成了巨大的威胁，但常见的革兰氏阴性病原体(例如大肠杆菌)的多药耐药性(MDR)菌株的出现受到格外的关注。目前普遍使用术语泛耐药性或极端耐药性描述临床重要的隔离体：铜绿假单胞细菌(Pseudomonasaeruginosa)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)和肠细菌科菌(Enterobacteriaceae)，它们几乎对所有的抗生素耐药(Patel等人，Front.Microbiol.2013:4:48)。不幸地是，有效抗革兰氏阴性菌的抗菌剂即使存在也仅有几种，它们处于将致力于这种迫切的需求1期临床试验或开始1期临床试验(ButlerMS.等人，J.Antibiotics2013:66:571-591)。就分布和临床相关性而言，或许最重要的抗生素耐药机制是β-内酰胺酶(BushK.等人，Annu.Rev.Microbiol.2011:65:455-478)。β-内酰胺酶是水解β-内酰胺抗生素的酶，其危及β-内酰胺的功效，而β-内酰胺是70多年来我们抗菌化学治疗最大的组和中流砥柱。显然，对于直接抗这类将恢复它们底物活性的酶的抑制剂存在需求，即需要便宜、无毒和通常有效的抗生素。丝氨酸β-内酰胺酶抑制剂(克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦)在延长β-内酰胺抗生素的治疗寿命上已具有非凡的成就，并且也被全世界临床微生物实验室采用作为诊断工具。反之，尚没有可用于金属-β-内酰胺酶的临床抑制剂(MBL；Drawz等人，Antimicrob.AgentsChemother.2014:58:1835-1846)。后者现已成为显示全球性传染性的β-内酰胺酶的临床最重要的家族成员之一。MBL属于仅在细菌中发现的一大组蛋白，像青霉素结合蛋白(PBP)具有与β-内酰胺相互作用的能力。如SauvageE.等人在FEMSMicrobiolRev32(2008):234-258中综述的，PBP和结合β-内酰胺的酶的实例为MBL、丝氨酸β-内酰胺酶-类蛋白(LACTB)、D,D-转移酶、D-Ala(D,D)-羰肽酶、D-丙氨酰基-D-丙氨酸二肽酶VanA、VanX、VanY等等。仅在细菌生物中发现该类蛋白。对PBP具有亲和性的化合物的实例为β-内酰胺抗生素。β-内酰胺一直是抗生素化学治疗的历史锚点，其包含青霉素、头孢霉素、单环β-内酰胺(monobactams)和碳青霉烯(BushK.等人，Annu.Rev.Microbiol.2011:65:455-478)。β-内酰胺抗生素的作用机制是它们模拟细菌使用的交联细菌壁中肽聚糖的小二肽D-Ala-D-Ala，共价地摧毁使用D-Ala-D-Ala作为其的底物的酶。β-内酰胺酶是最普遍且临床上最重要的耐药机制，其通过水解使β-内酰胺失活。它们根据序列标准(Ambler类A、B、C和D)分类，并在结构上被分为两个超级家族(superfamilies)：丝氨酸β-内酰胺酶(类A、C和D)和MBL(类B)。与以活性位点中的丝氨酸部分为特征的丝氨酸β-内酰胺酶相比，MBL需要二价阳离子，通常是锌作为酶活性的金属辅助因子(PalzkillT.Ann.N.Y.,Acad.Sci.2013:91-404)。MBL作为β-内酰胺酶临床最重要的家族成员之一出现(Patel等人，Front.Microbiol.2013:4:48；Walsh等人，Int.J.Antimicrob.Agents2010:S8-S14)是由于以下原因：(i)获得性MBL基因与可动遗传因子相关，该因子常携带其他作为基因簇(与IS和ISCR因子相关)的耐药基因和/或整合子列阵，导致产生多药耐药的隔离体。世界上的许多地方现在都能在临床重要的病原体(例如铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和肠杆菌科菌)中普遍观察到这样的因子。因此，这些高流动性的耐药基因簇的适应性和传染性严重地危害了现有的治疗方案。(ii)MBL的水解谱是所有β-内酰胺酶中最宽的之一，其包含除单环β-内酰胺(氨曲南)以外几乎所有的β-内酰胺酶。因此，具有MBL的临床分离体除单环β-内酰胺外，无例外地对所有β-内酰胺抗生素耐药。然而，几乎所有的MBL阳性菌都携带额外的β-内酰胺酶，其会水解氨曲南，因此并不推荐这种治疗。目前临床上最重要的MBL(IMP-、VIM-和NDM-组)在各种革兰氏阴性物种中广泛传播。尤其是，VIM-和NDM-酶已作为最主要的MBL出现。NDM前所未有的全球性传染突出了问题的严重性。从2008年第一次报道开始，已在澳大利亚、非洲、北美洲、亚洲和许多欧洲国家识别到NDM(JohnsonAP.等人，J.Med.Microbiol.2013:62:499-513)。令人担忧地，在许多革兰氏阴性物种中和在环境中发现了NDM(WalshTR.等人，LancetInfect.Dis.2011:11:355-362)。临床上可提供类别A丝氨酸β-内酰胺酶的成功的抑制剂，但是缺乏抗MBL的抑制活性(DrawzSM等人，Clin.Microbiol.Rev.2010:23:160-201)。受范例奥格门汀(克拉维酸-丝氨酸β-内酰胺酶的自杀底物-和阿莫西林)的商业成功的启发，几个研究组已关注相似的方法以开发抑制剂，但是尚没有将功效与抗多MBL靶点活性组合的分子达到临床试验阶段(DrawzSM.等人.Antimicrob.AgentsChemother.2014)。对于临床最具威胁的三个MBL(IMP、NDM和VIM组)，报道最多的是对IMP-1的抑制剂，同时也发现到几个对VIM-2和NDM的抑制剂。对于NDM，真菌天然产物曲霉明A被认定为MBL抑制剂，其在小鼠模型中显示出体内活性(KingAM.等人，Nature2014:510:503-506)。然而，需要相对高剂量的曲霉明A来逆转碳氢霉烯耐药性。其他的治疗选择(Martinez,FutureMed.Chem.2012)包括使用掺有单环β-内酰胺的三-β-内酰胺治疗；然而MIC并不令人印象深刻，它们的体内活性被细菌接种体严重地削弱(Page等人，Antimicrob.AgentsChemother2011)。因此，对于MBL抑制剂存在强烈的临床需求。大多数IMP-1的有效抑制剂含有硫醇-羧酸酯或二元羧酸酯药效团，而在VIM-2抑制剂中，硫代羧酸酯是最主要的。从这些结构部分中发现唯一同时以IMP-1和VIM-2为靶点的抑制剂。然而，近期表征的马来酸衍生物缺乏广谱抑制性，即对临床重要的VIM和NDM-组酶显示出差的抑制性。然而，已报道了一些结构上非常不同的抑制剂，它们选择性地以VIM-2为靶点而非IMP-1(Weide等人，Med.Chem.Lett.2010)。几项研究已评估了大量全细胞检测中抑制剂的有效性，更不用说动物模型中的体内有效性。大多数抑制剂严重依赖于单齿锌键合的基团，例如复合了酶键合的锌离子的硫醇基基团或羧酸基团。有趣地是，被成功用于其他含有锌的金属蛋白(如异羟肟酸)抑制剂设计中的典型双齿锌键合基团除一个例外，全都是没有报道过的。可用结构的对比显示所有抑制剂在双核锌MBL中用杂原子(例如S或O)取代桥联羟基。临床重要的细菌是本领域所熟知的，见例如维基百科http://en.wikipedia.org/wiki/Listofclinicallyimportantbacteria。尤其是，由于铜绿假单胞菌显著的多药抗药性，它导致严重的问题。通常作为β-内酰胺酶抑制剂使用的所谓的清除剂(scavenger)(例如舒巴坦、克拉维酸和他唑巴坦)对于具有丝氨酸作为活性中心的丝氨酸-β-内酰胺酶有效，但这些药物对MBL显示出很小的抑制作用或没有抑制。因此，对于新MBL抑制剂的需求变得越来越重要。重要的β-内酰胺抗生素是青霉素、头孢菌素和碳青霉烯类。已报道许多化合物具有MBL抑制活性。在WO98/117639、WO97/30027、WO98/40056、WO98/39311和WO97/110225中，描述了一类作为MBL抑制剂的β-硫代丙酰基-氨基酸衍生物。其他可作为MBL抑制剂的化合物类别为硫酯(BioI.Pharm.Bull.1997,20,1136；FEMSMicrobiologyLetters1997,157,171；Antimicrob.AgentsChemother.1997,41,135；Chem.Commun.1998,1609；Biochem.1.1998,331,703；WO00/076962)和琥珀酸衍生物(WO01/030148和WO01/030149)。现有技术(例如WO2011/63394、WO2004/71425、WO2006/109069、WO2001/60349、US6,410,570、US2003/0225155、WO2006/43153和WO2006/43153)中已详细描述了抗病毒或细菌的金属螯合剂的使用。本领域普通技术人员将理解现有技术中描述的能够螯合金属的各种物质，并且对于不同的目的将选择适当的螯合剂。实例为包含氨基基团和羟基基团变体的螯合剂，例如1,10-邻二氮杂菲、氯碘羟喹、1,2-二甲基-3-羟基-4-吡啶酮(DMHP)、1,2-二乙基-3-羟基-4-吡啶酮(DEHP)、地拉罗司；包含各种氨基基团、羟基基团和羧酸基团变体的螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二胺-N,N'-二乙酸基-N,N'-二-B-丙酸(EDPA)、二乙撑三胺五乙酸(DTPA)、反式1,2-环己烷-二胺-Ν,Ν,Ν',Ν'-四乙酸(CyDTA)、肌肽、二羟乙基甘氨酸(DHEG)、1,3-二氨基-2-羟基丙烷-N,N,N',N'-四乙酸(DTPA-OH)、乙二胺-N,N'-二乙酸(EDDA)、乙二胺-N,N'-二丙酸(EDDP)、N-羟基-乙二胺-N,N',N'-三乙酸(EDTA-OH)、N,N'-双(2-羟基苄基)乙二胺-N,N'-二乙酸(HBED)、六亚甲基-1,6-二胺四乙酸(HDTA)、羟乙基亚氨基二乙酸(HIDA)、亚氨基二乙酸(IDA)、甲基EDTA、次氮基三乙酸(NTA)、次氮基三丙酸(NTP)、三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)、乙二胺-二(O-羟基苯乙酸)(EDDHA)、乙二醇双(2-氨基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸(EGTA)、反式-1,2-环己烷二胺四乙酸(CDTA)、N-(2-羟乙基)乙二胺三乙酸(HEDTA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(HEIDA)、柠檬酸、7,19,30-三氧杂-1,4,10,13,16,22,27,33-八氮杂双环并[11,11,11]三十五烷(O-Bistren)、青霉胺；螯合剂还包含硫或者磷，例如：二乙基二硫代氨基甲酸酯(DEDTC)、2,3-二巯基-1-丙磺酸(DMPS)、乙基麦芽酚(EM)、4-(6-甲氧基-8-喹哪啶基-氨基磺酰基)苯甲酸钾盐(TFLZn)、双硫腙、N-(6-甲氧基-8-喹啉基)-顺-甲苯磺酰胺(TSQ)、乙二胺-N,N'-双(甲基膦)酸(EDDPO)、乙二胺四(亚甲基膦)酸(EDTPO)、次氮基三亚甲基膦酸(NTPO)、二巯基琥珀酸(DMSA)、去铁胺、二巯基丙醇、二巯基琥珀酸和依替膦酸。然而，本领域(例如Smith,R.M.；Martell,A.E.NISTCriticallySelectedStabilityConstantsofMetalComplexes,Version2.0；U.S.DepartmentofCommerce:Gaithersburg,MD,1995中)已知这些螯合剂是非选择性螯合剂，其具有相对低的区分不同金属离子的能力。因此，他们可以同时地具有键合基本金属离子的能力，例如锌、铁、铜、镍、钴、锰和其他自然界(例如细菌和哺乳动物)中大多数酶中基本的金属离子。但当在宿主生物中治疗由靶生物造成的特异性感染时(例如，当理想的是只影响特定的微生物，同时对非治疗靶的宿主生物或其他物种的毒理效应是弱的时)，这种选择性的缺失可导致不期望的毒性和其他生物效应。细菌细胞正常生存必须的关键因素是锌的体内平衡。锌是人体中第二丰富的过渡金属，它对6000多种酶和蛋白质的催化功能和结构稳定性负责(Bertini等人，JournalofInorganicBiochemistry111(2012)150-156)。对细胞中游离的有效锌的操作已显示影响大范围的疾病和病状(Que等人，J.Chem.Rev.(Washington,DC,U.S.)2008,108,1517-1549；Peterson等人，Mol.Biol.2009,388,144-158；BarKalifa等人，Eur.J.Pharmacol.2009,618,15-2；Maret等人，Mol.Med.2007,13,371-375)。生物组织中游离锌浓度依据锌缓冲容量而变化。在PC12、HeLa和HT-29细胞系，以及在体外的心肌细胞和神经元的原代培养基中，已将游离锌的浓度确定为大约5nM(Bozym等人，Exp.Biol.Med.2010,235,741-750)。锌是软金属，自然中主要发现的是闪锌矿(salpherite)或亚硫酸锌，其中Zn的氧化态为+2(Emsley,J.\Zinc\.Nature'sBuildingBlocks:AnA-ZGuidetotheElements.；OxfordUniversityPress:NewYork,2001)。为了选择性地和高效地螯合锌，需要使用软碱配体。已报道亲脂性锌螯合剂：N,N,N',N'-四(2-吡啶基甲基)乙二胺(TPEN)显示出许多有趣的生物活性，这是由于它的锌螯合性及它的亲脂特性，使其具有细胞膜渗透能力(Donadelli等人，J.Cell.Biochem.2008:104,202-212)。在TPEN分子中，锌键合能力基于吡啶甲基胺(picoylamine)单元中两个或更多个单元的键合(见方案1)。方案1其他采用硫基配体的技术与其它内源性金属离子相比，也对锌产生高选择性(Zhang等人，Tetrahedron2013,69,15-21)。细菌中的锌检测通过不同家族的调节剂进行，其包括SmtB/ArsR、MerR、TetR、MarR、和Fur族(Napolitano等人，JournalofBacteriology2012,第2426-2436页)。MBL的X-射线结构指示出在活性位点紧密结合的锌离子，通常结构在催化位点显示出两个Zn原子，一个紧密结合另一个更松弛结合(PalzkillT.Ann.N.Y.Acad.Sci.2013:91-404)。亚类Bl是最大的MBL家族，其包含大多数的酶，例如IMP、VIM和NDM。Bl酶的特征在于保守的Zn(II)结合主旨(bindingmotif)，在Bl酶的活性位点有两个Zn2+，其中Zn1由三个His残基结合，Zn2由一个His、一个Cys和一个Asp结合。此外，在两个锌离子间有一个桥联水或羟基配体，其被认为是水解底物(例如β-内酰胺抗生素)的亲核试剂。锌离子对于酶的活性是必需的。在一些实施方案中，MBL抑制剂含有Zn(II)结合基团，其可与中心金属离子强烈地相互作用。在现有技术中(如WO2006/117660、WO2001/60349或US6,410,570中)已将锌螯合剂描述为多种疾病的同时抑制剂。如WO2009/140215中还认为锌螯合剂是抗菌剂，如WO2011/63394和WO2009/155088中认为其是生物膜形成抑制剂，或如WO2004/71425和WO2006/43153中认为其是抗病毒剂。