本发明属于兽药制剂领域。具体涉及一种用于治疗鸡肺炎的中药组合物。
背景技术：
鸡肺炎是以呼吸加快和气喘为特征的严重的呼吸道疾病。该病通常由多种病原及环境应激等诸多因素相互作用引起的呼吸道感染传入肺部引起的疾病。多发生于3～10日龄雏鸡，急性患鸡无明显症状，突然死亡。病程慢的病鸡伸颈张口、呼吸困难、咳嗽、食欲减退或不食，最后因肺充血而死。剖解病死鸡可见肺水肿、充血。通常给家禽养殖者带来巨大的经济损失。
目前国内尚无治疗鸡肺炎的的专用特效药物，大多数养殖户采用大量抗生素和抗病毒药物进行治疗，不仅达不到治疗目的，还会造成严重的肝肾损伤，鸡群成活率降低、整齐度差、饲料报酬降低、用药成本大幅增加、养殖户经济效益明显降低。同时在畜产品中残留的大量抗生素、存在食品安全隐患、严重危害人类健康。而采用本发明公布的中药治疗可以达到标本兼治的目的，不仅可以快速缓解临床症状，而且可以调动机体的防御机能，提高机体免疫力。
技术实现要素：
本发明涉及一种专用于治疗鸡肺炎的中药组合物。特点在于对环境应激及病原菌混合感染引起的鸡肺炎疗效高、无药残、绿色、安全。
本发明的技术方案是：公开了一种用于治疗鸡肺炎的中药组合物。它是由以下质量份数的原药制成的药剂：满山红2～6份、桔梗2～6份、浙贝母1～4份、鱼腥草2～4份、板蓝根2～4份、葶苈子2～4份、甘草1～3份。
本发明按照优选的药材质量配比制成了一种用于治疗鸡肺炎的中药组合物口服液。满山红6份、桔梗4份、浙贝母1、鱼腥草4份、板蓝根2份、葶苈子2份、甘草2份。制成每1ml相当于原生药2g的中药组合物口服液。
本发明涉及的各味中药材的药理作用如下：
满山红又名映山红，味苦，性寒，入肺经，可肃降肺气，清热化痰，常用于风热咳嗽，痰热郁肺等证。在长江流域各省，东至台湾、西南达四川、云南、北至长白山区及大兴安岭、小兴安岭地区等都有大量分布，药物来源丰富。其叶中含有多种药用活性成分。如大牻牛儿酮、杜鹃素、槲皮素、金丝桃苷、愈创木奥、丁香酸和香草酸等。
现代医学研究表明：满山红具有镇咳、祛痰、平喘、抗炎抑菌的作用。小鼠口服5mg大牻牛儿酮其镇咳作用相当可待因2mg，同时大牻牛儿酮有对抗组胺引起的豚鼠支气管痉挛的作用。杜鹃素、槲皮素为满山红治疗气管炎的主要有效成分。家兔活体气管纤毛运送粘液速度试验可以证实临床祛痰的结论。同时家兔静脉注射满山红醇浸水溶液，可对抗乙酰胆碱引起的支气管痉挛。叶中所含愈创木奥、可用作抗炎剂。杜鹃素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有抑菌活性。丁香酸和香草酸亦有抗细菌和真菌的作用。满山红中含有的金丝桃苷具有解痉镇痛、增强免疫力的作用。
桔梗，辛开宣散，苦以泻，体轻升浮，性味平和，宣肺止咳，疏邪达表，外感六淫，皆为所宜。可宣肺解表、升提肺气、祛痰平喘、利气散结、清咽开音。而满山红苦寒入肺，降逆祛痰，破结散热。二药合用，一升一降，梳理气机，可开通郁滞，开胸顺气。宣肺止咳，适用于肺气郁滞之喘咳，胸膈满闷等证。
鱼腥草，味辛性寒，辛能发散、寒能清热、入肺经，既能清热解毒，又能排脓消痈。常用治肺痈、肺炎等证。配桔梗可清热解毒除肺痈，宣肺托脓祛溃疡。治肺脓疡及痈肿脓出不畅。二药均入肺经，同为疗肺痈要药。鱼腥草清热解毒作用颇强，长于解毒排脓而消痈；桔梗长于宣通肺气，祛痰，排脓消肿以治痈。二药配对，相使为用，同奏宣肺祛痰，消热排脓，解毒疗痈之功。
浙贝母为百合科贝母属植物。《本草正》：″大治肺痈肺萎，咳喘，吐血，衄血，最降痰气，善开郁结，止疼痛，消胀满，清肝火，明耳目。有止咳化痰、清热散结之作用。主治上呼吸道感染，咽喉肿痛、支气管炎、肺脓疡、痰多、肺热咳嗽。
葶苈子是常用的中药之一。《本草正义》：葶苈子苦降辛散，而性寒凉，故能破滞开结，定逆止喘，利水消肿。
板蓝根，苦，寒，无毒。归肝经、胃经。清热，解毒，凉血，利咽。现代医学研究：板蓝根含靛甙、靛红、β-谷甾醇、板蓝根乙素、丙素和丁素。亦含植物性蛋白、树脂状物、糖类、芥子甙、多种氨基酸及微量元素。板蓝根对多种细菌有抑制作用。水浸液对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、八联球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、痢疾(志贺、弗氏)杆菌、肠炎杆菌等都有不同程度的抑制作用，对流感病毒PR8株和京科68-1株有明显抑制作用。