现有技术已知通过锌螯合剂抑制耐药机制中涉及的有吸引力的细菌的锌依赖靶。三个实例为紧密调控的细菌锌吸收系统Zur(Ellison等人在PLOSONE8(2013),e75389中)、生物膜(Conrady等人，PNAS(2008)105(49),19456-19461)和MRSA中的肽酶HmrA。所有这些靶均由现有技术的锌螯合剂例如TPEN、EDTA或邻二氮杂菲抑制。然而，这些试剂对于细菌生物不具有特异的亲和性，并且对哺乳动物有毒。另一个重要的锌-依赖机器实例为细菌利用外排泵(Nikaido等人，FEMSMicrobiologyReviews36(2012)340-363)，其适应几乎所有作为底物的现代抗生素，将它们排出细菌细胞。另一个实例为锌-依赖的脱乙酰酶LpxC(Liang等人，J.Med.Chem.2013,56,6954-6966)。另一个实例是高度锌-依赖的细菌核糖体功能(Graham等人，J.Biol.Chem.284(2009)第18377-18389页)。后者在70S核糖体单元上使用8个锌原子。然而，在这些说明中，没有指导如何在靶物种中获得锌螯合治疗的选择性效应，同时以足够低的水平影响宿主生物，以避免涉及例如毒性问题。因此，对于在宿主生物中具有低毒性同时还对靶生物具有选择性效应的锌螯合剂存在药物需求。现已惊人地发现在新化合物的合成库中，先导候选(leadcandidate)抑制剂影响含有MBL的耐药菌株。先导化合物对于一些最临床相关的含有一些最重要MBL的菌株显示出纳摩尔范围内的EC50值。先导候选物含有在现有技术未描述过的构建体(construct)中的三个中心结构要素(见方案2)：方案2部分(moiety)A是任何亲脂的选择Zn(II)的螯合基团。术语“螯合”涉及希腊语“chelo”，表示蟹爪通过至少两个接触点结合物体。因此，化学中的螯合剂可按分子部分定义：(C)mRc(RL)(II)其中m是从2-10的整数；每个基团C均是可相同或不同的官能团，其具有路易斯碱性，并具有至少一个能够向路易斯酸M给电子的杂原子，该杂原子选自N、S、O或P，本发明的路易斯酸是锌原子；Rc是连接基团C的单元，其可含有多达50个原子，并且其携带官能团RL；并且RL构成本文定义的构建体A-L-B中对于连接体L的共价连接。部分L是共价连接A和B的连接体或键。连接体L可任选地具有支撑Zn(II)螯合基团的配体基团。部分B可以是与细菌中发现的生物结构相互作用的基团，例如这可对MBL、DD-转移酶或其他未在人类生物中发现的酶具有特异性，因此对人类具有更低的毒性或其可促进跨细胞膜运输。更具体地，B可以是化学部分，其对原核细胞(例如细菌)或病毒或寄生虫中发现的生物结构具有亲和性。同时，部分B对包含真核细胞的生物体中(例如哺乳动物中，尤其是较高级的哺乳动物如人类)发现的生物结构具有足够低的亲和性，以免引起非期望的效果，例如毒性迹象。因此，在一个实施方案中，部分B可以是在细菌中发现但未在宿主生物中发现的分子部分。这样的部分的非限制性实例为仅在细菌中发现的肽聚糖。这些构成两个交替氨基糖N-乙酰基-葡糖胺(GlcNAc)和N-乙酰基胞壁酸(MurNAc)的线性链。每个MurNAc结合至短(4-至5-残基)氨基酸链。这些氨基酸链由未在哺乳动物生物中发现的结构单元组成，其中通常氨基酸官能性(functionality)为R构型，对应包含α-氨基酸官能性的分子中的D构型。本发明所使用的部分B中可存在以下结构单元的非限制性列表：L-赖氨酸、L-丙氨酸、D-或L-谷氨酸、D-谷氨酰胺、内消旋-二氨基庚二酸、D-2,3-二氨基丙酸、D-丙氨酸或其它具有D构型的氨基酸及其任何衍生物(例如，酯衍生物)。D-氨基酸不存在于蛋白质中，也未在真核生物中找到。因此，在一个实施方案中，部分B可以是包含上文列出结构单元的任意组合的构建体或模拟这样的构建体的分子。化合物模拟包含具有D构型氨基酸的三肽的一个实例是曲霉明，现有技术(例如，Mikami等人，AgriculturalandBiologicalChemistry(1983),47(11):2693-5)中描述了该实例。优选的是具有D-构型的氨基酸的组合，例如D-谷氨酸、D-谷氨酰胺、内消旋-二氨基庚二酸和D-丙氨酸的组合。其它可使用的氨基酸的组合是D-丙氨酸的组合，例如结构单元D-丙氨酸-D-丙氨酸本身或其衍生物例如甘氨酰-L-α-氨基-ε-庚二酰基(pimelyl)-D-丙氨酸-D-丙氨酸。在任意的这些结构中，氨基酸结构单元中的羧酸部分可以由等电子官能团取代，比如硼酸、-B(OH)2、磷酸、-P(＝O)(OH)2或硫酸、-SO3H。也可将羧酸或任意这些等电子官能团酯化。部分B也可以是任意酶的底物，所述酶在构建细菌壁或细菌膜的过程中使用这些结构单元的构建物作为底物，例如使用D-Ala-D-Ala的D,D-转移酶。在另一个实施方案中，部分B可包含β-内酰胺结构单元，其对仅在细菌中发现的一大组蛋白(意指青霉素结合蛋白(PBP))具有亲和性。如Sauvage等人在FEMSMicrobiolRev32(2008)234-258中综述的，PBP的实例为MBL、丝氨酸β-内酰胺酶类蛋白(LACTB)、D,D-转移酶、D-Ala(D,D)-羧肽酶、D-丙氨酰-D-丙氨酸二肽酶VanA、VanX、VanY等。这类蛋白的其他成员可促进跨细菌膜的运输。这类蛋白仅在细菌生物中发现而未在哺乳动物生物中发现，并且其是根据本发明的构建物中的分子部分B的一类合适的靶体。对PBP具有亲和性的化合物的实例为β-内酰胺抗生素。因此，青霉素、头孢菌素、碳青霉烯和单环β-内酰胺的衍生物是可用作本发明的部分B的分子部分。这些类别代表了市场上大量的抗生素试剂，它们在用于本发明的构建物A-L-B的合成过程中，许多结构部分是可商购的。如上所述，用作部分B单元的DD-转移酶底物的实例为D-Ala-D-Ala，其可作为结构单元用于细菌壁的合成。抗菌剂是对在细菌中发现而未在人体生物中发现的生物结构具有选择性相互作用的分子，例如青霉素模拟的D-Ala-D-Ala，因此充当DD-转移酶的拮抗剂。此外，β-内酰胺抗生素是MBL的底物。因此，部分B可以是细菌生物结构的任何底物。部分B的非限制性实例包括：青霉素、头孢菌素、碳青霉烯、克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦、单环β-内酰胺(例如氨曲南)、硫代丙酰基-氨基酸衍生物、硫酯、琥珀酸衍生物和马来酸衍生物。锌结合单元A包含至少一种对锌具有选择性的亲脂的金属螯合功能。分子部分A优选的但非限制性的实例为包含两个2-吡啶基-甲基单元(指二甲基吡啶(见方案3：A、B))的部分，其中相邻的给体原子D协助稳定螯合锌的二吡啶基甲基单元(方案3：A-C)。部分A也可包含多于两个2-吡啶基-甲基单元，例如新的TPEN衍生物。现有技术中，已在许多生物应用中广泛地使用如上所定义的TPEN。TPEN具有四个2-吡啶基-甲基单元，使得锌螯合能力更强。方案3D中描绘了共价结合至连接体L的TPEN衍生物，其是现有技术中未知的，并且是本发明的一部分。方案3E示出适合的螯合部分A的其他实例。方案3D＝给电子原子、L＝本文所定义的连接体；S1＝H或烷基基团、S2＝H、低级烷氧基基团或羟基基团；E＝CH或N。为了与对于MBL发挥正常功能所必需的必要锌原子具有强相互作用，优选的锌螯合功能需要有尽可能低的与锌的解离常数Kd。解离常数Kd是金属复合物形成常数Kf的倒数，也就是Kd＝1/Kf。在本发明中，通常Kd值优选低于1×10-5M，甚至更优选低于1×10-8M，还更优选低于20×10-10M或低于1×10-10M。通常，方案3A和B中的二吡啶基甲基单元具有的和锌的Kd处于1-10×10-10M的范围(等人，Tetrahedron69(2013)8645-8654)。亲脂的，细胞渗透的锌螯合剂TPEN具有的和锌的解离常数(Kd)为0.26×10-15M(Makhov等人CellDeathDiffer.2008,15,1745)。本发明也可使用邻-羟基苯亚甲基-酰肼部分(方案3E)，现有技术中也报道了该部分具有锌螯合性能，其Kd值处于1-30×10-10M的范围(Putt等人，Nat.Chem.Biol.2006,2,543；Charkoudian,J.Am.Chem.Soc.2006,128,12424；Hsu等人，ACSComb.Sci.2012,14,44)。在Ganta等人，Bioorganic&MedicinalChemistryLetters19(2009)1618-1622中报道了一组化合物，其在作为对MBL有亲和性基团的相同分子部分中，具有作为锌螯合部分的异羟肟酸基团。然而，根据Smith,R.M.；Martell,A.E.NISTCriticallySelectedStabilityConstantsofMetalComplexes,2.0版；U.S.DepartmentofCommerce:Gaithersburg,MD,1995报道，异羟肟酸和锌的复合解离常数处于10-4的范围，其比二吡啶甲基胺示出的解离常数高五个数量级。此外，异羟肟酸基团是非选择性螯合基团，也显示出结合Fe2+/Fe2+和许多其他的金属离子，使得异羟肟酸配体不太特异，更易与人类生物相互作用导致更高的人类毒性。基于2-吡啶基-甲基单元的配体对锌和镉显示出相当高的选择性(Xu等人，J.Am.Chem.Soc.2010,132,601)，后者并非生物系统内天然的金属离子。现有技术中也提出锌螯合试剂作为MBL抑制剂，在WO2012/088283中，提出四氢噻唑和类似化合物与β内酰胺一起作为MBL抑制剂。在此没有提及在锌螯合剂中使用二甲基吡啶胺基团。然而，这些试剂也具有和锌的复合解离常数，其显著地高于纳摩尔范围。同样，WO2012/088383中没有发现在MBL分析中低于微摩尔范围的IC50值。提供以下方案4-6中每一个的目的只是为了说明和描述部分发明，不应将其作为对本发明的限制的限定。因此，例示了迄今为止合成的化合物库的成员，但其不限于方案4-6中的那些。方案4方案5方案6所有示例的分子具有的和锌的解离常数Kd均小于1×10-10M。一些库成员的一般制备方法例示于方案7中：方案7按方案8中所表明的制备本发明的一个优选的化合物OAA4033(实施例24)。方案8化合物OAA4033(实施例24)是本发明的核心实施例，示意性地并一般表示为A-L-B。锌螯合剂是二甲基吡啶胺部分(A)，连接体是羰基氨基-苯基基团，载体是D-Ala-D-Ala肽。可替代选择地看，锌螯合剂可以被认为是二甲基吡啶胺甲基-羰基氨基部分(A)，连接体为苯基-乙基基团和载体(B)为D-Ala-D-Ala肽。如上所述，所有β-内酰胺抗生素的机理均是模拟细菌细胞壁合成中由细菌酶DD-转移酶使用的D-Ala-D-Ala结构单元。通常地，具有立体化学L的氨基酸于人类生物体中发现。因此，二肽细菌底物D-Ala-D-Ala具有对细菌酶DD-转移酶的亲和性。本发明的两个特别优选的实施例，AB773和AB777，由本发明中定义为载体(B)的商业化合物克拉维酸和阿莫西林制备(见方案9)。方案9迄今未作为MBL抑制剂进行试验的新的化学实体，现显示出有前景的EC50值，例如对于VIM-2与对照抑制剂相比。相同的抑制剂在酶和含有VIM-2的大肠杆菌细菌全细胞分析中均显示出活性。最具活性抑制剂相对于抗其他MBL(例如NDM-1和GIM-1)和在含有GIM-1的大肠杆菌细菌全细胞分析中显示出更胜一筹(μM以下)的活性。抑制剂在与β-内酰胺抗生素美罗培南的细菌协同分析中显示出有前景的表现，在该分析中抑制剂与美罗培南抗具有不同MBL(VIM-2、VIM-1和NDM-1)的不同临床铜绿假单胞杆菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌分离体，这为这些抑制剂具有被用作β-内酰胺-β-内酰胺酶抑制剂联合治疗的潜质提供了证据。几种库候选化合物显示出与美罗培南的协同活性。我们继续将锌结合片段(片段A)与对在细菌生物中发现而未在人类生物体中发现的结构单元具有亲和性的分子部分(片段B)结合。所得化合物(OAA4033，实施例24)在迄今为止所有的体外试验中均显示出有前景的表现，并在与美罗培南的协同分析中表现良好。这些结果指出了概念上新一类抗菌剂的方向。根据本发明的其他化合物包含方案10的结构：方案10其中L是本文所定义的连接体，V是本文所定义的对应于部分B的载体。大环内脂是一类活性来源于存在的大环内酯环的抗生素。它们通过结合至细菌的核糖体，抑制tRNA的核糖体转运以及抑制核糖体易位(translocation)来抑制细菌蛋白的生物合成。如上所述，细菌核糖体是高度锌依赖细菌蛋白的实例。现有技术中(例如Liu等人在Bioorganic&MedicinalChemistryLetters19(2009)4079-4083.中)全面描述了大环内脂化学。因此大环内脂和它们的衍生物是载体B的另一个实例，其可存在于本文所述的构造体中。例如，可使用方案11中描绘的羰酰基-咪唑(CDI)活化的克拉霉素衍生物作为起始材料制备用于本发明的许多化合物。方案11另一类用作本发明的载体B的分子包含氯霉素及其衍生物。氯霉素是抑菌的，其通过结合至细菌核糖体抑制蛋白质合成实现。也将理解，可以用药学可接受的盐的形式提供本文所述的任何化合物。可用无机酸或碱或有机酸或碱将根据本发明的化合物转化成其盐，特别是其药学可接受的盐。可用于该目的的酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磺酸、甲磺酸、磷酸、富马酸、琥珀酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、马来酸、乙酸、三氟乙酸和抗坏血酸。可能适合于该目的的碱包括碱金属氢氧化物和碱土金属氢氧化物(例如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化铯)、氨和有机胺(例如二乙胺、三乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、环己胺和二环己胺)。用于形成盐的步骤是本领域中常规的。本文还提供了包含根据本发明的化合物和至少一种药学可接受的稀释剂或载体的药物组合物。优选在给药前配制包含MBL抑制剂的组合物。这样的组合物中的活性成分可按重量计构成制剂的0.05％-99％。适宜的剂量可取决于待使用的调节剂、待治疗的精确病状、患者的年龄和体重等等，也可由有经验的执业医师根据本领域熟知的原则常规确定。举例而言，代表性的剂量可包括1-200或1-100mg/kg，例如5-70、5-50或10-70或10-50mg/kg。“药学可接受的”意指成分必须与组合物的其他成分配伍且对于受体是生理上可接受的。可根据本领域所熟知的和在文献中广泛描述的技术和步骤配制根据本发明的药物组合物，其可包含任何已知的载体、稀释剂或赋形剂。当然也可根据本领域所熟知的技术包含入其他的成分，例如稳定剂、防腐剂等等。制剂可以处于的形式为无菌水溶液和/或药学活性成分的悬浮液、气雾剂、软膏等。制剂也可处于缓释形式，例如微颗粒、纳米颗粒、乳剂、纳米悬浮液、脂质颗粒或油。此外，抗菌剂制剂的一个重要方面是处于膜、敷料、贴片(folio)的形式，在它们的表面覆盖有MBL抑制剂；这些也可被用于本发明。可通过医药领域已知的任意合适的方法给药，包括口服给药、肠胃外给药、局部给药、皮下给药或通过吸入给药。可以单剂量通过定间隔摄取施用MBL抑制剂或包含MBL抑制剂的制剂，例如每天一次或两次，每48小时一次或每72小时一次。缓释制剂可以更长的间隔给药，例如每月或每三个月1-2次。