甘草，性味甘、平、无毒。具有补脾益气、清热解毒、润肺止咳之功效。同时甘草药性平和，通行十二经脉，可升可降，能和能缓，又解又补，故有调和药性之功。在各类药方中，能使诸药彼此和谐而无相争之弊。
本发明的突出特点在于依据传统医学古方、结合现代医学理论及流行病学调查，将满山红、桔梗、浙 贝母、鱼腥草、葶苈子、板蓝根、甘草进行科学组方，用于治疗鸡肺炎，药物来源丰富、成本低廉、生产工艺简单、质量可控。通过大量的临床试验验证，对环境应激及病原菌混合感染引起的鸡肺炎均有较好的治疗效果，快速缓解临床症状，有效率达到90％以上。纯中药制剂、可广泛用于肉鸡及蛋鸡，无休药期、无药物残留、确保动物性食品的安全。同时可根据生产条件、市场需求制备成散剂、颗粒剂、口服液、注射液、片剂等各种药物剂型。
具体实施方式
为更好的说明本发明的优点及实施效果，列举本发明优选实施例1个，但不限制本发明。所用原辅料均为市售医药级原辅料。
具体实施例1中药组合物制备方法
中药组合物口服剂制备方法如下：
取满山红6份、桔梗4份、浙贝母1份、板蓝根2份、葶苈子2份、甘草2份，除去杂质洗净，加入药材总质量10倍、8倍、8倍体积量的浓度为60％的乙醇回流提取3次、温度为80℃、每次提取时间为60min，合并三次提取液并转入浓缩罐，进行浓缩回收乙醇。浓缩至相对密度1.25-1.3g/ml备用。另取鱼腥草4份，除去杂质洗净，加水蒸馏，收集蒸馏液(收集量相当于投药量的一半)。将收集的蒸馏液加入上述浓缩备用的浸膏中，搅拌混合均匀，后加入40％的乙醇溶液稀释至每毫升药液相当于原生药2g。灌封即得。
中药组合物还可以根据生产条件、市场需求制备成其他多种剂型，如散剂、颗粒剂、注射液、片剂等各种药物剂型。
具体实施例2质量检验
质量标准如下：
性状：本品为棕黄色澄明液体，味辛，微甜。
鉴别：①取药液10ml，加乙醚振摇提取2次，每次15ml，合并乙醚液，蒸干，残渣分三次加40％乙醇各10ml，置水浴上溶解，趁热滤过，合并滤液，置水浴上蒸去乙醇，水溶液加乙醚振摇提取2次，每次15ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取满山红对照药材5g，加乙醚50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加40％乙醇30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲醇(5∶5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
②取本品10ml，置分液漏斗中，加稀盐酸2ml，用氯仿振摇提取2次，每次5ml，分取氯仿液，挥干， 残渣加氢氧化钠试液3ml使溶解，加二硝基苯肼试液1ml，振摇，即生成橙红色沉淀。
③取药液10ml，加浓氨溶液2ml与三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取浙贝母对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(17∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
④取药液10ml，加三氯甲烷40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同德浅紫色斑点。
⑤取药液10ml，加乙醚10ml，密塞，超声处理30分钟，滤过，滤液挥去乙醚，加正丁醇提取两次，每次10ml，合并正丁醇液，加水10ml洗涤，取正丁醇层水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草药材1g，加水50ml，回流提取30分钟，滤过，滤液用正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用水30ml洗涤，取正丁醇层水浴蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一含有1％氢氧化钠的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，热风吹干，，喷以10％硫酸乙醇溶液，与105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