待施用的活性化合物的精确剂量、每日或每月剂量的数目和疗程的长度将取决于许多因素，包括患者的年龄和他们的体重。可根据文献中所熟知的技术和步骤配制组合物，其可包含任何已知的载体、稀释剂或赋形剂。例如，可用于本发明的方便地适合于肠胃外给药的组合物/制剂可包含无菌水溶液和/或药学活性成分的悬浮液，一般通过使用氯化钠、甘油、葡萄糖、甘露醇和山梨醇等使其与受体的血液等渗。此外，组合物可含有任意数目的佐剂，例如缓冲剂、防腐剂、分散剂、促进快速作用的制剂或延长作用持续时间的制剂。适合于口服给药的组合物/制剂可处于无菌纯化的原料粉末(stockpowder)形式，优选用一层包膜或可含任意数目层或佐剂(例如缓冲剂、防腐剂、促进延长或快速释放的制剂)的包膜覆盖。用于本发明的适于局部(localortopical)给药的组合物/制剂可包含与已知的合适成分(例如石蜡、凡士林、十六醇、甘油等)混合的MBL抑制剂，以形成合适的软膏或乳膏。在以下非限制性实施例中将更详细地描述本发明。一般方法所有使用的试剂和溶剂均是商业级的，使用前未进行进一步的纯化。在BrukerAVII-400MHz、DPX-300MHz或DPX-200MHz谱仪上记录NMR(1H、13C)谱。耦合常数(J)以赫兹报告，化学位移以相对于CDCl3(对于1H为7.26ppm，对于13C为77.16ppm)和[D6]DMSO(对于1H为2.50ppm，对于13C为39.52ppm)每百万分之一(ppm)报告。IR谱由Perkin-ElmerSpectrumBX系列FT-IR光谱仪得到，并且仅报告了选定的峰。所有结果未经校正。实施例1-N,N’-二甲基吡啶基-N-丙炔胺(propagylamine)的合成将N,N’-二甲基吡啶胺(5.0mL，22.9mmol，1.0当量)用THF(55.7mL，700mmol，25当量)稀释，随后加入K2CO3(15.40g，111.4mmol，4.0当量)和溴丙炔(4.34mL80％，39.0mmol，1.4当量)。将混合物在强力搅拌下加热至回流，并保持三小时。然后将深红色浆液冷却至室温，使用玻璃过滤器过滤，用2×20mL二氯甲烷洗涤滤液，将合并的有机相在减压下浓缩至锈红色油。使用柱色谱纯化粗产物，用于二氯甲烷中的甲醇(1-5％)从氧化铝柱洗脱产品，产率5.55g(86％)。1H和13CNMR与报道的结果一致。实施例2-合成三唑的一般方法将于2.5mLH2O中的七水合硫酸铜(250mg，1.0mmol，1.0当量)和于2.5mLH2O中的(+)抗坏血酸钠(396mg，2.0mmol，2.0当量)同时加入炔烃(1.0mmol，1.0当量)于2.5mLtBuOH的搅拌溶液中。然后加入叠氮溶液(4.0mL25％于tBuOMe，1.0mmol，1.0当量)，将溶液在室温下搅拌16个小时。然后向搅拌的溶液中加入EDTA(293mg，1.0mmol，1.0当量)，将混合物用50mLH2O稀释前先保持60分钟，而后用1MNaOH将混合物的pH调节至>10。然后用50mLEtOAc和50mL二氯甲烷萃取浆液。将合并的有机相于K2CO3上干燥，并在减压下浓缩以得到深红色油/半固体。通过使用以1-10％的于二氯甲烷中的甲醇洗脱中性Al2O3柱的柱层析纯化粗产物。实施例3-1-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N,N-双(吡啶-2-基甲基)甲胺(OAA2168)的制备产率：188mg(49％)。1HNMR(200MHz，氘代氯仿)δ8.55-8.45(m，2H)，7.70-7.48(m，4H)，7.46(s，1H)，7.25-7.06(m，4H)，6.89(m，2H)，5.44(s，2H)，3.85(s，2H)，3.81(s，4H)，3.80(s，3H)。HRMSe/zC22H23N6O(M+1)的计算值：387.1928，测量值：387.1927。实施例4-1-(1-(6-甲氧基萘-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N,N-双(吡啶-2基甲基)甲胺(OAA4067)的制备产率：286mg(86％)。1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ8.57(d，J＝4.8Hz，2H)，8.16(s，1H)，8.09(s，1H)，7.93-7.76(m，4H)，7.68(t，J＝7.6Hz，2H)，7.62(d，J＝7.8Hz，2H)，7.25-7.12(m，4H)，4.01(s，2H)，3.99-3.87(m，7H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ158.6，149.3，136.7，134.4，129.9，128.7，128.6，123.6，122.3，120.5，119.8，118.6，115.1，106.0，59.9，55.6，48.9。HRMSe/zC26H25N6O(M+H)的计算值：437.2084，测量值：437.2086。实施例5-1-(吡啶-2-基)-N-(吡啶-2-基甲基)-N-((1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)甲胺(OAA4069)的制备产率：261mg(78％)。1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ8.56(d，J＝4.7Hz，2H)，8.01(s，1H)，7.66(d，J＝7.6Hz，2H)，7.58(d，J＝7.8Hz，2H)，7.23-7.08(m，2H)，6.94(s，2H)，3.98(s，2H)，3.94(s，6H)，3.91(s，4H)，3.89(s，3H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ159.3，154.0，149.3，145.2，138.4，136.6，133.2，123.6，122.2，121.6，98.7，61.2，59.9，56.6，48.7。HRMSe/zC24H27N6O3(M+H)的计算值：447.2139，测量值：447.2143。实施例6-1-(1-(4-硝基苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N,N-双(吡啶-2-基甲基)甲胺(OAA4071)的制备产率：176mg(42％)。1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ8.55(d，J＝4.8Hz，2H)，8.21(d，J＝8.4Hz，2H)，7.90(s，1H)，7.69(t，J＝7.6Hz，2H)，7.58(d，J＝7.8Hz，2H)，7.41(d，J＝8.3Hz，2H)，7.24–7.12(m，2H)，5.64(s，2H)，4.01(s，2H)，3.95(s，4H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ148.97，141.92，137.19，128.74，124.42，124.10，122.71，59.01，53.22，48.73。HRMSe/zC22H22N7O2(M+H)的计算值：416.1829，测量值：416.1825。实施例7-1-(吡啶-2-基)-N-(吡啶-2-基甲基)-N-((1-(3,4,5-三甲氧基苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)甲胺(OAA4073)的制备产率：138mg(30％)。1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ8.52(d，J＝4.7Hz，2H)，7.69-7.59(m，3H)，7.54(d，J＝7.8Hz，2H)，7.22-7.01(m，2H)，6.47(s，2H)，5.43(s，2H)，3.91(s，2H)，3.90-3.81(m，7H)，3.80(s，6H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ153.8，152.3，149.2，139.4，137.6，136.7，134.8，130.5，126.3，123.6，123.3，123.1，122.3，111.8，105.3，103.3，61.0，59.5，56.3，54.4，48.8。HRMSe/zC25H29N6O3(M+H)的计算值：461.2296，测量值：461.2296。实施例8-1-(1-(4-甲氧基-3-硝基苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N,N-双(吡啶-2-基甲基)甲胺(OAA4075)的制备产率：191mg(43％)。1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ8.52(d，J＝4.7Hz，2H)，7.81(s，1H)，7.64(t，J＝7.6Hz，2H)，7.59(s，1H)，7.53(d，J＝7.8Hz，2H)，7.45(d，J＝8.6Hz，1H)，7.19-7.10(m，2H)，7.07(d，J＝8.7Hz，1H)，5.49(s，2H)，3.96(s，3H)，3.88(s，2H)，3.82(s，4H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ159.2，153.3，149.3，145.3，139.7，136.6，133.9，127.4，125.4，123.5，123.1，122.2，114.5，59.7，56.9，52.7，48.7。HRMSe/zC23H24N7O3(M+H)的计算值：446.1935，测量值446.1940。实施例9-1-(1-(3-溴-4-甲氧基苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N,N-双(吡啶-2-基甲基)甲胺(OAA4077)的制备产率：228mg(48％)。HRMSe/zC23H24N6OBr(M+H)的计算值：479.1189，测量值：479.1196。实施例10-1-(1-(二苯并[b,d]呋喃-4-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N,N-双(吡啶-2-基甲基)甲胺(OAA4079)的制备产率：231mg(52％)。1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ8.69(s，1H)，8.57(d，J＝4.8Hz，2H)，8.16(d，J＝8.0Hz，1H)，8.01(t，J＝8.1Hz，2H)，7.76-7.62(m，5H)，7.61-7.39(m，4H)，7.16(t，J＝5.6Hz，2H)，4.08(s，2H)，3.99(s，4H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ159.3，156.4，149.3，145.7，145.1，136.7，128.3，126.8，124.2，123.9，123.7，123.5，122.7，122.2，121.2，120.6，119.9，115.1，112.2，59.9，49.0。HRMSe/zC27H23N6O(M+H)的计算值：447.1928，测量值：447.1931。实施例11-1-(1-(2,4-二甲氧基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N,N-双(吡啶-2-基甲基)甲胺(OAA4081)的制备产率：112mg(27％)。1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ8.53(d，J＝4.7Hz，2H)，8.01(s，1H)，7.64(dq，J＝11.2，6.0，4.3Hz，5H)，7.14(t，J＝5.9Hz，2H)，6.60(d，J＝5.2Hz，2H)，3.97(s，2H)，3.90(s，4H)，3.87(s，3H)，3.82(s，3H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ161.3，159.6，152.8，149.2，143.7，136.6，126.7，125.3，123.4，122.1，120.4，104.9，99.8，59.8，56.1，55.8，49.0。HRMSe/zC23H25N6O2(M+H)的计算值：417.2034，测量值：417.2033。实施例12-1-(吡啶-2-基)-N-(吡啶-2-基甲基)-N-((1-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)甲胺(OAA4085)的制备产率：208mg(49％)。1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ8.54(d，J＝4.7Hz，2H)，7.95(s，1H)，7.86(d，J＝7.7Hz，1H)，7.74(t，J＝7.6Hz，1H)，7.67(t，J＝8.1Hz，3H)，7.62-7.50(m，3H)，7.21-7.07(m，2H)，3.98(s，2H)，3.90(s，4H)。HRMSe/zC22H20N6F3(M+H)的计算值：425.1696，测量值425.1698。实施例13-1-(1-(4-甲氧基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N,N-双(吡啶-2-基甲基)甲胺(OAA2172)的制备产率：167mg(42％)。1HNMR(200MHz，氘代氯仿)δ8.54(d，J＝4.5Hz，2H)，7.96(s，1H)，7.74-7.51(m，6H)，7.16(dd，J＝8.5，3.3Hz，2H)，7.07-6.93(m，2H)，3.95(s，2H)，3.89(s，3H)，3.86(s，3H)。13CNMR(75MHz，CDCl3)δ160.1，159.5，149.4，145.1，136.9，131.0，123.8，122.5，121.8，115.4，115.1，60.1，56.0，49.0。HRMSe/zC22H23N6O(M+1)的计算值：387.1928，测量值387.1927。实施例14-叔丁基(4-氨基苯乙基)氨基甲酸酯的制备将4-(2-氨乙基)苯胺(5.00克，36.7mmol，1.0当量)溶解于50mLEtOAc，并置于水浴中。向快速搅拌的溶液中逐滴加入于50mLEtOAc中的boc酸酐(8.25克，37.8mmol，1.03当量)混合物。在加入酸酐后，混合物变成白色浆液，其在4小时后变为淡黄色澄清溶液。将反应保持过夜。在减压下将粗混合物浓缩至淡黄色油，用10mL热EtOAc稀释，并与50mL热庚烷混合。将混合物置于冰浴中以促进沉淀。过滤白色晶体，干燥得到7.11克产物(82％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.82(d，J＝7.8Hz，2H)，6.76(s，1H)，6.47(d，J＝7.8Hz，2H)，4.82(s，2H)，3.02(q，J＝6.4Hz，2H)，2.47(m，2H)，1.37(s，9H)。实施例15-叔丁基(4-(2-氯乙酰氨基)苯乙基)氨基甲酸酯的制备将根据实施例14制备的叔丁基(4-氨基苯乙基)氨基甲酸酯(7.50克，31.7mmol，1.0当量)溶解于CH2Cl2(500mL)，并于冰浴中冷却至0℃。