⑥取药液10ml，加盐酸3ml与水30ml，加热回流1小时，冷却，滤过，滤液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇1ml，使溶解，作物供试品溶液。另取桔梗对照药材1g，加70％乙醇回流提取3次，每次20ml，每次1小时，合并提取液并挥去乙醇至无醇味，加盐酸3ml、水30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(1∶1)为展开剂，展开，取出，热风吹干，，喷以10％硫酸乙醇溶液，与105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查：
本品相对密度应不低于1.02；
含量测定：
①总黄酮含量测定
对照品溶液的制备取芦丁对照品适量，精密称定，加60％乙醇制成每1ml含芦丁60μg的溶液，即得。
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置10ml量瓶中，各 加0.1mol/L三氯化铝溶液2ml、1mol/L醋酸钾溶液3ml，加60％乙醇至刻度，摇匀，放置30分钟；以相应试剂为空白。照紫外一可见分光光度法(《中国兽药典2010版二部附录》)，在420nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。
精密量取本品2g，置50ml量瓶中，加60％乙醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加0.1mol/L三氯化铝溶液”起依法操作，制成供试品溶液。另精密量取本品2g，置50ml量瓶中，加60％乙醇稀释至刻度，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加60％乙醇至刻度，摇匀，作空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的质量，计算。本品每1g含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计，不得少于2.0mg。
②桔梗皂苷D含量测定
照高效液相色谱法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一水(25∶75)为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论板数按桔梗皂苷D峰计算应不低于3000。
取桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。取本品约5ml，精密称定，精密加入50％甲醇至50ml，称定质量，超声处理30分钟，放冷，用50％甲醇补足减失的质量；摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置水浴上蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，加硅胶0.5g拌匀，置水浴上蒸干，加于硅胶柱[100～120目，10g，内径为2cm，用三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液湿法装柱]上，以三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液50ml洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇-水(60∶20∶3)混合溶液100ml洗脱，弃去洗脱液，继用三氯甲烷-甲醇-水(60∶29∶6)混合溶液100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl，供试品溶液10～15μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，含桔梗皂苷D(C57H92O28)不得少于0.08％。