将DMAP(6.23g，51.0mmol，1.6当量)一次性加入。在将氯乙酰氯(3.00ml，37.7mmol，1.2当量)于100mlCH2Cl2中的溶液于20分钟逐滴加入至搅拌的混合物中之前，先使该混合物保持10分钟。然后将混合物在减压下浓缩之前，先于0℃保持30分钟，在室温下保持3小时。将黏着的红色残余物溶解于CH2Cl2(250mL)中，并以0.5M的醋酸水溶液(2×200mL)、0.5M的NaHCO3(1×100mL)水溶液洗涤，并于无水K2CO3上干燥。通过(4cm×5cm长的)硅胶塞(silicagelplug)使用75％的于庚烷中的乙酸乙酯洗脱，将溶液过滤。在减压下移除挥发物，产出7.46g标题化合物(23.8mmol，75％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.21(s，1H)，7.49(d，J＝8.4Hz，2H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，6.84(t，J＝5.6Hz，1H)，4.23(s，2H)，3.18-2.99(m，2H)，2.74-2.56(m，2H)，1.36(s，9H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ164.4，155.5，136.5，134.9，128.9，119.4，77.4，43.5，41.5，34.9，28.2。实施例16-叔丁基(4-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基甲酸酯的制备将实施例15中制备的α-氯酰胺(7.44g，23.8mmol，1.0当量)和KI(2.37g，14.3mmol，0.6当量)溶解于500mLMeCN中，然后向搅拌的混合物中加入DPA(5.2mL，28.9mmol，1.2当量)。然后加入DIPEA(40.5mL，0.233mol，9.7当量)，将混合物加热至回流并保持14小时。在冷却至室温后，将混合物在减压下浓缩，并使用10％的于CH2Cl2中的MeOH洗脱使混合物通过氧化铝塞纯化。在减压下移除挥发性物质，得到定量产率的标题化合物。材料不经进一步纯化使用。1HNMR(400MHz，氘代氯仿)δ10.86(s，1H)，8.61(d，J＝4.1Hz，2H)，7.70(d，J＝8.4Hz，2H)，7.61(td，J＝7.7，1.7Hz，2H)，7.31-7.24(m，2H)，7.22-7.11(m，4H)，4.54(s，1H)，3.93(s，4H)，3.45(s，2H)，3.42-3.25(m，2H)，2.76(t，J＝6.8Hz，2H)，1.42(s，9H)。13CNMR(75MHz，CDCl3)δ169.8，158.2，155.9，149.5，137.1，136.7，134.4，129.2，123.3，122.6，112.0，79.2，60.4，58.8，41.9，35.7，28.5。实施例17-N-(4-(2-氨乙基)苯基)-2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰胺的制备将实施例16中制备的boc-保护的胺(200mg，0.42mmol)溶解于20mLDCM中，并在冰水浴中冷却至0℃。然后在5分钟的过程中将三氟乙酸(2mL)加入至搅拌的溶液中。反应在升温至室温前先于0℃保持15分钟。在将反应于减压下浓缩至棕色油之前，先将它在室温保持额外的两个小时。将粗材料溶解于30mL0.5M的NaHCO3中，并用3×20mLEtOAc萃取。将合并的有机相汇集，并用50mL0.5MNaHCO3洗涤，然后于K2CO3上干燥，过滤并在减压下浓缩，得到155mg为淡棕色油的标题化合物(98％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.53(s，1H)，8.64-8.41(m，2H)，7.75(td，J＝7.6，1.8Hz，2H)，7.58(d，J＝8.4Hz，2H)，7.45(d，J＝7.8Hz，2H)，7.27(ddd，J＝7.5，4.9，1.0Hz，2H)，7.15(d，J＝8.5Hz，2H)，3.90(s，4H)，3.41(s，2H)，2.73(t，J＝7.1Hz，2H)，2.58(t，J＝7.1Hz，2H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ169.0，158.4，149.0，136.7，136.6，135.3，128.9，123.0，122.4，119.0，59.4，57.8，43.7。HRMSe/zC22H25N5O的计算值：375.2059，测量值：376.2133(M+H)。实施例18-4-((4-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基)-4-氧代丁酸的制备将实施例17中制备的胺(100mg，0,27mmol)溶解于10mL丙酮中，并在冰水浴中冷却至0℃。然后向搅拌的溶液中一次性加入琥珀酰酐(27mg，0.27mmol)。移除冰水浴，使反应在室温下搅拌过夜。然后将粗混合物在减压下浓缩，并悬浮于乙醚(10mL)中。振荡混合物，过滤出浅色沉淀以得到36mg为淡黄色固体的标题化合物(28％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.52(s，1H)，8.58(d，J＝4.6Hz，2H)，7.94(s，1H)，7.76(t，J＝7.5Hz，2H)，7.59(d，J＝8.2Hz，2H)，7.45(d，J＝7.7Hz，2H)，7.32-7.21(m，2H)，7.16(d，J＝8.1Hz，2H)，3.91(s，4H)，3.55-3.09(m，7H)，2.74-2.58(m，2H)，2.40(t，J＝6.9Hz，2H)，2.28(t，J＝6.9Hz，2H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ173.84，170.87，169.02，158.40，149.01，136.81，136.67，134.40，128.89，123.03，122.39，119.01，59.42，57.80，40.32，34.61，30.15，29.36。HRMSe/zC26H29N5O4的计算值：475.2220，测量值：476.2293(M+H)。实施例19-甲基(4-((4-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基)-4-氧亚基丁酰基)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸酯的制备将实施例18中制备的游离酸(0.250g，0.526mmol)溶解于DMF(2mL)中并在冰水浴中冷却至0℃。然后在向搅拌的混合物中加入NMM(120μL，1.09mmol，2.1当量)之前，先加入D-丙氨酰基-D-丙氨酸甲酯盐酸盐(116mg，0.551mmol，1.05当量)和HATU(211mg，0.555mmol，1.06当量)。在将混合物缓慢加热至室温前先于冰水浴中保持30分钟。然后将混合物在室温保持18个小时。然后将混合物用50mL0.5MK2CO3稀释，并用5×10mL的EtOAc萃取。将合并的有机相合并，用新鲜的0.5MK2CO3(4×25mL)洗涤，并于K2CO3干燥，过滤并于减压下浓缩。这得到0.159mg为浅色半固体的标题化合物(0.252mmol，48％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.53(s，1H)，8.63-8.49(m，2H)，8.25(d，J＝7.1Hz，1H)，8.05(d，J＝7.8Hz，1H)，7.92(t，J＝5.6Hz，1H)，7.80-7.70(m，2H)，7.63-7.55(m，2H)，7.52-7.38(m，2H)，7.33-7.23(m，2H)，7.19-7.06(m，2H)，4.36-4.15(m，2H)，3.90(s，4H)，3.59(s，3H)，3.41(s，2H)，3.26-3.13(m，2H)，2.69-2.58(m，2H)，2.29(d，J＝10.0Hz，4H)，1.29(d，J＝7.3Hz，3H)，1.19(d，J＝7.1Hz，3H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ172.9，172.3，171.3，171.1，169.0，158.4，149.0，136.8，136.7，134.4，128.9，123.0，122.4，119.0，59.4，57.8，51.8，47.6，47.5，40.20，38.2，34.6，30.6，17.9，16.8。e/zC33H41N7O6的计算值：631，测量值632.3(M+H)。实施例20-甲基(4-((4-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基)-4-氧亚基丁酰基)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸(alanoicacid)的制备将实施例19中制备的酯(50mg，79μmol)溶解于THF(1mL)中并用冰水浴和水(150μL)和0.5M氢氧化锂水溶液(160μL，80μmol)冷却至0℃。将反应搅拌2.5h直至TLC(5％于CH2Cl2中的MeOH，氧化铝)指示酯耗尽。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于乙醇，过滤以移除盐，并在减压下移除溶剂。这得到22mg为淡绿色固体的标题化合物(36μmol，50％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.56(s，1H)，8.65-8.40(m，2H)，8.23(d，J＝7.7Hz，1H)，8.02(t，J＝5.5Hz，1H)，7.81-7.67(m，2H)，7.63-7.55(m，2H)，7.51(d，J＝6.0Hz，1H)，7.48-7.43(m，2H)，7.33-7.23(m，2H)，7.20-7.10(m，2H)，4.15(p，J＝7.2Hz，1H)，3.91(s，4H)，3.65(p，J＝6.7Hz，1H)，3.42(s，2H)，3.22(q，J＝6.6Hz，2H)，2.67(d，J＝13.0Hz，2H)，2.40-2.23(m，4H)，1.22-1.11(m，6H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ173.7，171.2，171.1，170.7，169.1，158.4，149.0，136.8，136.7，134.4，128.9，123.0，122.4，119.0，59.4，57.8，49.9，48.5，38.2，34.6，31.0，30.9，19.2，18.0。e/zC32H39N7O6的计算值：617，测量值：618.3(M+H)。实施例21-甲基(4-((4-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基)-4-氧亚基丁酰基)-D-丙氨酸酯的制备将实施例18中制备的游离酸(1.013g，2.13mmol)溶解于DMF(10mL)中并在冰水浴中冷却至0℃。然后在向搅拌的混合物中加入NMM(500μL，4.55mmol，2.14当量)之前，先加入D-丙氨酰基甲酯盐酸盐(315mg，2.26mmol，1.06当量)和HATU(850mg，2.24mmol，1.05当量)。在将混合物缓慢加热至室温前先于冰水浴中保持30分钟。然后将混合物在室温保持18个小时。然后将混合物用150mL0.5MK2CO3稀释，并用5×50mL的EtOAc萃取。将合并的有机相合并，用新鲜的0.5MK2CO3(100mL)、卤水(2×100mL)洗涤，并于K2CO3上干燥，过滤并于减压下浓缩。这得到1.00g为浅色半固体的标题化合物(1.78mmol，84％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.53(s，1H)，8.62-8.53(m，2H)，8.26(d，J＝7.0Hz，1H)，7.88(t，J＝5.7Hz，1H)，7.80-7.67(m，2H)，7.59(d，J＝8.1Hz，2H)，7.50-7.37(m，2H)，7.35-7.21(m，2H)，7.19-7.10(m，2H)，4.24(p，J＝7.2Hz，1H)，3.90(s，4H)，3.60(s，3H)，3.41(s，2H)，3.28-3.16(m，2H)，2.65(t，J＝7.4Hz，2H)，2.43-2.16(m，4H)，1.25(d，J＝7.3Hz，3H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ173.2，171.3，171.0，169.0，158.4，149.0，136.8，136.7，134.4，128.9，123.0，122.4，119.0，59.4，57.8，51.7，47.5，38.2，34.6，30.6，30.4，16.9.e/zC30H36N6O5的计算值：560，测量值561.3(M+H)。实施例22-甲基(4-((4-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基)-4-氧亚基丁酰基)-D-丙氨酸的制备将实施例21中制备的酯(0.857g,1.53mmol)溶解于THF(15mL)中并用冰水浴冷却至0℃，加入0.5M氢氧化锂水溶液(3.4mL，1.7mmol)。将反应搅拌2.5h直至TLC(5％于CH2Cl2中的MeOH，氧化铝)指示起始材料耗尽。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于少量乙醇(3mL)中，用过量的丙酮(40mL)沉淀。通过过滤收集所得沉淀，并再溶解于新鲜的乙醇中。过滤后为了移除盐，在减压下移除溶剂。这得到0.437g为淡绿色固体的标题化合物(0.799mmol，52％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.55(s，1H)，8.63-8.50(m，2H)，7.98(t，J＝5.6Hz，1H)，7.79-7.71(m，2H)，7.59(d，J＝8.4Hz，2H)，7.44(d，J＝7.7Hz，2H)，7.40(d，J＝6.6Hz，1H)，7.32-7.23(m，2H)，7.15(d，J＝8.4Hz，2H)，4.39(bs，1H)，3.90(s，4H)，3.80(p，J＝6.8Hz，1H)，3.41(s，2H)，3.29-3.14(m，2H)，2.64(t，J＝7.5Hz，2H)，2.36-2.20(m，4H)，1.15(d，J＝6.8Hz，3H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ174.3，171.3，169.9，169.1，158.4，149.0，136.8，136.7，134.4，128.9，123.0，122.4，119.0，59.4，57.8，50.0，40.3，34.6，31.3，31.2，19.3。e/zC29H36N6O5的计算值：546，测量值：547.3(M+H)。实施例23-叔丁基((R)-1-(((R)-1-((4-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-苯乙基)氨基)-1-亚氧基丙基-2-基)氨基)-1-氧亚基丙基-2-基)氨基甲酸酯的制备将实施例16中制备的游离胺(2.88g，7.67mmol)溶解于DMF(30mL)中并在冰水浴中冷却至0℃。然后在向搅拌的混合物中加入NMM(1.70mL，15.5mmol，2.02当量)之前，先加入N-Boc-D-丙氨酰基-D-丙氨酸(2.00g，7.68mmol，1.0当量)和HBTU(2.92g，7.70mmol，1.0当量)。在将混合物缓慢加热至室温前先于冰水浴中保持15分钟。然后将混合物在室温保持4.5个小时。然后将混合物用200mL0.5MK2CO3稀释，并用4×100mL的EtOAc萃取。将合并的有机层合并，用新鲜的0.5MK2CO3(2×150mL)、卤水(2×100mL)洗涤，并于Na2SO4上干燥，过滤并于减压下浓缩。将棕色油状残余物溶解于CH2Cl2，并通过在中性氧化铝上使用1-2％的于CH2Cl2中的MeOH洗脱的柱色谱纯化。这得到3.66g为棕色半固体的标题化合物(5.92mmol，77％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.53(s，1H)，8.57(ddd，J＝4.9，1.8，0.9Hz，2H)，7.90(d，J＝5.6Hz，1H)，7.82-7.67(m，3H)，7.64-7.53(m，2H)，7.50-7.37(m，2H)，7.34-7.23(m，2H)，7.19-7.10(m，2H)，6.98(d，J＝7.3Hz，1H)，4.29-4.11(m，1H)，3.90(s，5H)，3.41(s，2H)，3.30-3.13(m，2H)，2.68-2.58(m，2H)，1.37(s，9H)，1.15(d，J＝7.0Hz，6H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ171.8，169.0，158.4，149.0，136.9，136.7，134.2，128.9，123.0，122.4，119.0，78.1，59.4，57.8，54.9，49.8，48.0，40.2，34.4，28.1，17.9。实施例24-(R)-1-(((R)-1-((4-(2-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基)-1-亚氧基丙基-2-基)氨基)-1-亚氧基丙基-2-氯化铵(aminiumchloride)(OAA4033)的制备将实施例23中制备的boc-保护的胺(3.491g，5.65mmol)溶解于26mLCH2Cl2中，并在冰水浴中冷却至0℃。然后在5分钟的过程中将于CH2Cl2(6.5mL)中的三氟乙酸(6.5mL，84.9mmol，15.0当量)加入至搅拌的溶液中。反应在升温至室温前先于0℃保持15分钟。在向反应快速加入另外的于CH2Cl2(1mL)中的TFA(1mL)前，先将其于室温下保持额外3小时。搅拌1h后，TLC(5％于CH2Cl2中的MeOH，氧化铝)指示氨基甲酸酯的耗尽，在减压下移除挥发物。将所得棕色油溶解于CH2Cl2(50mL)中，并用于Et2O(9mL)中的2MHCl处理。在30min搅拌后混合物析出油，加入额外的乙醚(100mL)，产生淡棕色固体沉淀和部分滴定的油。通过过滤收集淡色细粉，用过量的新鲜醚洗涤，在真空下干燥，得到1.25g标题化合物。用乙醚洗涤剩余的黏着油，然后溶解于热乙醇中，转移至烧瓶，并在减压下移除溶剂以得到另外的1.35g淡棕色固体。总计分离出2.60g为淡棕色固体的标题化合物(4.69mmol，83％)。1HNMR(300MHz，D2O)δ8.77(d，J＝5.4Hz，2H)，8.53(td，J＝8.0，1.4Hz，2H)，8.07(d，J＝8.0Hz，2H)，7.96(t，J＝6.8Hz，2H)，7.27(s，4H)，4.51(s，4H)，4.30-3.99(m，2H)，3.78(s，2H)，3.65-3.32(m，2H)，2.84(hept，J＝6.7Hz，2H)，1.51(d，J＝7.1Hz，3H)，1.27(d，J＝7.2Hz，3H)。13CNMR(75MHz，D2O)δ174.8，170.9，170.8，152.7，147.3，142.0，137.1，134.7，129.9，127.5，126.7，122.1，58.3，57.1，50.3，49.2，40.7，34.4，17.1，16.9。HRMSe/zC28H36N7O3的计算值：518.2880，测量值：518.2879。实施例25-(R)-2-乙酰氨基-N-((R)-1-((4-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基)-1-亚氧基丙基-2-基)丙酰胺的制备将实施例23中制备的boc-保护的胺(173mg，0.280mmol)溶解于2.5mLCH2Cl2中，并在冰水浴中冷却至0℃。然后在5分钟的过程中将三氟乙酸(330μL，4.30mmol，15.4当量)加入至搅拌的溶液中。反应在升温至室温前先于0℃保持15分钟，然后搅拌3h，然后在减压下移除蒸发物将所得棕色油溶解于CH2Cl2(5mL)，加入Ac2O(60μL，0.634mmol，2.25当量)，将反应搅拌18个小时。用0.5MK2CO3(5mL)淬灭反应。搅拌15min后，分离层，并用3×10mLCH2Cl2萃取水层。用新鲜的0.5MK2CO3(10mL)洗涤合并的有机层，于Na2SO4上干燥，过滤并在减压下移除溶剂，以得到78mg粗材料，其可进一步通过柱色谱纯化以得到标题化合物。实施例26-叔丁基(4-(2-(二苄基氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基甲酸酯的制备将叔丁基(4-(2-氯乙酰氨基)苯乙基)氨基甲酸酯(1.002g，3.20mmol，1.0当量)和KI(0.597g，3.60mmol，1.25当量)溶解于350mLMeCN中，向搅拌的混合物中加入二苄基胺(0.74mL，3.85mmol，1.2当量)。然后加入DIPEA(5.5mL，31.6mmol，9.87当量)，并将混合物加热至回流，保持17个小时。在冷却至室温后，将混合物在减压下浓缩，并使用柱色谱在二氧化硅上纯化。使用20-50％于庚烷中的乙酸乙酯洗脱产物，得到1030mg(68％)的标题化合物。1HNMR(400MHz，DMSO)δ9.54(s，1H)，7.48(d，J＝8.1Hz，2H)，7.42(d，J＝7.0Hz，4H)，7.34(q，J＝7.2Hz，4H)，7.30-7.19(m，2H)，7.11(d，J＝8.2Hz，2H)，6.83(t，J＝5.7Hz，1H)，3.76(s，4H)，3.21(s，2H)，3.09(q，J＝8.0，5.6Hz，2H)，2.63(t，J＝8.4，6.4Hz，2H)，1.37(s，9H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ168.68(s)，155.45(s)，140.80(s)，138.50(s)，136.55(s)，134.35(s)，128.74(d，J＝3.8Hz)，128.27(s)，127.95(d，J＝19.4Hz)，127.06(s)，119.28(s)，77.43(s)，57.52(s)，56.09(s)，40.20(s)，34.87(s)，28.23(s)。实施例27-N-(4-(2-氨乙基)苯基)-2-(二苄基胺)乙酰胺的制备将实施例26中制备的boc-保护的胺(550mg，1.16mmol，1当量)溶解于25mLDCM中，并在冰水浴中冷却至0℃。然后在5分钟的过程中将三氟乙酸(6mL，78.35mmol，67.5当量)逐滴加入至搅拌的溶液中。将反应在减压下浓缩得到浅棕色油之前，先于室温下保持一小时。将粗材料溶解于25mL乙酸乙酯中，并用50mL0.5MK2CO3萃取。用3×20mL乙酸乙酯萃取水相。将合并的有机相汇集，并用25mL0.5MK2CO3洗涤，于K2CO3上干燥，过滤并在减压下浓缩以得到404mg为淡浅色油的标题化合物(93％)。1HNMR(400MHz，DMSO)δ9.52(s，1H)，7.48-7.44(m，2H)，7.41(d，J＝7.0Hz，4H)，7.34(t，J＝7.5Hz，4H)，7.29-7.21(m，2H)，7.15-7.07(m，2H)，3.75(s，4H)，3.20(s，2H)，2.72(t，J＝7.2Hz，2H)，2.57(t，J＝7.2Hz，2H)，1.34(s，2H)。实施例28-叔丁基((R)-1-(((R)-1-((4-(2-(二苄基氨基)乙酰氨基)苯乙基)氨基)-1-亚氧基丙基-2-基)氨基)-1-亚氧基丙基-2-基)氨基甲酸酯将在实施例27中制备的N-(4-(2-氨乙基)苯基)-2-(二苄基氨基)乙酰胺(0.404g，1.017mmol，1当量)溶解于4mLDMF中。将D-丙氨酰基-D-丙氨酸甲酯盐酸盐(0.285g，1.095mmol，1当量)和HBTU(0.413g，1.090mmol，1当量)加入至搅拌的溶液中，并在冰水浴中冷却至0℃。加入NMM(0.115mL，1.044mmol，1当量)，将溶液在冰水浴中保持30分钟，然后在室温保持3小时。用200mL水稀释混合物，并用3×50mL乙酸乙酯萃取。将合并的有机相汇集，并用25mL0.5MNaHCO3洗涤，然后于K2CO3上干燥，过滤并在减压下浓缩得到498mg(80％)。1HNMR(400MHz，DMSO)δ9.57(s，1H)，7.91(t，J＝5.7Hz，1H)，7.78(d，J＝7.5Hz，1H)，7.51-7.30(m，11H)，7.30-7.21(m，2H)，7.15-7.08(m，2H)，7.01(d，J＝7.4Hz，1H)，4.19(p，J＝7.1Hz，1H)，3.93(p，J＝7.3Hz，1H)，3.75(s，4H)，3.24(m，4H)，2.64(t，J＝7.1Hz，2H)，1.38(s，9H)，1.15(dd，J＝7.0，2.0Hz，6H)。实施例29-(R)-2-(氯-l5-氮烷基)-N-((R)-1-((4-(2-(二苄基氯-l5-氮烷基)乙酰氨基)苯乙基)氨基)-1-氧亚基丙基-2-基)丙酰胺((R)-2-(chloro-l5-azanyl)-N-((R)-1-((4-(2-(dibenzylchloro-l5-azanyl)acetamido)phenethyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)propanamide)将实施例28中制备的boc-胺(0.254g，0.413mmol，1当量)溶解于25mLDCM中，并在冰水浴中冷却至0℃。将TFA(2mL，26.12mmol，63当量)溶解于25mLDCM中，并在5分钟的过程中将其逐滴加入至搅拌的溶液中。将反应在室温保持1小时。将溶液在减压下浓缩。将物质重新溶解于5mL干DCM中，加入1mL于乙醚中的2MHCl。产生沉淀。过滤沉淀，用乙醚洗涤，并在减压下干燥。1HNMR(400MHz，氧化氘)δ7.46(dd，J＝6.8，2.9Hz，4H)，7.42-7.29(m，6H)，7.17-7.01(m，2H)，6.97-6.70(m，2H)，4.50(s，3H)，4.06(q，J＝7.2Hz，1H)，3.93(q，J＝7.0Hz，1H)，3.87(s，2H)，3.43(m，1H)，3.22(m，1H)，2.78–2.42(m，1H)，1.36(d，J＝7.1Hz，3H)，1.11(d，J＝7.2Hz，3H)。13CNMR(101MHz，D2O)δ175.04，171.09，164.46，137.52，134.34，132.09，131.21，130.16，130.13，130.01，129.05，122.49，60.54，53.02，50.56，49.47，40.89，34.64，17.33，17.14。实施例30-甲基(2-氯乙酰基)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸酯的制备将氯甲基乙酸(112mg，1.19mmol)溶解于DMF(3mL)中，并在冰水浴中冷却至0℃。然后在将NMM(288μL，2.62mmol)加入至搅拌的混合物前，先加入D-丙氨酰基-D-丙氨酸甲酯盐酸盐(250mg，1.19mmol)和HATU(452mg，1.19mmol)。将混合物缓慢加热至室温前，现将其在冰水浴中保持30分钟。然后将混合物在室温保持4小时。然后用300mL水稀释混合物，并用5×30mLEtOAc萃取。将合并的有机相汇集，将其于MgSO4上干燥前，先用0.5MNaHCO3(50mL)、0.1MHCl(50mL)和卤水(50mL)洗涤，过滤并在减压下浓缩。然后通过使用SiO2作为固定相，50-100％于庚烷中的EtOAc作为流动相的快速柱色谱纯化粗材料。这得到274mg为白色粉末的标题化合物(92％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.41(d，J＝6.9Hz，1H)，8.34(d，J＝7.5Hz，1H)，4.43-4.18(m，2H)，4.09(s，2H)，3.62(s，3H)，3.30(s，0H)，2.50(s，8H)，1.28(d，J＝7.3Hz，3H)，1.22(d，J＝7.0Hz，3H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ172.8，171.7，165.3，51.9，48.0，47.5，42.5，18.3，16.8。HRMSe/zC9H15N2O4Cl的计算值：250.0720，测量值：273.0616(M+H)。实施例31-甲基双(吡啶-2-基甲基)甘氨酰基-D-丙氨酰基-D-丙氨酸酯的制备将实施例30中制备的α-氯酰胺(200mg，0.80mmol，1.0当量)和KI(80mg，0.48mmol，0.6当量)溶解于200mLMeCN中，并向搅拌的混合物中加入DPA(173μL，0.96mmol，1.2当量)。然后加入DIPEA(1.35mL，7.74mmol，9.7当量)，将混合物加热至回流，并保持16小时。冷却至室温后，将混合物在减压下浓缩，并使用柱色谱纯化。使用0-5％于DCM中的MeOH从中性氧化铝柱上洗脱产物，得到212mg(64％)。1HNMR(300MHz，氘代氯仿)δ9.37(d，J＝7.8Hz，1H)，8.74-8.40(m，2H)，7.63(td，J＝7.7，1.8Hz，2H)，7.31-7.25(m，2H)，7.23-7.13(m，3H)，4.54(pd，J＝7.2，3.3Hz，2H)，3.90(d，J＝3.4Hz，4H)，3.69(s，3H)，3.40(s，2H)，1.49(d，J＝7.1Hz，3H)，1.30(d，J＝7.2Hz，3H)。13CNMR(75MHz，CDCl3)δ173.2，172.3，171.8，158.4，149.4，136.7，123.3，122.6，77.6，77.2，76.7，60.4，58.3，52.5，49.0，48.1，18.3，17.5。HRMSe/zC21H27N5O4的计算值：413.2063，测量值：414.2134(M+H)。实施例32-甲基(2-叠氮乙酰基)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸酯的制备将2-叠氮乙酸(178μL，2.38mmol)溶解于DMF(5mL)中，并在冰水浴中冷却至0℃。