其他项应符合兽药店规定的口服液标准。
具体实施例3药效学研究
1.体外抑菌试验
实验中所用的大肠杆菌标准菌株购自中国兽医药品监察所。试验选用纸片法进行测定。供试药液为实例制备的液态中药复合物。
菌液制备：将大肠埃希菌的新鲜培养物置于10ml营养肉汤培养基中，37℃培养18～24h；取培养液1ml加入0.9％无菌氯化钠溶液，采用10倍递增稀释法，稀释至105～106cfu/ml，备用。
含药纸片的制作：选用定性滤纸用打孔器制成直径6mm的圆纸片放入清洁干燥的空瓶中，瓶口密封， 121℃高压灭菌30min，保存备用。在无菌条件下分别将100片纸片浸泡于相当于1g生药的中药复合物药液中1～2h，待药液完全被纸片吸收后，取出滤纸片，50℃烘干制成药敏片备用。此时每片纸片上含生药量是0.01g/片。
实验操作：在超净工作台中，将浓度为105～106cfu/ml的试验菌液用平均涂抹于营养琼脂平板表面，制成含菌平板。室温2～5min后，平铺药物纸片2片，其中一片为无菌生理盐水阴性对照，培养18～24h后，测量各药敏片的抑菌圈直径(mm)。共设置3个重复，测3次求平均值。以上操作均为无菌操作。
试验结果，通过测量3个重复实验组的抑菌圈直径后求得平均值为16mm属于高度敏感。
2.靶动物实验室药效学试验
选取10日龄健康白羽肉鸡200只，平均分成四组，每组50只，笼养，自由采食饮水，并进行人工感染，具体处理方法见表1。
病料上清液制备：选取具有典型肺炎症状的病鸡肺脏，经伟嘉集团健康养殖与评价云中心实验室进行病料处理及细菌分离培养鉴定为感染大肠杆菌，即大肠杆菌性肺炎。后取剩余病鸡肺脏，无菌条件下剪碎，加少量的生理盐水研磨后2000r/min离心5分钟后取上清液备用。
表1试验分组及处理
在初次攻毒后的第二天，试验组、阳性治疗组、阳性非治疗组的鸡陆续开始出现呼吸困难、咳嗽、气管啰音，食欲减退，阴性对照组无异常。故判定建模成功。
试验组按每1L水添加试验样品5ml，饮水给药，连续给药3天；阳性治疗组按产品使用说明书投以某厂家生产的清肺颗粒，采取饮水给药，连续5天。阳性非治疗组及阴性对照组不进行治疗。
试验组与阳性治疗组、阳性非治疗组的病死鸡分别进行剖解，病鸡可见肺水肿、少量充血、鸡气囊浑浊。取病鸡肺脏经细菌分离鉴定为大肠杆菌。故判定病鸡死于大肠杆菌性肺炎。
表2试验中治疗效果统计(单位/只)
疗效判断标准：
治愈 给药5日后，无喘息、咳嗽、伸颈，食欲、精神状态恢复正常；
有效 给药5日后，无喘息、伸颈，咳嗽症状有所缓解、食欲、精神状态有所改善；
无效 给药5日后，喘息、伸颈、咳嗽、食欲、精神状态等症状无减轻甚至加重或死亡。
给药5天后的试验结果统计表明，大肠杆菌性肺炎在人工感染后的自然耐过率仅为8％，死亡率高达60％。而本专利发明的中药复合物在治疗鸡肺炎上具有见效快，治愈率高的特点，有效率达到92％。五天内对鸡肺炎的治愈率比普通中药颗粒高出20个百分点。
3.临床效果验证
应用实例1：辽宁省某蛋鸡饲养厂10日龄雏鸡5000只，临床表现精神萎靡、咳嗽、呼吸困难伴湿性啰音、呆力、不食，排黄绿色稀便，剖检个别鸡只肺部水肿，充血、出血，气囊浑浊、有干酪样物，囊壁增厚经专业兽医诊断为细菌感染引发气囊炎。采用本专利实例1制备的中药组合物制剂每只鸡0.2ml饮水。连续给药5天，并进行观察记录鸡只给药前后精神状态、采食量变化。给药后第三天，精神状态好转；无咳嗽、无喘息，气管呼吸音减轻，稀便减少，到给药后第5天痊愈。据统计总有效率约为90％。据兽医及养殖户反应，本研究开发的中药组合物在治疗鸡肺炎上具有良好的临床效果，呼吸道症状快速缓解，不影响采食量及日增重，价格低廉，一个疗程的药费为0.03元/只，没有休药期和药物残留，在保障动物性食品安全的同时给广大养殖户创造更可观的经济收益。市场应用前景良好。