在向搅拌的混合物中加入NMM(576μL，5.24mmol)前，先加入D-丙氨酰基-D-丙氨酸甲酯盐酸盐(500mg，2,38mmol)和HATU(904mg，2.38mmol)。将混合物缓慢加热至室温前，先于冰水浴中保持30分钟。然后将混合物在室温保持4个小时。然后将混合物用350mL水稀释，并用5×50mLEtOAc萃取。将合并的有机相汇集，于MgSO4上干燥、过滤并在减压下浓缩前，先用0.5MNaHCO3(50mL)、0.1MHCl(50mL)和卤水(50mL)洗涤。然后通过使用以SiO2作为固定相，50-100％于庚烷中的EtOAc作为流动相的快速柱色谱纯化粗材料。这得到520mg为白色粉末的标题化合物(85％)。1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δ8.46(d，J＝7.1Hz，1H)，8.33(d，J＝7.3Hz，1H)，4.35(p，J＝7.1Hz，1H)，4.26(p，J＝7.3Hz，1H)，3.82(s，2H)，3.61(s，3H)，1.28(d，J＝7.3Hz，3H)，1.21(d，J＝7.1Hz，3H)。13CNMR(151MHz，DMSO)δ173.0，171.9，167.1，52.0，50.4，47.8，47.6，18.4，16.9。实施例33-甲基(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰基)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸酯的制备将于2.5mLH2O中的醋酸铜(200mg，1.0mmol，1.0当量)和于2.5mLH2O中的(+)抗坏血酸钠(396mg，2.0mmol，2.0当量)同时加入至于2.5mLtBuOH中的炔烃(237mg，1.0mmol，1.0当量)的搅拌溶液中。然后加入实施例32中制备的叠氮(257mg，1.0mmol，1.0当量)，将溶液在室温下搅拌16个小时。然后在将混合物用50mLH2O稀释前先向搅拌的溶液中加入EDTA(293mg，1.0mmol，1.0当量)并保持60分钟，用1MNaOH将混合物的pH调节至>10。然后用2×50mL二氯甲烷萃取浆液。将合并的有机相于K2CO3上干燥，并于减压下浓缩以得到深红色油。使用通过用0-5％于二氯甲烷中的甲醇洗脱中性Al2O3柱的柱色谱纯化粗产物，以得到134mg为淡橙色油的标题化合物(27％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.59(d，J＝7.5Hz，1H)，8.49(d，J＝4.7Hz，2H)，8.43(d，J＝7.2Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.77(t，J＝7.7Hz，2H)，7.57(d，J＝7.8Hz，2H)，7.29-7.21(m，2H)，5.13(s，2H)，4.42-4.21(m，2H)，3.77-3.70(m，6H)，3.62(s，3H)，1.31-1.21(m，6H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ172.8，171.8，165.0，159.0，148.8，143.1，136.5，125.3，122.5，122.1，58.7，51.8，51.4，48.0，47.9，47.5，31.3，18.3，16.8。HRMSe/zC24H30N8O4的计算值：494.2390，测量值：495.2463(M+H)。实施例34-甲基(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰基)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸(methyl(2-(4-((bis(pyridin-2-ylmethyl)amino)methyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)acetyl)-D-alanyl-D-alaninoicacid)的制备将实施例33(49mg，99umol)中制备的酯溶解于THF(1mL)中，使用冰水浴和0.5M氢氧化锂水溶液(220μL，0.110mmol)冷却至0℃。将反应搅拌2.5h直至TLC(5％于CH2Cl2中的MeOH，氧化铝)指示酯耗尽。将溶剂在减压下移除，并将残余物溶解于水(5mL)中。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，然后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。而后在减压下从水层移除溶剂，将所得固体溶解于乙醇，过滤以移除盐，并在减压下移除溶剂。这得到35mg为淡绿色固体的标题化合物(73umol,74％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.67(d，J＝7.7Hz，1H)，8.53-8.44(m，2H)，8.07(s，1H)，8.03-7.94(m，1H)，7.82-7.71(m，2H)，7.64-7.52(m，2H)，7.33-7.15(m，2H)，5.14(s，2H)，4.33(q，J＝7.3Hz，1H)，4.09-3.89(m，1H)，3.80-3.65(m，6H)，1.29-1.14(m，6H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ170.9，165.0，159.0，148.8，143.1，136.6，125.3，122.6，122.1，58.7，51.5，48.3，48.0，18.4，18.0。e/zC23H28N8O4的计算值：480，测量值：481.3。实施例35-甲基(2-(4-(2-(二乙氧基磷酰基)-3-巯基-丙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰基)丙氨酰基丙氨酸酯在0℃下搅拌于干DMF(0.3mL/mmol)中的磷酰基乙酸酯(1)(1当量)。加入叔丁醇钾(0.7当量)，在0℃下搅拌溶液直至碱溶解。向反应混合物中逐滴加入溴丙炔(2)(0.7当量)，移除冰浴以使溶液达到室温(rt)。然后将反应混合物在60℃加热18个小时。向混合物中加入氯化锂溶液(5％)，用乙醚将产物萃取三次，用水和卤水洗涤。过滤有机相，并在硫酸钠(Na2SO4)上干燥，在真空下移除溶剂。通过使用乙酸乙酯:己烷(60:40)作为洗脱剂的快速色谱纯化产物以得到黄色油。在0℃将硼氢化锂(LiBH4)溶解于干THF(2mL/mmol)中，并在0℃缓慢加入烷基化的磷酰基乙酸酯(3)中。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后在微波下于80℃照射10分钟。当反应混合物达到室温后，缓慢加入甲醇，同时搅拌直至中和过量的LiBH4。将混合物用10％的柠檬酸酸化，使用乙醚萃取产物，用卤水溶液洗涤，并于Na2SO4上干燥。在真空下移除溶剂。将产物在以乙酸乙酯:丙酮90:10作为洗脱剂的快速色谱上纯化为无色油。向含有于二氯甲烷(DCM)(10mL/mmol)中的醇衍生物(4)的反应瓶中加入三乙胺(1.05当量)和催化量的4-二甲基氨基吡啶(DMAP，20％)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟。然后，向溶液中缓慢加入甲磺酰氯并在室温下搅拌过夜。将粗品用50mLNH4Cl水溶液淬灭，并用乙醚萃取(3×50mL)。然后将合并的有机相在Na2SO4上干燥、过滤，蒸发溶剂。将粗品溶解于DMF(3mL/mmol)中。将硫代乙酸钾溶解于DMF，并加入至粗产物中。然后将反应混合物搅拌过夜。在真空下移除溶剂，并将所得棕色固体溶解于50mLNH4Cl中，用乙醚萃取(2×100)，并用水洗涤(2×100)。将有机层于Na2SO4上干燥、过滤，并在真空下蒸发溶剂。将产物(5)在使用乙酸乙酯:丙酮(95:05)的快速色谱上纯化为橙色油。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.15(m，5H)，3.42(m，1H)，3.01(s，1H)，3.16(m，2H)2.27(dd，2H)，2.33(s，3H)，1.34(t，6H)。13CNMR(101MHz，CDCl3)δ195.03，80.33，70.91，62.83，62.18，36.27，34.87，30.52，27.60，17.58，16.43。HRMS：(ESI):(M+H)+：C11H20O4PS的计算值：279.0817；测量值：279.0814。将炔烃(5)(1当量)和叠氮(6)(1.2当量)加入THF溶液并在室温下搅拌。将于H2O中的七水合硫酸铜(1当量)和于H2O中的(+)抗坏血酸钠(2.5当量)逐滴加入至反应混合物中，然后将溶液在室温下搅拌48小时。将EDAT(1当量)和1MNaOH一起加入搅拌的溶液中以调节pH>10。然后用EtOAc/DCM萃取反应混合物。将合并的有机相于K2CO3上干燥，并在减压下浓缩。通过使用柱色谱纯化粗产物(7)。于-20℃在N2下将2M于甲醇中的甲硫醇钠(1当量)加入至(7)(1当量)中。将混合物在-20℃搅拌30分钟。所得混合物用3NHCl(mL)酸化并用乙酸乙酯萃取(3×--mL)。将合并的有机层于MgSO4上干燥、过滤并浓缩以得到产物(8)。实施例36-甲基(6-((叔-丁氧羰基)氨基)己酰基)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸酯的制备将Boc-6-氨基己酸溶解于适当的溶剂(例如DMF或DCM)中，并在冰水浴中冷却至0℃。然后在向搅拌的混合物加入NMM(576μL，5.24mmol)前，先加入D-丙氨酰基-D-丙氨酸甲酯盐酸盐和HATU。将混合物缓慢加热至室温前，先将其在冰水浴中保持30分钟。然后将混合物在室温保持4小时。然后将混合物用水稀释，并用5×50mLEtOAc萃取。将合并的有机相于MgSO4上干燥、过滤并在减压下浓缩前，先将其汇集，并用0.5MNaHCO3(50mL)、0.1MHCl(50mL)和卤水(50mL)洗涤。然后通过快速柱色谱纯化粗材料。实施例37-甲基(6-氨基己酰基)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸酯的制备将实施例36中描述的boc-胺溶解于适当的溶剂(例如DCM)，并在冰水浴中冷却至0℃，然后向混合物中加入5-50当量的TFA。将混合物在减压下浓缩前，先在0℃搅拌30分钟，然后在室温下搅拌4-24个小时。然后将粗材料重新溶解于DCM中，并用3×50mL0.5MK2CO3溶液萃取。然后将有机相于MgSO4上干燥、过滤并浓缩。若化合物不够纯，则使其经过柱色谱以得到标题化合物。实施例38-甲基(6-((3aS,4R,7R,9R,10R,13R,15R,15aR)-10-(((2S,3R,4S,6R)-3-乙酰氧基-4-(二甲氨基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-11-甲氧基-3a,4,7,9,11,13,15-七甲基-2,6,8,14-四氧亚基十二氢-2H-[1]氧杂环十四烷并[4,3-d]噁唑-1(4H)-基)己酰基)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸酯(methyl(6-((3aS,4R,7R,9R,10R,13R,15R,15aR)-10-(((2S,3R,4S,6R)-3-acetoxy-4-(dimethylamino)-6-methyltetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-11-methoxy-3a,4,7,9,11,13,15-heptamethyl-2,6,8,14-tetraoxododecahydro-2H-[1]oxacyclotetradecino[4,3-d]oxazol-1(4H)-yl)hexanoyl)-D-alanyl-D-alaninate)的制备将2′-O-乙酰基-10,11-二去氢-11-去氧-12-O-(1H-1-咪唑羰基)-3-O-去克拉定糖基-3-氧亚基-6-O-甲基-红霉素A与实施例37中制备的甲基(6-氨基己酰)-D-丙氨酰基-D-丙氨酸酯一起悬浮于适当的溶剂混合物(例如水：MeCN)中。将混合物在50℃加热12-72小时。将粗混合物用5％KH2PO4和EtOAc稀释并萃取。将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，于MgSO4上干燥、过滤并在减压下浓缩。然后通过柱色谱纯化该材料以得到标题化合物。实施例39-(2S,3R,4S,6R)-2-(((3aS,4R,7R,9R,10R,13R,15R,15aR)-1-(4-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)苯乙基)-11-甲氧基-3a,4,7,9,11,13,15-七甲基-2,6,8,14-四氧亚基十四氢-2H-[1]氧杂环十四烷并[4,3-d]噁唑-10-基)氧基)-4-(二甲氨基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-3-基乙酸酯((2S,3R,4S,6R)-2-(((3aS,4R,7R,9R,10R,13R,15R,15aR)-1-(4-(2-(bis(pyridin-2-ylmethyl)amino)acetamido)phenethyl)-11-methoxy-3a,4,7,9,11,13,15-heptamethyl-2,6,8,14-tetraoxotetradecahydro-2H-[1]oxacyclotetradecino[4,3-d]oxazol-10-yl)oxy)-4-(dimethylamino)-6-methyltetrahydro-2H-pyran-3-ylacetate)的制备将2′-O-乙酰基-10,11-二去氢-11-去氧-12-O-(1H-1-咪唑羰基)-3-O-去克拉定糖基-3-氧亚基-6-O-甲基-红霉素A与N-(4-(2-氨乙基)苯基)-2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰胺一起悬浮于适当的溶剂混合物(例如水：MeCN)中。将混合物在50℃加热12-72小时。将粗混合物用5％KH2PO4和EtOAc稀释并萃取。将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，于MgSO4上干燥、过滤并在减压下浓缩。然后通过柱色谱纯化该材料以得到标题化合物。实施例40-(2S,5S,6R)-6-(2-氯乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备将(+)-6-氨基青霉烷酸溶解于水和丙酮的混合物中，并在冰浴中冷却至0℃。加入碳酸钾，将混合物在0℃搅拌5-10分钟。然后向搅拌的混合物中逐滴加入氯乙酰氯，并将混合物在0℃-室温保持4-48小时直至反应完全。在减压下移除丙酮，酸化混合物。通过过滤沉淀或通过用适当的有机溶剂萃取酸性水相收集分离产物。若需要进一步地纯化，将化合物重结晶或通过柱色谱纯化。实施例41-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-氯乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸将7-氨基头孢烷酸溶解于水和丙酮的混合物中，并在冰浴中冷却至0℃。加入碳酸钾，将混合物在0℃搅拌5-10分钟。然后向搅拌的混合物中逐滴加入氯乙酰氯，并将混合物在0℃-室温保持4-48小时直至反应完全。在减压下移除丙酮，酸化混合物。通过过滤沉淀或通过用适当的有机溶剂萃取酸性水相收集分离产物。若需要进一步地纯化，将化合物重结晶或通过柱色谱纯化。实施例42-(2S,5S,6R)-6-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备将先前制备的α-氯酰胺溶解于乙腈或另一种适当的有机溶剂中。加入胺基碱(例如三乙胺或二异丙基乙胺)(1-20当量)连同KI和二甲基吡啶胺。将混合物在25-100℃搅拌1-72小时直至反应完全。通过柱色谱或从适当的溶剂混合物中重结晶纯化粗混合物。实施例43-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸的制备将先前制备的α-氯酰胺溶解于乙腈或另一种适当的有机溶剂中。加入胺基碱(例如三乙胺或二异丙基乙胺)(1-20当量)连同KI和二甲基吡啶胺。将混合物在25-100℃搅拌1-72小时直至反应完全。通过柱色谱或从适当的溶剂混合物中重结晶纯化粗混合物。实施例44-(2S,5S,6R)-6-(2-叠氮基乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备将2-叠氮乙酸溶解于DMF中，并在冰水浴中冷却至0℃。然后在向搅拌的混合物中加入NMM前，先加入(+)-6-氨基青霉烷酸和适当的偶联剂例如HATU、EDC、CDI。将化合物缓慢加热至室温前先于冰水浴中保持30分钟。然后将混合物在室温保持至72小时。而后在减压下浓缩混合物。然后通过快速柱色谱或重结晶纯化粗材料。实施例45-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-叠氮基乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸的制备将2-叠氮乙酸溶解于DMF中，并在冰水浴中冷却至0℃。然后在向搅拌的混合物中加入NMM前，先加入7-氨基头孢烷酸和适当的偶联剂例如HATU、EDC、CDI。将化合物缓慢加热至室温前先于冰水浴中保持30分钟。然后将混合物在室温保持至72小时。然后在减压下浓缩混合物。然后通过快速柱色谱或重结晶纯化粗材料。实施例46-(2S,5S,6R)-6-(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备将(2S,5S,6R)-6-(2-叠氮基乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸和二甲基吡啶基-炔丙基胺(propagylamine)溶解于水和叔丁醇的混合物中。分别将醋酸铜或硫酸铜和(+)抗坏血酸钠溶解于水中并同时逐滴加入搅拌的混合物中。将混合物在室温静置2-7天或直至反应完全。然后将混合物在减压下浓缩并通过色谱或重结晶纯化。实施例47-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸的制备将(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-叠氮基乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸和二甲基吡啶-炔丙基胺溶解于水和叔丁醇的混合物中。分别将醋酸铜或硫酸铜和(+)-抗坏血酸钠溶解于水中并同时逐滴加入搅拌的混合物中。将混合物在室温静置2-7天或直至反应完全。然后在减压下将混合物浓缩并通过色谱或重结晶纯化。实施例48-(2S,5S,6R)-6-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备通过以下方法制备标题化合物：在有机溶剂和加入的碱中，将(+)-6-氨基青霉烷酸和2-氯甲基吡啶盐酸盐烷基化，或在适当的溶剂(例如乙醇)和与醛一同添加的NaB(CN)3H中或和在所有起始材料耗尽后加入的NaBH4中，将2-吡啶甲醛还原烷基化。然后通过柱色谱或从适当的溶剂混合物中重结晶纯化粗产物。实施例49-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸的制备通过以下方法制备标题化合物：在有机溶剂和加入的碱中，将7-氨基头孢烷酸和2-氯甲基吡啶盐酸盐烷基化，或在适当的溶剂(例如乙醇)和与醛一同添加的NaB(CN)3H中或和在所有起始材料耗尽后加入的NaBH4中，将2-吡啶甲醛还原烷基化。然后通过柱色谱或从适当的溶剂混合物中重结晶纯化粗混合物。实施例50-(2S,5S,6R)-6-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备将双(吡啶-2-基甲基)甘氨酸乙酯溶解于H2O和5MKOH溶液中。将混合物在室温搅拌60分钟，并用1MHCl将pH调节至7。然后在减压下浓缩溶液至淡橙色黏着固体，并用热纯乙醇洗涤。然后将合并的乙醇在减压下浓缩至棕色油，其在下一步未经纯化直接使用。将(+)-6-氨基青霉烷酸与粗酸、N-甲基吗啉、HOBT和纯乙醇混合，并冷却至10℃。然后向搅拌的溶液中加入EDC。而后将溶液加热至室温并搅拌四小时。将混合物在减压下浓缩，在H2O中稀释，并用CH2Cl2萃取。将合并的有机相于K2CO3上干燥并浓缩。通过柱色谱纯化粗产物以得到标题化合物。实施例51-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸的制备将双(吡啶-2-基甲基)甘氨酸乙酯溶解于H2O和5MKOH溶液中。将混合物在室温搅拌60分钟，并用1MHCl将pH调节至7。然后在减压下浓缩溶液至淡橙色黏着固体，并用热纯乙醇洗涤。然后将合并的乙醇在减压下浓缩至棕色油，其在下一步未经纯化直接使用。将7-氨基头孢烷酸与粗酸、N-甲基吗啉、HOBT和纯乙醇混合，并冷却至10℃。然后向搅拌的溶液中加入EDC。而后将溶液加热至室温并搅拌四小时。将混合物在减压下浓缩，在H2O中稀释，并用CH2Cl2萃取。将合并的有机相于K2CO3上干燥并浓缩。通过柱色谱纯化粗产物以得到标题化合物。实施例52-甲基(2S,5S,6R)-6-氨基-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯的制备将于甲醇中的(+)-6-氨基青霉烷酸在冰浴中冷却至0℃，并缓慢加入SOCl2、(COCl)2、TMS-CHN2或CH2N2。将反应在减压下浓缩前先使其达到反应完全。所得酯通过萃取、重结晶或柱色谱纯化或在后续反应中不经进一步纯化直接使用。实施例53-甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-氨基-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯的制备将于甲醇中的7-氨基头孢烷酸溶液在冰浴中冷却至0℃，并缓慢加入SOCl2、(COCl)2、TMS-CHN2或CH2N2。将反应在减压下浓缩前先使其达到反应完全。所得酯通过萃取、重结晶或柱色谱纯化或在后续反应中不经进一步纯化直接使用。实施例54-甲基(2S,5S,6R)-6-(2-叠氮基乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯的制备将2-叠氮乙酸溶解于DMF中并在冰水浴中冷却至0℃。然后向搅拌的混合物中加入NMM前，先加入(2S,5S,6R)-6-氨基-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸甲酯和适当的偶联剂例如HATU、EDC和CDI。将混合物缓慢加热至室温前先于冰水浴中保持30分钟。然后给将混合物在室温保持至72小时。而后将混合物在减压下浓缩。然后通过快速柱色谱或重结晶纯化粗材料。实施例55-甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-叠氮基乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯的制备将2-叠氮乙酸溶解于DMF中并在冰水浴中冷却至0℃。然后向搅拌的混合物中加入NMM前，先加入甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-氨基-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯和适当的偶联剂例如HATU、EDC和CDI。将混合物缓慢加热至室温前先于冰水浴中保持30分钟。然后给将混合物在室温保持至72小时。而后将混合物在减压下浓缩。然后通过快速柱色谱或重结晶纯化粗材料。实施例56-甲基(2S,5S,6R)-6-(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯的制备将甲基(2S,5S,6R)-6-(2-叠氮基乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯和二甲基吡啶基-炔丙基胺溶解于水和叔丁醇的混合物中。分别将醋酸铜或硫酸铜和(+)-抗坏血酸钠溶解于水中并同时逐滴加入至搅拌的混合物中。将混合物在室温静置2-7天或直至反应完全。然后在减压下将混合物浓缩并通过色谱或重结晶纯化。实施例57-甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯的制备将甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-叠氮基乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯和二甲基吡啶基-炔丙基胺溶解于水和叔丁醇的混合物中。分别将醋酸铜或硫酸铜和(+)-抗坏血酸钠溶解于水中并同时逐滴加入搅拌的混合物中。将混合物在室温静置2-7天或直至反应完全。然后在减压下将混合物浓缩并通过色谱或重结晶纯化。实施例58-(2S,5S,6R)-6-(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备将甲基(2S,5S,6R)-6-(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯溶解于THF(1mL)中，使用冰水浴冷却至0℃并与水和0.5M氢氧化锂水溶液混合。将反应搅拌1-48个小时直至反应完全。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于纯乙醇中并过滤以移除盐，在减压下移除溶剂。可使用从适当的溶剂或溶剂混合物中重结晶或通过色谱纯化最终产物。实施例59-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸的制备将(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(4-((双(吡啶-2-基甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸甲酯溶解于THF(1mL)中，使用冰水浴冷却至0℃并与水和0.5M氢氧化锂水溶液混合。将反应搅拌1-48个小时直至反应完全。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于纯乙醇中并过滤以移除盐，在减压下移除溶剂。可使用从适当的溶剂或溶剂混合物中重结晶或通过色谱纯化最终产物。实施例60-甲基(2S,5S,6R)-6-(2-氯乙酰胺)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯的制备将甲基(2S,5S,6R)-6-氨基-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯溶解于水和丙酮的混合物中，并在冰浴中冷却至0℃。加入碳酸钾，将混合物在0℃搅拌5-10分钟。然后向搅拌的混合物中逐滴加入氯乙酰氯，并将混合物在0℃-室温保持4-48小时直至反应完全。在减压下移除丙酮，酸化混合物。通过过滤沉淀或通过用适当的有机溶剂萃取酸性水相收集分离产物。若需要进一步地纯化，将化合物重结晶或通过柱色谱纯化。实施例61-甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-氯酰胺基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯的制备将甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-氨基-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯溶解于水和丙酮的混合物中，并在冰浴中冷却至0℃。加入碳酸钾，将混合物在0℃搅拌5-10分钟。然后向搅拌的混合物中逐滴加入氯乙酰氯，并将混合物在0℃-室温保持4-48小时直至反应完全。在减压下移除丙酮，酸化混合物。通过过滤沉淀或通过用适当的有机溶剂萃取酸性水相收集分离产物。若需要进一步地纯化，将化合物重结晶或通过柱色谱纯化。实施例62-甲基(2S,5S,6R)-6-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯的制备将甲基(2S,5S,6R)-6-(2-氯酰胺基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯溶解于乙腈或另一种适当的有机溶剂中。加入胺基碱(例如三乙胺或二异丙基乙胺)(1-20当量)连同KI和二甲基吡啶胺。将混合物在25-100℃搅拌1-72小时直至反应完全。通过柱色谱或从适当的溶剂混合物中重结晶纯化粗混合物。实施例63-甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯的制备将甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-氯酰胺基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸甲酯溶解于乙腈或另一种适当的有机溶剂中。加入胺基碱(例如三乙胺或二异丙基乙胺)(1-20当量)连同KI和二甲基吡啶胺。将混合物在25-100℃搅拌1-72小时直至反应完全。通过柱色谱或从适当的溶剂混合物中重结晶纯化粗混合物。实施例64-(2S,5S,6R)-6-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备将甲基(2S,5S,6R)-6-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯溶解于THF(1mL)中，使用冰水浴冷却至0℃并与水和0.5M氢氧化锂水溶液混合。将反应搅拌1-48个小时直至反应完全。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于纯乙醇中并过滤以移除盐，在减压下移除溶剂。可使用从适当的溶剂或溶剂混合物中重结晶或通过色谱纯化最终产物。实施例65-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸的制备将甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯溶解于THF(1mL)中，使用冰水浴冷却至0℃并与水和0.5M氢氧化锂水溶液混合。将反应搅拌1-48个小时直至反应完全。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于无水乙醇中并过滤以移除盐，在减压下移除溶剂。可使用从适当的溶剂或溶剂混合物中重结晶或通过色谱纯化最终产物。实施例66-甲基(2S,5S,6R)-6-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯的制备通过以下方法制备标题化合物：在有机溶剂和加入的碱中，将甲基(2S,5S,6R)-6-氨基-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯和2-氯甲基吡啶盐酸盐烷基化，或在适当的溶剂(例如乙醇)和与醛一同添加的NaB(CN)3H中或和在所有起始材料耗尽后加入的NaBH4中，将2-吡啶甲醛的还原烷基化。然后通过柱色谱或从适当的溶剂混合物中重结晶纯化粗混合物。实施例67-甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯的制备通过以下方法制备标题化合物：在有机溶剂和加入的碱中，将甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-氨基-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸甲酯和2-氯甲基吡啶盐酸盐烷基化，或在适当的溶剂(例如乙醇)和与醛一同添加的NaB(CN)3H中或和在所有起始材料耗尽后加入的NaBH4中，将2-吡啶甲醛的还原烷基化。然后通过柱色谱或从适当的溶剂混合物中重结晶纯化粗产物。实施例68-(2S,5S,6R)-6-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备将甲基(2S,5S,6R)-6-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯溶解于THF(1mL)中，使用冰水浴冷却至0℃并与水和0.5M氢氧化锂水溶液混合。将反应搅拌1-48个小时直至反应完全。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于纯乙醇中并过滤以移除盐，在减压下移除溶剂。可使用从适当的溶剂或溶剂混合物中重结晶或通过色谱纯化最终产物。实施例69-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸的制备将甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯溶解于THF(1mL)中，使用冰水浴冷却至0℃并与水和0.5M氢氧化锂水溶液混合。将反应搅拌1-48个小时直至反应完全。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于纯乙醇中并过滤以移除盐，在减压下移除溶剂。可使用从适当的溶剂或溶剂混合物中重结晶或通过色谱纯化最终产物。实施例70-甲基(2S,5S,6R)-6-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯的制备将双(吡啶-2-基甲基)甘氨酸乙酯溶解于H2O和5MKOH溶液中。将混合物在室温搅拌60分钟，并用1MHCl将pH调节至7。然后在减压下浓缩溶液至淡橙色黏着固体，并用热纯乙醇洗涤。然后将合并的乙醇在减压下浓缩至棕色油，其在下一步未经纯化直接使用。将甲基(2S,5S,6R)-6-氨基-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯与粗酸、N-甲基吗啉、HOBT和纯乙醇混合，并冷却至10℃。然后向搅拌的溶液中加入EDC。而后将溶液加热至室温并搅拌四小时。将混合物在减压下浓缩，在H2O中稀释，并用CH2Cl2萃取。将合并的有机相于K2CO3上干燥并浓缩。通过柱色谱纯化粗产物以得到标题化合物。实施例71-甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯的制备将双(吡啶-2-基甲基)甘氨酸乙酯溶解于H2O和5MKOH溶液中。将混合物在室温搅拌60分钟，并用1MHCl将pH调节至7。然后在减压下浓缩溶液至淡橙色黏着固体，并用热纯乙醇洗涤。然后将合并的乙醇在减压下浓缩至棕色油，其在下一步未经纯化直接使用。将甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-氨基-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸酯与粗酸、N-甲基吗啉、HOBT和纯乙醇混合，并冷却至10℃。然后向搅拌的溶液中加入EDC。而后将溶液加热至室温并搅拌四小时。将混合物在减压下浓缩，在H2O中稀释，并用CH2Cl2萃取。将合并的有机相于K2CO3上干燥并浓缩。通过柱色谱纯化粗产物以得到标题化合物。实施例72-(2S,5S,6R)-6-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸的制备将甲基(2S,5S,6R)-6-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-3,3-二甲基-7-氧亚基-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-甲酸酯溶解于THF(1mL)中，使用冰水浴冷却至0℃并与水和0.5M氢氧化锂水溶液混合。将反应搅拌1-48个小时直至反应完全。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于纯乙醇中并过滤以移除盐，在减压下移除溶剂。可使用从适当的溶剂或溶剂混合物中重结晶或通过色谱纯化最终产物。实施例73-(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸的制备将甲基(6S,7R)-3-(乙酰氧基甲基)-7-(2-(双(吡啶-2-基甲基)氨基)乙酰氨基)-8-氧亚基-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]八-2-烯-2-甲酸甲酯溶解于THF(1mL)中，使用冰水浴冷却至0℃并与水和0.5M氢氧化锂水溶液混合。将反应搅拌1-48个小时直至反应完全。使用0.1MHCl将溶液的pH调节至7，并在减压下移除溶剂。将混合物溶解于纯乙醇中并过滤以移除盐，在减压下移除溶剂。可使用从适当的溶剂或溶剂混合物中重结晶或通过色谱纯化最终产物。实施例74-确定化合物抗纯化的MBL的IC50值用于确定IC50值的一般方案缓冲剂：A:50mMHEPESpH7.2、100μMZnCl2B：50mMHEPESpH7.2、100μMZnCl2和400μg/ml牛血清白蛋白(BSA)设备：SpectraMax96孔读出器(wellreader)96孔板比色皿一般塑料制品：稀释管、离心管等。方法：抑制剂：a.以10mM的浓度溶解于100％DMSO中b.将抑制剂溶解于缓冲剂A中至浓度为25％DMSO。分析中不超过2.5％DSMO是可以忍受的。100％DMSO(10mM)；25％DMSO(0.25mM)；2.5％DMSO(2.5mM)c.制备抑制剂的两倍稀释系列。制备至少8组稀释。见表1中的实施例报告底物(Reportersubstrate)(头孢硝噻吩)：a.将少量的头孢硝噻吩在1mlDMSO中稀释b.向比色皿中加入990μl的缓冲剂A+10μl的头孢硝噻吩c.在对底物特异的吸光度下测量初始ODd.向比色皿中加入纯化的酶，并进行水解直至完全(酶越是浓缩的，水解进行的越快)e.测量终止ODf.计算底物的浓度：[(终止OD-初始OD)×稀释因子]/Δε(Δε头孢硝噻吩＝17400)g.在缓冲剂A中将头孢硝噻吩稀释至100μM酶：在缓冲剂B中将纯化的酶稀释至10nM的浓度。分析：a.设定Spectramax/软件上的设置和温度：I.动力学II.λ：482III.时间：20minIV.间隔：2-5秒V.第一次读取前混合(Mixbefore1stread)：5秒VI.温度：25℃b.向分析孔中加入30μl缓冲剂A、10μl纯化的酶(最终浓度1nM)和10μl抑制剂(每个抑制剂浓度两组)。也包括阴性对照。孔中仅加入40μl缓冲剂A而不加抑制剂。见表1的说明。c.将板在读出器中培养5分钟。d.向分析孔中加入50μl头孢硝噻吩(最终浓度50μM)。这应该快速进行-优选使用电子多通道移液枪。e.即刻开始读取。确定：每个抑制剂浓度的初始速度(V0)并计算IC50。表1-抑制剂稀释系列(所有的值均以μM为单位)结论：确定IC50的结果列出于表2中。下图中描绘了抑制剂曲线的实例。A.实施例3的化合物B.实施例13的化合物C.实施例24的化合物表2：选择的化合物和参考化合物(TPEN)A的IC50-值AND：未确定；NA：进行了试验，但未得到合适的IC50曲线。结果显示化合物在μM(VIM-2)和低于μM的范围(NDM-1和GIM-1)抑制三种不同的纯化的MBL。实施例77：构造的表达MBL的大肠杆菌细胞中的MBL抑制活性结果用于确定表达MBL的大肠杆菌细胞中抑制活性的一般方案缓冲剂：缓冲剂A：50mMHEPESpH7.2、100μMZnCl2设备：SpectraMax96孔读出器(wellreader)96孔板比色皿一般塑料制品：稀释管、离心管等。方法：第一天：1.用50μg/ml的卡那霉素在LB板上析出细菌细胞第二天：1.用50μg/ml卡那霉素将2-4个种群接种于100mlLB中2.在37℃振荡下培养过夜第三天：抑制剂：a.在离心管中称出小量的抑制剂(～5mg)b.用缓冲剂A或具有25％DMSO的缓冲剂A将抑制剂稀释至100mM的浓度报告底物(头孢硝噻吩)a.将少量的头孢硝噻吩在1mlDMSO中稀释b.向比色皿中加入990μl的缓冲剂A+10μl的头孢硝噻吩c.在482吸光度下测量初始ODd.向比色皿加入纯化的MBL酶，并进行水解直至完全e.测量终止ODf.计算底物的浓度：[(初始OD-终止OD)×稀释因子]/Δεg.将头孢硝噻吩在缓冲剂A或H2O中稀释至3.2mM过夜培养a.将过夜的培养物在LB培养基(broth)中稀释至OD600＝1分析：a.将50μlLB和0.8mMIPTG(分析中0.4mM的最终浓度)转移至每个孔b.向选择的孔中加入1μl抑制剂/阳性对照(分析中500/1000μM的最终浓度)c.向每个孔中加入50μl的过夜培养物(OD600＝1)d.在37℃振荡下在板读出器中培养20mine.用多通道移液枪向选择的孔中加入5μl头孢硝噻吩(3.2mM)f.将板在板读出器中培养3小时，每分钟测量A482处头孢硝噻吩水解，每次测量间振荡g.测量A600处的终点，以观察抑制剂怎样单独影响细菌的生长h.将板在2800rpm离心10min，并向干净孔中转移50μli.测量A482终点结果：表3列出了显示在大肠杆菌中表达的VIM-2和GIM-1抑制的结果。表3:具有VIM-2和GIM-1的全细胞实验中的MBL抑制(％)。细胞是含有载体pET26b-blaVIM-2或pET26b-blaGIM-1的大肠杆菌SNO3。在250μM的浓度下使用受试物。化合物％VIM-2抑制％GIM-1抑制实施例374.0515.65实施例1382.0520.55实施例2498.2569.20实施例573.7514.40实施例682.1020.65实施例775.3512.50实施例882.9522.20实施例984.2014.75实施例1175.1016.50实施例1264.2515.70结果显示化合物能跨越大肠杆菌的外膜，并抑制位于周质间隙中MBL。在化合物间观察到不同程度的抑制，与GIM-1相比抗VIM-2的抑制活性最强。实施例78-用于评估化合物和美罗培南协同效应的微培养基(Microbroth)稀释法的结果用于评估化合物抗菌活性或化合物-抗生素组合的协同效应的微培养基稀释法的一般方案细菌的制备第一天：·将菌株置于适当的培养基中：■具有ESBL或碳青霉烯酶的革兰氏阴性菌：含有100mg/L氨必西林的绿色琼脂平板■不含β-内酰胺酶的革兰氏阴性菌：绿色琼脂平板■革兰氏阳性菌(葡萄球菌和肠球菌)：血琼脂平板·在37℃培养过夜(o.n.)第二天：制备细菌接种物：·在0.85％NaCl中制备细菌的0.5麦法兰悬浮液(McFarlandsuspension)(应在制备后15min内使用)○将0.5麦法兰悬浮液1:100稀释至MH培养基中。通过稀释制备的细菌悬浮液1:100(10μl细菌悬浮液+990μl0.85％NaCl)检查接种物。将10μl稀释液置于MH琼脂平板上(×2)。在37℃培养过夜，进行集落计数，通过将集落的平均数乘以10000再除以2计算平板中最终CFU/ml接种物。最终的接种物应在3-7x105CFU/ml之间。·除了阴性生长对照外，向微量滴定板的每个孔中加入50μl制备的细菌悬浮液化合物/抗生素的制备·计算分析中期望的浓度范围和化合物/抗生素的体积。对于抗生素这将取决于对待检测菌株的美罗培南的MIC。将储存液在MH培养基中稀释。若需要检测浓度范围(记住分析板中额外的稀释因子)，则在MH培养基中制备期望浓度的后续两倍的稀释液。始终包含移液管的额外体积。要考虑在缓冲液中制备的对细菌生长影响的存储液(例如DMSO)。分析：·确定化合物/抗生素单独的MIC：○向行2-11(行2浓度最高)加入25μl各浓度的化合物/抗生素○向行2-11加入25μlMH培养基○向行12(阳性对照)加入50μlMH培养基○向行1加入100μlMH培养基○向行2-12加入50μl细菌悬浮液·确定抗生素+化合物的MIC：○向行2-11(行2浓度最高)加入25μl各浓度的抗生素○向行2-11加入25μl化合物○向行12(阳性对照)加入50μlMH培养基○向行1加入100μlMH培养基○向行2-12加入50μl细菌悬浮液·将板在37℃培养20小时，并确定存在或缺少抑制剂下的MIC结果：在存在或缺少化合物下，美罗培南抗MBL阳性和MBL阴性的临床革兰氏阴性分离体的最小抑制浓度(MIC)示出于表4中。总之，先导有效物(leadhit)OAA4033(实施例24)和几个我们的候选物显示出美罗培南的强的协同增效性，恢复产生MBL的铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌的不同临床株的抗菌活性。协同效果与种类无关。在MBL-阴性临床株中，OAA4033(实施例24)和OAA4085(实施例12)未观察到协同效果，表明该效果对于产生MBL的分离体是特异性的。化合物固有抗菌活性的试验显示排除化合物的固有抗菌活性外，它们所有都具有≧1000μM的MIC。如预期的，也观察到了与美罗培南和TPEN的协同活性。应注意的是在分析中TPEN对于一些分离体显示出的固有抗菌活性(MIC250μM-1000μM)刚刚高于试验的浓度(125μM)。卡托普利未观察到协同活性。